DNA RNA 蛋白质等各种生物物质的保存(参考资料)
DNA和RNA提取方法及原理
材料准备
基因组DNA的提取
最好使用新鲜材料,低温保 存的样品材料不要反复冻融
提取血液基因组DNA时,要 选择有核细胞(白细胞)
组培细胞培养时间不能过长, 否则会造成DNA降解
含病毒的液体材料DNA含量较 少,提取前先富集
核酸溶解在适量缓冲液或水中材料准备材料准备最好使用新鲜材料低温保存的样品材料不要反复冻融提取血液基因组dna时要选择有核细胞白细胞组培细胞培养时间不能过长否则会造成dna降解含病毒的液体材料dna含量较少提取前先富集基因组dna的提取质粒dna的提取使用处于对数期的新鲜菌体老化菌体导致开环质粒增加培养时应加入筛选压力否则菌体易污染质粒易丢失尽量选择高拷贝的质粒如为低拷贝或大质粒则应加大菌体用量菌株不要频繁转接质粒丢失细胞裂解细胞裂解材料应适量过多会影响裂解导致dna量少纯度低针对不同材料选择适当的裂解预处理方式
基因组DNA-SDS法
SDS法流程图 (以动物组织为例)
动物组织
抽提
离心洗涤
组织匀浆
上层溶液
干燥溶解
细胞裂解
酒精沉淀
DNA溶液
基因组DNA-其它方法
根据细胞裂解方式的不同有:
物理方式:玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法 化学方式:异硫氰酸胍法、碱裂解法 生物方式:酶法
基因组DNA-其它方法
质粒DNA的提取
使用处于对数期的新鲜菌体 (老化菌体导致开环质粒增加)
培养时应加入筛选压力,否则 菌体易污染,质粒易丢失
尽量选择高拷贝的质粒,如为 低拷贝或大质粒,则应加大菌 体用量
菌株不要频繁转接(质粒丢失)
干血片检测原理-概述说明以及解释
干血片检测原理-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述干血片检测,是一种基于干血片技术的检测方法,广泛应用于医学领域。
它通过快速、准确地分析干血片中的生物标记物,如DNA、RNA、蛋白质等,来评估个体的健康状况、疾病风险以及药物反应等重要信息。
相比传统的血液检测方法,干血片检测具有简便、经济、无需专业技术人员操作等诸多优势,因而备受关注。
干血片检测的原理主要基于血液中生物标记物与相关疾病之间的紧密联系。
在干血片制备过程中,通过简单的刺破皮肤,将足够数量的血液收集于特殊的滤纸片上。
这些血液中的生物标记物会在干燥的过程中被固定,形成干血片,从而保持其完整性和活性。
在干血片制备完成后,接下来就是对干血片的分析。
最常见的方法是利用高分辨率的仪器,如质谱仪、光谱仪等,对干血片中的生物标记物进行定性和定量分析。
这些仪器能够根据生物标记物的特征光谱或质谱图谱,快速识别和测量血液中的不同成分,从而对个体的健康状态作出准确的评估。
从技术上讲,干血片检测的原理是基于生物化学、光谱学、质谱学等学科的知识。
通过对干血片中的生物标记物进行分析,可以获取许多有关患者的关键信息,包括基因型、表达谱、代谢产物等。
这些信息不仅能够帮助医生进行疾病的早期诊断和治疗选择,还可以为个体化医疗和精准医学提供有效的支持。
总之,干血片检测原理是以干血片技术为基础的一种快速、准确地分析血液中生物标记物的方法。
它具有简便、经济、无需专业技术人员操作等特点,将在未来医学领域发挥越来越重要的作用。
随着相关技术的进一步发展,干血片检测有望成为一种常规的、非侵入性的健康监测手段,为人们的健康提供更加全面和个体化的保障。
1.2 文章结构文章结构文章结构主要包括引言、正文和结论三个部分。
1. 引言:引言部分主要概述了干血片检测原理的背景和重要性。
通过介绍干血片检测的基本概念和应用领域,引起读者对这一主题的兴趣。
同时,说明了本文的研究目的和文章结构。
2. 正文:正文是干血片检测原理的核心内容,可以包括多个要点。
高中生物实验总结(超级详细)
基础课程教学资料高中生物实验总结实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布(必修一P26)一、实验原理:1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA大部分存在于细胞质中。
2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。
利用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
3、盐酸的作用①盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞;②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,有利于DNA与染色剂结合4、0.9%的NaCl溶液作用:保持口腔上皮细胞的正常的形态二、目的要求:初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法三、材料用具:人的口腔上皮细胞(也可用其他动物或植物细胞代替,如洋葱鳞片叶表皮细胞)大烧杯、小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜质量分数为0.9%的NaCl溶液,质量分数为8%的盐酸,吡罗红甲基绿染色剂(取A 液20mL,B液80mL配成染色剂,使用时现配。
A液:取吡罗红甲基绿粉1g,加入100mL蒸馏水中溶解,放入棕色瓶中备用。
B液:取乙酸钠16.4g,用蒸馏水溶解至1000mL。
取乙酸12mL,用蒸馏水稀释至1000mL。
取稀释的乙酸钠溶液30mL和乙酸20mL,加蒸馏水50mL,配成pH为4.8的溶液),蒸馏水五、方法步骤:1、取口腔上皮细胞制片①在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液。
②用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下,把牙签上附有碎屑的一端,放在上述载玻片上的液滴中涂抹几下。
