手性药物高效液相色谱拆分
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优点：此法不需昂贵的手性柱，亦无须进行柱
前衍生，手性添加剂可视要求而更换，使用比较方 便。
其中主要应用的有：配体交换型手性添加剂、环 糊精添加剂、手性离子对添加剂。
手性试剂衍生化法 ( CD F)
该法是药物对映体在分离前与高光学纯度衍生化试 剂( C D A) 反应， 形成非对映体， 再进行色谱分离 测定。
雷诺嗪的拆分
色谱柱：1 5 0 m m×4 .6 m m ，用纤维素 —三 ( 3 ,5 - 二甲基苯基氨基甲酸酯)湿法装柱。
色谱条件：以纯甲醇作流动相，流速为1 mL／min ， 紫外检测波长为 2 5 4 n m。
分离效果：雷诺嗪对映体获得比较好的拆分效果， 分离度达到 1 .5 7 9 ，保留时间也比较短 ，7m i n 内即可拆分完毕。
柱性能评价：用流动相冲洗该色谱柱， 直到基线稳 定． 以 1 ， 3 ， 5——叔 丁基苯测定死时间， 以 苯测其理论塔板数为 2 2 9 6 9 m—1 。
药物扑尔敏溶解在流动相溶剂中， 配制的 浓度为3 .2 mg／mL 。
扑尔敏的结构示意图1所示。
在上述色谱条件下，分别以0 . 4和0 .5uL的进样量进样分析
CSP种类
作用机理
应用
Pirkle型 CSP
通过含末端羧基或异氰酸酯基手 性前体与氨基键合硅胶进行缩合反 应， 分别形成含酰胺或脲型结构
CSP
环糊精CSP
环糊精的手性识别主要来自环内腔 对芳烃或脂 肪烃类侧链的包容作 用， 以及环外壳上的羟基与药物对 映体分子发生氢键作用
多糖类CSP
主要来自氨基甲酸酯或酯的部位与 被拆分物之间形成氢键或偶极 ～偶 极作用， 或通过被拆分物分子进入 纤维索网状腔， 导致腔内立体环境 的改变而实现
该法要求手性试剂及反应产物在化学性质上和 手性上很稳定，在反应及色谱条件下，试剂、手 性药物和反应产物不发生消旋化反应。手性试剂 应具有紫外或荧光吸收等敏感结构， 使生成物具 有良好的可检测性。
一些手性衍生化试剂和应用
CD F法优缺点
优点：可使用已有的非手性同定相， 花费少，通过选用具有
强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂， 可提高检测敏感度， 而 且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性。
C S P 法优缺点
优点：分离时间短，而手性选择性和拆分能力
高，多数药物在分离前都不需要进行பைடு நூலகம்生化反应， 分 离方法直接。
局限性：色谱柱价格昂贵，部分固定相还存在稳
定性差，柱容量低，柱强度差等缺点，且根据不同手 性药物的性质不同，选用的分析方法也不同。
手性流动相( C M P ) 拆分法
又称手性添加剂法，这种拆分法是在流动相中加 入手性试剂，利用手性试剂与各对映体结合的稳定常 数不同，以及药物与结合物在固定相上分配系数的不 同来进行分离。
随着流速的下降， 分离度逐渐升高。
通过控制流速、流动相等方法对雷诺嗪的 拆分进行了下述研究。
通过虽然上法雷诺嗪得到非常好的拆分， 但是拆分时间过短，容量因子k太小(k<1)，且 无法根据需要调节。
于是考察醇类系统对雷诺嗪的手性分离的 影响。
手性药物的高效液相色谱拆分 方法包括薄层色谱、气相色谱、液 相色谱、超临界流体色谱和电泳在 内的几乎所有色谱和准色谱手段都 已应用于对映体拆分。一般分为间 接法与直接法。
直接法
手性固定相( C S P ) 拆分法
手性流动相( C M P ) 拆分法
间接法
手性试剂衍生化法 ( CD F)
蛋白质CSP 可识别药物对映体在蛋白质的结合 位点而达到手性分离
