生理实验

重要的是ABO血型系统，其次为Rh系统。本次实验介绍ABO
血型鉴定。
实验步骤：玻片法
1、先取双凹玻片，标好姓名、A、B，然后滴加抗 A、抗B血清各一滴，取牙签一支，用其两头蘸 血分别在A、B血清中搅拌，置0~15分钟后观察 凝血现象。
A 抗B 姓氏 第一字母 抗A B
结
果：
A型血
B型血
抗A凝集抗、B不凝集
(3）结果判断 从高浓度管开始观察： 不溶血：上层无色、透明，下层红色浑浊； 开始溶血：上层红色、透明，下层红色、浑 浊而不透 明； 完全溶血：全部液体变红且透明。
方法2：化学性溶血 取试管4支，各盛5%鸡红细胞混悬液2ml，分别 加入下列溶液，并观察红细胞在各试管中的溶解 现象： 1） 0.75%NaCl 1ml 2） 乙醚 0.2ml 3） 0.1M HCl 1ml 4) 0.1MNaOH 1ml
【注意事项】
1、室内需保持安静，以利于听诊。 2、袖带不宜绕得太松或太紧。 3、上臂中段与心脏在同一水平位，压脉带应缚于 肘窝以上。 【思考题】 1、实验结果表明什么问题，为什么？ 2、测定动脉血压，为何上臂中段要与心脏在同一 水平位？
实验四 红细胞的溶解——溶血作用
【目的要求】 1、学习引起红细胞溶解的各种实验方法。 2、观察红细胞的溶血现象。
任氏液
实验步骤：
1、双毁髓：枕骨大孔处，向前毁脑，向后毁脊髓。 2、去皮和制作下肢标本：于腋窝下处横断脊柱，并将 头及前肢连同所有内脏一起剪去,由断面将皮肤及肌 肉分离，去皮。 3、分离两后肢：用粗剪刀沿脊柱和耻骨联合的中线， 将标本纵剖为两半。
（二）、盲点的测定： 1、取白纸一张帖在墙上，在纸上与眼相平处画一“+”字 2、被测者立于纸前50cm处，用遮眼板遮住一眼，令受 试者一只眼注视“+”字。实验者将黑色视标由“+”字 中心向被测者颞侧移动。此时受试者被侧眼直视前方， 不得转动。当受试者恰好看不见视标时，在白纸上标记 视标位置。然后将视标继续向颞侧移动，直至又看见视 标时记下其位置。这两点间的距离就是水平方向该眼盲 点的投射直径。 3、从上述两个记号的中点起，沿各方向移动视标。指出 并记下视标不能看到与能看到的交界点，然后以曲线连 接各点，即得出一个不规矩椭圆圈，此区即为该眼盲点 的投射区。
目的要求：
掌握测定血红蛋白含量的基本方法——比色法
实验原理：
测定血红蛋白的方法很多，种沙里（sahli）比色法是 其中一种。血红蛋白本身的色泽，常随所结合的氧量多少而
改变，不便于比色。沙里比色法是用少许稀盐酸加入一定量
血液中，酸不仅使红细胞膜破坏，而且使原来位于红细胞内
亚铁血红素转变成高铁血红素，后者呈较稳定的棕色。将其
【基本原理】 红细胞在高渗NaCl溶液中，会失去水分发生 皱缩；在低渗NaCl溶液中，会因过多水分进入红 细胞而膨胀，甚至破裂，使血红蛋白释出，称为 红细胞溶解。红细胞对低渗溶液具有不同的抵抗 力，即红细胞具有不同的脆性，对低渗溶液抵抗 力小，表示红细胞的脆性大，对低渗溶液抵抗力 大，则表示红细胞的脆性小。 各种有机溶剂、酸、碱等都会使红细胞的膜 发生溶解，称为红细胞的化学性溶血。
【实验器材】
视野计、视标、米尺、遮眼板、视野图纸、铅 笔、白纸。
【实验步骤】 （一）视野的测定： 1、熟悉视野计结构及使用方法。 2、在光下，被测者下颌放于视野计托颌架上，眼眶下缘 靠在眼眶托上，调节托颌架高度，使眼与弧架上小镜子 在同一水平，遮住一眼，另一眼始终注视小镜子。 3、测者从弧架周边向中央慢慢移动白色视标，随时询问 被侧者是否看见了白视标。当被测者说看到时，再将视 标倒移一些，然后再向中央移动，如此反复一次。待测 出一致结果后，记下弧架上度数，并标在视野图纸上。 4、将弧架依次转动45 度 ， ℃重复上边测定，得8个度数 。将视野图纸上8个度数依次连接就得白色视野范围。 5、按上述方法测出该眼一彩色视觉视野。
【实验器材】
血压计、听诊器、节拍器、冰水 【方法与步骤】 1、受试者准备 2、放空压脉带 3、裹扎压脉带 4、放置听诊器 5、测量收缩压/舒张压
