BD多色流式全面解决方案课件

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BD流式细胞仪操作说明

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生物秀-专心做生物！

3. 仪器面板：
m 仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。 o 流速控制：
.c LO：样品流速：12 μl /min
MED：样品流速：35 μl /min
雷射光源。） 7. 倒掉废液，并回填 200 ml漂白水。 8. 将减压阀放在「VENT 漏气」位置。将鞘流液筒充填至八分满。 9. 退出软件“File”Æ“Quit”(如有对话选项，选择“Don‘t save”)。确认退出
计算机中所有BD应用软件，所有数据数据已储存备份。 10. 关闭计算机。“Spheral Blood Mononuclear Cell Procedure
w • Leukemia and Lymphoma Procedure 1 w • Leukemia and Lymphoma Procedure 2, B-cell Clonality Assay
秀 • 间接免疫荧光染色
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三、上机分析流程
建议首次试机避免进行大量试验，仅需准备下列样品。（1）Negative Control（不加任何抗体）。（2）CD3-FITC（FL1 单染）。（3）CD19-PE（FL2 单染）。（4）CD3-FITC /CD19-PE（FL1/FL2 双染）。
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1.2 Macintosh 计算机与打印机：

BD流式细胞仪技术参数

一、产品介绍
BDFACSCalibur流式细胞仪
ACSCalibur是世界上第一台双激光、四色台式流式细胞仪，可同时应用于细胞分析和分选。

从FACSCalibur诞生至今，经过多次改进和升级，已经广泛应用于各个临床和科研用户，由于其稳定全面的性能，FACSCalibur已经成为全球销售量最大的流式细胞仪。

二仪器配置
主机
进样器
工作站
1)性能指标：标准激光器：15mw,488nm,气冷氩离子激光。

用于3色荧光分析。

第二激光器：636nm,红色二极管激光，用于第四色色荧光分析。

2)测定参数：FSC,SSC,FL1,FL2,FL3,FL4
3)光电倍增管：光谱检测范围300nm-1100nm,电压150v-990v
4)最小检测颗粒大小：0.2um-50um
5)荧光检测灵敏度：<750MESF
6)检测分辨率：全峰高CV<2%
7)样品获取速度：10000个/秒。

四、相关二手产品图片
五、二手产品信息
商品名称：BDFACSCalibur流式细胞仪仪器种类：生化仪器价格：32万
年限：1年内
仪器状态：无故障正常运行
仪器发布：仪器无忧网&司马缸APP
仪器来源：企业。

BD流式细胞仪

BD流式细胞仪⽬录简介流式细胞仪 (3)流式细胞仪的临床检验项⽬淋巴细胞亚群分析 (4)肿瘤细胞DNA检测分析 (5)⽩⾎病及淋巴瘤免疫分型 (6)残余⽩⾎病检测 (6)⽹织红细胞计数 (7)造⾎⼲细胞计数 (7)⾎⼩板疾病及活化⾎⼩板检测 (8)HLA-B27检测 (8)器官移植的配型及免疫状态监控 (9)AIDS诊断及治疗监控 (9)流式细胞仪的临床/医学研究 (10)流式细胞技术的发展及国内现况 (10)建议流式细胞仪之机型----BD公司FACSCalibur仪器主要特点 (11)配套设施（计算机、软件、试剂、样本制备仪、售后服务） (12)仪器主要技术参数 (15)BD公司全球及中国业务介绍BD公司流式细胞仪培训计划BD公司推荐配置单BD公司仪器与其他⼚家仪器⽐较表⼀、简介流式细胞仪（⼀）流式细胞仪概念流式细胞术（FlowCytometry，FCM）是⼀种对处在液流中的细胞或其它⽣物微粒（如细菌）逐个进⾏多参数的快速定量分析和分选的技术。

简⾔之，流式细胞仪是测量染⾊细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质，如⼤⼩、内部结构、DNA、RNA、蛋⽩质、抗原等进⾏快速测量并可分类收集的⾼技术，FCM以其快速、灵活、⼤量、灵敏和定量的特⾊，⼴泛应⽤于基础研究和临床实践各个⽅⾯，包括细胞⽣物学、肿瘤学、⾎液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等，在各学科领域发挥着重要的作⽤。

（⼆）原理待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列⾼速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。

