BD多色流式全面解决方案课件

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流式多色方案中荧光素选择的重要性
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荧光素的选择是关键
V450
BV510
BV605
BV421
CD 3
CD4
• 合适的荧光素选择帮助我们更好的理解实验 • 对于弱的抗原，亮的染料尤为重要
BV650
BV711
BV711
BV786
BV786
PE
PE-CF594
PE-Cy5
PE-Cy7
BUV395
BUV395
BUV737
BUV737
2
2
3
4
5
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BD Horizon Brilliant™ Violet
• 六种被紫激光激发的染料 – 基础多聚体: BV421 and BV510 – 串联体: BV605, BV650, BV711 and BV786
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荧光素的选择是关键
BV421
V450
CD197 (CCR7) FITC
PerCP-Cy5.5 PE
PE-CF594 Alexa Fluor Alexa Fluor
647
700
CD3
选择正确的荧光素组合是回答生物学问题的关键
• BUV395: 对其他检测其几乎无溢漏
• BUV737: 对Alexa Fluor 700中等溢漏
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荧光素分辨率等级
• 等级由细胞经不同克隆，不同规格的抗体在多种流式细胞仪上的实验所得的染色指数（分辨 率）的比较决定
• 激光器的能量，PMT电压，光学部件，抗体克隆和生物样品等多种因素均会影响荧光素/试 剂在某个特定仪器上的效果
BD Horizon Brilliant Ultraviolet (BUV)
BUV395 中等亮度
Exmax/Emmax: 348 nm/395 nm 滤光片: 379/28BP
BUV737 明亮
Exmax/Emmax: 348 nm/737 nm 滤光片: 740/35BP; 690LP
两种被355nm紫外激光激发的新荧光素
Buffer Compatibility – Surface Stain
Transcription Factor Buffer
Stain – Fix/Perm
Perm III Solution
Stain - Fix/Perm
Fix/Perm - Stain
Hu CD4 BV510
Fix/Perm - Stain
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基于仪器配置选择荧光素
488 nm 640 nm
405 nm
561 nm 355 nm # Lasers
BD Accuri™ C6 BD FACSVerse™ BD FACSVerse™ BD LSR™ Fortessa BD LSR™ Fortessa BD FACSCanto™ II BD FACSCanto™ II BD LSR Fortessa X-20 BD LSR Fortessa X-20
APC APC-Cy7
APC Alexa Fluor 700 APC-H7/APC-Cy7
APC Alexa Fluor 700 APC-H7/APC-Cy7
BV421/V450
BV421/V450
BV510/V500
BV510/V500
BV421/V450
BV605
BV605
BV510/V500
BV650
Eight-color antibody panels proposed by the Human Immunophenotyping Consortium
Nat Rev Immunol, 2012
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主要内容
❖ 多色方案中荧光素选择的重要性 ❖ 荧光素同抗原的搭配 ❖ 优化仪器配置，提高分辨率 ❖ 多色Panel设计实例分析
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Identification of immune cell subsets by eight-color antibody staining Nat Rev Immunol,2012
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• 亮的染料 • 减少交叉激光激发 • 减少样品制备影响
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与其他染料的比较
BV421
BV711
PE
BV786
BV605
BV CD4 试剂与PE比较
BV650 BV510
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紫激光配置
检测光学部件需匹配所用 的荧光素
•许多仪器已经配置可以使 用纳米晶体染料
•为最大限度地发挥BD Horizon Brilliant Violet 的 组合优势，仪器可能需要 更新配置
•更新配置可提高扩展仪器 的性能
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Hu CD4 BV786
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Buffer compatibility : intracellular staining
Unstimulated
CMV pp65
SEB
CD4
IFN-g PE
IFN-g PE
CD8
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FITC PE PerCP-Cy5.5
FITC PE PerCP-Cy5.5 PE-Cy7
FITC PE PerCP-Cy5.5 PE-Cy7
FITC （ BB515） PE PE-CF594 PerCP-Cy5.5 PE-Cy7
FITC （BB515） PerCP-Cy5.5
APC
APC APC-Cy7