酶标仪的正确认识使用及校准
酶标仪工作原理及使用方法
酶标仪简介：酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。
可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。
测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
酶标仪原理：酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单.微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.光是电磁波，波长100nm~400nm称为紫外光，400nm~780nm之间的光可被人眼观察到，大于780nm称为红外光。
人们之所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。
绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光，但对绿色不吸收，反射出来，所以植物呈现为绿色。
酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。
随着检测方式的发展，拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪，可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。
酶标仪的使用方法与数据处理
酶标仪的使用方法与数据处理
酶标仪的使用方法与数据处理如下：
准备工作：确保酶标仪处于正常工作状态，校准和检修需要在必要时进行。
根据实验需求选择合适的酶标仪板和酶标仪试剂盒。
样品处理：根据实验要求选择合适的样品，并进行相应的前处理步骤。
将样品放置于酶标仪板中的孔中。
加入酶标试剂：根据实验要求和试剂盒说明书中的指导，将相应的酶标试剂添加至每个孔中。
注意按照正确的顺序和比例加入试剂，避免污染和误差。
混匀和孵育：轻轻摇晃或轻轻拍打酶标仪板，确保样品和试剂充分混合。
将酶标仪板放置在恒温条件下的孵化箱中进行相应的孵育时间，以促进反应的进行。
反应停止和读数：在孵育结束后，根据试剂盒说明书中的指导，加入适当的反应停止剂，终止反应。
将酶标仪板放置在酶标仪中，根据所测定的具体物质选择相应的波长或滤光片，读取吸光度或荧光强度值。
数据处理：根据实验需要，使用软件或计算公式将读数结果转化为所需的具体物质的浓度或活性。
清洗和维护：使用适当的清洗液和方法对酶标仪进行清洁和消毒，确保下次使用时的准确性和可靠性。
按照设备的维护手册，定期进行维护和检修工作，包括校准和更换部件等。
酶标仪的使用方法和注意事项
酶标仪的使用方法和注意事项酶标仪是一种用于检测生物样本中酶的活性的仪器，常用于生物化学、生物医学、生命科学等领域的研究和应用。
下面将介绍酶标仪的使用方法和注意事项。
一、使用方法1.准备工作在使用酶标仪之前，需要先进行一些准备工作。
首先，需要将检测板（通常是96孔板）放入酶标仪中，并将所需的试剂和样本准备好。
其次，需要根据实验的需要设置酶标仪的参数，如波长、温度、时间等。
2.加样和测定加样前，需要将试剂及样本搅拌均匀，然后按照实验方案将其加入到检测板的相应孔中。
加样完成后，将检测板放入酶标仪中，并启动仪器进行测定。
测定完成后，可通过酶标仪的软件进行数据处理和分析。
3.清洗和维护在使用完毕后，需要对酶标仪进行清洗和维护。
首先，需要将检测板从仪器中取出，并用适当的方法清洗和干燥。
其次，需要对酶标仪进行日常的维护和保养，如清洁、校准、更换灯管等。
二、注意事项1.样本准备在进行酶标检测之前，需要对样本进行适当的处理和准备，以确保其质量和稳定性。
例如，需要对样本进行冷冻保存、离心分离、过滤、稀释等操作。
2.试剂和标准品在进行酶标检测之前，需要对所使用的试剂和标准品进行充分的了解和掌握，以确保其质量和稳定性。
例如，需要对试剂的配制、保存和稀释等进行掌握，对标准品的选取和制备进行了解。
3.仪器校准在进行酶标检测之前，需要对酶标仪进行校准，以确保其准确性和可靠性。
例如，需要对仪器的波长、光强、温度等参数进行校准，对仪器的光路、光源等进行定期检查和维护。
4.数据处理和分析在进行酶标检测之后，需要对所得到的数据进行充分的处理和分析，以达到准确、可靠和合理的结果。
例如，需要对数据进行统计、分布、比较等分析，对结果进行解释和说明。
5.安全注意事项在进行酶标检测之前，需要注意安全问题，以保护实验人员的身体健康和生命安全。
例如，需要佩戴适当的防护用品，对实验室环境进行清洁和消毒，对化学品和生物样本进行正确的处理和处置。
酶标仪是一种重要的生物检测仪器，在生物科学和医学领域具有广泛的应用前景。
酶标分析仪检定方法
酶标分析仪检定方法酶标分析仪是一种常用的生化分析仪器，用于测定酶活性及其底物或抑制剂的浓度。
为确保酶标分析仪的准确性和稳定性，需要定期进行检定。
以下是一种常见的酶标分析仪检定方法。
1. 准备检定样品：先准备一定浓度的酶底物，浓度应适中，使其能够在检定样品中产生可测的酶反应。
此外，还需准备一些阻断剂和底物或阳性对照物。
2. 准备检定试剂：根据酶标分析仪的操作手册，准备好各种检定试剂，如底物缓冲液、底物溶液等。
3. 调整酶标分析仪：首先，根据操作手册进行酶标分析仪的操作和校准，确认仪器参数正确。
然后，按照仪器使用方法，将检定试剂加入仪器中，并选择相应的检定模式。
4. 进行检定：在酶标分析仪中加入检定样品和检定试剂，按照仪器操作步骤进行检定。
通常包括吸光度测定、时间测定等。
5. 记录结果和数据分析：记录酶标分析仪所得的各项数据，包括吸光度、反应时间等。
