实验三_水中细菌总数的测定
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
自来水中细菌总数的测定
自来水中细菌总数的测定自来水是我们生活中必需的一种水源，但由于其经过管道输送，可能会受到外界环境的影响，其中细菌是其中一种污染物。
因此，对自来水中的细菌总数进行测定，有助于判断自来水是否符合生活饮用水标准。
一、实验原理本实验采用了膜过滤法对自来水中的细菌总数进行测定。
其原理是通过将水样通过微孔膜滤器，将水中的微生物捕捉在滤膜的表面，再将滤膜培养在含有营养物质的琼脂培养基中，使细菌能够生长形成菌落，然后再通过计数器进行计数。
二、实验步骤1. 实验前处理：先将实验室的玻璃仪器清洗干净，用工业酒精将滤器放入灭菌杯中斜着着火杀菌，备用。
2. 取一个样品瓶，将自来水（1L）倒入瓶中。
将样品瓶放入一个不透明的塑料袋中，用胶带密封塑料袋，防止紫外线照射导致细菌死亡。
3. 首先将滤装置组装好，将滤膜放入滤装置的中间柄内，放入开口的滤膜夹中。
然后用无菌注射器将琼脂培养基吸入滤装置的压力室中，将压力室旋好。
4. 用烧杯等容器将自来水倒入滤装置中，通过压力室将水样通过滤膜，滤膜表面残留的微生物被滤装置中的滤膜抓住，滤液通过过滤口流出。
滤液需丢弃。
5. 将滤膜夹子取下，将滤膜放入用滤膜侧朝上的营养琼脂培养基培养皿中，培养皿需用无菌手套拆开。
将其覆盖好，标明标识，并用胶带作为封口。
6. 将培养皿竖起放入培养箱中，温度设定为37℃左右，需要放置24h以上，17~25℃下也可进行培养，培养天数也需要视不同微生物而定。
7. 取出培养皿，用目镜进行菌落计数。
计数时需要注意，培养皿中的菌落数量需要控制在20~200个之间。
计数完后将数据进行转换，得出升级菌落数，即水样中的细菌总数。
三、实验注意事项1. 玻璃仪器需要在实验前清洗干净，并且需要消毒处理，防止样品污染。
2. 在进行实验前，实验人员需要洗手，并穿戴洁净的实验服和手套，防止手部细菌对实验结果的影响。
3. 滤装置和培养皿需要在无菌条件下进行处理，避免细菌的交叉感染。
4. 培养皿中需要加盖，防止紫外线照射导致细菌死亡，同时也可以避免污染。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
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培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
细菌总数测定实验报告
细菌总数测定实验报告细菌总数测定实验报告引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界的各个角落。
细菌的数量对于环境卫生和食品安全至关重要。
本实验旨在通过测定细菌总数的方法，了解样品中细菌的数量，并探讨不同环境条件对细菌总数的影响。
实验方法：1. 样品采集：我们选择了不同环境中的样品，包括自来水、空气、餐具表面和人体皮肤表面。
通过无菌棉签或无菌采样器，分别采集样品，并放入无菌试管中。
2. 稀释液的制备：我们准备了一种稀释液，以免细菌过多导致结果不准确。
稀释液的配方为：1克氯化钠和1克蛋白胨溶解在100毫升蒸馏水中。
3. 稀释样品：将采集到的样品取出一定量，加入稀释液中，进行逐级稀释。
我们选择了1:10、1:100和1:1000三个不同的稀释倍数。
4. 培养：将稀释后的样品分别接种在琼脂平板上，利用无菌棉签均匀涂抹样品。
然后将琼脂平板倒置放置于恒温培养箱中，温度设定为37摄氏度。
培养时间为24小时。
5. 细菌总数计算：在培养箱中，我们观察到琼脂平板上的菌落。
根据菌落的数量和稀释倍数，可以计算出原始样品中的细菌总数。
实验结果：我们进行了多次实验，得到了不同样品中的细菌总数。
结果显示，自来水中的细菌总数最低，空气中次之，餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多。
此外，我们还发现，稀释倍数越高，细菌总数越低。
讨论：细菌总数的测定对于环境卫生和食品安全具有重要意义。
通过本实验，我们了解到不同环境中细菌总数的差异，为进一步研究提供了基础数据。
自来水中的细菌总数较低，这可能是由于自来水经过了严格的处理和消毒。
空气中的细菌总数稍高，这是因为空气中存在着大量的微生物，例如细菌和真菌。
餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多，这与人们日常接触物体和环境有关。
稀释倍数的选择对于测定细菌总数至关重要。
过高的稀释倍数会导致菌落过少，难以准确计数；而过低的稀释倍数则会导致菌落过多，影响结果的准确性。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的稀释倍数。
实验 水中细菌总数的测定 水中大肠杆菌的测定
实验2 水中大肠菌群数的测定一、目的要求1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数二、原理若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。
最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37ºC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。
检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。
多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。
三、实验仪器和材料1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。
2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液3．显微镜4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。
6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。
微生物实验（生物实验三）