点燃酒精灯,将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。
(固定细胞)2、水解①在小烧杯中加入30mL质量分数为8%的盐酸,将烘干的载玻片放入小烧杯中。
②在大烧杯中加入30℃温水。
③将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在大烧杯中保温5min。
DNARNA和蛋白质解释这些分子之间的关系
DNARNA和蛋白质解释这些分子之间的关系DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)以及蛋白质是生命活动中非常重要的分子。
它们在遗传信息的传递、蛋白质合成以及基因调控等方面扮演着不可或缺的角色。
在本文中,我们将探讨DNARNA 和蛋白质之间的关系。
一、DNA的作用DNA是一种巨大的分子,由四种碱基(腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶)的排列组合而成。
DNA主要存在于细胞核中,它承载着遗传信息,决定了细胞的特征和功能。
DNA具有双螺旋结构,其中两条单链通过碱基间的氢键连接在一起。
DNA的重要作用之一是作为模板参与蛋白质的合成。
二、RNA的作用RNA和DNA在结构上有一些相似之处,都由核苷酸组成。
然而,RNA具有单链结构,而不像DNA那样具有双链结构。
RNA有多种类型,包括信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)和核糖体RNA (rRNA)等。
RNA在细胞中具有多种功能,其中最重要的是参与蛋白质的合成过程。
三、蛋白质的合成蛋白质是由氨基酸组成的。
氨基酸通过形成肽键而连接在一起,形成多肽链,最终折叠成特定的三维结构。
蛋白质合成是一个复杂的过程,涉及到DNA、RNA和各种酶的参与。
具体而言,DNA中的基因在转录过程中生成mRNA,mRNA携带着从DNA中复制的遗传信息,通过核糖体上的rRNA指导tRNA将特定的氨基酸带入多肽链的生长中。
四、DNARNA与蛋白质的关系DNARNA和蛋白质之间存在着密切的联系。
DNA是生物体内最重要的遗传物质,它保存着生物体的全部遗传信息。
而RNA作为DNA的复制品,在蛋白质合成过程中发挥着关键的作用。
DNA通过转录过程生成的mRNA携带着从DNA中获得的信息,它通过核糖体上的rRNA与tRNA相互配对,控制了氨基酸的选择和氨基酸的带入,进而实现蛋白质的合成。
此外,DNARNA还参与到基因调控的过程中。
一些特定的RNA分子,如微小RNA(miRNA)和小干扰RNA(siRNA),可以与mRNA 配对,从而影响mRNA的稳定性和翻译过程,进而影响蛋白质的表达水平。
生物大分子的结构与功能
生物大分子的结构与功能生物大分子是构成生物体的重要组成部分,它们在生物体内发挥着极其重要的功能。
生物大分子的结构与功能密不可分,它们的特定结构决定了其特定的功能。
本文将从蛋白质、核酸、碳水化合物和脂质四个方面来详细介绍生物大分子的结构与功能。
蛋白质是生物体内最具代表性的大分子之一,它们在生物体内发挥着多种重要功能。
从结构上看,蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的多肽链,经过折叠和旋转形成特定的三维空间结构。
蛋白质的结构决定了其功能,不同结构的蛋白质具有不同的功能。
酶是一类重要的蛋白质,在生物体内负责催化各种生物化学反应。
酶的结构决定了其具有特异性和高效性,能够在生物体内加速化学反应,从而维持生命活动的进行。
抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质,它在免疫系统中具有重要的抗病毒和抗细菌作用。
肌肉收缩、细胞信号传导等生物体内的重要功能都与蛋白质密切相关。
核酸是生物体内保存和传递遗传信息的大分子,其结构与功能也具有密切关联。
DNA和RNA是生物体内的两种主要核酸,它们都是由核苷酸经过磷酸二脂键连接而成的长链分子。
DNA是细胞核内的主要遗传物质,其双螺旋结构能够稳定地保存遗传信息,并在细胞分裂时传递给新生细胞。
RNA在蛋白质合成中发挥着重要作用,它通过与核糖体结合,将DNA中的遗传信息翻译成蛋白质。
RNA还参与调控基因表达和细胞信号传导等生物学过程。
核酸的特定结构使得其在生物体内能够有效地保存和传递遗传信息,从而维持生命的连续性。
碳水化合物是生物体内最主要的能量来源,其结构与功能也具有密切关联。
碳水化合物主要包括单糖、双糖和多糖三种类型,它们都是由碳、氢和氧三种元素组成的化合物。
单糖是碳水化合物的基本单元,如葡萄糖、果糖等,它们能够通过细胞呼吸产生能量,并为细胞代谢提供物质基础。
双糖是由两个单糖分子通过糖苷键连接而成的化合物,如蔗糖、乳糖等,它们是生物体内的重要能量储备物质。
多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物,如淀粉、聚糖等,它们在植物和动物体内起到能量储存和结构支撑的作用。
5第五章现代分子生物学研究方法——DNA、RNA及蛋白质操作技术
DNA的基本操作技术——核酸凝胶电泳 以琼脂糖凝胶电泳为例:
DNA的基本操作技术——核酸凝胶电泳
凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小,浓度越高,孔隙越小, 其分辨能力就越强。反之,浓度降低,孔隙就增大,其其分辨能力 就越弱。
DNA的基本操作技术——核酸凝胶电泳
溴化乙锭(ethidium bromide,EB)能插入到DNA或RNA分子的相 邻碱基之间,并在紫外灯光照射下发出荧光,所以常用EB来检测凝 胶介质中的核酸条带。
x 25 中的聚合酶可能很多正处于复制状态,
如果此时降到室温,将会影响最终产 率。所以再留出5分钟,以使正在复制 中的DNA能够复制完全,以合成更多 的目的分子。
DNA的基本操作技术——重组载体构建 PCR完成之后,需要有什么操作?