根据仪器操作手册的要求，分析数据并计算酶活性或样品中底物的浓度。
6. 判定检定结果：根据仪器的准确度和重复性要求，判定检定结果的可靠性和准确性。
如果结果与预期不符，可能需要重新检定或调整仪器参数。
7. 记录检定过程和结果：将检定过程、方法、结果和分析记录在检定报告中，以备后续参考和审核。
通过以上酶标分析仪检定方法，可以确保仪器的正常工作，提高结果的准确性和可靠性，从而保证酶标分析的分析结果的准确性。
同时，检定的频率要根据实验室的要求和标准规定进行，以确保酶标分析仪的正常运行和数据的可靠性。
酶标分析仪是一种广泛应用于生物学、医学和化学等领域的仪器设备，广泛用于测定酶活性、蛋白质浓度以及分析生物样品中特定分子的含量。
为了保证酶标分析仪的准确性和可靠性，在使用之前和使用过程中，需要进行定期的检定。
一般来说，酶标分析仪的检定需要通过以下几个步骤来完成：准备检定样品、准备检定试剂、调整仪器参数、进行检定、记录结果和数据分析、判定检定结果、记录检定过程和结果。
首先，准备检定样品。
使用酶标仪注意事项
使用酶标仪注意事项酶标仪（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，通过酶标记的抗体、抗原相互作用来定量检测分析样品中特定物质的浓度。
酶标仪在医学、生物学、免疫学等领域被广泛应用。
为了确保酶标仪的准确性和稳定性，我们在使用酶标仪时需要注意以下事项。
1.正确认识酶标仪：酶标仪是一种高灵敏度的分析仪器，使用前需要对仪器进行熟悉，了解仪器的使用方法和原理。
熟悉仪器的各个组成部分，如光源、滤光片、检测器等。
2.仪器校准：在使用酶标仪之前，需要对仪器进行校准。
校准仪器可以通过使用标准样品进行。
对仪器进行校准可以提高测定的准确性和可重复性。
3.选择适当的波长：在使用酶标仪时，需要选择适当的波长进行测量。
不同的酶标负载物有不同的最佳波长，应根据实验的需要选择合适的波长。
4.阅读和设置标准曲线：标准曲线是酶标仪测定物质浓度的重要参考。
在使用酶标仪前，需要准备标准曲线。
标准曲线上应包含不同浓度的标准样品，通过读取标准曲线可以确定待测样品中物质的浓度。
5.样品的处理：样品的处理对于酶标仪的结果具有重要影响。
样品的处理应遵循实验设计的要求，确保样品中目标物质的稳定性和完整性。
必要时进行稀释或浓缩样品。
6.操作环境的控制：酶标仪对环境的要求较高，应在洁净、无尘、干燥的实验室环境中进行操作。
避免有害化学物质和灰尘对仪器的影响。
7.操作仪器的规范：使用酶标仪应按照仪器的使用说明书和操作规程进行操作。
操作时要注意安装正确的试剂和仪器的调节，避免发生因操作不当导致的误差。
8.保养和维护：酶标仪的保养和维护对仪器的长期稳定运行和准确性具有重要影响。
及时清洗和维护仪器的各个部件，定期校准和维修仪器。
9.合理分析数据：使用酶标仪得到的结果需要合理分析和解释。
根据实验的需要进行统计分析，确保结果的可靠性。
同时，应将实验结果与已有的参考值进行对比，确保实验结果的准确性。
总结起来，在使用酶标仪时，我们需要了解仪器的使用方法和原理，并进行校准和设置标准曲线。
酶标仪使用方法及注意事项
酶标仪使用方法及注意事项
1实验室的湿度在65%以下，保持环境清洁
2定期清洁仪器外壳以保持良好的外观，特别重要的是保持酶标板架滑道的清洁干燥以防止堵塞。
用温度适中的中性洗涤溶液浸湿柔软的布后即可擦拭。
如果仪器表面有生物危险物质污染，请用中性消毒液清洁。
3开机。
预热20分钟。
使仪器达到稳定状态。
4严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。
5放板要注意酶标板摆放位置正确和平整，避免出现卡板。
如果出现卡板，第一时间切断电源，停止操作。
按照使用说明书操作，仍无法排除故障，联系厂家技术人员进行故障分析和处理。
6小心操作，避免将试液洒漏在仪器上。
一旦有试剂或血清溅落在酶标仪器上，应立即清理干净。
7 实验完成后，务必取出孔板。
如不关机，勿将抽屉留在仪器外面，灰尘会导致读数不准。
8在常规消毒时，不能使用甲醛，因为即使微量的甲醛也会导致微孔ELISA测试中使用的酶产生不良影响，超终导致不正确的实验结果。
9 不建议频繁开关机，影响仪器及光源-卤素灯寿命。
酶标仪使用方法及注意事项
操作过程
1．开启仪器电源开关，同时启动电脑。
2．启动程序，进入程序主界面。
3．根据不同的测量要求，设置测定波长和测量范围。
4．弹出板架，放入待测样品，启动检测，命名测试样品，进行检测。
5．导出excel表格数据，并保存数据。
6．关闭计算机和主机电源，登记使用记录。
注意事项
1.开机预热，待自检结束后方可使用。
2. 孔板底部需要保持干净，避免测量误差。
3. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作
4．侧紫外波段的吸光值，须使用特殊孔板。
5．加样的溶剂量应适当，太少影响测定结果，太多则容易溢出，推荐每孔至少使用100ul溶剂
6．仪器如果出现故障，请立即与技术人员，切勿擅自拆卸酶标仪。
7. 使用结束后必须关掉仪器和电脑，
8. 每次使用需要登记使用人姓名、时间以及仪器状态。
酶标仪使用详解范文
酶标仪使用详解范文酶标仪是一种常见的实验仪器，用于检测生物样本中特定分子的浓度。
它广泛应用于生物医学研究、药物研发和临床诊断等领域。
本文将详细介绍酶标仪的使用方法及注意事项。
一、酶标仪的基本原理酶标仪是通过光学测量来确定样本中特定分子浓度的仪器。
其工作原理是利用底物与酶的反应产生的物质颜色变化来测定样品中酶活性或者其中一种特定分子的浓度。
酶标仪通过测量底物产生的吸光度或荧光来确定管内样本中特定分子的浓度。
二、酶标仪的使用步骤1.准备工作：首先打开酶标仪电源，等待其预热。