当液柱通过检测区，在⼊射的激光束照射下产⽣前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC），它们分别反映细胞⼤⼩和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。

经⼀种或⼏种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产⽣的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进⾏分析，得到细胞相应的各种特性。

多色流式细胞术-荧光素和脱机补偿(ppt课件)

PE-Cy5.5标记抗体

开创荧光标记的新纪元
发射波长范围广:由近紫外-可见-近红外适于多色分析和制成Tandem荧光染料毫无例外地得到最好, 最亮的标记物

Alexa Fluor标记抗体特性

多色流式细胞术的必要性
CD4/CD8绝对计数白血病/淋巴瘤免疫分型微小残留白血病祖细胞分析树突状细胞分析 Naive/Memory T细胞亚群细胞凋亡分析增殖/活化分析细胞周期分析
其它临床/科研应用

多色流式细胞术的必要性
BLOOD, 2000; 96(8): 2691-6
亮度(Brightness)
Alexa Fluor标记物的荧光强度远高于其它标记物
光稳定性(Photostability)
Alexa Fluor标记物的光稳定性强于大多数其它荧光标记物
pH不敏感(pH insensitivity)
Alexa Fluor标记物在很宽的pH范围内均保持高荧光强度
水溶性(Water solubility)
由近紫外可见近红外毫无例外地得到最好最亮的标记物适于多色分析和制成tandem荧光染料wwwgotofcmcomalexafluor标记抗体特性亮度brghtnessalexafluor标记物的荧光强度远高于其它标记物光稳定性photostabialexafluor标记物的光稳定性强于大多数其它荧光标记物ph不敏感phalexafluor标记物在很宽的ph范围内均保持高荧光强度水溶性watersolubialexafluor染料水溶性好因此标记时无需有机溶剂wwwgotofcmcomalexafluor488fitc亮度光稳定性carboxyfluoresceinoregongreenalexafluor488ph敏感性wwwgotofcmcom标记抗体wwwcaltagcomwwwgotofcmcom标记抗体wwwcaltagcomwwwgotofcmcom标记抗体wwwcaltagcomwwwgotofcmcom亮度antb220alexaflur光稳定性极好wwwgotofcmcom标记抗体wwwcaltagcomwwwgotofcmcom脱机补偿necompensatwwwgotofcmcomwwwgotofcmcom多色分析的利器脱机补偿necompensat减少操作时间和样品用量纠正误操作wwwgotofcmcom多色分析的利器脱机补偿necompensatwwwgotofcmcom所有产品与软件信息请登陆wwwgotcmcom免费电话

BD流式细胞仪培训手册

一、BD FACSCalibur 基本结构
1.1 仪器本体： 1. 电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。
2. 光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例 FSC Diode SSC PMT FL1 PMT FL2 PMT FL3 PMT 只收488 nm波长散射光只收488 nm波长散射光荧光光谱峰值落在绿色范围（波长515-545 nm）荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长564-606 nm）荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 >650 nm）
4. 储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter，及空气滤网 Air filter。请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。
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鞘液筒：位于抽屉左侧，容积 4 升。装八分满鞘液筒，仪器可以运行大约 3 小时。筒上装有液面感应器，鞘液用完时，仪器软件上会有显示。鞘液筒盖上有金属环扣，保证鞘液筒密闭。
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三、上机分析流程建议首次试机避免进行大量试验，仅需准备下列样品。（1）Negative Control（不加任何抗体）。（2）CD3-FITC（FL1 单染）。（3）CD19-PE（FL2 单染）。（4）CD3-FITC /CD19-PE（FL1/FL2 双染）。 3.1 Calibur 开机 1. 先开启细胞仪本体再打开计算机。 *秘技 1：如顺序相反，仪器和计算机之间无法建立正常通讯，无法执行“connect to cytometer”。解决之道，两者都关机、然后以正确方式重开。 2. 向前拉开储液箱抽屉，检查鞘液筒、废液筒水量，如需充填鞘液，将减压阀方向调在 VENT 位置（箭头方向）。 3. 仪器会对鞘流液筒打气加压，请确认筒盖确实旋紧。 *秘技 2：将减压阀方向调在加压（向前）位置。减压阀如在 VENT（箭头方向）位置，按 RUN 功能键时将显示橙黄色（表示仪器不正常，请检查是否失压），正常为绿色显示。 3.2 开启 CellQuest 软件、编辑实验文件 4. 在苹果菜单下点击 CELLQuest 启动软件。桌面会出现一’Untitled’ 实验文件，可点击实验文件的右上角的放大钮，将实验文件窗口放大。

