硝酸还原酶活性测定

实验原理
在一定条件下，NO2 的生成量与硝酸还原酶活性 呈正相关。 NO2 可从组织渗透到外界溶液中，通过测 定溶液中NO2含量的增加检测该酶活性。 NO2含量可用磺胺显色法测定，即在酸性条件下， NO2与磺胺和α－萘胺反应，生成红色化合物，在520nm 下比色测定。
2ml
2ml
1. 标准曲线绘制
亚硝酸钠标准液浓度0、0.5、1.0、2.0、3.0ug/ml，即共5管 溶液。 混匀上述溶液，静置20min； 520nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
实验步骤
2. 酶的诱导与还原反应
1.
2. 3. 4. 5. 6.
将实验材料用水洗净，吸水纸吸干； 配制对照液(5ml PBS + 5mlH20)和诱导液(5ml PBS + 5ml KNO3)，置于 两个烧杯中； 用剪刀将叶片剪成边长为0.4cm的正方形小块，天平上称取0.5g重的两等 份，分别投入到上述两烧杯中； 将盛有叶片的两个烧杯进行真空抽气30min，最好使叶片沉入烧杯底部， 30℃ 恒温箱中保温30min。 从两烧杯中分别吸取1ml反应液，注入两只试管中； 再分别依次加入2ml磺胺试剂和2ml α-萘胺试剂，混匀后室温静置20min;
维普检索的中文文献
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实验器材
1. 天平
2. 真空泵
3. 分光光度计 4. 恒温箱 5. 剪刀 6. 试管 7. 三角瓶 8. 移液管
主要试剂
0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液 0.2mol/L KNO3
磺Biblioteka Baidu试剂
α-萘胺试剂
亚硝酸钠标准液
实验步骤
亚硝酸钠标准液 磺胺试剂 α-萘胺试剂
体积
1ml
高等植物硝酸还原酶的模型
NR-含钼的黄素蛋白 辅基是黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）
高等植物硝酸还原酶的模型
研究趋势
【英文篇名】Determination Method of Nitrate Reductase Activity in the Leaves of Camptotheca acuminata 【作者中文名】孙世芹; 阎秀峰; 【作者单位】东北林业大学; 东北林业大学 哈尔滨; 150040; 【文献出处】东北林业大学学报, Journal of Northeast Forestry University, 编辑部邮箱 2004年 03期 期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 中国期刊方阵 CJFD收录刊 【关键词】喜树; 硝酸还原酶; 体内法; 【英文关键词】Camptotheca acuminata; Nitrate reductase; In vivo method; 【摘要】以喜树 (Camptothecaacuminata)为材料 ,探讨了用体内法测定其叶片硝酸还 原酶活性的若干问题 ,比较分析了硝酸盐诱导、2 ,4 -二硝基苯酚、三氯乙酸及煮沸等 因素对硝酸还原酶活性测定结果的影响 ,以寻求体内法测定喜树叶片硝酸还原酶活性的 最佳条件。试验表明 ,体内法是一种操作简便、准确可靠的测定喜树叶片硝酸还原酶活 性的方法 ,为进一步研究喜树的氮代谢奠定了基础。
实验七、硝酸还原酶活性测定
实验目的：
掌握测定硝酸还原酶活性的原理和方法; 巩固分光光度计的使用方法。
硝酸还原酶(NR)，是硝酸盐同化中第一个酶，也是限速酶， 催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐，在植物的氮素代谢中发 挥重要作用，与作物有效吸收和利用氮素肥料有关，对农作物产 量和品质有重要影响，硝酸还原酶活性被当作植物营养或农田施 肥的指标之一，也可作为品种选育的指标之一。