然后根据需要选择合适的检测模式，如吸光度或荧光模式。
2.设定参数：按照实验要求，设定酶标仪的参数，包括波长、时间和增益等，这些参数取决于所使用的底物和样品类型。
通常需要根据实验所需设定不同的参数。
3.校准仪器：在进行测量之前，需要对酶标仪进行校准，以确保测量结果的准确性。
校准一般分为零点校准和标准曲线校准两个步骤。
零点校准是将酶标仪的读数归零，标准曲线校准则是使用已知浓度的标准样品制作标准曲线，以便后续测量时根据标准曲线确定待测样品中的物质浓度。
4.加样测量：用自动吸管器或移液器将样品加入酶标仪中，确保每个孔都有足够的样品进行测量。
加样完成后，将酶标板或孔板插入酶标仪的样品槽内，等待测量结果。
5.数据处理：酶标仪会自动测量各个孔的吸光度或荧光值，并将结果显示在仪器屏幕上。
根据实验要求，将数据导出并进行数据处理，如制作标准曲线、计算浓度等。
三、酶标仪使用注意事项1.酶标仪是一种精密仪器，使用前需仔细阅读使用说明书，并按照操作步骤进行操作。
2.操作时要注意保持操作平台的清洁和无尘，避免杂质对测量结果的影响。
3.底物的选取应根据实验目的和样品特性进行选择，不同底物对于不同物质浓度的测定有其特定的敏感性和检测范围。
4.样品的加入量需要根据实验要求准确控制，加样时尽量避免泡沫的产生。
5.酶标仪在校准时需要使用标准样品，为确保准确性应使用不同浓度的标准样品制作标准曲线。
酶标仪作业指导书
酶标仪作业指导书引言概述：酶标仪是一种常见的实验仪器，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
它通过检测酶的活性，匡助科研人员了解生物份子的浓度和相互作用情况。
本文将为您提供一份酶标仪的作业指导书，以匡助您正确操作酶标仪并获得准确的实验结果。
正文内容：1. 准备工作1.1 校准酶标仪：在进行实验前，首先需要校准酶标仪，以确保仪器的准确性。
校准过程包括调整波长、检查光强度和检测线性范围等步骤。
1.2 准备标准曲线：根据实验需要，选择适当的标准品，制备一系列已知浓度的标准溶液。
将这些标准溶液加入酶标板中，并进行测量，得到标准曲线。
2. 样品处理2.1 样品预处理：根据实验要求，对待测样品进行预处理。
这可能包括稀释、离心、加入特定试剂等步骤，以提取或者净化待测物质。
2.2 样品加入酶标板：将经过预处理的样品加入酶标板中的相应孔位，注意避免交叉污染。
2.3 控制组设置：为了确保实验结果的准确性，同时设置阴性对照组和阳性对照组。
阴性对照组不含待测物质，阳性对照组含有已知浓度的待测物质。
3. 反应和测量3.1 反应时间：根据待测物质的特性和实验要求，确定适当的反应时间。
在反应过程中，保持酶标板的温度和湿度稳定。
3.2 洗涤步骤：在反应结束后，使用洗涤缓冲液洗涤酶标板，以去除未结合的物质。
洗涤的次数和洗涤液的体积需根据实验要求进行调整。
3.3 度数检测：使用酶标仪测量各孔位的吸光度，并记录下实验结果。
注意选择适当的波长和光程。
4. 数据处理4.1 标准曲线拟合：使用测量得到的标准曲线数据，进行拟合计算，得到待测样品的浓度。
4.2 样品浓度计算：根据标准曲线的拟合结果，计算出待测样品的浓度。
根据实验需要，可以进行单位换算或者其他计算。
4.3 结果分析：根据实验目的，对实验结果进行分析和解释。
可以使用统计学方法进行数据处理，得出显著性差异等结果。
5. 实验注意事项5.1 实验操作规范：在进行实验前，熟悉酶标仪的使用说明书，并按照操作规范进行实验操作，避免操作失误。
酶标仪的使用注意事项
酶标仪的使用注意事项引言：酶标仪是一种常用的生物化学实验仪器，在实验室中被广泛应用。
它通过测量酶促反应的光学信号来定量检测样品中的特定物质。
然而，如果在使用酶标仪时忽略一些关键的注意事项，可能会导致误差的出现并影响实验结果的准确性。
本文将介绍酶标仪的使用注意事项，帮助用户正确操作并获得可靠的实验结果。
一、样品处理：1. 样品的准备：在使用酶标仪前，必须确保样品的准备符合实验方法的要求。
样品处理的不当可能会导致结果的偏差或错误。
在准备样品时，应严格按照实验方案中的指示进行，如浓度、体积等。
2. 样品的存储：不同的样品可能有不同的存储要求。
一些样品需要低温保存，而另一些样品则需要避免阳光直射。
在使用酶标仪之前，务必确保样品的存储条件符合要求，以保证实验结果的准确性。
二、仪器操作：1. 预热和校准：在开始实验之前，酶标仪需要进行预热和校准。
根据仪器的操作手册，正确进行预热和校准步骤，以确保仪器的工作状态和准确性。
2. 试剂的选择和使用：选择和使用适当的试剂至关重要。
使用失效或不合适的试剂可能会导致实验结果的错误。
在选择试剂时，应仔细阅读试剂说明书，并确保试剂在使用之前未过期。
3. 操作条件的控制：酶标仪的操作条件对实验结果有重要影响。
温度、时间、pH值等操作条件需要严格控制。
根据实验要求和仪器的要求，设置合适的操作条件，并确保条件的稳定性。
4. 仪器的清洁和维护：定期对酶标仪进行清洁和维护是保证实验结果准确和仪器长期稳定工作的关键。
在使用酶标仪后，及时清理残留的试剂和污物，并根据仪器手册进行定期维护。
三、数据分析：1. 数据的记录和保存：及时、准确地记录实验数据是科学研究的基本要求。
在使用酶标仪时，应当妥善记录实验数据并保存，以备后续数据分析和重复实验的需要。
2. 数据的分析方法：不同的实验目的和实验方法可能需要不同的数据分析方法。
在使用酶标仪进行数据分析时，应根据实验要求选择合适的数据分析方法，并确保方法的合理性和可靠性。
酶标仪的使用方法和注意事项
酶标仪的使用方法和注意事项一、酶标仪的基本介绍酶标仪是一种用于定量分析的仪器，可以测定生物样品中的蛋白质、核酸等生物分子的浓度。
其原理是利用特定酶促反应，将待测物质转化为可检测的产物，并通过光学方法进行测定。
