关于慢病毒感染的相关知识总结..
慢病毒感染问题全解答
A&Q|慢病毒感染问题全解答慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。
它可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，可有效地感染分裂细胞和非分裂细胞，所以慢病毒载体能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，能够方便快捷地实现基因的长期、稳定表达。
在使用慢病毒的过程中，可能因病毒的浓度、细胞的状态、操作规范和时间把握等出现各种问题，今天小恒就来和大家聊一聊在其中可能会遇到的问题，以及如何解决这些问题~1.对照病毒或目的病毒感染细胞以后，细胞形态发生改变或者细胞死亡，是否说明病毒有毒性?首先，确定病毒是否有支原体或细菌污染；其次，确定病毒感染MOI是否过高，梯度稀释后感染，寻找合适的MOI。
同时考虑目的细胞可能比较敏感，更换其它细胞感染确定病毒是否有问题。
病毒对某些敏感细胞有毒性可能是不可避免的。
如果以上都排除后细胞状态仍然不好，尝试增加血清含量，观察细胞状态是否好转2.病毒感染目的细胞效率低?和以下几个因素有关◆病毒活性解冻病毒一定要在冰上进行，尽量避免反复冻融，-80℃保存半年以上需要重新测滴度；◆目的细胞最好预实验测试过，看病毒载体是否合适感染目的细胞。
一些难感染的细胞，如贴壁不好的细胞，原代细胞等，或者体内动物实验适合用腺病毒或AAV；◆当然也和MOI值、感染时间以及是否加入polybrene等因素有关，可在实验中进行实当的摸索和调整，提升慢病毒的感染效率3. 如何确定向细胞中加入慢病毒的最佳时间？慢病毒感染细胞后2~3天可观察慢病毒携带的基因荧光表达情况，在细胞汇合度30~50%且细胞状态良好时加入慢病毒，确保在感染后2天时细胞增长达到70%左右的汇合度。
3.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后3天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。
针对大部分细胞系：传代周期在2~3天，感染时细胞铺板的密度保持在30~50%左右针对某些原代细胞：由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到70~80%左右针对非分裂细胞：如神经元细胞，接种后不再增殖，此时可以按照100%的汇合度进行接种4.慢病毒感染后什么时间基因表达到峰值慢病毒感染后大部分细胞会在3天左右GFP或目的基因表达达到峰值，但是对于生长缓慢的细胞，达到峰值的时间会更长。
慢病毒原理
慢病毒原理慢病毒，又称慢性病毒，是一类感染机体后具有长期潜伏期的病毒。
与急性病毒不同，慢病毒具有较长的潜伏期和慢性发展过程，因此对人类和动物健康造成了长期的威胁。
慢病毒的原理主要包括传播途径、感染过程和致病机制。
首先，慢病毒的传播途径多样，主要包括血液传播、性传播、母婴传播和空气传播等。
其中，血液传播是慢病毒最为常见的传播途径之一，例如艾滋病病毒（HIV）通过血液传播是造成艾滋病的主要原因之一。
另外，慢病毒还可以通过性接触、母婴垂直传播和呼吸道飞沫传播等途径传播，因此在预防和控制慢病毒感染方面需要采取多种有效的措施。
其次，慢病毒的感染过程相对复杂。
一般来说，慢病毒感染后会经历潜伏期，这段时间内病毒在宿主体内进行潜伏和复制，但并不引起明显的临床症状。
随着时间的推移，病毒逐渐破坏宿主的免疫系统和器官组织，最终导致慢性疾病的发生。
以乙型肝炎病毒为例，感染者在潜伏期内往往没有明显症状，但长期感染会导致肝脏损伤，甚至引发肝硬化和肝癌等严重后果。
最后，慢病毒的致病机制涉及多个方面，包括病毒的侵入、复制和传播，以及宿主免疫系统的应答和病理损伤等。
病毒侵入宿主细胞后，利用细胞内的生物合成机制进行复制，不断增加病毒颗粒的数量。
同时，病毒的复制和蛋白质的表达会诱导宿主免疫系统的应答，但慢病毒往往能够逃避宿主的免疫攻击，导致病毒长期存在于宿主体内。
此外，慢病毒的复制和病理变化还会引起宿主组织的炎症反应和器官功能损伤，最终导致慢性疾病的发生和发展。
综上所述，慢病毒的原理涉及传播途径、感染过程和致病机制等多个方面，对于预防和控制慢病毒感染具有重要意义。
因此，加强对慢病毒的研究和监测，制定科学有效的防控策略，对于维护人类和动物健康具有重要意义。
疾控中心个人慢病工作总结
疾控中心个人慢病工作总结
在疾控中心工作已经有好几年了，我一直都专注于慢性疾病的防控工作。
在这段时间里，我深刻体会到了慢性疾病对人们健康的影响，也认识到了预防和控制慢性疾病的重要性。
在这篇文章中，我将对我个人在疾控中心的慢病工作进行总结，分享一些经验和心得。
首先，我所在的疾控中心一直致力于慢性疾病的宣传和教育工作。
我们开展了一系列的健康讲座和宣传活动，向公众普及慢性疾病的相关知识，提高人们对慢性疾病的认识和防范意识。
此外，我们还针对不同年龄段和职业群体开展了定制化的健康教育活动，让更多的人了解到如何预防慢性疾病，保持健康的生活方式。
其次，我在慢病工作中也注重了慢性疾病的筛查和管理工作。
我们建立了慢性疾病的健康档案，对高危人群进行定期的体检和筛查，及时发现慢性疾病的早期症状，进行干预和管理。
同时，我们也积极引导患者进行规范的治疗和康复，帮助他们更好地控制疾病，提高生活质量。