氨基酸、 乙内酰脲、 内酰脲、 胺类、 醇类及硫醇类药物对映
体 拆分 β一环糊精：适用于大多数药物 α一环糊精：适用于相对分子质
量小于200的药物 γ一环糊精：适用于较大相对分
子质量药物 主要用于分离巴比妥类药物、 麻醉药和抗抑郁药等
可直接分离许多药物，如硫喷 妥因、 心得怡及阻滞剂等
扑尔敏的拆分
色谱柱： 2 5 0× 4 .6 m m i .d ，(制备醋酸纤维素 酯类液相色谱固定相，涂渍在修饰硅胶表面)， 采用 湿法自行装柱。
色谱条件：以正己烷 一异丙醇的混合溶液( 体积比 为9： 1 ) 作流动相， 流速为 0 . 5 mL ／ m i n ，柱 温3 0 ℃ ,紫外检测波长为2 5 4 n m。
手性固定相( C S P ) 拆分法
手性固定相是由担体键合高光学纯度的手性异构体制作 而成，检测物在手性固定相表面形成非对映体对，根据其稳 定常数不同而获得分离。
用于色谱分离的手性固定相已经被大量研究，已有100多 种液相色谱固定相被商业化。目前所研究的高效液相色谱手 性固定相有 7大类。
其中主要应用的有：Pirkle型CSP、环糊精CSP、多糖类 CSP、蛋白质CSP 。
结果表明：
此柱在分离药物扑尔敏时，随着进样量的增大， 此柱有些过载，分离效果不佳。一般来说，在分 离物进样过载的情况下，样品的分离效果较差， 随着进样量的降低，样品的分离更充分。
这是因为手性分离是 一个吸附和分配的过程， 在进样量过载的情况下， 没有足够的手性基团与 分离物进行作用 ， 因而对映体的分离就不充分。
局限性：是手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生
化速率及平衡常数应一致， 要求衍生化反应迅速、 彻底， 否 则影响定量结果。衍生化和色谱分析过程中应不发生消旋化， 外消旋药物需要有可被衍生化的基团， 此外衍生化法步骤较烦 琐， 衍生化试剂 绝大多数毒性相当大， 而且该方法难以实现 分析的自动化。
前衍生，手性添加剂可视要求而更换，使用比较方 便。
其中主要应用的有：配体交换型手性添加剂、环 糊精添加剂、手性离子对添加剂。
手性试剂衍生化法 ( CD F)
该法是药物对映体在分离前与高光学纯度衍生化试 剂( C D A) 反应， 形成非对映体， 再进行色谱分离 测定。
雷诺嗪的拆分
色谱柱：1 5 0 m m×4 .6 m m ，用纤维素 —三 ( 3 ,5 - 二甲基苯基氨基甲酸酯)湿法装柱。
色谱条件：以纯甲醇作流动相，流速为1 mL／min ， 紫外检测波长为 2 5 4 n m。
分离效果：雷诺嗪对映体获得比较好的拆分效果， 分离度达到 1 .5 7 9 ，保留时间也比较短 ，7m i n 内即可拆分完毕。
柱性能评价：用流动相冲洗该色谱柱， 直到基线稳 定． 以 1 ， 3 ， 5——叔 丁基苯测定死时间， 以 苯测其理论塔板数为 2 2 9 6 9 m—1 。
药物扑尔敏溶解在流动相溶剂中， 配制的 浓度为3 .2 mg／mL 。
扑尔敏的结构示意图1所示。
在上述色谱条件下，分别以0 . 4和0 .5uL的进样量进样分析
CSP种类
作用机理
应用
Pirkle型 CSP
通过含末端羧基或异氰酸酯基手 性前体与氨基键合硅胶进行缩合反 应， 分别形成含酰胺或脲型结构
CSP
环糊精CSP
环糊精的手性识别主要来自环内腔 对芳烃或脂 肪烃类侧链的包容作 用， 以及环外壳上的羟基与药物对 映体分子发生氢键作用
多糖类CSP
主要来自氨基甲酸酯或酯的部位与 被拆分物之间形成氢键或偶极 ～偶 极作用， 或通过被拆分物分子进入 纤维索网状腔， 导致腔内立体环境 的改变而实现
该法要求手性试剂及反应产物在化学性质上和 手性上很稳定，在反应及色谱条件下，试剂、手 性药物和反应产物不发生消旋化反应。手性试剂 应具有紫外或荧光吸收等敏感结构， 使生成物具 有良好的可检测性。