微⽣物实验（⽣物实验三）⽣物⼤实验三《微⽣物学》部分实验⽬录实验⼀、培养基的配制和灭菌实验⼆、微⽣物的分离、接种及培养法实验三、⽔中细菌总数和⼤肠菌群的检测实验四、微⽣物的快速鉴定和⾃动化分析技术实验五、抗微⽣物药物敏感性试验实验六、微⽣物的⽣理⽣化反应实验七、微⽣物菌种保藏实验⼋、沉淀反应实验九、细菌鞭⽑染⾊及其运动的观察实验⼗、细菌芽孢、荚膜的染⾊及观察实验⼀、培养基的配制和灭菌⼀、实验⽬的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的⼀般⽅法和步骤。
2.学习⼏种常⽤培养基的配制、分装和灭菌的操作⽅法。
3.进⼀步熟练掌握⼿提式⾼压蒸汽灭菌锅的使⽤⽅法。
⼆、实验器材1.药品及试剂：可溶性淀粉，葡萄糖，KNO3，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，K2HPO4，1mol/L NaOH，琼脂，⽜⾁膏，蛋⽩胨，NaCl，马铃薯2.仪器及其它试管、三⾓瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、⾼压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、⽜⽪纸、记号笔、⿇绳、纱布、⼲燥箱、培养⽫、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠、PH试纸三、实验内容1.分组配制⾼⽒⼀号培养基300ml。
配⽅：可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO3 1g K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂15-25g ⽔1000ml pH 7.4-7.62.配制⽜⾁膏蛋⽩胨培养基配⽅：⽜⾁膏3g 蛋⽩胨10g NaCl 5g ⽔1000ml PH 7.4-7.63.配制马丁⽒培养基配⽅：K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋⽩胨5g，葡萄糖l0g，琼脂15～20g，⽔1000mL，⾃然pH。
配制⽅法配制20％马铃薯浸汁取去⽪马铃薯200g，切成⼩块，加⽔1000ml。
水质 细菌总数的测定 菌落计数
水质细菌总数的测定菌落计数1.适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。
2.原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。
因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。
所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。
3.仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。
采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121°C（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。
培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121C高压蒸汽灭菌15min,经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。
4.步骤4.1选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30〜300之间。
大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL,所得的菌落总数可适于计数。
4.2水样的稀释方法①将水样用力振摇20〜25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。
②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。
按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。
4.3操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2〜3个适宜浓度的稀释水样ImL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每个水样应倾注两个平皿。
②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24h,进行菌落计数。
4.4菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。
如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5〜10C冰箱内，且不得超过24h。
但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（1）录入时间:2010-9-25 11:17:29 来源：生物信息网（一)实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
（二)实验原理水是微生物广泛分布的天然环境。
各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。
水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。
这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
水质菌落总数检测方法
水质菌落总数检测方法一、引言水质菌落总数是评估水体卫生质量的重要指标之一，它能够反映水体中细菌的数量，进而判断水质是否合格。
因此，准确测定水质菌落总数对于保障水源安全、防止水传播疾病具有重要意义。
1. 培养法培养法是目前最常用的水质菌落总数检测方法之一。
其基本原理是将水样涂布在含有营养物质的琼脂平板上，然后在适宜的温度下培养一定时间，观察并计数菌落的数量。