此外，我还参与了一些慢性疾病管理的科研项目，通过数据分析和实地调研，深入了解慢性疾病的流行病学特征和影响因素，为慢性疾病的防控工作提供科学依据和决策支持。
总的来说，我在疾控中心的个人慢病工作中，不断学习和积累了丰富的经验，也深刻认识到了慢性疾病防控工作的重要性。
我将继续努力，为预防和控制慢性疾病做出更大的贡献。
希望通过我们的努力，能够让更多的人远离慢性疾病的困扰，过上健康、幸福的生活。
关于慢病毒感染的相关知识总结讲解
慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
慢性感染的概念和举例
慢性感染的概念和举例
慢性感染是一种病毒、细菌等病原体长期存在于人体内的感染状态。
与急性感染不同，慢性感染通常具有较轻的症状，但其持续存在的时间较长，可能会导致长期的健康问题。
以下是慢性感染的一些常见类型和举例。
1. 结核病：结核分枝杆菌是一种慢性感染病原体，会引起肺结核、淋巴结结核等疾病。
由于其症状缓慢出现，可能不易察觉，而且治疗期长，因此容易漏诊和治疗不到位，对患者的身体健康造成很大的威胁。
2. 慢性乙型肝炎：乙型肝炎病毒会长期存在于肝脏中，导致肝脏组织的破坏和功能性损伤。
乙肝病毒的潜伏期较长，可能需要数十年才能显现症状。
乙肝病毒是全球感染人数较多的病毒，对全球人民的健康长期造成严重的威胁。
3. 微生物感染：某些微生物，如螺旋体、立克次体等，会引起各种慢性感染疾病，如慢性门脉高压、慢性肠炎等。
这些病原体在人体内长期寄生，由于其数量较少、生长缓慢，因此容易被忽略。
4. 慢性龋齿：龋齿是一种慢性细菌感染，在口腔内长期存在，对牙齿组织造成损伤。
龋齿症状不易出现，但长期存在可导致牙齿脱落、口腔感染等问题。
5. 慢性病毒感染：某些病毒如愤怒病毒、带状疱疹病毒等，可引起慢性病毒感染。
这些病毒长期存在于人体内，导致神经系统、免疫系统等的损伤，往往会对
患者的身体健康造成长期的影响。
总之，慢性感染虽然症状不明显，但其长期在人体内寄生，可能对健康造成长期的潜在危害。
因此，我们需要注意保持身体健康，及时发现和治疗慢性感染。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
慢病毒的感染机制及其防治策略
慢病毒的感染机制及其防治策略慢病毒是一类病毒，与传统的快速病毒不同，它们具有慢性感染的特点。
慢病毒的传染途径多样，可以通过血液、性接触、母婴传播等多种途径进行感染。
慢病毒感染后，会在体内潜伏数年甚至十几年，让感染者认为自己身体良好，但在这段时间里，感染者的健康却受到了慢性威胁。
本文将深入探讨慢病毒的感染机制及其防治策略。
一、慢病毒的感染机制1. 慢病毒的侵入过程慢病毒通过多种途径感染人体，其中血液途径是主要途径。
血液是慢病毒侵入人体的突破口。
在日常生活中，如注射毒品使用共享注射器、输血、器官移植、性行为等都会导致血液途径的感染。
2. 慢病毒的感染过程慢病毒的感染过程会受到许多因素的影响，包括病毒浓度、感染途径等。
慢病毒会侵入机体后，进入相关组织细胞，如巨细胞、淋巴细胞等，并在细胞内复制繁殖。
在慢病毒的复制过程中，它们会借助宿主细胞内的特殊机制，如表达特殊的病毒酶，使宿主细胞产生异常代谢，导致慢性病情的发生。
3. 慢病毒的传播慢病毒传播的途径多样，包括母婴垂直传播、血液途径传播、口腔黏膜摩擦等途径。
以乙型肝炎病毒为例，它能够通过血源、婴儿出生时从感染母亲的阴道中得到、疫苗接种时传染等多种途径传播。
二、慢病毒的防治策略1. 留意疫苗接种对于可预防的慢病毒而言，如肝炎B型和人类乳头瘤病毒疫苗，及时接种是精准预防的重要手段。
2. 定期筛查定期进行血液传染病筛查，如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒等，可以及时了解自身健康状况，并采取必要的治疗措施。
3. 保证注射器个人使用分享注射器是造成共生性疾病感染的主要原因之一。
因此，在注射药物等行为时，使用个人注射器是非常重要的预防措施。
4. 适度运动和饮食慢病毒感染会使患者出现许多生理和情感问题，运动和饮食等健康生活方式会对提高机体免疫力、降低慢病毒产生和复制等防治病毒的重要作用。
总之，慢病毒是一类长期潜伏的病毒，它们的传播和繁殖方式都很特殊，因此我们需要充分了解和认识慢病毒的感染机制，才能更好地预防和治疗慢病毒相关疾病。
慢病毒原理及注意事项
慢病毒原理及注意事项慢病毒介绍慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。
其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。
慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。
一经感染宿主细胞，慢病毒即利用反转录酶将其RNA转录成双链DNA，随后永久的整合到宿主细胞的染色体中，实现长时间稳定表达。
此外，慢病毒免疫原性低，不易造成免疫反应，所以现在慢病毒系统除了被广泛应用到各种细胞系的基因敲除/敲入、基因过表达、RNA干扰、microRNA研究，还大量应用于活体动物实验中。
慢病毒注意事项1、病毒转导至细胞后多久才会表达？Lentivirus表达时间较长，但在一般代谢较旺盛的细胞（如293T，HEK293等）上，病毒转导24小时后可以观察到荧光；代谢比较缓慢的细胞（如原代培养细胞，神经干细胞，胚胎干细胞等）荧光蛋白表达时间较长，转导后72-96小时甚至更长时间才可以观察到荧光。