二、酶标仪的使用前准备1.检查设备：在使用前，需要检查设备是否正常工作。
首先，检查电源线是否牢固连接；其次，检查光源和探测器是否干净无污染；最后，打开电源开关进行预热。
2.准备样品：根据实验需要，准备好待测样品，并按照实验方案进行处理。
3.调节波长：根据实验需要，选择合适的波长进行测量。
通常情况下，选择与产物吸光度最大值相对应的波长进行测量。
三、操作步骤1.打开软件：将电脑与酶标仪连接，并打开相应软件。
2.设置参数：在软件界面上设置相关参数，如波长、板型、样品类型等。
3.加入标准曲线：根据实验需要，在板子上加入标准曲线，通常选择不同浓度的标准品进行加入。
4.加入样品：将处理好的样品加入板子中，并记录每个孔的位置和名称。
5.开始测量：将板子放入酶标仪中，并按照软件提示操作，开始测量。
6.保存数据：测量完成后，将数据保存在电脑中，并进行必要的数据分析和处理。
四、注意事项1.保持清洁：在使用酶标仪前后，需要保持仪器和实验环境的清洁。
特别是光源和探测器等灵敏部件，需要定期清洗和消毒。
2.注意波长选择：选择合适的波长进行测量非常重要。
如果波长选择不当，可能会影响到测量结果的准确性。
3.注意样品稀释：如果样品过于稠密或者杂质过多，可能会影响到反应效果。
因此，在进行酶标实验前，需要对样品进行必要的稀释或者纯化处理。
4.注意安全操作：在使用酶标仪时，需要注意安全操作。
尤其是涉及到有毒有害物质时，需要采取必要的防护措施。
5.注意数据分析：在完成实验后，需要对数据进行必要的分析和处理。
特别是需要注意数据的可靠性和可重复性。
五、总结酶标仪是一种非常重要的实验仪器，可以用于定量分析生物样品中的各种生物分子。
在使用酶标仪时，需要注意设备维护、样品处理、波长选择等方面的问题，以确保实验结果的准确性和可靠性。
酶标仪使用方法
酶标仪使用方法
酶标仪是一种用于测定物质浓度的仪器，尤其是用于酶活性测定，具有高灵敏度和高精度的特点。
以下是酶标仪使用方法的详细解释，以帮助用户更好地操作仪器。
一、准备工作
1. 解决方案准备：根据需要预先准备好标准品或样品的浓度级别和体积，以及所需的缓冲液和试剂。
2. 仪器准备：打开酶标仪的电源，将检测板插入指定的孔中，并确保板完全插入。
然后按照仪器说明书的指导，正确连接线缆并放置适当的标准品和质控品。
3. 光谱扫描：对于需要进行标准曲线的实验，使用酶标仪进行吸收波长范围的光谱扫描。
二、测量操作
1. 标准曲线建立：在准备好的标准品上进行光谱扫描（或直接设置吸光度值），然后按照酶标仪的操作提示进行标准曲线建立。
确保检测范围内的标准品充分，特别是对于较低的检测范围，需要加强校准。
2. 样品测定：根据操作手册，将样品加入检测板中。
可以依次进样，或者采用多通道进样。
在进行测定前，必须确保样品和标准品在同一缓冲液中。
然后按照酶标仪的操作提示进行数据收集。
3. 数据分析：将通过检测得到的吸光度值转换为标准品的浓度值，并计算样品中分析物的浓度。
三、清洗与维护
1. 关闭仪器：完成实验后，关闭酶标仪的电源。
2. 检测板清洗：用去离子水或适当的洗涤剂清洗检测板，并放在干净的地方晾干。
3. 仪器保养：定期清洁仪器的外壳，并更换灯管等易损部件。
以上就是酶标仪使用方法的详细解释，希望能够帮助用户更好地进行仪器操作，顺利进行实验并得到准确的测量结果。
酶标仪的正确认识使用及校准
OPD在过氧化氢溶液存在下，经HRP作用，分别 氧化为2，2′-二氨基偶氮苯（DAB）和联苯醌。当 pH值为5.0左右时，DAB在450nm波长处有最大吸 收，当pH值降为1.0时，最大吸收波长移至492nm， 同时摩尔消光系数变大，显色加深，常用强酸如 硫酸或盐酸终止反应。
那么我们为什么要设定“灰区”呢？主 要由ELISA现有的测定技术的不确定性造 成的，也就是ELISA测定的“灰区”的存 在使得ELISA测定试剂盒cutt-off的设定只 是相对的准确，此时的假阳性和假阴性出 现的可能性较低。
因此，在血站以测定“灰区”的下限作为 判断献血人员血筛检不合格为标准，就可 以避免因“灰区”所致结果判断错误而引 起输血后疾病发生的可能性。
在ELISA测定中常用单双波长比色：“单波长”是 使用一种对显色具有最大吸收的波长进行比色测定。
“双波长”则除了用对显色具最大吸收的波长进行 比色测定外，同时用对特异显色不敏感的波长如 630nm进行测定，酶标仪最后打印出来的吸光度则 为二者之差。
630nm波长下得到的吸光度是非特异的，微板孔上 如指纹、灰尘、赃物等所致的吸收。
ELISA定性测定，如酶标仪具有阳性判断值 （cutt-off）及其测定“灰区”（即指测定吸光度 处于cutt-off周围的一定区域，此区域内结果应为 “可疑”）的统计计算功能，不但方便于实验室 工作人员的结果统计，而且对某些样本结果判读 有很高的实用价值。
血站实验室筛检献血人员血进行HBsAg、抗HCV 等的ELISA测定时，常会遇到测定吸光度处于 cutt-off附近但又低于cutt-off值的血，按照试剂盒 说明书的标准，可判为阴性，血为合格，可用于 患者输血，但工作经验告诉我们，这样的血如果 输给患者，会导致输血后感染疾病的可能性较大。
酶标仪的使用方法和实验操作技巧
酶标仪的使用方法和实验操作技巧酶标仪（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种广泛应用于生物学领域的分析方法，能够对特定抗原或抗体进行灵敏、快速的检测。
本文将介绍酶标仪的使用方法和实验操作技巧，帮助读者更好地了解和应用这一技术。
一、酶标仪的基本原理酶标仪基于酶的催化作用来检测分子的存在。
其基本原理是将待测分子与特异性抗体结合，在酶标记抗体的作用下，通过酶反应产生可视化的信号。
