解读2020药典热原检查法

说到热原检查，我们先了解几个概念，热原、热原反应、内毒素、实验动物。

热原（p yr o g e n）：指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。注射液中的热原主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。

热原反应：临床上在进行静脉滴注大量输液时，由于药液中含有热原，病人在0.5～1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至可休克，这种现象称为热原反应。

细菌内毒素：是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。因此，细菌内毒素广泛存在于自然界中。如自来水中含内毒素的量为1至100E U/m l。

当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。注射液中如果含有内毒素，就会产生代谢产物，内毒素大量进入血液就会引起发热反应即热原反应。

因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类（如一次性注射器，植入性生物材料）必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。

由于家兔对热原的反应与人基本相似，对热原比较敏感，所以半个世纪以来一直用家兔来检测热原，家兔为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。

鲎试验在某些情况下，比如西药注射液、生理盐水等成分明确的药品，现在大多采用鲎试验来检测，但在一些中药注射剂、血液制品，抗毒素等由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，还在使用兔法来检测热原，因此鲎试验目前还无法完全取代家兔热原试验。

检查法药典要求一

雌兔应无孕，家兔怀孕了会出现腹围会变大，体重也会增大，情绪变得多变，在试验固定台上不容易固定，怀孕后温度波动也会变得不敏感，药物反应小，影响检验结果的准确性。

新兔使用前要预测体温，有的兔子本身体温就低，不符合试验要求，要挑出来，也有运动健将型的，在试验台上固定着老是动来动去的，由于运动频繁体温也自然升高，一旦注射药物，有时候会出现假阳性可能。

有疾病的动物也不能使用，这些有病的动物可能本身就在发烧，如果注射药物后体温会降下来，就是药物发挥了治疗作用或急据升高，加重病情，总之不确定性太多，所以我们要选择体重合格、体温合格、精神状态好的。

大概的选择依据是这样的，兔身体匀称，肌肉结实丰满，背毛光滑。对外界反应表现出很机灵的样子。食欲旺盛是家兔健康的表现，粪便呈球形或椭圆形，大小均匀，外表光滑圆润，松散均匀，呈黑褐

色，新鲜粪便略带光泽。试验前的体温预测（正常体温范围、温度波动）应符合药典规定。

检查法药典要求二

热原试验对环境的要求，饲养环境的试验环境温度应保持一致，我们做热原试验一般普通环境就能满足要求，药典所要求的也是普通环境的温度，相当于医药洁净区的温度，家兔长时间生活在一个相对恒温的环境中，也有助于保证检验结果的准确性。

试验前禁食是这是为了降低由于饮食后导致的新陈代谢加快，体温升高，影响结果。本来动物试验就有很多不确定因素，我们所做的一切也是为了降低不确定度，增加检结果的准确度。

检查法药典要求三

测温装置的要求，药典统一要求为插入直肠深度为6c m，这种说法太过严格，药典并未对体重都没有统一要求，没有要求体重一致，药典要求体重为1.7k g以上，那么1.7k g和3.0k g休重，差了接近一倍了，为什么要对测温仪的插入深度做统一规定呢？

对于体型中等的兔子（一般2.2-2.5k g为试验最佳体重），插入直肠6c m正合适，对动物的刺激也最小，但对于体重大的和体重小的，就有些矫枉过正了，对体型小的兔子，6c m的深度太长，对动物的的刺激过大，引起动物不安，对于体型大的来说，6c m的深度又浅了，测量温度会略低于动物的实际体温，导致升温不显著。因此插入深度应因兔而异，即不影响检验结果又对动物伤害小，这是我们的原则，关爱人类的同时，人们也要保护动物。

检验结果的判定，这两版药典都没怎么变化过，本文就不做讨论了。以上就是笔者对中国药典的热原检查法的一点个人观点，不周之处，请提出您的意见，互相学习共同提高。