家禽白血病相关病毒简介
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网状内皮增生症 (Reticuloendotheliosis)
家禽白血病
家禽白血病 (Avian Leukosis, AL) 骨髓球性白血病 (Myleoid Leukosis, ML) (Myelocytomatosis) (Myelocytoma) (ALV-J 感染) (J 病毒感染)
家禽白血病病毒亚群
REV-A基因
LTR gag pol env LTR
Signal peptide 1 109
来自百度文库
surface unit
trans-membrane unit 1189 1735 nt
REV-T基因
LTR gag pol env LTR
Signal peptide
SU
rel gene
SU
trans-membrane unit
感染鸡只
临床及病理
慢性肿瘤之临床及病变：潜伏期6周
滑氏囊肿瘤：B淋巴球形成，在滑氏囊及肝 等其他藏器形成肿瘤 非滑氏囊肿瘤：滑氏囊以外的脏器形成肿瘤
多重症状型：上数不同型别的症状及病 变可以在同一只鸡发现。
免疫抑制
细胞免疫反应及体液免疫反应皆被抑制， 以胚胎或疫苗来源的感染最为明显，后 天接触感染及血清抗体阳性鸡群较少免 疫抑制的现象。
ALVb
GGGAATCAGCCAGAGGTGTTGTGGAACAATGGGACTGCTAAGGCACTCCCCCCAGGTATTTTCTTGATTTGTGGG GACAGGGCTTGGCAAGGCATCCCGCGTAATGCCTTGGGAGGGCCCTGTTATCTAGGACAATTGACTATGCTCTCT CCTAACTTTACCACCTGGATAACATATGGGCCGAACATTACGGGTCACCGCCGTAGCAGGCGC-924
内源性
E 亚群 永远插入鸡细胞基因 基因传染 (genetic transmis 不需完整病毒) 大部份不会制造病毒 不会使细胞癌化 无临床症状 会制造病毒抗原
内源性病毒
原病毒 (provirus) 基因插入宿主染色 体而形成的，简称ALVE 依插入的部位不同给于不同的代号 有些ALVE可以表现完整的病毒 (如EV21)，因此可以繁殖及感染 有些只表现部分蛋白质并不具有感染性 另有些会增加鸡只对其他亚型白血病的 感受性，甚至降低蛋及肉的产能
J antibody ELISA J antigen ELISA
Experimental design
Isolate 2921 Clone partial gp85 gene Express ALV-J specific antigen Develop ELISA test kit for ALV-J specific antibody
临床表现
种鸡
死亡率上升1~1.5% 初产延后及不整齐 产蛋下降 17周龄产生肿瘤
临床表现 (cont.)
肉鸡
1周龄淘汰率上升 周死亡率上升 生长不整齐上市时间延后 并发感染增加 产生肿瘤
目前的检测方法
檢測方法 Ag-ELISA Ab-ELISA 病毒分離 PCR 應用 P27 antigen (所有亞群) Ab to A, B, J 所有亞群 所有亞群 材 料 拭子 蛋 培養 液 血液 血液 腫瘤 蛋 培養液 腫瘤
家禽白血病相关病毒简介
Retroviridae (反转录病毒科)
Alpharetrovirus genus, subgroup J
家禽白血病J亚群: (A,B,C,D) J
Alpharetrovirus genus,subgroup E
内源性病毒 (endogenous virus, ev)
Gammaretrovirus genus
控制
突变快速无法发展单一疫苗 病毒易被破坏 减少压抑： adequate brooding temperatures stocking density feeder space sufficient water, nutrition
控制 (续)
公母分饲 (PS场) 头 6 周达标准体重 (PS场) 4-6 周给予维生素 (vit E) 免疫时要常换针头 增加饲料蛋白质含量以增强免疫力。小 鸡：20% >28天： 15%
动态 ELISA
P27 阳性不代表感染，因为内源性病毒 也会形成 阴性鸡群可高达60%阳性率 需早期决定阳性鸡 因J病毒早期水平传播迅速，推测早期动 态p27抗原会升高
以ELISA p27抗原检测阳性鸡群
单次60%也为阴性鸡群 0-1周及5-6周各测一次 p27 ELSIA 升高为阳性鸡群 阳性鸡群抗体升高较快且高 此法简单可行
The env peptide of isolate 2921 GVHLLQ
7-QPGNVWVTWANKTGRTDFCLSLQSATSPFRTCLIGIPQYPLNTFKGYVTNVTAC
DNDADLASQT ACLIKALNTTLPWDPQELDILGSQMIKNGTTR
vr2
TCVTFGSV CYKENNRSRV CHNFDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSD
1) 急性网状内皮增生肿瘤: 现场少见 2) 生长不良及免疫抑制 3) 慢性淋巴球肿瘤及其他肿瘤 后二者则时常发生，常见于疫苗污染， 尤其是禽痘病毒疫苗、马立克病毒疫苗
REV污染的后果
接种污染rev的疫苗后，鸡只生长不良， 羽毛蓬松，腺胃炎，坏死性皮肤炎及免 疫抑制。
慢性淋巴球肿瘤及其他肿瘤与马立克氏 病或淋巴球性白血病类似，不易区别诊 断。
hr1
DLLIRPYVNQSWTMVSPINVES FSISRRYCGFTSNETRYYRGDLSNW CGSKRGEWSAGYSNR
TKCSSNTTGCG -226
hr2
GNCTTEWNYYAYGFTFGNQPEVLWNNGTAKALPPGIFLI CGDRAWQ GIPRNALGGPCYLGQLTMLSPNFTTWITYGPNITGHRRSRR-308
REV污染源
疫苗种毒污染? (可能无?)