常见的酶标记包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），通过其催化底物的转化，可以得到颜色或荧光信号。
二、酶标仪的使用步骤1. 酶标仪的预热和设置在开始实验前，酶标仪需要预热至合适的温度，并设置所需的波长和光强。
一般情况下，450 nm的波长被广泛应用于酶标仪实验。
2. 样品制备和反应板处理样品的制备包括对待测物体的收集、处理和提取。
蛋白质的浓度测定、稀释和标准曲线的制作也属于这一步骤。
反应板则需根据实验设计选择合适的板型并进行预处理，如洗涤、孵育等。
3. 样品的加样和反应将待测样品、标准品和对照加入准备好的反应孔中，控制好反应时间并按照实验要求进行孵育。
注意避免交叉污染和误操作。
4. 反应终止和底物加入根据实验需要，在合适的时间点将反应终止剂加入反应孔中，阻断酶反应的进行。
接着，加入合适的底物，使颜色或荧光信号表现出来。
5. 数据采集和分析使用酶标仪读取反应孔中的信号，记录吸光度或荧光强度数值。
根据实验设计，采集所需的数据并进行统计和分析，包括标准曲线的拟合、样品浓度的计算等。
三、实验操作技巧1. 严格遵循操作规程在操作酶标仪时，必须遵循严格的操作规程，包括个人防护、培训和实验室安全等。
遵循实验设计、正确操作仪器设备，确保实验的准确性和重复性。
2. 反应条件的优化反应时间、反应温度和底物浓度等条件的优化对于获得准确、灵敏的结果至关重要。
通过试验调整这些条件，找到最佳工作范围，提高实验结果的可靠性。
酶标仪操作规程
酶标仪操作规程酶标仪是一种常用的实验仪器，用于测定样品中特定酶的活性。
为了保证实验结果的准确性和重复性，需要按照一定的操作规程进行操作。
下面是酶标仪的操作规程。
一、实验前准备1. 酶标仪和相关仪器的检查和校准：首先检查酶标仪的电源连接是否正常，然后校准仪器的光路和光密度范围。
2. 实验区域和试剂准备：实验过程中需要保持实验台面整洁，同时准备好所需的试剂和材料，保证试剂瓶上的标签与实验记录的试剂名称一致。
二、样品的处理1. 样品提取：按照实验需求进行样品的提取和处理，确保样品的质量和纯度。
2. 样品稀释：根据实验方案，将样品稀释到合适的浓度范围内，以保证实验结果的准确性并避免过高或过低的浓度对实验结果的影响。
三、酶标板的处理1. 酶标板的准备：检查酶标板是否完整，无污染和损坏。
将酶标板放置在实验室条件中恢复室温。
2. 酶标板的涂布：将所需酶标板上的孔涂布上相应的抗体或特定酶。
3. 孔板的阻塞：在涂布后的孔板中加入阻塞液，防止非特异性的吸附及降低背景。
四、酶标反应体系的配制1. 酶标反应液的配制：按照酶标试验方案的要求，准确称取相应试剂配制酶标反应液，记录配制的浓度和体积。
2. 酶标反应液的稀释：根据实验需求，将酶标反应液尽快稀释至合适的浓度范围，避免反应的非线性和过高的反应速率。
五、实验操作1. 样品的加样：将稀释后的样品分别加入孔板的相应孔中，确保每个孔中样品的体积一致。
2. 阳性和阴性对照的加样：在相应的孔板孔中分别加入阳性和阴性对照，用于结果的标定和判别。
3. 酶标板的封板：将加样后的酶标板添加盖板，确保反应的稳定性和避免蒸发。
4. 反应时间的控制：根据实验设计，控制反应的时间，保证反应的充分和避免过度反应。
5. 反应停止：根据实验方案，添加相应的停止液，停止反应并保证反应结果的稳定性。
六、酶标仪的操作1. 校正酶标仪：首先进行酶标仪的校正和调整，确认仪器的光线稳定及零点正常。
2. 定义所需测定的波长：根据实验方案，选择合适的波长进行测定。
酶标仪的使用及注意事项
酶标仪的使用及注意事项酶标仪是一种常见的实验设备，广泛应用于生物学、生化学、分子生物学和生物化学等领域。
它被用来进行酶活性测定、定量酶学研究和蛋白质含量测定等实验。
在使用酶标仪时，我们需要注意以下几个方面。
1.酶标仪的安全使用酶标仪涉及到电器设备和化学试剂，因此在使用前需要确保安全可靠的电源供应，并且根据使用说明书正确接线。
另外，使用化学试剂时需佩戴个人防护装备，如实验手套，眼镜等，避免因误操作引起事故。
2.酶标仪的操作规范在使用酶标仪时，需要保持仪器平稳，避免震动和碰撞。
操作时应按照说明书进行具体操作，严格遵守操作步骤和实验参数，以保证实验结果的准确性和可重复性。
3.酶标仪的消毒和清洁为了避免交叉污染，使用前需要消毒仪器外侧和工作台面。
实验后要及时清洁仪器，去除残留的样品和试剂，避免对下次实验的影响。
清洁时应使用专门的酶标仪清洗剂和消毒剂，并按照说明书进行纯化和消毒。
4.样品制备和测量条件酶标仪的测量结果受样品制备和测量条件的影响较大，因此需要严格控制这些因素。
样品制备前要选择合适的提取方法和溶解剂，确保样品中所需物质的溶解度和纯度。
测量条件包括温度、时间、酶底物浓度等，需要根据实际需要进行优化和标准化。
5.试剂的选择和保存酶标仪需要使用各种试剂，如底物、酶标记试剂、抗体等。
在选择试剂时要查阅相关文献并参考生产商推荐的产品。
试剂的保存要遵循正确的方法，如低温保存、避光保存、有机溶剂保存等，避免试剂失效或变质影响实验结果。
6.系统校准和质量控制为了保证测量结果的准确性和可靠性，酶标仪仪器的校准和质量控制是非常重要的。
在使用前应检查仪器的校准状态和有效期，对于不同的实验类型需要进行合适的校准。
同时，运行质控样品可以帮助判断仪器的稳定性和测量的准确性。
总之，酶标仪是一种重要的实验设备，能够帮助我们进行酶学和蛋白质研究。
在使用时需要注意安全操作、规范操作、消毒清洁、样品制备和测量条件、试剂选择和保存，以及仪器校准和质量控制等方面，以保证实验的可重复性和结果的准确性。
酶标仪的六个自检方面 酶标仪如何操作
酶标仪的六个自检方面酶标仪如何操作酶标仪即酶联免疫检测仪，是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。
酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与紧要结构和光电比色计基本相同。
想要对某一酶标仪进行认真的了解和认得，建议是能够依照如下流程进行自检操作：（一）外观酶标仪上应有仪器名称，型号，编号，生产厂家，出厂日期和电源电压；各调整旋钮，按键和开关均能正常工作，外表面无明显机械损伤；显示文字应清楚完整。
（二）酶标仪的稳定性（漂移）选用492nm波长，在吸光度o.0A处，测定标称值为1.0A的光谱中性滤光片（测定操作按仪器说明进行），记录仪器示值或均值，10min后再次记录仪器示值或均值，前后两次测定值之差不应超过±0.00、（三）吸光度测定的精准度选用405，492和620nm波长，以空气为参比，分别测定标称值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃滤光片，用专用测试板代替酶标板，按仪器说明连续测定3次，按下式计算精准度：AA=1/3（A、+A。
+A3）—A：（A：为标准值）。
（四）吸光度测定的重复性波长选择同（三），在酶标板*排加注空白溶液，二排加入浓度为200rig/ml的重铬酸钾溶液，重复测定5次。
记录每次测定的二排吸光度值，取二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。
（五）酶标仪的线性选用540nm波长，将标称值o.5，1.0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中，以空气为参比，各重复测定3次；然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中，重复测定3次。
（六）测定速度的检定.选用492nm波长，放人96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。
酶标仪除了在选购时，应尽可能自检外，在使用中也应定期检定，以保证酶标仪测定的有效性。
附：200ttg/ml重铬酸钾溶液的配制将重铬酸钾固体试剂放人称量瓶中（去盖）置于烘箱中，在105±5℃下烘2h后，置于干燥器内冷却30min，在分析天平上精准称取o.2829g，置于100ml烧杯中，用o.05mol/L稀硫酸溶解后，移入500ml容量瓶中，以少量o.05mol/L 稀硫酸洗烧杯3次，洗液并入容量瓶中，用0.05mol/L稀硫酸稀释至刻度线，摇匀。
酶标仪的正确认识使用及校准
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.5 方式不同
检定—有资质的计量部门或法定授权单位进行。 校准—外校、自校或两者结合。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.6 周期不同
检定—按国家计量检定规程规定进行。 校准—可根据使用计量器具使用的频次或风险程
（四）检测速度
指酶标仪完成比色测定所需要的时间。 检测速度快，有利于提高检测的精密度，即 避免由于在测定过程中，因测定时间不同所 致的各微孔间吸光度间的差异。现在的酶标 仪通常在数秒内即完成测定。
（五）震板功能
指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测 定前对其振荡混匀，使其微孔内颜色均一。 目前大部酶标仪均有震板功能，所不同的 是震板方式，有的可按上下、左右或旋转 等方式震板，振荡幅度有强、轻微、不震 荡。
酶标仪的正确认识、使 用及校准
贵州省临床检验中心 吴娴
正确认识、使用酶标仪
ELISA的基本过程涉及到加样、温育、洗板和显色、 比色测定等关键环节。
在酶标仪未普及以前，比色测定通常使用肉眼看是 否显色来判断结果，结果判断欠客观。
随着医院和血站实验室条件的改善，加之，卫生部 明确要求血站实验室在做ELISA测定时必须使用仪 器判读结果，因此酶标仪的正确使用及校准是保持 酶标仪对微孔板比色有足够的准确度和精密度，从 而为实验室提供准确、可靠、客观的结果（定性项 目评价）。
（三）光学系统
酶标仪的光学系统采用的是垂直光路 多通道（通常为8或12通道，亦有单通道） 检测，一般为硅光管或光导纤维，有的酶 标仪还有一个参比通道（参比通道测定在 开机时进行自我校准）。光学系统好与坏， 主要看其仪器测定的精密度与测定通道之 间的均一性有直接关系，单通道可以避免 因通道不同所致的差异。
酶标仪的正确认识使用及校准
1、外观
酶标仪上应有仪器名称，型号，编号， 生产厂家，出厂日期和电源电压；各调节旋 钮，按键和开关均能正常工作，外表面无明 显机械损伤；显示文字应清楚完整。
2、酶标仪的稳定性(漂移)
选用492nm波长，在吸光度0.0A处，测 定标准值为1.0A的光谱中性滤光片(测定操作 按仪器说明进行)，记录仪器示值或均值， 10min后再次记录仪器示值或均值，前后两 次测定值之差不应超过±0.005A。
TMB的氧化产物联苯醌在450nm波长处有最 大消光系数，如果HPR量少，H2O2和TMB 过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH， 即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌， 使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min。
因此，ELISA测定最常用的两个波长450nm 和492nm。除了这两个基本滤光片外，还考 虑到双波长比色的需要，还应有620nm或 630nm或650nm和405nm波长的滤光片，其 他滤光片可以根据自己的需要选择。