BD流式细胞分选仪原理和应用

从分选后染色体在激光共聚焦显微镜下图片可见分选得到的单条染色体，充分说明了 BD FACSAria Sorp分选纯度高，分选活性好。
能够分选百万分之一的细胞
3.肿瘤学
FACSAria分选出1000个细胞后具有很强的致瘤性，说明FACSAria分选出的细胞活性很强。
4. 干细胞研究----分选出的细胞高纯度和高活性
染色体分析和分选图谱（人的23对染色体）
本实验在北京大学医学院分析测试中心用BD FACSAria Sorp的445nm 及355nm两根激光器对协和医院基础所的小鼠细胞样本进行染色体分析分选。用BD SORP FACSAria 成功分析并分选到小鼠染色体，CA3/Hoechst333258 流式图谱可见，很明显的各号染色体，不同染色体间的区分度很好，直接说明了Sorp Aria的355nm及 445nm激光器可以充分激发Hoechst 333258和 CA3，并且仪器的检测分辨率高、灵敏度好。
• 胚胎干细胞 • 分化为任何细胞 • Very Small Embryonic-Like Stem Cell ( VSEL) • 分化为任何细胞 • 来源于骨髓或外周血 • 间充质干细胞 • 分化为造血系统外的其它任何细胞 • 来源于骨髓/脐带血/外周血 • 造血干细胞 • 分化为造血系统细胞 • 来源于骨髓/脐带血/外周血 • 成体干细胞 • 器官特异性分化潜能 •iPS •任何来源的细胞 •风险性尚在评估人胚胎干细胞治疗：从一个细胞开始的治疗
从一个细胞开始的治疗esc?胚胎干细胞?分化为任何细胞?verysmallembryoniclikestemcellvsel?分化为任何细胞?来源于骨髓或外周血?间充质干细胞?分化为造血系统外的其它任何细胞?来源于骨髓脐带血外周血?造血干细胞?分化为造血系统细胞?来源于骨髓脐带血外周血?成体干细胞?器官特异性分化潜能?ips?任何来源的细胞?风险性尚在评估2012年诺贝尔生理及医学奖

BD流式分选的原理和应用课件

符合分选条件的颗粒一旦被检测到，包含该颗粒的液滴将要从液流断开时，液流被充电。断开后的液滴仍然带电，带电的液滴通过被充电的偏转板。受静电吸引或排斥，带电液滴将向左或向右偏转。不带电的液滴不偏转而流入废液槽。
21
部分应用实例
科学是复杂的，工具是简单的
22
转染绿色荧光蛋白GFP细胞的分选
用带GFP (绿色荧光蛋白 ) 标记的质粒转染细胞，在488nm激光激发下，表达GFP 的细胞发绿色荧光。本实验为U937 细胞转染GFP和目的基因，用BD FACSAria III 分选高表达GFP目的基因的细胞。本案例用BD FACSAria III 分选GFP阳性细胞，该样本GFP阳性的目标细胞含量仅为1 .9%，分选后回测，目的细胞纯度高达99%。
细胞凋亡-Annexin Ⅴ/PI双标记法
FITC Annexin V/PI染色和流式细胞仪分析。Jurkat细胞（人T细胞白血病）用6µM的喜树碱或0.1% DMSO（阴性对照）4小时，引导凋亡。细胞根据Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒的染色指南，用FITC Annexin V和碘化丙啶（PI）染色。与DMSO对照组相比，喜树碱处理会增加细胞的早期凋亡（PI阴性， Annexin V阳性），即图中绿色部分。死细胞（PI阳性，红色部分）和活细胞（Annexin V和PI阴性，黑色部分）群体很容易辨别。图中的数据来自BD Accuri C6流式细胞的BD CFlow® Plus。
BD公司流式细胞仪
FACSJazz
FACSAriaII
Influx
FACSCantoII
LSRFortessa
Accuri C6
流式细胞仪特点及检测标本

