实验一 X染色质标本制备与观察

♦ (5)镜检：自来水漂洗，空气干燥后油镜下观察。 油镜下观察。
[观察与结果 观察与结果] 观察与结果
♦ 高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核， 高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核，
细胞质不着色或不明显。选择核较大， 细胞质不着色或不明显。选择核较大， 染色清晰，轮廓完整， 染色清晰，轮廓完整，核质呈均匀细网 状的细胞进行观察。 状的细胞进行观察。找到核膜内侧缘有 蓝色浓染小体的细胞核后， 蓝色浓染小体的细胞核后，换油镜进一 步观察。油镜下X染色质为蓝色平凸形 染色质为蓝色平凸形、 步观察。油镜下 染色质为蓝色平凸形、 三角形、扁平形的浓染小体。 三角形、扁平形的浓染小体。
[注意事项 注意事项] 注意事项
♦ (1)取材前要漱口，以免口腔中的杂质影 取材前要漱口， 取材前要漱口
响观察效果。 响观察效果。 ♦ (2)HCl水解要充分，使X染色质易于显 水解要充分， 水解要充分 染色质易于显 现。 ♦ (3)临床检查时要选择形态好的细胞观察， 临床检查时要选择形态好的细胞观察， 临床检查时要选择形态好的细胞观察 计算100个细胞中 染色质出现的频率。 个细胞中X染色质出现的频率 计算 个细胞中 染色质出现的频率。
[实验原理 实验原理] 实验原理
♦ 一个个体不论其细胞中有几条 染色体，均只 一个个体不论其细胞中有几条X染色体 染色体，
有一条具有转录活性，其余的 染色体均失活 有一条具有转录活性，其余的X染色体均失活 形成异固缩的X染色质 染色质。 形成异固缩的 染色质。正常女性间期细胞核 染色质阳性率一般约为10％ ％，有的 中X染色质阳性率一般约为 ％一30％，有的 染色质阳性率一般约为 ％， 可高达50％以上。 可高达 ％以上。其出现率的高低与个体不同 生理状态、染色方法、染色技术以及X染色体 生理状态、染色方法、染色技术以及 染色体 在细胞核中的位置不同有关。 在细胞核中的位置不同有关。在男性间期细胞 核中则平均低于1％。一般检查X染色质确定性 ％。一般检查 核中则平均低于 ％。一般检查 染色质确定性 别时，观察200个细胞，X染色质出现 ％以上 个细胞， 染色质出现 染色质出现5％ 别时，观察 个细胞 者为女性。现在， 染色质检查已广泛应用于 者为女性。现在，X染色质检查已广泛应用于 临床， 临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一 种辅助诊断方法。 种辅助诊断方法。
（二）甲苯胺蓝染色法
♦ (1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签
钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞， 在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻 片上晾干。 ♦ (2)固定：用95%乙醇固定30分钟。 ♦ (3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。 ♦ (4)染色：0.2％甲苯胺蓝染液染色5—10min。
实验一 X染色质标本制备与观察 染色质标本制备与观察
♦ [目的要求 目的要求] 目的要求
♦ （1）掌握X染色质标本制备方法及其原理。 1）掌握X染色质标本制备方法及其原理。 染色质标本制备方法及其原理 ♦ （2）掌握 染色质的形态特征及其临床意义。 染色质的形态特征及其临床意义。 ）掌握X染色质的形态特征及其临床意义
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[实验用品 实验用品] 实验用品
♦ (1)器材：显微镜、载玻片、牙签。 器材： 器材 显微镜、载玻片、牙签。 ♦ (2)试剂 ：Giemsa染液、0.2％甲苯胺蓝 染液、 ％ 试剂 染液
染液 、5mol/L HCl溶液 、95％乙醇、 溶液 ％乙醇、 pH 6.8 PBS ♦ (3)材料：人口腔黏膜上皮细胞。 材料： 材料 人口腔黏膜上皮细胞。
[方法与步骤 方法与步骤] 方法与步骤
♦ （一） Giemsa染色法 ♦ (1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签
钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞， 在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻 片上晾干。 ♦ (2)固定：将带有标本的载玻片置入装有新配置的甲醇冰醋酸固定液（3：1）的染色缸中固定10min后取出， 空气干燥。 ♦ (3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。 ♦ (4)染色：置Giemsa染液中染色10min ，蒸馏水冲洗后 晾干，酒精灯上过火脱水，以二甲苯透明(1-2min)， 树胶封片。
[作业 作业] 作业
♦ 书写实验报告，绘制 染色质图。 书写实验报告，绘制X染色质图 染色质图。
[思考题 思考题] 思考题
♦ 1．间期核内出现 染色质有何生理意义 染色质有何生理意义? ．间期核内出现X染色质有何生理意义 ♦ 2．X染色质检测有何临床用途 染色质检测有何临床用途? ． 染色质检测有何临床用途