DNA的基本操作技术——重组载体构建
DNA的基本操作技术——重组载体构建
转化(transformation):是指重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合 进入受体细胞(一般指细菌),并在受体细胞内稳定维持与表达的 过程。
转染(transfection):是真核细胞主动或被动导入外源DNA片段而 获得新的表型的过程。(与转化类似,只是受体细胞不同)
转导(transduction):是指通过病毒(如λ噬菌体)颗粒感染宿主细 胞将外源DNA分子导入到受体细胞内并稳定遗传的过程。
DNA的基本操作技术——聚合酶链式反应技术
DNA的基本操作技术——聚合酶链式反应技术
常用的PCR反应体系:引物、DNA聚合酶、dNTP、模板、缓冲液。
常用的PCR反应程序:
预变性 95℃ 3 min
变性 95℃ 30 s
退火 55℃ 30 s
x 25
延伸 72℃ 1 min
DNA RNA 蛋白质等各种生物物质的保存
各种生物活性物质的保存Experience 2021-08-16 16:34:36 阅读336 评论0 字号:大中小订阅DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法:〔网上搜索,仅供参考^_^〕1.DNA短期保存,两年之内吧,无菌水和TE缓冲液是ok的。
如果是长期保存,比方10年20年的话,我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里,放-20°,放10年没问题。
需要用的时候,再离心后,弃去乙醇,加水或TE溶解即可。
长期保存用TE,DNA本来就是酸性,所以需要弱碱性环境保存,如果用中性或者酸性环境保存容易降解。
保存两年应该会降解的!还是不要超过两年,再一年内都有降解的可能,所以还是要尽快的利用了。
做成干粉不太可能,哪里有那么多的量!还是在-80度以下保存吧,也要防止反复冻融。
如果DNA很纯的话,应该影响不是很大啊,有文献报道高纯DNA的最正确保存条件是4度,你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊,跑个电泳看看啊,如果出现smear,就不要用了啊!提纯的DNA放在4度一段时间〔数周-数月〕都没问题。
但是长期保存建议-20度,并且浓度不要稀释的太低,否那么容易降解。
2.RNARNA假设要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。
保存RNA应该尽量低温。
为了防止痕量RNase的污染,从富含RNase的样品〔如胰脏、肝脏〕中别离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA,对于长期贮存更是如此。
从大鼠肝脏中提取的RNA,在水中贮存一个星期就根本降解了,而从大鼠脾脏中提取的RNA,在水中保存3年仍保持稳定。
另外,长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。
为了增加贮存RNA样品的稳定性,可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中,存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。
来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
DNA与RNA提取的区别及注意事项
DNA与RNA提取的区别及注意事项DNA与RNA提取的区别及注意事项引言:DNA和RNA是生物体内两种重要的核酸分子,它们在遗传信息的传递和蛋白质合成中起着关键作用。
DNA提取和RNA提取是生物学研究和分子诊断中常用的实验技术。
本文将探讨DNA与RNA提取的区别,包括提取方法、提取的样本类型及注意事项,以帮助我们更好地理解和应用这两种技术。
一、DNA提取与RNA提取的方法1. DNA提取方法:DNA提取技术旨在从细胞或组织样本中分离出DNA分子。
DNA提取方法一般包括以下几个步骤:1) 细胞破碎:将样本中的细胞破碎,使DNA被释放出来;2) 蛋白质去除:利用蛋白酶等方法去除样本中的蛋白质污染;3) DNA纯化:通过溶液浓缩、离心等步骤,去除样本中的杂质,使DNA得到纯化。
2. RNA提取方法:RNA提取技术旨在从细胞或组织样本中分离出RNA分子。
RNA提取方法一般包括以下几个步骤:1) 细胞破碎:将样本中的细胞破碎,使RNA被释放出来;2) RNA保护:由于RNA容易被外界核酸酶降解,需使用RNA保护试剂保护RNA的完整性;3) 蛋白质去除:利用蛋白酶等方法去除样本中的蛋白质污染;4) RNA纯化:通过溶液浓缩、离心等步骤,去除样本中的杂质,使RNA得到纯化。
二、DNA提取与RNA提取的样本类型1. DNA提取的样本类型:DNA提取适用于多种生物样本,包括:1) 细胞:体液中的白细胞、培养细胞等;2) 组织:肌肉组织、肿瘤组织等;3) 体液:血液、唾液、尿液等。
2. RNA提取的样本类型:RNA提取也适用于多种生物样本,但需要更加谨慎处理,以保持RNA 的完整性。
常见的样本包括:1) 细胞:培养细胞、血液中的白细胞等;2) 组织:肝脏、心脏、肺等;3) 体液:血液、唾液、尿液等。
三、DNA提取与RNA提取的注意事项1. 样本采集:1) 注意采集样本时的卫生防护,避免外界污染;2) RNA提取时需快速处理,以防RNA被降解。
用Trizol提取DNA,RNA及蛋白质的方法及注意事项
TRIZOL试剂警告:接触皮肤或误吞将导致中毒或灼伤。
接触皮肤之后立即用去垢剂和水冲洗。
若感到不适,请遵医嘱(可能的话出示标签)。
收到药品后,在室温下存储。
以已证明TRIZOL在常温下可稳定储存12个月。
说明:TRIZOL是一种从细胞和组织中提取总RNA的现用试剂。
该试剂是一种苯酚异硫氰酸酯单相溶液,它发展自Chomczynski 和Sacchi的RNA一步抽提法。
在细胞破碎和溶解细胞组分时,TRIZOL可以保持细胞匀浆或抽提物中RNA的完整性。
离心后加入氯仿,将溶液分为水相和有机相。
RNA只留在水相中。
转移水相后,用异丙醇沉淀回收RNA。
除去水相后,样品中的DNA和蛋白质也可以用后续沉淀方法回收。
用乙醇从相界面间沉淀DNA,异丙醇从有机相回收蛋白质。
DNA 的共纯化可能对样品间RNA产量的正常化有用。
这项提取技术对人、动物、植物或细菌来源的各种量的组织(低至50-100mg,高至≥1g)和细胞(低至5×106,高至>107)都有良好的效果。
其简单的操作方法允许同时处理大量样品。
整个过程可在1小时内完成。
用TRIZOL提出的总RNA 不含蛋白质和DNA污染,可用来做Northern 电泳分析、斑点杂交、poly (A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。