Rev基因插入疫苗基因 Rev与疫苗同时存在
制作疫苗的细胞污染? 可能有
Duck embryo fibroblast cells were infected with REV (Yuasa, 1976)
1987台湾REV in goose (谢、陈)
REV引起的问题
传染途径
直接接触传染，排出病毒主要于急性感 染期 粪便、垫料皆含有病毒 昆虫蚊子也可以传播 介蛋传染机率较家禽白血病低，鸡胚胎 垂直传染造成免疫耐性 疫苗污染：禽痘疫苗、马立克疫苗
临床及病理
生长不良病型之临床及病变：鸡只6日龄 即可见生长不良，但饲料消耗并未减少； 羽毛蓬松，羽毛生成细胞坏死；苍白。 病理变化包括滑氏囊及胸腺萎缩，外围 神经肿大，腺胃炎，肠炎、贫血及肝脾 坏死，伴随体液及细胞免疫的抑制。
内源性病毒
ALVE21与迟羽性 (K) 的性染色体连结在 一起，增加鸡只对家禽白血病的免疫耐 性。 鸡胚胎及细胞疫苗
内源性病毒
人用的疫苗：
痲疹 (Measles),腮腺炎 (mumps), 德国痲 疹 (rubella), 黄热病 (yellow fever) vaccines
家禽白血病的诊断 品种改良及抗疾病因子的筛选 (ADOL)
ALV-J抗体阳性表示
感染甚高 与临床关系不知 可能有抵抗力 ADOL建议取鸡胚制作细胞，以J病毒攻击， 视感染情形可以知道其感受性。若有抵 抗力品种，可以用于育种
检测ALV-J特异方法的建立
Background:
P27 antigen 外源及内源皆会产生 Subgroups A,B,C,D,E,J
J病毒感染与发病情形
V-AV-A+ V+A+ V+A遺傳耐性 不發病 遺傳感受 少發病 性 遺傳感受 暫時性 性 免疫耐性 多發病
免疫耐性 (Immune tolerance)
垂直感染 胚胎发育时认为本身的蛋白质 不会对其产生免疫反应 终生带毒及排毒 产生肿瘤而死亡
传播
垂直：免疫耐性 (immune tolerance) 水平：直接接触及间接接触 (J 病毒， 其他 Alv 只直接接触才感染) 1周龄以内感受性最大 2周以后感染不大发病也不排毒
检测ALV-J特异方法的建立
Coated specific peptide for anti-J antibody assay by ELISA Monoclonal antibody coated for antigen capture ELISA
世界性的清除计划
数千只鸡源 (全世界每年生产) 原原种鸡 原种鸡 250百万只白肉种母鸡 200亿只白肉鸡 由种源开始清除 5 年以上才表现在肉鸡 有些鸡源 (GGP) 已清除本病
亞群 A, B, C, D E F, G, H, I J 原始病毒 宿主 RAV-1, 2, 49, 雞 50 RAV-0 雞 RAV-61, 62 HPRS-103 雉雞、松雞、 quail 雞 (1988)
外源性
A, B, C, D, J 亚群 暂时插入鸡细胞基因 先天传染congenital transmission 会制造病毒 会使细胞癌化 有临床症状 会制造病毒抗原
网状内皮增生症 Reticuloendotheliosis (REV)
哺乳动物白血病病毒 (Murine leukemiarelated virus group) 毒株
REV-T: protovirus, defective, transforming virus REV-A: helper virus SNV: spleen necrosis virus CSV: chick syncytial virus DIAV: duck infectious anemia virus
vr3
vr: variable region
hr: host range region
Preliminary result
SDS-PAGE
Lane 1: BLB2921 (4.5 M urea) Lane 2: BLB2921 (6 M urea) Lane 3: BLB2921 (8 M urea) Lane 4: pRSET B (4.5 M urea) Lane 5: pRSET B (6 M urea) Lane 6: pRSET B (8 M urea)
Produce monoclonal antibody for specific detection of ALV-J antigen
Experimental design Ⅰ