转导后的细胞可以连续培养一周，通过观察荧光的表达时间和表达强度来确定病毒对目的细胞的转导情况。
2、慢病毒对目的细胞的转导效率很低，如何提高病毒的转导效率？确保转导之前细胞处于良好的生长状态；可以使用易感细胞如293T进行滴度测试，验证病毒液滴度是否出现大幅下降；适当提高病毒转导的MOI值和延长转导时间。
3、慢病毒转导后，细胞状态很差甚至出现大量死亡，如何解决？转导前细胞状态不佳，加入病毒量太大，病毒携带的目的基因含有细胞毒性均有可能导致目的细胞状态异常，解决方法主要有：（1）稳定转导前细胞状态；（2）降低病毒加入量，降低MOI值，验证目的基因的细胞毒性；（3）转导6小时后观察细胞，如细胞状态出现异常时更换新鲜培养基，若无则24小时后更换。
慢病毒载体相关知识问答大总结
慢病毒载体相关知识问答大总结慢病毒包装技术专题Q:什么是慢病毒 ?A: 慢病毒载体 (Lenti vector)是用于感染细胞以实现稳定导入基因或siRNA的病毒载体系统，其感染效率可以达到100%。
慢病毒和细胞结合后通过包装蛋白将含有目的基因或者干扰序列释放到细胞内。
慢病毒RNA通过逆转录酶转录为DNA。
DNA整合前复合体进入细胞核并整合到靶细胞的染色体DNA。
由于靶基因或基因干扰序列整合到染色体上并且伴随着细胞分裂时DNA的复制一起复制，基因的导入能够获得稳定的表达。
慢病毒的显著优势在于其可以整合到非分裂细胞，而其他载体(如非病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体)不具备整合到靶细胞染色体的特性，或者只能整合到分裂细胞的染色体(如常规的逆转录病毒)。
目前我们使用的慢病毒载体是基于HIV-1改造而来，该载体使用最为广泛，经过科学家的多次改造在包装滴度和使用平安性等方面都特别抱负。
在实际的使用中我们可以用来表达目的基因或目的基因加上报告基因，近年来随着RNAi 讨论的深化，越来越多的科学家用慢病毒载体来表达干扰序列. Q:慢病毒用于rna i讨论A:目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的讨论中。
由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。
采纳事先在体外构建能够表达siRNA的载体, 然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。
在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的，这是由于RNA聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A尾。
当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3端形成1~4个U。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册:一、慢病毒的储存与稀释病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时 1.-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于个月，建议在使用前6 ①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过需要重新滴定病毒滴度；因此在病毒使用过程中反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10% ②,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细 2.请尽量℃保存含血清或含双抗不影响病毒感染胞用PBS或无血清培养基(()。
混匀分装后4 ) 分装后使用。
在三天内用完In Vitro二、慢病毒用于体外（）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒值）之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得（In Vivo以及在体。
（使用到合适的感染复数（MOI 值）24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞①）作为平行实验的对照细胞。
(HEK293T，Hela在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，②含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒TU/ml③一般慢病毒单位为88TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X10滴度为>1X10个具有生物活性的慢病毒颗粒。
细胞的感染预实验实验前按照不同HEK293T 24孔培养板为例，进行目的细胞和 2. 以和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使MOI的MOI设置不同的感染孔，并根据溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
