高效液相色谱流动相

高效液相色谱流动相

高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)

液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。 2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。 3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。 4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。 5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。

液相色谱流动相溶剂的选择步骤

选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等

选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值

二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。 2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。

在液相色谱常用混合溶剂作流动相。混合溶剂的P'具有加和性: P'ab

= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。溶剂极性对容量因子的影响: ?正相色谱:k2' / k1' = exp [(P1',P2')/2] ?反相色谱:k2' / k1' = exp

[(P2',P1')/2] 在液相色谱中, 一般溶剂的极性变化二个单位, 溶质的分配比差不多能有十倍的变化。 3)溶剂选择性分类

按溶剂分子的特殊作用类型(色谱选择性)进行分类, 采用三个不同的常数表示: ?Xe(接受质子参数)~易与含羟基的分子作用(如酸类、酚类); ?Xd(给质子参数)~易与碱性化合物作用(如胺、亚砜等); ?Xn(强偶极参数)~易与偶极距较大的溶质分子作用(如硝基化合物、腈、亚砜和胺类等)。常用溶剂分成八组。同一组溶剂的三个选择性参数相近，其选择性相似。改变色谱选择性，应从相距较远的溶剂组挑选其他溶剂。 4) 流动相的优化通过考察流动相组成对保留时间和分离因子等色谱参数的影响，获得最佳的分离选择性和较短分析时间。

气相色谱的日常维护

一、保证汽化室密封垫的气密性

1、进样口的硅橡胶垫的寿命与汽化室的温度有关，一般可以用数十次，硅橡胶垫漏气时会引起基线的波动，分析的重现性变差，从而使结果不准。

2、由于进样器穿刺过多，使硅橡胶垫碎屑进入汽化室，如果碎屑过多，高温时会影响基线的稳定，或者形成鬼峰。

因此为保证分析的正常进行请经常更换密封垫和经常检查汽化室的气密性。

二、经常清理汽化室或衬管

1、由于长期使用，汽化室和衬管内常聚集大量的高沸点物质，如遇某次分析高沸点物质时就会逸出多余的峰，给分析带影响，因此要经常用有机溶剂清洗汽化室和衬管。

2、汽化室的清洗:卸掉色谱柱，在加热和通气的情况下，由进样口注入无水乙醇或丙酮，反复几次，最后加热通气干燥。

三、气路的经常性检漏

1、一般情况下，在购置新仪器时已经进行过检漏，但是在使用过程中如发现灵敏度降低、保留时间延长、出现波浪状的基线等，则应重新检漏，尤其是氢气气路更应该经常性检漏，以免发生危险。

2、有的控制阀门是用“O”形橡胶圈，由于长期磨损，可能漏气;进样口硅胶垫不经常更换、色谱柱没有接好…….都可能漏气。故要经常检漏～

四、热导检测器(TCD)的清洗

1、拆下色谱柱，换上一根空的短的色谱柱，通载气，升高柱温箱和检测室温度至200,250度，从进样口注入2ml有机溶剂，重复数次，通气至干燥。

2、清洗时绝对不能通电桥电流。否则会损坏检测器～～～～

五、电子俘获检测器(ECD)的清洗

1、清洗法同热导检测器。

2、清洗有机溶剂不能用电负性的有机溶剂如三氯甲烷、四氯化碳等，可用苯、正已烷等。于250度。

3、对于放射源是Ni63检测器温度在250,300之间，而氚钪源温度应不高

4、在清洗ECD时必要时做好个人防护～～

六、氢焰检测器(FID)的清洗

1、清洗的目的是为了提高检测器的绝缘程度。

2、污染严重时可卸下收集极、极化极、喷嘴。收集极、极化极可用无水乙醇浸泡擦洗，底座和喷嘴用有机溶剂反复冲洗，通气管路也要彻底清洗，喷嘴口要平整光滑，如有毛刺可用油石或什锦锉、砂纸打磨光滑，再用乙醇反复冲洗，然后用热冷风交替吹干。

3、固定这些电极的绝缘体可在无水乙醇中浸泡10,15min ，用绸子或纱布擦拭干净。烘干待安装。

4、装配时要恢复原状，做到俯视喷嘴、极化极、收极集三者同心，侧视极化极与喷嘴口二者处于同一水平。

5、注意:清洗完后，所有的配件禁止用手接触，安装时要戴干净手套，所有的工具用前要清洗干燥。七、氮磷检测器(NPD)及火焰光度检测器(FPD)的清洗由于上述二检测器与FID结构基本相似，故清洗方法参考FID的清洗。NPD注重铷铢的清洗;而FPD则应注重光窗的清洗，但注意不要将光电管暴露于强光下如何防止FID收集极上的积垢

清除收集极积垢，拆洗FID时，常把喷嘴拆断造成了不可挽回的损失。依据FID工作原理，收集极对地为高阻，一般都在107欧姆以上，所以收集极的一般污染或收集极和静电计连接不良，除非在限制灵敏度操作外不会造成严重的噪声。所以当操作FID遇到尖峰噪声(基线毛刺)不提倡首先拆洗FID检测器，而应先寻找其它引起噪声的原因如:

1.气流比是否合适;

2.汽化室严重污染;

3.柱流失严重(老化不够);

4.静电放大器不稳定;

5.极化电压不稳定;

6.有关信号连接接触不良;

7.市电不稳定;

8.接地不正确;

9.数据处理机有故障或参数设置不合理;

10.气体纯度欠佳(特别是使用各种气体发生器时);

11.色谱柱连接以后各接头有严重漏气。