在PCR和扩大DNA酶Ⅰ梯度分离中,建议使用一个内含子中的两个引物。
TRIZOL简化了各种类型的大分子及小分子RNA的分离。
例如,从鼠肝分离的RNA经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色,显示出介于7到15kb的大分子RNA 条带,(由mRNA和hnRNA组成的)两个约5kb(28S)和2kb(18S)核糖体RNA 的条带,以及介于0.1到0.3kb(tRNA, 5S)的小分子RNA的条带。
所分离的RNA 稀释于TE时A260/A280之比大于等于1.8。
谨防RNase的污染:在提取中任何不正确的操作方法中都可能偶然引入RNase。
由于其活性难以抑制,因此只能直接避免其引入。
第十二章DNA RNA 蛋白质
双水相分离法
原理:利用两种多聚物,或多聚物与盐在水相中的不相容性,可以 从细胞破碎后的细胞碎片中直接分离、纯化蛋白质,同时起到浓缩 蛋白质的作用。 该法较温和,一般不会使蛋白质变性失活,可在室温下进行, 双水相中聚合物还可提高蛋白质的稳定性。 最常用的多聚物是聚二乙醇和葡聚糖。 影响因素:聚合物分子量及浓度、溶液pH、离子强度、盐类型及浓 度等的影响。 接下来一般采用Bradford方法测定蛋白质,以免PEG的影响
蛋白质样品的分离
聚沉: 聚沉剂主要是无机盐类(如氯化锌、氯化铝、硫酸盐等) 和聚合无机盐(聚合铝、聚合铁等)。为促进聚沉的产生, 可以降温至20℃以下进行;调整pH至3~6;提高离子浓度; 增加颗粒数量;增加多价金属离子等方法。 离心: 对于低粘度介质中的细菌,2000~3000g、10~15min;对 于高粘度的溶液,则需更高的速度和更长的时间,如细胞 碎片,12000g、30~45min;对于蛋白质沉淀,5000g、 30min或15000g、10min 过滤: 孔径一般为0.2um或0.45um,常压或减压过滤。
超滤法
原理:在常温下以一定压力和流量,利用不对称微孔结构和半透膜介质,
依靠膜两侧的压力差作为推动力,以错流方式进行过滤,使溶剂及小分子 物质通过,大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜 阻留,从而达到分离、分级、纯化、浓缩目的的一种新型膜分离技术。
优缺点:
1、超滤过程是在常温下进行,条件温和无成分破坏,因而特别适宜对热 敏感的物质,如药物、酶、果汁等的分离、分级、浓缩与富集。 2、超滤过程不发生相变化,无需加热,能耗低,无需添加化学试剂,无 污染,是一种节能环保的分离技术。 3、超滤技术分离效率高,对稀溶液中的微量成分的回收、低浓度溶液的 浓缩均非常有效。 4、超滤过程仅采用压力作为膜分离的动力,因此分离装置简单、流程短、 操作简便、易于控制和维护。 5、超滤法也有一定的局限性,它不能直接得到干粉制剂。对于蛋白质溶 液,一般只能得到10~50%的浓度。
DNA RNA 蛋白质等各种生物物质的保存
各种生物活性物质的保存Experience 2009-08-16 16:34:36 阅读336 评论0 字号:大中小订阅DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法:(网上搜索,仅供参考^_^)1.DNA短期保存,两年之内吧,无菌水和TE缓冲液是ok的。
如果是长期保存,比如10年20年的话,我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里,放-20°,放10年没问题。
需要用的时候,再离心后,弃去乙醇,加水或TE溶解即可。
长期保存用TE,DNA本来就是酸性,所以需要弱碱性环境保存,如果用中性或者酸性环境保存容易降解。
保存两年应该会降解的!还是不要超过两年,再一年内都有降解的可能,所以还是要尽快的利用了。
做成干粉不太可能,哪里有那么多的量!还是在-80度以下保存吧,也要避免反复冻融。
如果DNA很纯的话,应该影响不是很大啊,有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度,你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊,跑个电泳看看啊,如果出现smear,就不要用了啊!提纯的DNA放在4度一段时间(数周-数月)都没问题。
但是长期保存建议-20度,并且浓度不要稀释的太低,否则容易降解。
2.RNARNA若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。
保存RNA应该尽量低温。
为了防止痕量RNase的污染,从富含RNase的样品(如胰脏、肝脏)中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA,对于长期贮存更是如此。
从大鼠肝脏中提取的RNA,在水中贮存一个星期就基本降解了,而从大鼠脾脏中提取的RNA,在水中保存3年仍保持稳定。
另外,长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。
为了增加贮存RNA样品的稳定性,可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中,存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。
来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
2022年山东药品食品职业学院生物制药技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年山东药品食品职业学院生物制药技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)一、填空题1、现代微生物学发展有以下几个特点:______,______,______,______,______,______。
2、蓝细菌和黏细菌不能在液体中自由活动,但可以在固体表面上______,这是由于______而进行的。
3、微生物菌种保藏有两个原则,一是在菌种方面必须选用______;二是设法创造一个优良的休眠条件,例如______、______、______、______、______和______等。
4、利用干燥对微生物影响的原理,在日常生活中常用______、______ 和______等方法保存食物。
5、我国自古以来就利用曲霉做发酵食品,如利用______的蛋白分解能力作酱,利用______的糖化能力制米酒。
6、病毒可分真病毒与亚病毒两大类。
从组成的化学本质来划分,真病毒至少含有______和______两种成分;亚病毒中的______只含______, ______只含______或______,而______则只含______。