检定—对测量仪器进行强制性全面评定，评 定计量器具是否符合规定要求，作出是否合 格的结论。
是自上而下的量值传递过程。
校准—对照计量标准，评定测量仪器示值的 准确性，同时可将校准结果（修正值或校准 因子）用于测量过程中。
是自下而上的量值溯源过程。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.2 对象不同 检定—我国计量法明确规定的强制检定的计量器具。
合格—《检定证书》 不合格—不合格通知书
校准：不做结果判定
《校准证书》或《校准报告》。
A1+A2+A1，2
aA=
×100%
A1+A2
二片中式性中滤A1光为片第吸一光片度中均性值滤，光A片1,吸2为光两度片均中值性，滤A光2为片第 叠加后的吸光度均值。
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δA= 1/5(A1+A2+A3+A4+A5)
5、酶标仪的线性
选用540nm波长，将标准值0.5，1.0A中性滤光
片分别放入专用测试板样本位置中，以空气为参比， 各重复测定3次；然后将以上两片中性滤光片叠加后 置于专用测试板的同一孔位中，重复测定3次。线性 误差：
检定与校准
1 定义
检定：查明和确认计量器具是否符合法定要求的程序，它包括 检查、加标记和（或）出具检定证书。
首次检定：对未曾检定过的新计量器具进行的一种检定。 后续检定：计量器具首次检定后的任何一种检定。
强制性周期检定：按时间间隔和规定程序进行 修理后检定 周期检定有效期内的检定：由用户提出或由于某种原 因使有效期内的封印失效而进行的检定。
那么我们为什么要设定“灰区”呢？主 要由ELISA现有的测定技术的不确定性造 成的，也就是ELISA测定的“灰区”的存 在使得ELISA测定试剂盒cutt-off的设定只 是相对的准确，此时的假阳性和假阴性出 现的可能性较低。
因此，在血站以测定“灰区”的下限作为 判断献血人员血筛检不合格为标准，就可 以避免因“灰区”所致结果判断错误而引 起输血后疾病发生的可能性。
度确定校准的周期。可定期校准、不定期校准或 在使用前校准。
检定与校准
3按国家计量检定规程，对计量器具全 面评定。
校准—项目少于检定，主要针对计量器具的 示值误差，一般仅涉及定量试验。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.8 结论不同
检定：做出结果判定
校准—非强制性，为组织自愿的溯源行为。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.4 依据不同
检定—国家计量检定规程（JJG）（规定：计量 特性、检定条件、检定项目、检定方法、检定结 果的处理、检定周期），为法定技术文件。
校准
国家计量技术规范（JJF）（规定：计量特性、校准条 件、校准项目、校准方法、校准结果处理、建议复校时 间间隔）
（三）光学系统
酶标仪的光学系统采用的是垂直光路 多通道（通常为8或12通道，亦有单通道） 检测，一般为硅光管或光导纤维，有的酶 标仪还有一个参比通道（参比通道测定在 开机时进行自我校准）。光学系统好与坏， 主要看其仪器测定的精密度与测定通道之 间的均一性有直接关系，单通道可以避免 因通道不同所致的差异。
检定—对测量仪器进行强制性全面评定，评 定计量器具是否符合规定要求，作出是否合 格的结论。
是自上而下的量值传递过程。
校准—对照计量标准，评定测量仪器示值的 准确性，同时可将校准结果（修正值或校准 因子）用于测量过程中。
是自下而上的量值溯源过程。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.2 对象不同 检定—我国计量法明确规定的强制检定的计量器具。
在医疗卫生机构实行强制检定：
体温计
天平 秤
火焰光度计
分光光度计
比色计
血球计数器
血压计 眼压计
心、脑电图仪
照射量计（含医用辐射源） 激光能量、功率计（含医用激光源）
超声功率计（含医用超声源） 听力计 酸度计等
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.3 性质不同
检定—为强制性的执法行为，属于法制计量 管理的范畴。
因此，在ELISA比色测定中，最好使用双波长，且 不必设空白。如设空白，就可能会造成测定孔吸光 度为负数的现象；单个空白的非特异吸收具有一定 程度的不确定性，也就是每次测定或同次测定空白 孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值。
（二）测定的吸光度范围
通常酶标仪的吸光度测定范围在0～2.5 之间就可以满足ELISA的测定要求，但有些 仪器可以达到0～4.0的范围；对酶标仪的吸 光度范围不必追求大的吸收光范围，主要看 在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。
（八）语言界面
通常进口的中高档酶标仪人机对话多 采用英文。这对实验室可能会存在语言方 面的困难，从而难以最大限度地发挥酶标 仪的作用。
综上所述，酶标仪的最基本功能就是 比色测定，其基本要求就是在一定吸光度 范围内要有好的测定准确性、线性和精密 性。同样的，吸光度范围，测定的准确性、 线性和精密性越好则酶标仪亦越佳。
A1+A2+A1，2
aA=
×100%
A1+A2
二片中式性中滤A1光为片第吸一光片度中均性值滤，光A片1,吸2为光两度片均中值性，滤A光2为片第 叠加后的吸光度均值。
6 测定速度的检定
选用492nm波长，放入96孔酶标板进 行测定，用秒表计测仪器打印出全部数据 的时间。
酶标仪除了在选购时，应尽可能自检， 但在使用中也要定期检定，以保证酶标仪 测定的有效性。