慢病毒引起的免疫学反应和致病机制
慢病毒引起的免疫学反应和致病机制慢病毒是一类病毒，其病毒复制和致病过程较慢，具有持续性和潜伏期。
慢病毒感染后可以引起免疫学反应，在机体内不断激发免疫反应，而且会导致组织细胞持续凋亡，最终导致免疫缺损。
具体来说，慢病毒感染后会输出一些蛋白质及其片段、基因型或表型位点或表达的锚定分子、有机分子链、糖链、极性和反极性脂质等作用于宿主免疫系统，从而刺激机体内的免疫细胞参与这个状态的演变。
慢病毒感染的靶细胞主要是生命周期较长的细胞，如神经系统、呼吸系统、泌尿生殖系统等，这些细胞所在的生理界面群具有特殊的生物学特性，可以持久存活。
由于慢病毒比较复杂，感染后可导致长时间持续病变，患者有可能在多年、甚至几十年之后才会发病，医学上将此类疾病称为慢性进展性病变。
慢病毒的致病机制主要有三点：第一是直接感染，由于慢病毒感染的细胞具有极长的生命周期，所以对细胞的破坏将很难自我修复而且常常无法彻底消除，导致炎症反应的连续发生并逐渐加重；第二是自身免疫反应，引起的应答反应极为严重，并导致自身免疫反应，被损坏的组织细胞不断死亡，并引发病理反应，而这种病理反应还可能进一步导致身体免疫缺陷，风险进一步增加；最后是异常代谢物的沉淀和聚集，例如蛋白质、糖质、胆固醇、核酸等，会堵塞细胞通道，并象闭塞性疾病一样引发损伤和破坏，导致损伤显著，并致使组织加温和病变。
在感染慢病毒时，体内会产生两种免疫反应：细胞免疫（Cellular Immunity）和体液免疫（Humoral Immunity）。
细胞免疫主要由T细胞负责，其通过识别并杀死感染慢病毒的病毒或被感染细胞。
T细胞会释放一系列的细胞因子，例如干扰素（Interferon，IFN）、白介素（Interleukin，IL）、肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）等来抑制病毒的复制，同时也会促进CD8+T细胞、自然杀伤（Natural Killer，NK）细胞等细胞参与杀伤病毒感染的细胞。
细胞慢病毒感染实验总结
细胞慢病毒感染实验总结
慢病毒源于反转录病毒，但又有所不同。
在感染能力方面比反转录病毒还强，可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、干细胞等多中类型的细胞，又很少引发基因的免疫反应。
实验方法：
在大规模的感染之前，优化以下参数：细胞种植密度，慢病毒的数量，嘌呤霉素的浓度，感染时间，以确定一个实验的最适条件。
在6cm培养皿中种植适当密度的XXX细胞，每孔体积6mL。
贴壁细胞：转染前1天种植XXX细胞。
悬浮细胞：转染当天种植XXX细胞，培养基中需要含有凝聚胺。
XXX细胞中加入病毒：贴壁细胞，弃掉培养基，加入新鲜的含有凝聚胺的培养基。
或者，弃掉部分培养基并且补充含有凝聚胺的培养基。
调整体积和凝聚胺的浓度，使得凝聚胺的终浓度为8μg/mL。
病毒感染：孵育细胞过夜。
感染后24h更换培养基。
弃掉培养基，换入6mL新鲜的培养基。
如果需要抗生素选择，则使用含有抗生素的新鲜培养基。
注意：嘌呤霉素的浓度根据每种细胞系来进行优化；常用的浓度范围为2-5μg/mL。
孵育细胞，根据需要每隔几天更换培养基（如果需要，则要含有抗生素）。
孵育时间的长短主要依赖于感染后的试验。
慢病毒转染原理
慢病毒转染原理
慢病毒转染是一种常用的基因传递技术，它利用慢病毒病毒粒子作为载体将目标基因导入靶细胞。
慢病毒是一类特殊的病毒，具有较高的感染效率和稳定的基因表达能力，因此被广泛应用于基因转染领域。
慢病毒转染的基本原理可以分为以下几个步骤：
1. 构建慢病毒载体：首先，将目标基因插入到慢病毒载体的适当位点上。
慢病毒载体通常包括了病毒的基因组结构，例如表达型蛋白、包装型蛋白等。
2. 包装慢病毒：将构建好的慢病毒载体导入特定细胞系，并通过培养和传代扩增病毒。
这些细胞会产生足够多的慢病毒病毒颗粒。
3. 收集病毒颗粒：从培养基中收集慢病毒病毒颗粒。
通常，病毒颗粒可以通过浓缩和超速离心等方法获得。
4. 转染靶细胞：将收集到的病毒颗粒加入待转染的靶细胞培养基中。
病毒颗粒会与细胞表面的受体结合，进入细胞。
5. 病毒基因组整合到靶细胞基因组：一旦进入细胞内，慢病毒会释放出自己的遗传物质，包括病毒基因组RNA和逆转录酶。
逆转录酶能够将病毒基因组的RNA逆转录成DNA，并将其整合到宿主细胞的染色体上。
从而实现病毒基因的稳定表达。
综上所述，慢病毒转染是一种利用慢病毒病毒粒子作为载体将基因导入到靶细胞的技术。
通过包装慢病毒病毒颗粒，并与靶细胞进行转染，实现了基因的稳定表达。
这种技术在基因治疗、基因功能研究等领域具有重要的应用价值。
关于慢病毒感染的相关知识总结
慢病毒使用操作手册一、慢病毒得储存与稀释:1、病毒得储存:收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验,可以将病毒暂时放置于4 ℃保存;如需长期保存请放置于-80℃(病毒置于冻存管,并使用封口膜封口)①病毒可以存放于-80℃6个月以上;但如果病毒储存时间超过6个月,建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度:每次冻融会降低病毒滴度10%;因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融,为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次得使用量进行分装。