6、观察诸多因素对动脉血压的影响 ： （1）加深加快呼吸频率对血压的影响 记录正常血压后，令受试者加深加快呼吸（是正常频率 的1倍）1 min测压。 (2)情绪对血压的影响 待血压恢复正常后，令受试者回忆其最气愤的往事 1分 钟测压 （3）肢体运动对血压的影响 拉开压脉带与血压计相连的橡皮管接头（不要取下压 脉带）。令缠好压脉带的受试者按节拍器节律以50~60 次/ min的速度连续做蹲起运动3min，结束后取坐位测 定运动后的血压。 （4）冰水刺激对血压的影响 待受试者恢复平静，让其将手浸入冰水中1 min测血 压。
液中，其兴奋性可以在室温下，于一段时间内保
持不变，其实验条件较易控制，来源也较丰富。
因此，在实验中常用坐骨神经-腓肠肌标本观察神
经、肌肉的兴奋性、刺激以及反应的规律以及肌
肉收缩的特点等。
实验动物及器材：
牛蛙、蛙板、玻璃板、粗剪刀、手术剪、探针、玻
璃分针、蛙钉、镊子、线、滴管、培养皿、Zn-Cu弓、
4、根据物象成像原理及相似三角形各对应边成比例定理 ，可计算盲点与中央凹的距离及盲点直径。
盲点直径=盲点投射区的直径×15/500 盲点与中央凹的距离（mm）= 盲点投射区与十字距离 ×15/500
【注意事项】
1、测试颜色视野时，须以看清颜色为准。 2、照明要始终一致，被测试者必须背光而立 ，视野计背景最好是黑暗颜色。 3、测试一项后，受试者可稍微休息，以免眼 睛疲劳而影响实验结果。 4、被测眼要与“+”字符号处于同一水平，并 始终注视“+”字符号。
【实验目的】 1、学习并掌握间接法测定动脉血压的原理和方 法，测定人体肱动脉的收缩压与舒张压。
2、了解影响动脉血压的因素。
【实验原理】 通常血液在血管内流动时并没有声音，但外加压力 使血管变窄形成血液湍流时，则可发生所谓的“血管音 ”。测压时，用压脉带在上臂或手腕加压，当外加压力 超过动脉的收缩压时，动脉血流完全被阻断，此时在动 脉处听不到任何声音。当外加压力等于或稍低于动脉内 的收缩压而高于舒张压时，则在心脏收缩时，动脉内可 有少量血流通过，而心室舒张时却无血流通过。血液断 续地通过血管时，会发出声音。故恰好可以完全阻断血 流的最小外加压力(即发生第一次声音时的压力)相当于 收缩压。当外加压力等于或小于舒张压时，血管内的血 流连续通过，所发出的音调会突然降低或声音消失。在 心室舒张时有少许血流通过的最大管外压力(即音调突 然降低时的压力)相当于舒张压。 在正常情况下，人或哺乳动物的血压是通过神 经和体液调节保持其相对的稳定性，但是血压的稳定是 动态的。人体的体位、运动、呼吸、温度以及大脑的思 维活动等因素对血压均有一定影响。
实验一 视野及盲点的测定
【目的要求】
1、学习视野的测定方法，了解测定视野意义 2、证明盲点的存在，并计算盲点所在位置和 范围
【基本原理】 1、视野： 视野是单眼注视正前方一点时，所能看到空间范围。 测定视野有助于了解视网膜，视觉传导通路及视中枢功 能。正常人的视野范围鼻侧和额侧较窄，颞侧与下侧较 宽。在相同亮度下，白色视野最大，红色次之，绿色最 小，这可用特殊的仪器——视野计测定。 2、盲点： 在视神经离开视网膜的部位（即视神经乳头所在部位 ）没有感光细胞，外来光线成像于此不引起视觉，故称 为生理盲点。由于盲点的存在，视野中也必然存在盲点 投射区，根据物体成像规律，通过测定盲点投射区，可 计算盲点所在的位置和范围。
【参考值】 1、生理性盲点投射区呈椭圆形，垂直径 7.5cm±2cm，横径5.5cm±2cm。 2、生理性盲点投射区在注视中心外侧15.5cm ，在水平线下1.5cm。
【思考题】 实验证明两眼都存在盲点，为什么平时我们 注视物体时，却没有感到盲点的存在？
实验二、血红蛋白含量测定及血型的鉴定
（一）血红蛋白含量的测定
【动物与器材】
鸡、离心机、试管（16支）、试管架、吸耳 球、2ml移液管、一次性注射器（2ml或5ml）、 滴管、0.75%NaCl、0.1M HCl、0.1MNaOH、乙 醚、1%肝素、蒸馏水、171mMNaCl。
【方法与步骤】
方法1：渗透性溶血——红细胞渗透脆性的测定 (1) 取试管12支，从1~12分别标记后，排列在试管架上,按 教材P65表3－1配制各种浓度的NaCl溶液 . (2) 5%红细胞混悬液制备:取鸡血4ml，加入盛有1%肝素 0.4ml的离心管中，充分混合，放入离心机中，按3000r/min、离 心5min。取出后，弃去上清液，加入生理盐水，混合后再离 心，然后再弃去上清液。同法重复一次，即得洗涤之红细胞。 用生理盐水配成5%红细胞混悬液。 每支试管加入5%红细胞混悬液一滴，轻轻摇匀后于室温 下静置2h后观察各试管之溶血情况。