BD多色流式全面解决方案PPT学习课件

SEB
CD4
IFN-g PE
IFN-g PE
CD8
紫激光配置
检测光学部件需匹配所用的荧光素 • 许多仪器已经配置可以使
用纳米晶体染料 • 为最大限度地发挥BD
Horizon Brilliant Violet 的组合优势，仪器可能需要更新配置 • 更新配置可提高扩展仪器的性能
BD Horizon Brilliant Ultraviolet (BUV)
302 43 81
7
4
Hu CD4
174 47 58 166
4
3
Hu CD19
85 16 15 40
5
6
Ms CD8a
86 24 50 151
4
2
Ms CD11b
68 15 26
5
3
Hu CD127
37
9
4
Ms CD11b
Hu CD19
Hu CD127
Better resolution of dim markers
CD25 FITC
CD25 BB515
CD25 FITC or CD25 BB515 and CD3 PerCP-Cy5.5, CD4 APC, CD127 PE
荧光素同抗原的搭配
• 亮的染料 • 减少交叉激光激发 • 减少样品制备影响
BV421
BV711
BV650
PE
BV786
BV605
BV510
与B其V CD他4 试染剂与料PE的比较比较
Buffer Compatibility – Surface Stain
Transcription Factor Buffer

BD流式细胞仪工作原理

BD流式细胞仪工作原理流式细胞仪的工作原理是：将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。

在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。

流式细胞仪通常以激光作为发光源。

经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。

这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。

光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。

计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。

单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。

一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。

对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。

在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。

将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。

对分选出的细胞可以进行培养或其它处理，做更深的研究。

美国BD C6型流式细胞仪首先C6流式细胞仪能避免操作新手的一个容易犯的错误;--;调整电压，同步化不同的细胞。

《流式细胞术的原理》PPT课件

补偿不好调。 4. 尽量选择应用广、亮度高的荧光素 5. — 荧光素的强弱用Stain Index染色指数来表示，
数值越大，信噪比越高。 6. 多色实验中，亮度高的荧光素搭配表达量低的目
标抗原 7. — 例如，PE， APC这类大分子蛋白相对亮度高。 8. 关注F/P比值
BD网站提供每一种荧
光素的激发以及发射光谱
流式细胞仪的根本构造以及原理
流式细胞仪的根本构造以及工作原理
•虽然每款流式细胞仪有各自的特征性构造，但是其内部构造根本组成一样。
•根本构造一共分三局部： •液流系统 •光学系统 •电子系统
液流系统
液流系统包括
•流动室 flow chamber
Injector
Tip Sheath
fluid
•液流驱动系统
Fluorescence signals
Focused laser beam
鞘液三大作用：防止堵塞喷孔约束样本位于喷嘴中心、提高测量精度保持细胞活性
液流系统
对灵敏度要求不是很苛刻的实验，可调高样本进样速率，从而提高采样分析速度。
光学系统
主要由激发光源、光束成形及收集系统组成
数据显示
•二维点图〔Dot Plot〕 •直方图〔Histogram〕 •等高线图〔Contour Plot〕 •密度图〔Density〕 •三维图〔3D Plot〕等·
流式细胞术操作流程
样本收集及处理
制备单细胞悬液
免疫荧光染色
表型测定
统计学分析
1.样本制备
样本来源
•血液 •骨髓 •淋巴结 •体液〔尿液、脑脊液、胸腹腔积液〕 •灌洗液〔肺泡支气管〕 •加抗凝剂〔EDTA〕，室温保存，24h内

BD流式原理及应用

•Immune Function 探索疾病发病机理、进程和预后（炎症、肿瘤）
淋巴细胞亚群双色分析
12%
76%
11% 49% 26%
BD Biosciences Immune Function
AIDS 病人T亚群分析
50-84%
27-51%
15-44%
BD Biosciences Immune Function
BD Biosciences Immune Function
BD FastImmune Activation System 快速免疫活化检测系统
优点
快速简便全程<5h ●全血分析（肝素钠抗凝血） ●无需分离PBMCs ●无需组织培养 ●免洗试剂，无需洗涤离心 ●多参数分析加速研究进程 ●功能活性检测同时报告单个细胞亚型 ●T细胞分析可进行亚群分析 ●可外延于B、NK、单核细胞 ●应用全血保留了细胞与生化微环境 ●更能代表体内状态
流式细胞仪的原理
BD Biosciences Immune Function
散射光信号
Laser
FALS Sensor
BD Biosciences Immune Function
散射光信号
Right Angle Light Detector Cell Complexity
SSC
Incident Light Source Forward Light Detector Cell Surface Area
数据分析
等高图和密度图分析
BD Biosciences Immune Function
数据分析
三维图分析
BD Biosciences Immune Function