这种方法简单易行，可以检测各种类型的细菌，但需要较长的时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
2. 膜过滤法膜过滤法是一种快速测定水质菌落总数的方法。
其原理是将水样通过一块细孔膜滤膜，过滤掉水中的微生物，然后将滤膜放置在含有营养物质的琼脂平板上进行培养。
菌落在滤膜上生长并形成可见的斑点，通过计数斑点的数量来测定水质菌落总数。
相比于培养法，膜过滤法缩短了检测时间，通常只需要6-12小时即可得到结果。
3. 流式细胞仪法流式细胞仪法是一种高效准确的水质菌落总数检测方法。
它利用光散射和荧光染色技术，将水样中的微生物分为不同的群体并进行计数。
流式细胞仪能够快速检测大量样品，并提供详细的菌落分布数据，具有高灵敏度和准确性。
但是，流式细胞仪法的设备较为昂贵，需要专业操作人员进行操作。
4. PCR法PCR法是一种基于DNA扩增的水质菌落总数检测方法。
它利用特定的引物和酶，在聚合酶链反应的条件下，扩增水样中细菌的DNA片段。
通过测定扩增产物的数量，可以间接测定水质菌落总数。
PCR 法具有高灵敏度和高特异性，并且可以快速得到结果，但需要专业的实验室设备和技术支持。
三、不同方法的优缺点比较1. 培养法的优点是操作简单，可以检测不同种类的细菌。
缺点是需要较长时间，无法实时监测水质。
2. 膜过滤法的优点是快速，可以在较短时间内得到结果。
缺点是只能检测活菌，对于耐热菌等特殊菌种的检测效果较差。
3. 流式细胞仪法的优点是高效准确，可以实时监测水质。
缺点是设备昂贵，需要专业操作人员。
(完整版)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后,所得1 mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量,按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7。
6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。
43 kPa（121°C，15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样:应取距水面10-15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
实验三 水中细菌总数的测定
实验三水中细菌总数的测定实验目的：1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.理解水质检测的原理和意义。
实验原理：在水体中存在着大量的微生物，其中包括细菌、藻类、真菌、原生动物等。
其中，细菌是最常见的一种。
水中细菌的检测可以对水质进行评估。
水中细菌的测定方法有多种，其中最常用的是悬浮液涂片法。
具体步骤如下：1.样品采集：准备好采集样品的器具，比如采样瓶。
在采集水样之前，要仔细洗手，并戴上手套。
2.处理样品：将样品过滤筛，去除水中的大颗粒。
然后用吸头从样品瓶中吸取适量的水样，放入卡片内。
3.制作涂片：将取出的水样涂在普通菌落计数板上。
涂片的方式要均匀，涂抹的厚度要适中。
制片完成后，可将板在37℃恒温条件下培养24小时。
4.统计菌落数目：待培养时间结束后，统计平板上的菌落数目。
实验步骤：1.准备实验药品和器具，保持清洁卫生，避免造成污染。
3.取出一片净化涂片，并用酒精灯或消毒灯消毒。
4.用吸头从采样瓶中取出适量的水样，均匀地涂在净化涂片上。
5.将制片好的涂片在恒温器中培养，待24小时后取出观察。
统计涂片上菌落的数目，计算出水样的细菌总数。
6.实验结束后，将药品和器具进行清理和消毒。
实验注意事项：1.实验过程中要注意保持清洁卫生，防止污染；2.涂片的制作要均匀，厚度不要过薄或过厚；3.涂片不要碰触手指等其他物体，否则影响菌落生长；4.待菌落计数板培养后不要翻盘，以免影响菌落的计数。
实验结果分析：通过实验，我们可以了解到水中细菌总数的检测方法，并从中得出有关水质的检测数据。
水中细菌总数越高，说明水质越差，这意味着我们在使用这种水源时需要更加谨慎和严格。
因此，水质检测对于保障人们的健康和生命安全非常重要，需要时常进行检测和监控。
实验5 水中细菌总数的检测
实验五水中细菌总数的检测一、实验目的1.采用标准平皿法对水样中细菌作计数。
2.掌握微生物实验中无菌操作技术方法。
二、实验原理水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。
由于重金属及某些其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。
细菌总数是指l ml水样在营养琼脂培养基中，37ºC、24h 培养后所生长的菌落数。
一般规定，1ml自来水中总菌数不得超过100个。
三、材料和器皿1.培养基：营养琼脂培养基牛肉膏：3-5 g ；NaCl ：5 g ；蛋白胨：10 g ；琼脂：15-20 g；H2O ：1000 ml ；pH ：7.0-7.2.2.无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。
四、方法和步骤1.采集水样。
2.吸取10ml水样(河水、污水、游泳池水或港湾水等)，注入罐有90ml无菌水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。
3.按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、l0-4。
4.营养琼脂培养基(用于河水样)倒平皿(厚度约2-3毫米，12毫升）水平放置至固化。
5.根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、l0-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿0.2 ml，用玻璃刮刀涂匀。
稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30～300个之间。
6.将培养皿倒置于37ºC 培养24h，可观察出明显菌落。
水中细菌总数的测定
琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2.倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，
放置桌面待其凝固。 3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻
璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微 生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水 滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于37度培养箱中培养24h。
一.实验目的：
1.学习水样的采取方法和水样细菌 总数测定的方法；
2.了解水源水的平板菌落计数的原 则。
二.实验原理：
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细 菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其 他生长条件的要求差别很大，不可能找到 一种培养基在一种条件下，使水中所有的 细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养 基平板上生长出来的菌落，计算出水中细 菌总数仅是一种近似值。
2. 自来水取样： 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用
烧杯接取自来水。
3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连 续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混 匀）、自来水样不稀释。
注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入 9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河 水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。
目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
本实验以普通肉膏蛋白胨琼脂 培养基，采用平板菌落计数技 术来分别测定自来水和河水中 的细菌总数。
三、实验操作
1.水体取样： 应取距水面10～15cm的深层水样。先将灭菌
的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转 过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出。
水质 细菌总数的测定 菌落计数
水质细菌总数的测定菌落计数1. 适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。
2. 原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。
因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。
所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。
3. 仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。
采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121℃（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。
培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121℃高压蒸汽灭菌15min，经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。
4. 步骤4.1 选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30～300之间。
大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL，所得的菌落总数可适于计数。
4.2 水样的稀释方法①将水样用力振摇20～25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。
②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。
按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。
4.3 操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2～3个适宜浓度的稀释水样1mL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每个水样应倾注两个平皿。
②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。
4.4 菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。
如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5～10℃冰箱内，且不得超过24h。
但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。
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（2）待检水样的采集方法
可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。采水样
时，直接将水灌入已灭菌的采样瓶，不需再用样
水洗采样瓶。采样后，采样瓶内的水面与瓶塞底
部间应留有一些空隙，以便在检验时可充分摇动
混匀水样。
2. 水中细菌总数的测定