The env sequence of isolate 2921
ALVa
GGAGTTCATCTATTGCAACAACCAGGAAACGTGTGGGTCACCTGGGCAAATAAGACGGGCCGAACAGATTTTTGC CTTAGTCTACAGTCAGCGACCTCACCATTCCGCACCTGCTTGATAGGCATTCCACAGTATCCTCTGAACACCTTC AAGGGATACGTCACTAATGTTACTGCTTGCGATAACGACGCCGATTTAGCCAGCCAAACAGCATGCTTGATAAAG GCTCTAAATACAACCCTCCCTTGGGACCCCCAAGAATTGGATATTTTAGGGTCCCAGATGATCAAGAACGGAACA ACACGTACGTGTGTTACCTTTGGTTCGGTGTGCTATAAAGAGAACAATCGCAGTAGAGTCTGTCACAATTTTGAT GGGAATTTTAATGGGACTGGTGGGGCAGAAGCAGAATTGCGTGACTTCATAGCAAAATGGAAAAGTGATGACCTT CTTATAAGGCCCTATGTCAACCAATCATGGACGATGGTAAGTCCAATAAACGTAGAGAGTTTTTCAATAAGTCGT AGATATTGTGGATTCACCAGCAACGAGACTCGTTACTATAGAGGGGACCTTTCTAATTGGTGTGGTTCAAAAAGG GGAGAATGGTCAGCGGGGTACAGCAACAGGACAAAATGTTCCAGCAACACGACGGGTTGCGGTGGTAATTGCACG ACGGAATGGAATTATTATGCATATGGGTTTACCTTC
家禽白血病
家禽白血病 (Avian Leukosis, AL) 骨髓球性白血病 (Myleoid Leukosis, ML) (Myelocytomatosis) (Myelocytoma) (ALV-J 感染) (J 病毒感染)
家禽白血病病毒亚群
REV-A基因
LTR gag pol env LTR
Signal peptide 1 109
来自百度文库
surface unit
trans-membrane unit 1189 1735 nt
REV-T基因
LTR gag pol env LTR
Signal peptide
SU
rel gene
SU
trans-membrane unit
感染鸡只
临床及病理
慢性肿瘤之临床及病变：潜伏期6周
滑氏囊肿瘤：B淋巴球形成，在滑氏囊及肝 等其他藏器形成肿瘤 非滑氏囊肿瘤：滑氏囊以外的脏器形成肿瘤
多重症状型：上数不同型别的症状及病 变可以在同一只鸡发现。
免疫抑制
细胞免疫反应及体液免疫反应皆被抑制， 以胚胎或疫苗来源的感染最为明显，后 天接触感染及血清抗体阳性鸡群较少免 疫抑制的现象。
ALVb
GGGAATCAGCCAGAGGTGTTGTGGAACAATGGGACTGCTAAGGCACTCCCCCCAGGTATTTTCTTGATTTGTGGG GACAGGGCTTGGCAAGGCATCCCGCGTAATGCCTTGGGAGGGCCCTGTTATCTAGGACAATTGACTATGCTCTCT CCTAACTTTACCACCTGGATAACATATGGGCCGAACATTACGGGTCACCGCCGTAGCAGGCGC-924
内源性
E 亚群 永远插入鸡细胞基因 基因传染 (genetic transmis 不需完整病毒) 大部份不会制造病毒 不会使细胞癌化 无临床症状 会制造病毒抗原
内源性病毒
原病毒 (provirus) 基因插入宿主染色 体而形成的，简称ALVE 依插入的部位不同给于不同的代号 有些ALVE可以表现完整的病毒 (如EV21)，因此可以繁殖及感染 有些只表现部分蛋白质并不具有感染性 另有些会增加鸡只对其他亚型白血病的 感受性，甚至降低蛋及肉的产能
J antibody ELISA J antigen ELISA
Experimental design
Isolate 2921 Clone partial gp85 gene Express ALV-J specific antigen Develop ELISA test kit for ALV-J specific antibody
临床表现
种鸡
死亡率上升1~1.5% 初产延后及不整齐 产蛋下降 17周龄产生肿瘤
临床表现 (cont.)