7、微生物在自然环境中广泛存在的原因在于______、______、______、______和______等。
8、一般而言,微生物在含糖基质上生长,会产生______,而使______;微生物分解蛋白质或氨基酸会产生______,而使______。
9、硝酸盐在微生物生命活动中具有两种作用,其一是利用它作为氮源,这就是______;另一种是利用它作为呼吸链最终氢受体,这就是______,又称______或______。
这两个作用的共同点都需要一种含______的______酶将硝酸盐还原为亚硝酸盐。
10、由酵母多糖、LPS等多种微生物及其产物从______和______因子开始的补体激活途径称______。
它的C3转化酶是______,C5转化酶是______,攻膜复合体是______。
生命的化学基础——核酸和蛋白质的相互作用
生命的化学基础——核酸和蛋白质的相互作用在生命的起源和演化过程中,核酸和蛋白质是两个至关重要的生物大分子。
核酸是生命的遗传物质,负责传递和保存生物体内各种遗传信息;蛋白质则是生命的基本工具,负责生物体内的各项生物学过程和机能。
它们之间的相互作用,便决定了生命本身的运作和表现。
核酸的结构和功能核酸是由核苷酸连接而成的大分子,是生物体内储存遗传信息的基本分子。
核苷酸由糖、碱基和磷酸三部分组成,不同的碱基决定了核苷酸不同的信息载体。
核酸的主要类型有DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)两种,其中DNA是固有的遗传信息,而RNA则负责DNA的转录和翻译过程,将基因信息调控至蛋白质合成过程中。
核酸的信息特异性、精密的复制和传递,是生命活动不可或缺的基础。
它们在细胞分裂和有性繁殖过程中,以独特的方式进行遗传物质传递和变异,从而在物种演化和适应过程中发挥了重要的作用。
蛋白质的结构和功能蛋白质是由氨基酸连接而成的巨大分子,是生物体内各种工具酶、激素、抗体的基础,也是细胞内外的结构成分。
根据氨基酸的不同组合和排列方式,会形成不同的蛋白质结构和性质。
蛋白质在生命活动中的作用非常多样,包括催化、传输、调节、结构维持等等。
在蛋白质结构和功能的表达中,核酸则扮演了重要的导演角色。
在生物体内,核酸以基因形式储存蛋白质的信息,并通过转录和翻译过程,将这些信息转化为可读的蛋白质序列。
同时,在各种细胞生命活动中,蛋白质则作为各种生物学过程的重要实现物质,执行着各种不同的机能。
核酸和蛋白质的相互作用核酸和蛋白质之间的相互作用,是生命活动中至关重要的一个环节。
在生物体内,大部分核酸和蛋白质都相互作用着,形成了复杂的生物学网络。
这些相互作用的形式包括:核酸和蛋白质的组装、切换、传递、调控等等。
例如,在许多调控生物学过程的关键步骤中,核酸和蛋白质之间的相互作用是缺一不可的。
这些过程中,核酸等分子能够借助碱基序列的特异性,与蛋白质表面区域上的特定氨基酸残基发生结合作用,从而实现过程的调节和实现。
DNA RNA 蛋白质等各种生物物质的保存
各种生物活性物质的保存Experience 2009-08-16 16:34:36 阅读336 评论0 字号:大中小订阅DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法:(网上搜索,仅供参考^_^)1.DNA短期保存,两年之内吧,无菌水和TE缓冲液是ok的。
如果是长期保存,比如10年20年的话,我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里,放-20°,放10年没问题。
需要用的时候,再离心后,弃去乙醇,加水或TE溶解即可。
长期保存用TE,DNA本来就是酸性,所以需要弱碱性环境保存,如果用中性或者酸性环境保存容易降解。
保存两年应该会降解的!还是不要超过两年,再一年内都有降解的可能,所以还是要尽快的利用了。
做成干粉不太可能,哪里有那么多的量!还是在-80度以下保存吧,也要避免反复冻融。
如果DNA很纯的话,应该影响不是很大啊,有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度,你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊,跑个电泳看看啊,如果出现smear,就不要用了啊!提纯的DNA放在4度一段时间(数周-数月)都没问题。
但是长期保存建议-20度,并且浓度不要稀释的太低,否则容易降解。
2.RNARNA若要长期保存,需沉淀下来后臵于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。
保存RNA应该尽量低温。
为了防止痕量RNase的污染,从富含RNase的样品(如胰脏、肝脏)中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA,对于长期贮存更是如此。
从大鼠肝脏中提取的RNA,在水中贮存一个星期就基本降解了,而从大鼠脾脏中提取的RNA,在水中保存3年仍保持稳定。
另外,长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。
为了增加贮存RNA样品的稳定性,可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中,存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。
来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
生化试剂储存管理制度
生化试剂储存管理制度一、背景介绍生化试剂是生物科学研究中不可或缺的重要材料,其储存管理对实验结果的准确性和稳定性具有至关重要的影响。
为了确保生化试剂的质量和安全性,必须建立科学规范的储存管理制度,以确保试剂的安全、有效使用。
二、储存管理的目的1. 确保生化试剂的质量和安全性;2. 减少试剂的损耗和浪费,提高资源利用效率;3. 便于管理和监督试剂的使用情况;4. 减少实验误差,提高实验结果的准确性和可靠性。
三、储存管理的基本原则1. 分类储存:根据试剂的性质和用途进行分类储存,避免不同试剂混放引发安全隐患;2. 标签明确:对每一瓶试剂都要进行标签,包括试剂名称、浓度、制备日期、有效日期等信息,以便及时识别和管理;3. 温度控制:根据试剂的要求,设定合适的温度储存条件,避免因温度变化引起试剂质量的降低;4. 防潮防晒:试剂要保存在阴凉干燥处,避免阳光直射和潮湿环境,以免影响试剂的质量;5. 定期检查:定期检查试剂的储存情况,确保试剂的质量和有效期,及时淘汰过期试剂;6. 严格管控:确保试剂的领取、使用、归还等环节都要有相应的管理,严格执行操作规程。