（1）水样的稀释（梯度稀释法） 根据水被污染程度的不同，可用无菌吸管作10倍 系列稀释。具体步骤如下：取水样10ml，盛于 有90ml无菌水的三角瓶内，充分振摇15分钟， 此即为10-1浓度的稀释液。静置15秒后，用无菌 吸管取10-1稀释液2 ml加至18ml无菌水试管中， 充分摇匀，此即为10-2浓度稀释液。另取无菌吸 管，依次作10倍知释，制成10-3、10-4……等一 系列稀释液，通常稀释至10-6浓度。
实验三、水中细菌总数的测定
（平板混匀法）
我国饮用水标准
细菌总数主要作为判断被检水样污染程度的标志。在水
质卫生学检验中，细菌总数是指1ml水样在牛肉膏蛋白
胨琼脂培养基中，于37℃经24小时培养后，所生长的细
菌菌落的总数。我国生活饮用水卫生标准（GB5749-
2006）中规定生活饮用水的细菌总数l ml中不得超过
微量移液器的使用方法
吸液时到第一格； 吸液时轻放； 排液时到第二格； 排液时快推。
（3）培养
待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于
37℃恒温箱内培养24小时，进行菌落计数，即
为l ml水中的细菌总数。
（4）菌落计数
先计算同一稀释度的平均菌落数，若其中一个平 皿有较大片状菌落生长时，则不予采用，而应以 无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落 数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中 菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2 以代表全皿菌落数，然后再计算该稀释度的平均 菌落数。
100 CFU (colony forming unit)。
一、实验目的 二、实验仪器与材料 三、实验操作步骤
四、实验结果
五、思考题
一、实验目的
掌握水样的取样方法； 掌握水体中细菌总数的测定方法； 了解国家的相关法规。
二、实验仪器与材料
1. 仪器： 高压蒸汽灭菌器、恒温箱、冰箱、体视镜(放大镜)、带刻
度试管（3）、培养皿（4）、微量移液器（配枪头）、
三角瓶（2 ） 、计数器。来自2. 培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
三、实验操作步骤
1. 水样的采集
供细菌学检验用的水样，必须按一般无菌操作的基
本要求进行采样，并保证在运送、贮存过程中不受
污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况，
水样在采取后应立即送检；一般从取样到检验不应
表 4-3-1 计算菌落总数的方法举例
例 次 1 2 3 4 5 6 不同稀释度的平均菌落数 10-1 1 365 2 760 2 800 无法计数 27 无法计数 10-2 164 294 271 1 650 11 305 10-3 20 46 60 513 5 12 两个稀释 菌落总数 报告方式 度菌落之 （个/ml） （个/ml） 比 1.6 2.2 16400 37700 27100 513000 270 30500 1.6×104 3.8×104 2.7×104 5.1×105 2.7×102 3.1×104 备注
超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱，
但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
（1）自来水的取样方法
先将自来水龙头用火焰烧灼三分钟灭菌，然后再 开放水龙头使水流5分钟，以排除管道内积存的 死水，再用无菌容器接取水样，以待分析。如水 样内含有余氯，则采样瓶未灭菌前按每采500ml 水样加3％硫代硫酸钠(Na2S2O3· 5H2O)溶液lml的 量预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的 余氯，以防止其继续存在有杀菌作用。
两位以 后的数 字采取 四舍五 入的方 法去掉
四、实验结果
你所测得的1ml待测水样中的细菌数（附详细 的计算过程，列表说明）。
五、思考题
用这种方法是否测得全部水中细菌？为什么？
微生物菌落及计数方法
各种不同情况的计算方法：
① 首先选择平均菌落数在30-300之间者进行计 算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范 围时，则即以该平均菌落数乘以稀释倍数报告 (见表4-3-1例次1)。 ② 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300 之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若 其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则 报告其中较少的菌落总数(见表4-3-1例次2及 3) 。
10-2
10-3
10-4
10-5 10-6
10-1
（2）接种
以无菌操作方法用无菌吸管吸取原水样l ml或取
2-3个适宜浓度稀释液l ml，注入灭菌平皿中。倾
注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋
白胨琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培
养基充分混匀，每个稀释度平行三皿。另设三皿 空白对照（？）。
③ 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按 稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见 表4-3-1例次4)。 ④ 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按 稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见 表4-3-1例次5)。 ⑤ 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间 则以最近300或30的平均菌落乘以稀释倍数报告 (见表4-3-1例次6)。