2、病毒得稀释:如果需要稀释病毒,请将病毒取出置于冰浴融解后,使用培养目得细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外(In Vitro)实验:感染培养原代细胞与建系细胞。
慢病毒对各种细胞与组织得亲嗜性不同,在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献,了解慢病毒对您得目得细胞得亲嗜性,感染复数(MOI 值)以及在体(In Vivo)注射所需要得病毒量。
如果没有相关文献支持,可以通过感染预实验得到合适得感染复数(MOI 值)(使用24孔板检测病毒对目得细胞得亲嗜性)。
慢病毒感染目得细胞预实验1、慢病毒感染目得细胞预实验注意事项:①测定慢病毒对目得细胞得亲嗜性时,需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高得细胞(HEK293T,Hela)作为平行实验得对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时,可以用完全培养基(培养目得细胞用)稀释;理论上,含有血清,双抗或者其她营养因子得完全培养基不影响慢病毒得感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml,即每毫升中含有具有生物活性得病毒颗粒数。
如:病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性得慢病毒颗粒。
2、以24孔培养板为例,进行目得细胞与HEK293T 细胞得感染预实验实验前按照不同得MOI设置不同得感染孔,并根据MOI与细胞数量计算所需要得病毒量,如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
慢病毒传播途径及其防治研究
慢病毒传播途径及其防治研究慢病毒是一类引起动物或人类疾病的病毒，其传播途径多种多样，防治也需要多方面进行研究和实践。
一、慢病毒的传播途径慢病毒的传播途径有两种主要方式，一种是通过体液的接触传播，另一种则是通过食物或水传播。
下面将详细介绍这两种传播途径。
1. 体液的接触传播体液的接触传播是慢病毒最主要的传播途径之一。
在这种情况下，慢病毒通常通过直接接触感染者的体液来传播，例如血液、精液、唾液等。
感染者可以是人或动物，这包括有病症的个体和无症状感染者。
这些接触传播中的体液能够直接进入人或动物的体内，从而感染最终导致相关疾病的发生。
2. 食物或水传播食物或水传播是另一个慢病毒传播途径。
这时，慢病毒通常会通过霉菌或细菌等其他生物体在食物或水中生长繁殖，最终会感染到人或动物。
传统上，这种情况下通常涉及到食品加工或使用不清洁水源，例如食物中的菌落、致病菌等。
现在，一些研究发现水包装物、空调系统、高压灭菌等也可能会成为传播病毒的途径。
二、慢病毒的防治研究慢病毒的防治研究已经进行了很长时间，其研究的方向和内容也十分多样化。
1. 传统防疫措施传统的防疫措施通常包括隔离、消毒等方式。
这些措施可以有效地限制慢病毒的传播，从而降低人或动物感染的风险。
此外，还可以通过尽早进行诊断和治疗来减少慢病毒感染的影响。
2. 疫苗开发开发疫苗也是慢病毒防治的一个重要方向。
但是，由于慢病毒突变频繁，因此生产一种有效的疫苗非常困难。
但是在近几年中，一些新型技术已经被开发出来，这样的技术可能会有助于解决这个问题。
3. 新型研究方法新型研究方法也给慢病毒的防治研究带来了很大的帮助。
例如，一些基于新型技术的抗体可以被用来治疗慢病毒感染。
另外，一些基于CRISPR/Cas9的免疫治疗方法也被应用到慢病毒的研究中。
三、结论慢病毒的传播途径多样，这限制了人们发现和治愈慢病毒的能力。
但是，随着科技的日益发展，这个问题已经得到了很好的解决。
我们应该继续研究慢病毒的各个方面，寻求更好的预防和治疗方法，以此来保护人类和动物的健康。
慢病毒的基本原理和应用
慢病毒的基本原理和应用慢病毒（Slow Virus）是指一种具有长期潜伏期或长期进展的病毒，在宿主体内繁殖较慢，而病程较长的感染性疾病。
慢病毒以肝炎病毒、感能病毒、人免疫缺陷病毒（HIV）等为代表。
慢病毒是一种特殊的病毒，其感染机制、致病机理和治疗方法都与其他病毒不同。
一、慢病毒的基本原理慢病毒的基本原理可以简单地分为以下几个方面。
1. 慢病毒的潜伏期长。
以艾滋病毒为例，患者感染后，可潜伏多年，甚至10年以上，其间没有任何症状表现。
这就给治疗患病的时机带来了难度，也使得艾滋病具有了很强的传染性。
2. 慢病毒可以长期影响人体的免疫系统。
慢病毒比其他病毒更加复杂，可以在人体内长期生存。
慢病毒通过影响人体的免疫系统，消耗人体的免疫力，使得患者陷入易感染、易发病、病程较长的状态。
3. 慢病毒的感染难以被查明。
由于慢病毒繁殖较慢，对人体产生的毒性较小，因此在感染初期难以快速检测出来。
这也是慢病毒传染性强的原因之一。
二、慢病毒的应用虽然慢病毒对人体的危害不小，但科学家也发现慢病毒也具有较大的疗效。
下面我们来看看慢病毒的应用领域。
1. 肿瘤治疗。
慢病毒呈现的长期作用和稳定的表达是其治疗肿瘤的重要特点之一。
利用载了有效目标基因的慢病毒病毒载体，经过基因修饰而改变其发病机制，可以将慢病毒载体作为介导治疗的载体，将其放置在肿瘤细胞中，从而减少肿瘤细胞的生长。