四、储存管理的具体措施1. 分区储存:根据试剂的性质和用途,设立不同区域进行储存,避免试剂交叉污染;2. 温度监控:对试剂的储存区域进行温度监控,确保试剂的储存温度符合要求;3. 标签管理:对试剂进行标签管理,确保试剂信息的准确和清晰;4. 定期检查:定期对试剂进行检查,发现问题及时处理;5. 防潮防晒:对试剂进行防潮防晒处理,确保试剂质量不受影响;6. 使用记录:对试剂的使用情况进行记录,便于追溯和管理;7. 安全措施:在储存试剂的过程中,要加强安全意识,加强设备和防护措施,确保员工的安全。
五、员工培训为了确保储存管理制度的有效实施,必须对员工进行相关培训,包括试剂的分类储存、标签管理、温度监控等知识和技能的培训,提高员工的储存管理水平,减少操作失误和事故的发生。
临床分子生物学检验技术(潍坊医学院)知到章节答案智慧树2023年
临床分子生物学检验技术(潍坊医学院)知到章节测试答案智慧树2023年最新第一章测试1.分子生物学检验技术检测的标本包括人体各种组织、细胞、体液、分泌物等多种样本。
参考答案:对2.1958年,克里克提出了著名的分子生物学中心法则。
参考答案:对3.DNA“STR”分型技术已经在全世界法医鉴定中普及应用。
参考答案:对4.个体化医学的内涵包括:基于个体化基因精准检测的疾病风险评估、个体化医学诊断和个体化医学治疗。
参考答案:对5.分子生物学检验技术所涉及到的原理和方法多种多样,常见的有参考答案:分子杂交技术;生物芯片技术;基因测序技术;聚合酶链式反应6.分子生物学检验技术检测的靶标主要包括参考答案:蛋白质;DNA;RNA7.临床分子生物学检验技术广泛应用于参考答案:遗传性疾病的诊断和预防;亲子鉴定;肿瘤的临床诊断和治疗监测;感染性疾病的诊断和监测8.“临床分子生物学检验技术”是以分子生物学的原理和技术为基础,通过检测生物样本中DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的量变或质变,从而为疾病的预防、诊断、治疗、预后提供生物信息和诊疗依据的应用学科。
参考答案:对9.表观遗传学是指DNA序列在不发生改变的情况下,可以影响表型变化,并通过体细胞遗传的现象。
参考答案:对10.通过多种分子生物学技术建立起来的人类白细胞抗原基因分型技术,可以提高器官移植、受体之间的相容性匹配和移植物存活率。
参考答案:对第二章测试1.真核生物mRNA在成熟过程中切去的是参考答案:内含子2.构成核小体的组蛋白不包括参考答案:H53.与核DNA相比,mtDNA具有以下特点参考答案:母性遗传4.Alu家族属于参考答案:短散在核元件5.大肠杆菌类核结构的组成是参考答案:RNA+支架蛋白+双链DNA6.下述序列中,在双链状态下,属于完全回文结构的序列是参考答案:AGTCGACT7.下列哪种质粒带有抗性基因参考答案:R质粒8.病毒的遗传物质是参考答案:DNA或RNA9.下列哪一项不是蛋白质组的研究技术参考答案:RFLP10.下列关于双向凝胶电泳优点的说法,不正确的是参考答案:能够筛选出所有的蛋白第三章测试1.BLAST可以进行参考答案:序列比对分析2.仅仅进行核酸一核酸查询,一般使用的BLAST方式是参考答案:BLASTn3.在进行多序列对比的多序列联配比对时,常用的程序是参考答案:ClustalW4.HGP绘制的四项图谱包括参考答案:遗传图谱、物理图谱、序列图谱和基因图谱5.欧洲分子生物学网EMBnet的主要数据库检索工具是参考答案:SRS6.生物信息学的任务有哪些参考答案:数据库的建立、相关分析软件的开发和应用;蛋白质的序列、结构、功能、定位、分类;基因组及基因表达数据的分析和处理;新药研制;生物分子数据的获取、处理、贮存、传递、分析和解释7.PDB能够100%准确预测蛋白质空间立体结构参考答案:错8.蛋白质的基本性质分析包括参考答案:疏水性分析;分子量;氨基酸组成;跨膜区分析9.核酸序列的基本分析包括参考答案:分子量;限制性酶切分析;测序分析;碱基组成10.常见生物信息数据库的检索工具有参考答案:SRS;BDGET/LinkDB;Entrez第四章测试1.下列不属于分离纯化质粒 DNA 的方法参考答案:甲酰胺解聚法2.质粒DNA提取中,沉淀DNA的是参考答案:无水乙醇3.以下哪种方法不能抑制或灭活RNase活性参考答案:加入EDTA金属离子螯合剂4.波长260nm的紫外线下,A值等于1时的光密度大约相当于多少的双链DNA参考答案:50µg/ml5.下列关于紫外分光光度法用于核酸的纯度鉴定的说法正确的是参考答案:TE 缓冲液中,纯 DNA 的A260/A280比值为1.8,纯 RNA 的 A260/A280比值为 2.06.有关核酸的鉴定描述错误的是参考答案:纯 DNA 样品的 A260/A280为 2.07.以下属于DNA的保存的方法是参考答案:溶于 TE 缓冲液中在-70℃储存8.以下哪种方法不是DNA的适宜保存法参考答案:常温保存9.下列关于双向凝胶电泳技术的说法,正确的是参考答案:是蛋白质组学研究最重要的技术;包括等电聚焦电泳和SDS-PAGE;与质谱技术紧密结合使用10.用碱裂解法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为()。
生物化学复习资料(全)
生物化学复习资料第一章蛋白质化学第一节蛋白质的基本结构单位——氨基酸凯氏定氮法:每克样品蛋白质含量(g)=每克样品中含氮量x 6.25氨基酸结构通式:蛋白质是由许多不同的α-氨基酸按一定的序列通过肽键缩合而成的具有生物学功能的生物大分子。
氨基酸分类:(1)脂肪族基团:丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、脯氨酸(2)芳香族基团:苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸(3)含硫基团:蛋氨酸(甲硫氨酸)、半胱氨酸(4)含醇基基团:丝氨酸、苏氨酸(5)碱性基团:赖氨酸、精氨酸、组氨酸(6)酸性基团:天冬氨酸、谷氨酸(7)含酰胺基团:天冬酰胺、谷氨酰胺必需氨基酸(8种):人体必不可少,而机体内又不能合成,必需从食物中补充的氨基酸。
蛋氨酸(甲硫氨酸)、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸氨基酸的两性性质:氨基酸可接受质子而形成NH3+,具有碱性;羧基可释放质子而解离成COO-,具有酸性。
这就是氨基酸的两性性质。
氨基酸等电点:指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值。
蛋白质中的色氨酸和酪氨酸两种氨基酸具有紫外吸收特性,在波长280nm处有最大吸收值。
镰刀形细胞贫血:血红蛋白β链第六位上的Glu→Val替换。
第二节肽肽键:一个氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基脱水综合而形成的酰胺键叫肽键。
肽键是蛋白质分子中氨基酸之间的主要连接方式,它是由一个氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基缩合脱水而形成的酰胺键。