肉鸡
1周龄淘汰率上升 周死亡率上升 生长不整齐上市时间延后 并发感染增加 产生肿瘤
目前的检测方法
檢測方法 Ag-ELISA Ab-ELISA 病毒分離 PCR 應用 P27 antigen (所有亞群) Ab to A, B, J 所有亞群 所有亞群 材 料 拭子 蛋 培養 液 血液 血液 腫瘤 蛋 培養液 腫瘤
家禽白血病相关病毒简介
Retroviridae (反转录病毒科)
Alpharetrovirus genus, subgroup J
家禽白血病J亚群: (A,B,C,D) J
Alpharetrovirus genus,subgroup E
内源性病毒 (endogenous virus, ev)
Gammaretrovirus genus
控制
突变快速无法发展单一疫苗 病毒易被破坏 减少压抑： adequate brooding temperatures stocking density feeder space sufficient water, nutrition
控制 (续)
公母分饲 (PS场) 头 6 周达标准体重 (PS场) 4-6 周给予维生素 (vit E) 免疫时要常换针头 增加饲料蛋白质含量以增强免疫力。小 鸡：20% >28天： 15%
动态 ELISA
P27 阳性不代表感染，因为内源性病毒 也会形成 阴性鸡群可高达60%阳性率 需早期决定阳性鸡 因J病毒早期水平传播迅速，推测早期动 态p27抗原会升高
以ELISA p27抗原检测阳性鸡群
单次60%也为阴性鸡群 0-1周及5-6周各测一次 p27 ELSIA 升高为阳性鸡群 阳性鸡群抗体升高较快且高 此法简单可行
The env peptide of isolate 2921 GVHLLQ
7-QPGNVWVTWANKTGRTDFCLSLQSATSPFRTCLIGIPQYPLNTFKGYVTNVTAC
DNDADLASQT ACLIKALNTTLPWDPQELDILGSQMIKNGTTR
vr2
TCVTFGSV CYKENNRSRV CHNFDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSD
1) 急性网状内皮增生肿瘤: 现场少见 2) 生长不良及免疫抑制 3) 慢性淋巴球肿瘤及其他肿瘤 后二者则时常发生，常见于疫苗污染， 尤其是禽痘病毒疫苗、马立克病毒疫苗
REV污染的后果
接种污染rev的疫苗后，鸡只生长不良， 羽毛蓬松，腺胃炎，坏死性皮肤炎及免 疫抑制。
慢性淋巴球肿瘤及其他肿瘤与马立克氏 病或淋巴球性白血病类似，不易区别诊 断。
hr1
DLLIRPYVNQSWTMVSPINVES FSISRRYCGFTSNETRYYRGDLSNW CGSKRGEWSAGYSNR
TKCSSNTTGCG -226
hr2
GNCTTEWNYYAYGFTFGNQPEVLWNNGTAKALPPGIFLI CGDRAWQ GIPRNALGGPCYLGQLTMLSPNFTTWITYGPNITGHRRSRR-308
REV污染源
疫苗种毒污染? (可能无?)