2. 神经退行性疾病的治疗。
神经退行性疾病是指一类慢性神经系统疾病，常常由于神经元死亡导致，如阿尔茨海默症、帕金森病等。
慢病毒通过基因修饰可帮助人体产生某种神经元离子通道，通过将离子通道放在感觉神经元和中枢神经元上，减少神经元死亡，保护人体神经系统的健康。
3. 病毒基因敲除治疗。
利用了慢病毒的基因敲除能力，将慢病毒转化成人体行为控制器，将慢病毒病毒载体作为载体，递送到患者体内，进行病毒治疗。
通过这种治疗方式，可以更加有效地处理患病问题，避免上述疾病的出现，并显著提高生命质量。
慢病毒的生物学和流行病学研究
慢病毒的生物学和流行病学研究慢病毒是一类病毒，与常见的急性病毒不同，它们会在宿主体内潜伏数年，十年甚至二十年之久，最终导致严重的慢性疾病。
对于慢病毒的生物学和流行病学研究，对于了解这类疾病的发生机制以及疫情的控制和治疗具有重要意义。
在本文中，我们将深入探讨慢病毒的生物学和流行病学研究的相关内容。
一、慢病毒的生物学慢病毒是一类单链RNA病毒，属于反转录病毒。
它们包含三个基因，分别编码外壳蛋白、反转录酶和基质蛋白。
这些病毒可通过三种传播途径传播：1. 血液传播；2. 性接触传播；3. 父母到子女的垂直传播。
慢病毒还具有非常复杂的复制机制。
当它们侵入宿主细胞时，它们会使用反转录酶将自己的RNA转录成DNA，并将其插入宿主的DNA。
此后，它们会用宿主细胞的RNA聚合酶转录它们的DNA，并在宿主细胞内复制成新的病毒。
慢病毒通常具有非常长的潜伏期，这是因为它们能够保持低复制率并避免宿主免疫系统对其的清除。
它们也能够传播到多个组织，包括大脑、脾脏、骨髓等，发挥其致病作用。
二、慢病毒的流行病学慢病毒感染全球范围内普遍存在。
据统计，全球约有3700万人感染艾滋病病毒，而慢性乙肝病毒感染人数超过2亿。
其他慢病毒感染包括 HTLV-1、慢性乙型肝炎和慢性C型肝炎等。
慢病毒的流行病学因其传染途径和发病率的差异而有所不同。
艾滋病以性传播和血液传播为主要传播途径，主要影响发展中国家且致死率高。
乙肝和C肝主要通过血液传染，而垂直传播也是其主要的一种传播方式。
而HTLV-1主要通过垂直传播和性接触传播。
慢病毒造成的硬性经济负担因疾病类型和不同地理分布而有所不同。
在最严重的慢病毒流行地区，这些疾病与生产和经济活动直接相关，可能导致失去劳动力和经济资源的严重后果。
然而，在发达国家，这些慢病毒很大程度上影响着高风险人群，例如吸毒者和其他传染病代表，这些人通常被社会边缘化，并且缺乏医疗保健服务的覆盖范围。
三、慢病毒的治疗目前尚无完美治疗慢病毒的方法，因为它们往往难以被根治。
慢病毒侵染及分子克隆最全知识讲解，学习这一篇就够了！
慢病毒侵染及分子克隆最全知识讲解，学习这一篇就够了！一、慢病毒基础简介二、慢病毒体外包装三、慢病毒体外侵染四、慢病毒滴度测定五、慢病毒体内侵染六、慢病毒质粒构建一、慢病毒基础简介简介：1.慢病毒是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体；2. 逆转录病毒载体；3. 它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力；4. 在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。
形态结构：侵染过程：二、慢病毒体外包装1.人工体外包装生产慢病毒慢病毒包装的条件：①包装细胞（HEK293T)②辅助质粒（RRE , REV, Vsvg)③目的慢病毒质粒④转染2. 过表达目的基因的慢病毒包装①试剂：1）包装细胞（HEK293T)2）辅助质粒（RRE , REV, Vsvg)3）携带GFP基因CDNA的质粒（Fugw-GFP, Plx304)4）脂质体转染②步骤：1)传代293T细胞；2)24h 后，取1.5 ml EP管，加入OPTI-MED，加入RRE , REV, Vsvg，加入携带表达目的基因的Fugw-GFP质粒，混匀，加入脂质体，吹打混匀；3）静止30min,加入到HEK293T 细胞，等待48 h；4）收集上清即为慢病毒。
3.干扰目的基因表达的慢病毒包装①试剂：1）包装细胞（HEK293T)2）辅助质粒（RRE , REV, Vsvg)3）携带干扰目的基因表达的shRNA的质粒（Fugw, PLKO.1)4）脂质体转染②步骤：1）传代293T细胞；2）24h 后，取1.5 ml EP管，加入OPTI-MED，加入RRE , REV, Vsvg，加入携带干扰目的基因表达的质粒PLKO.1 ，混匀，加入脂质体，吹打混匀；3)静止30min,加入到HEK293T 细胞，等待48 h；4）收集上清即为慢病毒。
三、慢病毒体外侵染1.慢病毒体外侵染步骤：①细胞培养箱取出细胞到无菌操作台；②取慢病毒上清直接加入到目的细胞的培养基中，轻轻摇晃；③把细胞放回培养箱，放置2-4 天。
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慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。
混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。
二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。
慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。
如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。
慢病毒感染目的细胞预实验1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项：①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。
②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。
③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。
如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。
2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。
第一天，准备细胞：在24孔培养板接种若干孔，每个孔内接种3~5X104个目的细胞，铺板时细胞的融合率为50%左右，每孔培养基体积为100 μl；进行病毒感染时细胞的融合度约为70%左右。
第二天，准备病毒：取出4℃保存的病毒，使用台式离心机离心20 秒（使病毒完全悬于离心管底部即可）；如果是冻存在-80℃的病毒需要先在冰上融化后使用。
亦可以根据实验室的实际情况将按照MOI准确计算好的慢病毒稀释到培养基中，并尽可能保证所获得的含有慢病毒的培养基的总体积为最小体积，以期获得最佳的感染效率。
第二天，感染目的细胞：病毒准备好之后，从培养箱中拿出细胞，首先察细胞生长状态，如细胞状态较好则开始实验。
a使用移液器吸取准确体积的病毒液加入准备好的培养基。
b吸去培养基的培养器皿中的培养基（如果细胞生长良好，密度适宜，则不用换液）。
c在目的细胞和对照细胞中分别加入计算好的病毒液。
d混匀后放于二氧化碳培养箱（37℃、5%CO2）孵育过夜。
注：感染前细胞的状态好坏对最终的感染效果高低影响很大，所以务必保证加病毒之前细胞处于良好的生长状态。
亦可以将预先准备好的培养基和慢病毒的混合液直接加入培养器皿中。
慢病毒对目的细胞的感染效率较低，通过提高MOI 值可以提高病毒的感染效率，但是当MOI高于20时，我们建议在培养基中加入ploybrene（8 μg/ml左右）来提高病毒的感染效率。
第三天，更换培养液：一般在24小时候后将含有慢病毒的培养液更换成正常培养液；在感染后观察细胞状态，如果慢病毒对细胞有明显毒性作用而影响细胞生长状态，可以最短在加病毒4小时候更换新鲜培养液后继续培养（建议在8-12小时更换为宜）。
第一次换液后，如果慢病毒对细胞没有明显毒性作用，按照正常培养条件培养换液。
第六天，感染效率检测：在倒置荧光显微镜观察荧光，估计慢病毒感染目的细胞的效率；如何由于目的基因较大而造成选择的载体不能携带Marker Gene的，可以通过Real-timeRT-PCR检测目的基因的表达来拍评估感染效率。
注意：有些慢病毒载体上带有GFP 绿色荧光蛋白，使用者可以在病毒感染96小时后用倒置荧光显微镜观察GFP 绿色荧光，以观察病毒对目的细胞的感染情况。
如果慢病毒载体携带其他Marker Gene如RFP\BFP可以用荧光显微镜在对应的激发光波长下观察荧光表达的情况。
慢病毒表达时间较慢，荧光表达所需时间较长，建议感染后96小时后观测荧光表达。
感染后的细胞可以连续培养一周，通过观察荧光的表达时间和表达强度来确定慢病毒对目的细胞的感染情况。
感染期间请根据细胞生长的情况对细胞进行及时换液，以保证细胞良好的生长状态。
三、慢病毒使用安全使用规范慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒因此没有毒性作用。
但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险，不建议使用编码已知或可能会致癌的基因的假型病毒。
除非已经完全公认某个基因肯定没有致癌性，否则均不建议采用假型病毒进行生物学实验。
使用时请参照如下所示进行实验：1．病毒操作时最好使用生物安全柜。
如果使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开排风机。
2．病毒操作时请穿实验服，带口罩和手套。
3．操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅。
如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS 溶液擦拭干净。
接触过病毒的枪头，离心管，培养板，培养液请于84 消毒液或1%SDS 中浸泡过夜后弃去。
4．用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板。
用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。
离开显微镜实验台之前，用70%乙醇清理显微镜实验台。
5．如需要离心，应使用密封性好的离心管，或者用封口膜封口后离心，而且尽量使用组织培养室内的离心机。
6．脱掉手套后，用肥皂和水清洗双手。
四、悬浮细胞感染方法概要1. 根据细胞的量将细胞在1.5ml 管中离心收集然后用100-200ul 的无血清培养液稀释细胞沉淀，以细胞完全浸没在培养基中为准。