少于10个氨基酸的肽称为寡肽,由10个以上氨基酸形成的肽叫多肽。
谷胱甘肽(GSH)是一种存在于动植物和微生物细胞中的重要三肽,含有一个活泼的巯基。
参与细胞内的氧化还原作用,是一种抗氧化剂,对许多酶具有保护作用。
化学性质:(1)茚三酮反应:生产蓝紫色物质(2)桑格反应第三节蛋白质的分子结构蛋白质的一级结构:是指氨基酸在肽链中的排列顺序。
蛋白质的二级结构:是指蛋白质分子中多肽链本身的折叠方式。
西安大学生物工程学院2020级《生物化学》考试试卷(143)
西安大学生物工程学院2020级《生物化学》课程试卷(含答案)__________学年第___学期考试类型:(闭卷)考试考试时间:90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题(50分,每题5分)1. 琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中唯一掺入线粒体内膜的酶。
()答案:正确解析:2. 沿糖酵解途径简单逆行,可从丙酮酸等小分子前体物质合成葡萄糖。
()答案:错误解析:3. 反密码子GAA只能辨认密码子UUC。
()答案:错误解析:4. DNA的复制过程同时需要DNA聚合酶和RNA聚合酶参与。
()[浙江大学2010研]答案:正确解析:DNA复制时需要RNA引物,RNA引物由RNA聚合酶合成。
5. tRNA中含有大量修饰碱基,完全没有修饰的tRNA是没有功能的。
()答案:正确解析:6. 有些蛋白质的内含肽是断裂的,需要经过反式拼接才能得到有功能的蛋白质。
()答案:正确解析:7. 细胞中DNA链延长的速度随细胞的培养条件改变。
()答案:错误解析:细胞DNA的拷贝发生在细胞周期的DNA合成期,细胞培养条件的前提改变会改变细胞的生长周期,它可通过控制复制激活起始的频率来实现,但复制叉移动(链延长)的速度在改变复制总速度的情况下仍保持相当的稳定。
8. 每种生物都是有自己特有的一套遗传密码。
()答案:错误解析:9. 非循环式光合磷酸化既可产生ATP,也可产生O2和NADPH。
()答案:正确解析:非循环式光合传感磷酸化电子沿Z形传递,直至NADP+产生NADPH,电子传递过程中产生的H+浓度差推动ATP的生成,同时分解H2O分子产生O2。
10. 当溶液的pH升高时,ATP水解释放的自由能明显增高。
()答案:正确解析:2、名词解释题(25分,每题5分)1. 超氧化物歧化酶答案:超氧化物歧化酶是指内的一种重要的天然抗氧化酶,是典型清除超氧阴离子的主要酶。
在其催化下超氧阴离子与H+作用使一个超氧阴离子被氧化为O2,另一个超氧阴离子还原为H2O2,所以超氧化物歧化酶在清除超氧阴离子同时又是生成H2O2的重要酶。
不同保存时间蛋白质
不同保存时间蛋白质组学
蛋白质组学是一门研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成、功能和变化的科学,具有全局性、动态性和功能性的特点。
它旨在阐明生物体中蛋白质的组成、结构和功能,揭示生命活动的本质和规律,为疾病诊断和治疗提供理论依据。
在蛋白质组学的研究中,蛋白质的保存时间是一个重要的考虑因素。
蛋白质的保存时间和条件对其结构和功能有着显著的影响。
一般来说,蛋白质在适当的保存条件下可以保持其稳定性和活性,从而保持其原有的功能。
然而,如果保存条件不当,如温度、湿度、光照等因素不适宜,蛋白质可能会发生变性、降解或聚集等现象,导致其结构和功能发生改变。
在蛋白质组学研究中,为了保持蛋白质的稳定性和活性,通常需要在低温、避光、干燥的条件下保存。
此外,还需要避免反复冻融、机械搅拌等操作,以减少对蛋白质的损害。
同时,为了评估蛋白质的保存效果,可以采用一些生物化学方法,如SDS-PAGE电泳、Western Blot等,来检测蛋白质的完整性和活性。
在蛋白质组学实验中,不同保存时间的蛋白质样品可能会产生不同的结果。
因此,在实验设计时需要考虑到蛋白质保存时间的因素,选择合适的保存条件和时间,以保证实验结果的准确性和可靠性。
总之,蛋白质组学研究中需要考虑蛋白质的保存时间因素,采取适当的保存措施,以保证蛋白质的稳定性和活性,从而获得准确的实验结果。
同时,随着技术的不断发展,未来可能会有更加先进的方法来研究蛋白质在不同保存时间下的变化规律和机制。
DNA保存液说明书
DNA 保存液说明书
本产品仅供体外研究使用,不得用于临床诊断
产品简介:
DNA 保存液由Tris 、EDTA 、防腐剂等组成,可以螯合金属离子,这样就大大减少金属离子破坏DNA 的能力,该试剂经无菌处理,不仅适用于保护溶液的DNA ,亦可用于保护组织样本中的 DNA 。
该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
操作步骤(仅供参考):
1、按实验具体要求操作,一般按保存液:DNA 样本=1:9,4℃保存。
注意事项:
1、如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品名称
规格 说明书 有效期 保存条件 DNA 保存液 100ml/500ml 1份 1年 RT
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DNA保存液_PDFRemovePassword EDTA溶液(0.25mol_L,pH8.0) EDTA溶液(0.5mol_L,pH8.0) NTE缓冲液(10×,pH7.4)
NTE缓冲液(1×,pH7.4)。
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各种生物活性物质的保存
Experience 2009-08-16 16:34:36 阅读336 评论0 字号:大中小订阅
DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法:
(网上搜索,仅供参考^_^)
1.DNA
短期保存,两年之内吧,无菌水和TE缓冲液是ok的。
如果是长期保存,比如10年20年的话,我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里,放-20°,放10年没问题。
需要用的时候,再离心后,弃去乙醇,加水或TE溶解即可。
长期保存用TE,DNA本来就是酸性,所以需要弱碱性环境保存,如果用中性或者酸性环境保存容易降解。
保存两年应该会降解的!还是不要超过两年,再一年内都有降解的可能,所以还是要尽快的利用了。
做成干粉不太可能,哪里有那么多的量!还是在-80度以下保存吧,也要避免反复冻融。
如果DNA很纯的话,应该影响不是很大啊,有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度,你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊,跑个电泳看看啊,如果出现smear,就不要用了啊!