一些手性衍生化试剂和应用
CD F法优缺点
优点：可使用已有的非手性同定相， 花费少，通过选用具有
强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂， 可提高检测敏感度， 而 且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性。
C S P 法优缺点
优点：分离时间短，而手性选择性和拆分能力
高，多数药物在分离前都不需要进行பைடு நூலகம்生化反应， 分 离方法直接。
局限性：色谱柱价格昂贵，部分固定相还存在稳
定性差，柱容量低，柱强度差等缺点，且根据不同手 性药物的性质不同，选用的分析方法也不同。
手性流动相( C M P ) 拆分法
又称手性添加剂法，这种拆分法是在流动相中加 入手性试剂，利用手性试剂与各对映体结合的稳定常 数不同，以及药物与结合物在固定相上分配系数的不 同来进行分离。
随着流速的下降， 分离度逐渐升高。
通过控制流速、流动相等方法对雷诺嗪的 拆分进行了下述研究。
通过虽然上法雷诺嗪得到非常好的拆分， 但是拆分时间过短，容量因子k太小(k<1)，且 无法根据需要调节。
于是考察醇类系统对雷诺嗪的手性分离的 影响。
手性药物的高效液相色谱拆分 方法包括薄层色谱、气相色谱、液 相色谱、超临界流体色谱和电泳在 内的几乎所有色谱和准色谱手段都 已应用于对映体拆分。一般分为间 接法与直接法。
直接法
手性固定相( C S P ) 拆分法
手性流动相( C M P ) 拆分法
间接法
手性试剂衍生化法 ( CD F)
蛋白质CSP 可识别药物对映体在蛋白质的结合 位点而达到手性分离
氨基酸、 乙内酰脲、 内酰脲、 胺类、 醇类及硫醇类药物对映
体 拆分 β一环糊精：适用于大多数药物 α一环糊精：适用于相对分子质
量小于200的药物 γ一环糊精：适用于较大相对分
子质量药物 主要用于分离巴比妥类药物、 麻醉药和抗抑郁药等
可直接分离许多药物，如硫喷 妥因、 心得怡及阻滞剂等
扑尔敏的拆分
色谱柱： 2 5 0× 4 .6 m m i .d ，(制备醋酸纤维素 酯类液相色谱固定相，涂渍在修饰硅胶表面)， 采用 湿法自行装柱。
色谱条件：以正己烷 一异丙醇的混合溶液( 体积比 为9： 1 ) 作流动相， 流速为 0 . 5 mL ／ m i n ，柱 温3 0 ℃ ,紫外检测波长为2 5 4 n m。
手性固定相( C S P ) 拆分法
手性固定相是由担体键合高光学纯度的手性异构体制作 而成，检测物在手性固定相表面形成非对映体对，根据其稳 定常数不同而获得分离。
用于色谱分离的手性固定相已经被大量研究，已有100多 种液相色谱固定相被商业化。目前所研究的高效液相色谱手 性固定相有 7大类。
其中主要应用的有：Pirkle型CSP、环糊精CSP、多糖类 CSP、蛋白质CSP 。
结果表明：
此柱在分离药物扑尔敏时，随着进样量的增大， 此柱有些过载，分离效果不佳。一般来说，在分 离物进样过载的情况下，样品的分离效果较差， 随着进样量的降低，样品的分离更充分。
这是因为手性分离是 一个吸附和分配的过程， 在进样量过载的情况下， 没有足够的手性基团与 分离物进行作用 ， 因而对映体的分离就不充分。
局限性：是手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生
化速率及平衡常数应一致， 要求衍生化反应迅速、 彻底， 否 则影响定量结果。衍生化和色谱分析过程中应不发生消旋化， 外消旋药物需要有可被衍生化的基团， 此外衍生化法步骤较烦 琐， 衍生化试剂 绝大多数毒性相当大， 而且该方法难以实现 分析的自动化。