校准是在规定条件下，给测量仪器的特性赋值并确定 示值误差，将测量仪器所指示或代表的量值，按照比 较链或校准链，溯源到测量标准所复现的量值上。
检定与校准
2 检定与校准的相同之处
都是计量器具的评定形式，是确保仪器示值 正确的两种重要的方式。
都属于计量范畴。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.1 目的不同
1、外观
酶标仪上应有仪器名称，型号，编号， 生产厂家，出厂日期和电源电压；各调节旋 钮，按键和开关均能正常工作，外表面无明 显机械损伤；显示文字应清楚完整。
2、酶标仪的稳定性(漂移)
选用492nm波长，在吸光度0.0A处，测 定标准值为1.0A的光谱中性滤光片(测定操作 按仪器说明进行)，记录仪器示值或均值， 10min后再次记录仪器示值或均值，前后两 次测定值之差不应超过±0.005A。
目前国内常见的ELISA试剂盒使用的标记用酶均为 辣根过氧化物酶（HRP），底物通常为四甲基联 苯胺（TMB）和邻苯二胺（OPD）。
OPD在过氧化氢溶液存在下，经HRP作用，分别 氧化为2，2′-二氨基偶氮苯（DAB）和联苯醌。当 pH值为5.0左右时，DAB在450nm波长处有最大吸 收，当pH值降为1.0时，最大吸收波长移至492nm， 同时摩尔消光系数变大，显色加深，常用强酸如 硫酸或盐酸终止反应。
检定通常是进行量值传递、保证量值准确一致的重要措施。
检定与校准
1 定义
校准：在规定条件下，为确定测量仪器（或测量系统）所 指示的量值，或实物量具（或参考物质）所代表的量值， 与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。
校准结果既可给出被测量的示值，又可确定示值的修正值； 校准也可确定其他计量特性，如影响量的作用； 校准结果可以记录在校准证书或校准报告中。
对已有酶标仪的实验室又如何去正确使用呢？要正 确使用酶标仪就必须对酶标仪的一些性能指标（测 定波长、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板 功能、温度控制、定性和定量测定软件功能等方面） 有一定的了解。
（一）测定波长
一般酶标仪的测定波长在400～750nm或800nm之 间就可以满足ELISA的显色测定。
（六）温育功能
指酶标仪本身能按要求自动精确地控 制仪器的温度，使得ELISA测定中微孔板 条的温育过程在仪器内部完成，而无需在 外配温箱。目前少有部分酶标仪具有此功 能，温育功能只是酶标仪的一个附加功能， 是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及 仪器的优劣。
（七）软件功能
指酶标仪对ELISA定性和定量测定及其 他测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等测 定数据具有统计分析并报告结果的功能。软 件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功 能。如果硬件方面区别不大，则软件就成为 判定酶标仪优劣的唯一指标。好的软件功能， 对实际工作会有较大的帮助。
《中华人民共和国计量法》第九条 县级以上人民政府计量行政部门对社会公用计量标准器具， 部门和企业、事业单位使用的最高计量标准器具，以及用 于贸易结算、安全防护、医疗卫生、环境监测方面的列入 强制检定目录的工作计量器具，实行强制检定。未按照规 定申请检定或者检定不合格的，不得使用。
校准—强制性检定之外的计量器具。
组织根据实际需要自行制定的校准规范。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.5 方式不同
检定—有资质的计量部门或法定授权单位进行。 校准—外校、自校或两者结合。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.6 周期不同
检定—按国家计量检定规程规定进行。 校准—可根据使用计量器具使用的频次或风险程
TMB的氧化产物联苯醌在450nm波长处有最 大消光系数，如果HPR量少，H2O2和TMB 过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH， 即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌， 使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min。
因此，ELISA测定最常用的两个波长450nm 和492nm。除了这两个基本滤光片外，还考 虑到双波长比色的需要，还应有620nm或 630nm或650nm和405nm波长的滤光片，其 他滤光片可以根据自己的需要选择。
合格—《检定证书》 不合格—不合格通知书
校准：不做结果判定
《校准证书》或《校准报告》。
检定与校准
3 检定与校准的不同之处
3.9 法律效力不同
检定—具法律效力 校准—不具法律效力
3、吸光度测定的准确度
选用405，492和620 nm波长，以空气 为参比，分别测定标准值为0.5和1.0A的光 谱中性玻璃滤光片，用专用测试板代替酶标 板，按仪器说明连续测定3次，按下式计算 准确度：△A＝1／3(A1+A2+A3)—A：(A： 为标准值)。
4、吸光度测定的重复性
选择405，492和620 nm波长 ，在酶标 板第一排加注空白溶液，第二排加入浓度为 200ug／ml的重铬酸钾溶液，重复测定5次。 记录每次测定的第二排吸光度值，取第二排 任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。按 下式计算重复性
（四）检测速度