Rev基因插入疫苗基因 Rev与疫苗同时存在
制作疫苗的细胞污染? 可能有
Duck embryo fibroblast cells were infected with REV (Yuasa, 1976)
1987台湾REV in goose (谢、陈)
REV引起的问题
传染途径
直接接触传染，排出病毒主要于急性感 染期 粪便、垫料皆含有病毒 昆虫蚊子也可以传播 介蛋传染机率较家禽白血病低，鸡胚胎 垂直传染造成免疫耐性 疫苗污染：禽痘疫苗、马立克疫苗
临床及病理
生长不良病型之临床及病变：鸡只6日龄 即可见生长不良，但饲料消耗并未减少； 羽毛蓬松，羽毛生成细胞坏死；苍白。 病理变化包括滑氏囊及胸腺萎缩，外围 神经肿大，腺胃炎，肠炎、贫血及肝脾 坏死，伴随体液及细胞免疫的抑制。
内源性病毒
ALVE21与迟羽性 (K) 的性染色体连结在 一起，增加鸡只对家禽白血病的免疫耐 性。 鸡胚胎及细胞疫苗
内源性病毒
人用的疫苗：
痲疹 (Measles),腮腺炎 (mumps), 德国痲 疹 (rubella), 黄热病 (yellow fever) vaccines
家禽白血病的诊断 品种改良及抗疾病因子的筛选 (ADOL)
ALV-J抗体阳性表示
感染甚高 与临床关系不知 可能有抵抗力 ADOL建议取鸡胚制作细胞，以J病毒攻击， 视感染情形可以知道其感受性。若有抵 抗力品种，可以用于育种
检测ALV-J特异方法的建立
Background:
P27 antigen 外源及内源皆会产生 Subgroups A,B,C,D,E,J
J病毒感染与发病情形
V-AV-A+ V+A+ V+A遺傳耐性 不發病 遺傳感受 少發病 性 遺傳感受 暫時性 性 免疫耐性 多發病
免疫耐性 (Immune tolerance)
垂直感染 胚胎发育时认为本身的蛋白质 不会对其产生免疫反应 终生带毒及排毒 产生肿瘤而死亡
传播
垂直：免疫耐性 (immune tolerance) 水平：直接接触及间接接触 (J 病毒， 其他 Alv 只直接接触才感染) 1周龄以内感受性最大 2周以后感染不大发病也不排毒
检测ALV-J特异方法的建立
Coated specific peptide for anti-J antibody assay by ELISA Monoclonal antibody coated for antigen capture ELISA
世界性的清除计划
数千只鸡源 (全世界每年生产) 原原种鸡 原种鸡 250百万只白肉种母鸡 200亿只白肉鸡 由种源开始清除 5 年以上才表现在肉鸡 有些鸡源 (GGP) 已清除本病
亞群 A, B, C, D E F, G, H, I J 原始病毒 宿主 RAV-1, 2, 49, 雞 50 RAV-0 雞 RAV-61, 62 HPRS-103 雉雞、松雞、 quail 雞 (1988)
外源性
A, B, C, D, J 亚群 暂时插入鸡细胞基因 先天传染congenital transmission 会制造病毒 会使细胞癌化 有临床症状 会制造病毒抗原
网状内皮增生症 Reticuloendotheliosis (REV)
哺乳动物白血病病毒 (Murine leukemiarelated virus group) 毒株
REV-T: protovirus, defective, transforming virus REV-A: helper virus SNV: spleen necrosis virus CSV: chick syncytial virus DIAV: duck infectious anemia virus
vr3
vr: variable region
hr: host range region
Preliminary result
SDS-PAGE
Lane 1: BLB2921 (4.5 M urea) Lane 2: BLB2921 (6 M urea) Lane 3: BLB2921 (8 M urea) Lane 4: pRSET B (4.5 M urea) Lane 5: pRSET B (6 M urea) Lane 6: pRSET B (8 M urea)
Produce monoclonal antibody for specific detection of ALV-J antigen
Experimental design Ⅰ
The env sequence of isolate 2921
ALVa
GGAGTTCATCTATTGCAACAACCAGGAAACGTGTGGGTCACCTGGGCAAATAAGACGGGCCGAACAGATTTTTGC CTTAGTCTACAGTCAGCGACCTCACCATTCCGCACCTGCTTGATAGGCATTCCACAGTATCCTCTGAACACCTTC AAGGGATACGTCACTAATGTTACTGCTTGCGATAACGACGCCGATTTAGCCAGCCAAACAGCATGCTTGATAAAG GCTCTAAATACAACCCTCCCTTGGGACCCCCAAGAATTGGATATTTTAGGGTCCCAGATGATCAAGAACGGAACA ACACGTACGTGTGTTACCTTTGGTTCGGTGTGCTATAAAGAGAACAATCGCAGTAGAGTCTGTCACAATTTTGAT GGGAATTTTAATGGGACTGGTGGGGCAGAAGCAGAATTGCGTGACTTCATAGCAAAATGGAAAAGTGATGACCTT CTTATAAGGCCCTATGTCAACCAATCATGGACGATGGTAAGTCCAATAAACGTAGAGAGTTTTTCAATAAGTCGT AGATATTGTGGATTCACCAGCAACGAGACTCGTTACTATAGAGGGGACCTTTCTAATTGGTGTGGTTCAAAAAGG GGAGAATGGTCAGCGGGGTACAGCAACAGGACAAAATGTTCCAGCAACACGACGGGTTGCGGTGGTAATTGCACG ACGGAATGGAATTATTATGCATATGGGTTTACCTTC