BD流式分选的原理和应用

30
肿瘤细胞的非整倍体分析
二倍体
异倍体
四倍体
➢ 正常细胞DNA量相同，癌变细胞的DNA指数发生变化，非整倍体出现概率很高。 ➢ 用流式DNA峰图鉴别细胞的倍体在病理学上是一种快速、直接的检测方法。
31
植物倍体的分析
➢ 植物细胞的倍体非常复杂，常以多倍体形式存在。 ➢ 检测时多采用对数形式。 ➢ 植物的倍性鉴定是多倍体研究的重要内容之一。流式细胞术已应用于玉米、
细胞凋亡-Annexin Ⅴ/PI双标记法
FITC Annexin V/PI染色和流式细胞仪分析。Jurkat细胞（人T细胞白血病）用6µM的喜树碱或0.1% DMSO（阴性对照）4小时，引导凋亡。细胞根据Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒的染色指南，用FITC Annexin V和碘化丙啶（PI）染色。与DMSO对照组相比，喜树碱处理会增加细胞的早期凋亡（PI阴性， Annexin V阳性），即图中绿色部分。死细胞（PI阳性，红色部分）和活细胞（Annexin V和PI阴性，黑色部分）群体很容易辨别。图中的数据来自BD Accuri C6流式细胞的BD CFlow® Plus。
➢ Sub-G1峰的出现被认为是凋亡细胞的标志之一。
33
肿瘤细胞凋亡检测
方法：Jurkat细胞分别用DMSO（对照；<2%）或HU-331（一种诱导细胞凋亡的大麻素； Cayman Chemical Company ）处理6小时。然后用Accuri Cell Cycle Phase Determination Kit (KR-300)固定细胞并染色。
流式对照的设置
15
对照的设置
流式细胞术显示的荧光强度是相对的、可调节的，所以需要设置一系列对照来确定细胞是否阳性。 ➢ 阴性对照 ➢ 阳性对照 ➢ 单染对照（补偿对照）

简约四色多彩微立体PDCA医院护理案例汇报案例分析讲课PPT演示课件

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02
P D C A 循环流程图 Cycle flow chart
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A
C
P
D
PDCA —— P计划阶段
步骤二 : 分析产生质量问题的各种原因或影响因素
找准问题后分析产生问题的原因至关重要，运用头脑风暴法等多种集思广益的科学方法，把导致问题产生的所有原因统统找出来。
根据所分析的原因制定整改的目标和计划
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因素01
检验科与临床科室之间缺少沟通
解决办法
每一个月召开临床科室与检验科之间的碰头会,就加强危机值管理进行协商,解决落实碰到的困难,作好会议记录(原始资料的积累)
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04
P D C A 循环管理举例 Analysis and explanation
时间
2013.7-2013.9 2013.9-2013.11 2013.11-2013.12
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2014.1-2014.2
P-PLAN D-DO C-Check A-action
发现问题，分析问题，制定目标，计划，设计流程
根据所分析的原因制定整改的目标和计划
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因素03பைடு நூலகம்
流程存在缺陷
解决办法
设计更合理优化的流程，比如在原有流程的基础上引进电脑强制报告程序，如果检验科危机值发出电脑警示后，科室内电脑不能再进行其他操作，只能处理完危机值后才能进行其它操作。
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04
P D C A 循环管理举例 Analysis and explanation