提纯的DNA放在4度一段时间(数周-数月)都没问题。
但是长期保存建议-20度,并且浓度不要稀释的太低,否则容易降解。
2.RNA
RNA若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。
保存RNA应该尽量低温。
为了防止痕量RNase的污染,从富含RNase的样品(如胰脏、肝脏)中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA,对于长期贮存更是如此。
从大鼠肝脏中提取的RNA,在水中贮存一个星期就基本降解了,而从大鼠脾脏中提取的RNA,在水中保存3年仍保持稳定。
另外,长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。
为了增加贮存RNA样品的稳定性,可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中,存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。
来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
当准备使用RNA 时,可以使用下列方法沉淀RNA:加入NaAc至0.3M,12,000×g 离心5分钟。
RNA即使是放在-80度下也会降解,所以最好的保存方法是将RNA逆转成cDNA后保存。
提取的RNA保存在DEPC处理的水中,加入RNAse抑止剂,在-80度保存2个月,应该是可以保证不降解的。
最好是反转录后保存。
一旦生物样品被收集采摘,离体组织的RNA会立刻变得非常不稳定,极易被降解。
由于特异及非特异的RNA降解,或者由于样品
采集过程中的应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。
对于生物芯片、基因表达矩阵分析(Array Analysis)、定量RT-PCR 等实验来说,采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态,是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。
记得以前学植物遗传的同学常常要带着液氮罐,骑着单车到田里采样——那个液氮罐的盖子有点问题,一颠就冒白烟,吓得一路上行人、车辆纷纷躲避,很是招摇,据说有一次觉得液氮不够了,赶着坐出租回来,那可是连哄带骗才上了的士,到学校时司机已经紧张得面无人色了——这真令贪玩的我们非常羡慕,只恨这等趣事怎么就落不到我们头上。
对当事人来说,每周一次带着液氮罐到处跑实在不算一种有趣的经历。
没有办法,为了保持样品的RNA完整真实,要么当场提RNA,要么液氮保存,一直如此。
不过自从有了RNAlater,这种有趣的场面就会越来越少了。
RNAlater是特殊的样品储存液,只要在采样后立即将新鲜样品浸入这种液体试剂,RNlater可以迅速渗透到组织或其他生物样本中,稳定并保护RNA完整而不被降解,确保下游分析得到的数据真实反应样品的表达信息。
样品储存液中保存的新鲜样品可以在不超过37度的高温天气下保存一天,或者在25度室温下保存一周;或者4度冰箱存放一个月;或者负20度长期保存而使RNA保持完整免受降解。
这种技术为在不同温度和不同地点下的采样、运输和保存样品提供了极大的方便,同样适合手术/解剖过程中部分样品的保存。
RNAlater的用法非常简单,只要在采样后立即将样品完全浸入适量(10ul/1mg组织或者5倍体积)的RNAlater中即可。
取样的动作要尽量快速利索,组织样品的大小以厚度不超过0.5公分为宜。
对于一些小的组织如小鼠的脾、肾等器官则可以整个取出浸入溶液中,较大的则应切开为厚度小于0.5公分的小块,以确保RNAlater 能迅速扩散渗透入组织块中的所有细胞中。
采样的容器应该足够大以容纳10倍于组织重量的溶液,避免组织块挤在一起,同时建议将溶液加满容器以避免在运输过程中组织块露出液面。
保存在RNAlater中的样品RNA可以:
· 37℃下稳定保存1天
· 18-25℃保存7天
· 2-8℃稳定4周
· -20℃永久保存
3.蛋白质
辛辛苦苦纯化得到的那么一点蛋白,可千万不能因为不懂得怎么保存而白白浪费了!选择什么样的贮存方法取决于该蛋白的稳定性和你打算保存多长时间以及下一步你打算如何利用。
一般来说,蛋白溶液应避免极端的pH(强酸or强碱),同时也不能接近其等电点的pH。
另外,还应该避免其他物质的掺入。
如果保存时间在24h以内,大多数蛋白可以放置到4℃。
如果保存时间在24h以上,应该考虑避免蛋白溶液长菌,可以事先
过滤一下(through a 0.22 μm filter)或者加入抑菌的物质(如叠氮化钠)。
如果保存时间超过一周,则应该将蛋白溶液冷冻起来。
通过液氮或干冰冷冻的方法使蛋白溶液迅速冷冻,可以有效避免蛋白的变性。
为避免多次冻溶致使蛋白活性降低或变性,应该将蛋白溶液分装保存,一次用多少就取多少。
除此之外,还可以加入一些甘油(5-50% (w/v))或者血清(10 mg/ml)帮助目的蛋白保持稳定。
如果打算保存数月之久,则需要将其放置于-20℃,此时要加入一定量甘油,避免“冻伤”。
另外,还可以用硫酸铵将蛋白沉淀置于4℃保存(损失较多,不建议采用);也可以将蛋白以干粉状态保存(保存时间最久)。
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新提取的蛋白可以分装存在-80度冰箱,保存(保险系数)1年,如果加入buffer煮过的蛋白在-20保存。
最好提取的蛋白,一部分保存,一部分立刻加Buffer煮,做实验。
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蛋白的稳定性及保存方法——PIERCE公司技术资料
Proteins comprise an extremely heterogeneous class of biological macromolecules. They are often unstable when not in their native environments, which can vary considerably among cell compartments and extracellular fluids. If certain。