_基于自噬调控肿瘤相关巨噬细胞表型极化的金纳米粒抗肿瘤机制研究

海军军医大学

博士学位论文

基于自噬调控肿瘤相关巨噬细胞表型极化的金纳米粒抗肿瘤机制研究Study on the Mechanism of AuNPs in Anti-tumor Growth Based on Autophagy Regulating Phenotypic Polarization of Tumor-associated Macrophages

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目录

摘要...................................................................................................... - 1 - Abstract ................................................................................................. - 5 - 缩略词表.............................................................................................. - 11 - 前言.................................................................................................. - 12 - 第一章PEG修饰的金纳米粒的制备、表征和细胞毒性研究....... - 18 -

一、仪器与试剂........................................................................... - 18 -

二、实验方法............................................................................... - 19 - （一）PEG修饰的金纳米粒的制备.......................................... - 19 - （二）PEG修饰的金纳米粒的表征.......................................... - 19 - （三）PEG修饰的金纳米粒细胞毒性实验.............................. - 20 - 三、结果与讨论........................................................................... - 21 - （一）PEG修饰的金纳米粒的表征.......................................... - 21 - （二）PEG修饰的金纳米粒细胞毒性...................................... - 23 - 四、本章小结............................................................................... - 25 - 第二章金纳米粒体外对肿瘤相关巨噬细胞表型极化的影响....... - 26 -

一、仪器与试剂........................................................................... - 27 -

二、实验方法............................................................................... - 28 - （一）肿瘤细胞悬液TSN培养巨噬细胞................................. - 28 - （二）金纳米粒对TSN培养条件下的巨噬细胞表型作用的考察-33 -

（三）统计学处理....................................................................... - 34 -

三、结果与讨论........................................................................... - 34 -

（一）TSN培养条件诱导巨噬细胞向M2表型极化............... - 34 - （二）金纳米粒对TSN培养条件下巨噬细胞表型极化作用. - 38 -

四、本章小结............................................................................... - 43 - 第三章金纳米粒体内抑制肿瘤相关巨噬细胞表型极化发挥抗肿瘤作用.......................................................................................................... - 44 -

一、仪器与试剂........................................................................... - 45 -

二、实验方法............................................................................... - 46 -

（一）荷瘤小鼠模型的建立、给药和分组............................... - 46 - （二）小鼠肿瘤体积测量........................................................... - 46 - （三）肿瘤组织免疫荧光实验................................................... - 47 - （四）肿瘤组织中巨噬细胞的分离和纯化............................... - 48 - （五）肿瘤相关巨噬细胞表型鉴定流式实验........................... - 50 - （六）肿瘤相关巨噬细胞mRNA的检测（Real-time PCR）. - 50 - （七）统计学处理....................................................................... - 50 -

三、结果与讨论........................................................................... - 50 -

（一）肿瘤生长曲线及抑制率................................................... - 50 - （二）肿瘤组织中巨噬细胞表型的鉴定................................... - 52 -

四、本章小结............................................................................... - 59 -