【思考题】
1、产生渗性溶血和化学性溶血的机制有什么不同？
实验五
坐骨神经——腓肠肌标本制备
目的要求：
1、学习生理学实验基本的组织分离技术 2、学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 3、学习蛙类坐骨神经-腓肠肌标本制备基本操作技术
实验原理：
蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳
动物有近似之处，若将其离体组织器官放在任氏
2、用蒸馏水将血红蛋白（Hb）稀释管洗净，干燥备
用。
3、用滴管加0.1M Hcl于血红蛋白稀释管内，到刻度
“2”或“10%”处。
4、采血：常规消毒指尖，用一次性刺血针刺破无名
指尖。拭去第一滴血，待第二滴血流出一大滴时，
用一次性毛细取血管吸血至刻度20ul（0.02ml即20 mm3）处。
5、血液与盐酸完全反应：使Fe2+ 钟)。
半小时后，观察并记录各试管溶液血情况，注意 颜色与透明度。
【注意事项】
1、试管编号排列顺序切勿弄错、颠倒。 2、小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只加一滴。 3、在进行渗透性溶血——配液要准确、无误。 4、加入血液后，轻轻摇匀溶液，切勿剧烈震荡。 5、抗凝剂最好为肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。
思考题：
1、测定Hb含量实际意义？Hb具有什么功能？
（Biblioteka Baidu）血型的鉴定
目的要求：
1、学习鉴定血型的方法
2、观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理
实验原理：
血型是指红细胞的血型，是根据存在于红细胞膜外表面特
异性抗原（镶嵌于红细胞膜上特异性糖蛋白）来确定的，这种
抗原或凝集原由遗传基因决定。血清中抗体或称凝集素，可与 红细胞膜上不同的相应抗原结合，产生凝集反应，最后发溶血。 由于这种现象，临床上在输血前必须进行鉴定血型，以确保安 全输血。人类红细胞上已发现20多种血型系统。其中最常用最
用蒸馏水稀释后与血红蛋白测定计的标准色进行目测比色， 即得每100ml血液所含的血红蛋白数或百分率。
实验器材：
血红蛋白计、采血针、蒸馏水、0.1M HCL、一次性
20ul定量毛细取血管、滴管、玻璃棒、75%酒精棉球、
乙醚
实验方法与步骤：
1、了解血红蛋白计的构造： a、标准比色架 b、血红蛋白稀释管
思考题：
1、已知某人为A型（或B型）血，在无标准血清情况
下，可否对其他人进行ABO血型鉴定？如何进行？
2、如何区别血液中凝集与凝固，其机理是否一样？
参考： 许多学者调查表明：中国人血型分别O型30.77% 、 A型 27.07%、 B型32.48%、AB型9.67%
实验三 人体动脉血压的测定及其影响因素
Fe3+(置10分
6、透光比色
7、加蒸馏水至颜色同标准色柱
注意事项：
1、吹血液入稀释管及洗净吸管时，应插入液面内， 吹时不宜用力过猛，以免产生气泡。 2、蒸馏水逐滴加，以免过量稀释，玻璃取出比色。 3、一定要准确掌握进入稀释管内血液量（20ul）。
实验结果及分析：
附： 我国成年人Hb正常值：男：120~160g/L或12~16g/100ml血液 女：110~150 g/L或11~15 g/100ml血液 新生儿含量可达20g/100ml 以后减少，2~3个月最低，达9.5g.
抗B凝集、抗A不凝集 抗A、抗B凝集 抗A、抗B不凝集
因红细胞上有A 抗原
因红细胞上有B 抗原
AB型血
因红细胞上有A、B 抗原 因红细胞上无抗原
O型血
注意事项：
1、注意消毒，防止穿刺部位皮肤感染。 2、肉眼看不清楚凝集现象时，应在低倍显微镜下观 察。 3、红细胞悬液和血清应新鲜，因污染可产生假凝集 现象。