2. 按照MOI 换算病毒颗粒数量，吸取病毒液加入细胞中，将1.5ml 管放在37℃度培养箱中孵育30 分钟。
3. 将管中混合溶液吸出加到培养皿中或孔里。
4. 加入足够量的新鲜培养液。
5. 12 小时后换液。
6. 96 小时后观察细胞阳性率。
五、相关专业术语：MOI：病毒感染复数传统的MOI 概念起源于噬菌体感染细菌的研究。
其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。
噬菌体的数量单位为pfu。
一般认为MOI 是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。
后来MOI 被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值，本手册中提到的MOI都是沿用这个概念。
然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI 产生了不同的含义。
能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu 表示病毒数量，因此其MOI 的含义与传统的概念相同。
六、细胞培养器皿的相关参数慢病毒重组慢病毒简介在转染遗传物质到细胞基因组中的工作中，重组慢病毒载体是一个强大和有效的工具。
慢病毒能作用于细胞周期的G0/G1期，同时具有嗜核性，所以可以感染分裂期细胞和非分裂期细胞，感染包括几乎所有的哺乳动物细胞、干细胞和原代培养的细胞。
慢病毒载体具有携带基因片段容量大、转染效率高、可感染分裂细胞及非分裂细胞、目的基因可在宿主细胞中长时间稳定表达以及安全性好、免疫反应小等优点。
所以获得了较广的应用范围。
慢病毒载体也是RNAi表达的主要手段，同化学合成和酶切形成的siRNA相比具有几个优点：其一，可以携带GFP或萤光素酶等报告基因共表达，便于跟踪、选择和富集转染的细胞；其二，可以根据需要表达不同类型的小RNA分子（siRNA、shRNA或miRNA）；其三，具有较高的转染效率，使基因沉默维持较长时间。
目前Pubmed中收录有关慢病毒载体用作实验的文章超过7万多篇，仅Nature,，Science,，Cell上便超过600篇。
已成为国际上最通用的转染系统，广泛用于各类实验室。
慢病毒的安全操作规范深圳百恩维提供的慢病毒均采用第三代系统的慢病毒载体。
水泡性口炎病毒来源的VSV-G基因代替HIV-1的env基因，这既提高了慢病毒的安全性，又使其能够感染的细胞种类大大增加。
本系统的慢病毒颗粒是“自身失活型(SIV)”，整合入靶细胞后，不会产生完整长度的RNA，仅仅具有携带目的基因的功能，感染目的细胞后不再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。
尽管如此，该病毒仍然具有潜在的生物学危险性，因此建议不要使用编码已知或可能会致癌的基因的假性病毒；并强烈建议将本系统生产的慢病毒视为二级生物安全水平的生物，而且严格遵守BSL-2或BSL-2+操作手册并进行相应的废弃物消毒。
基本操作规范如下：1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服；应戴上合适的手套和口罩。
2、病毒操作时最好使用生物安全柜。
如果使用普通的超净工作台操作病毒，请不要打开风机。
3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。
如果出现病毒污染，请立即用70%的酒精加1%SDS溶液擦拭干净。
4、如需离心，应使用密封性好的离心管，可用Parafilm膜封口后离心，而且最好使用组织或细胞培养室内的离心机。
5、用显微镜观察细胞感染情况时遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板，并在使用70%乙醇清理所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染。
废弃的含病毒的培养基加入84消毒液（1:20左右），浸泡一天后丢弃。
接触过病毒的枪头，离心管，培养板等其他物品可用84消毒液稀释液处理，也可以用煮沸处理半小时或高压湿热灭菌（121℃，30min）。
6、手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。
详细操作规范请参阅卫生部发布的《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》（WS233-2002）、美国疾病控制中心出版的《微生物和生物医学实验生物安全（第五版）》和世界卫生组织出版《WHO生物安全手册》。
操作慢病毒时请依照现有的使用指南。
包装细胞293T细胞（下述流程来自深圳百恩维，如果使用不同公司系统请参考各公司提供的方案，本流程仅供参考）293T细胞的冻存1、随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等，所以要在细胞购进时就进行备份。
2、在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。
3、倒去细胞上清液，加入D-Hank's液洗去残留的培养基。
4、加入0.25%的胰酶，消化10-20s后倒去。