BD流式细胞仪的使用程序scmc

流式细胞仪的使用程序一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。

2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。

打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。

确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。

3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。

排出过滤器内的气泡。

4．如果需要打印，打开打印机电源。

5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。

6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。

7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。

X。

做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。

待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。

二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。

2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。

从Dot Plot 对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。

3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。

4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。

X. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。

三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。

BD流式全面介绍ppt课件

流式细胞仪的遗传学应用
细胞DNA, RNA 含量的测定染色体倍体分析染色体分离基因表达产物的生物活性研究基因转染表达的生物效应基因表达调控研究细胞内基因定位酵母转基因株的筛选报告基因的定性定量检测植物遗传学研究 ••••••
What can Flow Cytometer tell us about a cell?
样本处理
细胞悬液的制备
— 细胞悬液：
– 分离PBMC、PRP等：操作复杂，分离、离心步骤导致细胞特定群体丢失，并可能引入某些误差
– 直接使用外周血、骨髓：最接近生理状况，操作简便，样本用血量小
– 灌洗液、体腔积液 – 培养细胞、细胞系
— 实体组织：
– 病理组织：新鲜样本/石蜡包埋样本 – 针吸组织：新鲜样本
Voltage
Laser Laser Laser
Voltage
Voltage
Time Time Time
Quantification of a Voltage Pulse
— Height is a measurement for all parameters. — Width = Area/Height
1. 散射光信号
•前向角散射光（FSC,Forward
Scatter）入射激光的同向散射光信号细胞相对大小及其表面积。
•侧向角散射（SSC, Side Scatter）
入射激光90角的散射光信号细胞粒度及细胞内相对复杂性。
散射光
—散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异 - 通常使用“散点图”来看散射光信号 - 散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的数据
Optics
• Excitation optics consist of:

流式配色分析及实验设计 PPT

胞内因子的含量与检测效果
经过“开源”和“节流”之后的样本和先前的实验结果对比：
未刺激活化
刺激活化后
流式实验上机模版设置和结果分析
流式实验上机模版设置
设置上机模版需要用到：空白对照管：去除自发荧光同型对照管：去除非特异性荧光单阳补偿管：去除荧光泄漏实验样本管：检测样本
一、空白对照管：即只有样本的对照管；用来排除细胞的自发荧光，调节阈值、电压，设定阴性区域；
选择BD Fixable Viability Stain Reagents（FVS染料）：
三、单阳管：带有单一荧光抗体的样本管
用来排除荧光补偿
荧光补偿：所谓“补偿”就是除去某一荧光素误入到其它荧光通道中的发射光信号。通过调节仪器完成这一步骤。往往我们通过检测带有单一荧光素的样本来减除误入其他荧光通道的信号。既单阳管。
流式配色分析及实验设计
关于流式抗体
什么是荧光素
fitc pe
✓ 荧光素是具有荧光特性的染料 ✓ 只在特定波长激光照射后才发出自身荧光 ✓ 发出的荧光颜色（波长）也是固定的
流式细胞技术：
在细胞分子水平上；通过单克隆抗体；对单个细胞或其他生物粒子；进行多参数；快速的；定量分析。
液流系统：鞘液包绕着单行排列的细胞依次高速通过流动池，而激光聚焦于流动池中心的样本流上，随后经检测的样本和鞘液流向废液桶。
胞内因子和核内因子的同时检测：
问：同时检测Th1/Th2/Th17和Treg这几个细胞时是否有推荐的 buffer？
答：核内因子和胞内因子共测时一般推荐使用BD:562574转录/核内因子固定破膜试剂盒；但是：经验证，FoxP3 与 IL-4无法同时检测，但 FoxP3和IL-17a、 IFN-γ一起染色良好。故当需要同时检测th2/Treg时需要准备2种固定破膜试剂盒并分开检测。

流式细胞术多色方案的方法学探讨

流式细胞术多色方案的方法学探讨张雪;刘涛;杨宁;卢晓梅;林仁勇【摘要】Objective To establish a method for the identification of multi cell sub populations and to ex-plore the optimization of flowcytometry.Methods The different fluorescent antibody markers from dif-ferent cell sub populations were used to mark mouse peripheral blood cells and establish the multi-color scheme of flow cytometry by flow cytometry,voltage regulation,fluorescence compensation regulation. Then,these instrument parameters were recorded to set the instrumentand the different multi-color marking results were compared and analysied.Results Optimizing the detection voltage,the correct ad-justment of compensation,the correct choice of fluorescein,the same cell marker dye overlap minimiza-tion,can effectively reduce the deviation of the experiment.The distribution of cell subsets was clear,and the ratio of fluorescence intensity was expressed correctly,which was consistent with the results obtained by single staining method.Conclusion Multi color matching can effectively reduce the experimental cost, the amount of samples used,experiment duration,and make full use of flow cytometry.%目的：建立流式细胞仪多细胞亚群鉴定和多色标记技术平台，探讨流式细胞术多色配色的优化方案。