[小学]南京师范大学生命科学学院2012年《细胞工程》期末重点总结

[ 小学] 南京师范大学生命科学学院2012 年《细胞工

程》期末重点总结

南京师范大学生命科学学院细胞工程期末重点一( 名词解释

发育阻滞:

体外受精的早期胚胎在体外发育过程中，往往会停滞在某一阶段不再发育，此现象称为发育阻滞。

胚胎移植:

也称受精卵移植、借腹怀胎，是指将良种母畜配种后，从其生殖道内取出受精卵后早期胚胎，移植到同种的、生理状态相同的母畜体内，使之继续发育称为新个体的技术。

组织工程:

指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。人- 鼠嵌合抗体:就是用人源性抗体的一部分代替鼠源性抗体的一部分，使之保留对抗原的特异性，又具备与补体和细胞结合的功能，并减少异源性蛋白的抗原性。细胞融合:

在离体条件下，用人工方法将不同基因型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的过程。

ES细胞：

即胚胎干细胞，将细胞团的细胞分离出来进行培养，在一定条件下这些细胞可在体外“无限期”地增值传代，同时还保留其全能性的细胞。乳腺生物反应器：

利用哺乳动物乳腺特异性表达的启动子元件构建转基因动物，指导外源基因在乳腺中表达，并从转基因动物的乳液中获得重组蛋白。

细胞全能性：

指细胞分裂分化后，仍具有形成完整有机体的潜能或特性。Ips（诱导性多能干细胞）:

利用病毒载体将四个转录因子（Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。胚胎分割:

将一枚胚胎用显微手术的方法分割为二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。核移植:

利用显微操作技术，将某一特定细胞的核转移和嵌入另一细胞中的过程。

细胞系、细胞株:

细胞系是由原代培养经初步纯化。获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。细胞系经过进一步的克隆化，便得到由单一细胞组成的细胞株。

二、问答题

1. 如何鉴定转基因动物,

1. 分子杂交

Southern 印迹杂交技术是通过探针和已结合于硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上的经酶切、电泳分离的变性DNA链杂交，检测样品中是否存在目的DNA序列的方

法。该法不

仅灵敏而且准确, 因而广泛用于转基因阳性鼠的筛选和鉴定。当转入基因与内源基因组

DNA有较高同源性时，仍可用此法。，此法对样品的质量和纯度要求较高，操作烦琐, 费用

也较高。

2. 斑点杂交

通过直接将变性的待测DNA样品点在尼龙膜(或硝酸纤维素膜)等固体支持物上, 然后

和探针杂交，从而检测样品中是否存在目的DNA序列。根据点样方式一和样品点的形状不同可分为斑点杂交、狭缝杂交( slot blot hybridization) 、打点杂交(spot blot

hybridization) 。当目的基因与内源基因组DNA无同源性时可用它,为避免假

阴性, 可

同时用质粒DNA (1,IOpg)作阳性对照。该方法在分析基因组DNA时，对样品纯度要求低、快速、简便、经济、灵敏度高(能从2卩g,5卩g的基因组DNA中检出单拷贝基因),尤其对大批子代动物的粗筛颇具优越性,应作为首选方法。但该方法易出现假阳性。

3. PCR

PCR技术是DNA体外扩增技术,基本原理同体内DNA的复制一样,均需经过DNA 模板解链、引物、结合及模板指导下的链延伸三个过程，在PCR反应中是靠温度的调整和聚

合酶的共同作用完成的。若PCR体系中有一对方向相对的引物，通过反复重复变性、复性、延伸过程，则在短时内可将两引物间模板扩增至百万倍。由于PCR所需样品少, 灵

敏度高而且操作简便因而逐渐用于转基因动物外源基因整合、表达的检测。可极大提

减少人力物力的浪费。但该尤其在大型转基因动物研究中, 用PCR 先对高转基因效率,着床前的胚胎筛选, 再将已证实携带外源基因的胚胎植入母体, 方法要求待分析的基

因组DNA样品应尽可能纯化，否则会干扰本反应，降低检测的灵敏度和重复性；此外用于大批量检测时, 费用较昂贵。

4. 原位杂交

染色体原位杂交是确定转基因在染色体上确切位置的重要手段,其原理是利用碱基互

补的原则，以放射性同位素或非放射性同位素标记的DNA片段作探针，与染色体标本上的基因组DNA在“原位”进行杂交，经放射自显影或非放射性检测体系在显微镜下直接观察出目的DNA片段在染色体上的位置。最早同位素标记多采用放射性较低

的3H 、

35S、及1251 ,它们具有定位精确的优点，但放射自显影时间长而且操作较麻烦, 随着荧光显微镜技术的发展, 尤其是计算机图像处理系统的应用, 增强了对荧光信号的分辨率, 促进了非同位素在染色体原位杂交中的应用。

2. 细胞同步化培养有哪些方法,基本作用原理分别是什么

1. 选择细胞同步化

1) M期细胞震碎摇落法

处在有丝分裂期的细胞形状变圆，单层贴壁生长的细胞的附着性降低，摇动或拍打

培养瓶很容易使这些细胞脱落。2) 离心洗脱法

细胞在进行分裂时，细胞体积呈线性增加，利用洗脱离心机可以将体积大小不同的

处于不同时期的分离开来。

3) 梯度沉降法

利用含血清或蔗糖的梯度溶液可以将体积不同、处于不同分裂时期的细胞分离开来

2. 诱导细胞同步化

1) 血清饥饿法

将血清浓度降到一定限度，使细胞仅能存活而不能分裂，可以获得大量处于期

G1 的细胞。

2) 异亮氨酸营养缺乏法

培养基中缺乏异亮氨酸，细胞将被阻止到G1 期

3) DNA合成抑制阻断法

DNA合成抑制剂均能将细胞阻止在S期4)秋水仙素阻断法

利用秋水仙素抑制纺锤丝的形成，可以使细胞分裂停止在有丝分裂中期

3. 简述ES细胞建系的主要操作步骤

1. ES 细胞的分离

从着床前(孕3~5天)的胚泡中分离内细胞群(ICM) 细胞。

分离方法主要有:

1) 免疫学方法

2) 免疫外科学方法

3) 组织培养法

) 显微外科学方法4

2. ES 细胞的分离培养

a. 饲养层的制备及分化抑制物的选择小鼠成纤维细胞无限系(STO) 小鼠原始胚胎成纤维细

胞(PMEF)

(常用的饲养层是由小鼠成纤维细胞无限系(STO)或小鼠原始胚胎成纤维细胞

(PMEF)

制备而成。STO和PMEf细胞可以分泌成纤维细胞生长因子FGF、分化抑制因子