实验三_水中细菌总数的测定
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100 CFU (colony forming unit)。
一、实验目的 二、实验仪器与材料 三、实验操作步骤
四、实验结果
五、思考题
一、实验目的
掌握水样的取样方法； 掌握水体中细菌总数的测定方法； 了解国家的相关法规。
二、实验仪器与材料
1. 仪器： 高压蒸汽灭菌器、恒温箱、冰箱、体视镜(放大镜)、带刻
超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱，
但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
（1）自来水的取样方法
先将自来水龙头用火焰烧灼三分钟灭菌，然后再 开放水龙头使水流5分钟，以排除管道内积存的 死水，再用无菌容器接取水样，以待分析。如水 样内含有余氯，则采样瓶未灭菌前按每采500ml 水样加3％硫代硫酸钠(Na2S2O3· 5H2O)溶液lml的 量预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的 余氯，以防止其继续存在有杀菌作用。
微量移液器的使用方法
吸液时到第一格； 吸液时轻放； 排液时到第二格； 排液时快推。
（3）培养
待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于
37℃恒温箱内培养24小时，进行菌落计数，即
为l ml水中的细菌总数。
（4）菌落计数
先计算同一稀释度的平均菌落数，若其中一个平 皿有较大片状菌落生长时，则不予采用，而应以 无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落 数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中 菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2 以代表全皿菌落数，然后再计算该稀释度的平均 菌落数。
（2）待检水样的采集方法
可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。采水样
时，直接将水灌入已灭菌的采样瓶，不需再用样
水洗采样瓶。采样后，采样瓶内的水面与瓶塞底
部间应留有一些空隙，以便在检验时可充分摇动
混匀水样。
2. 水中细菌总数的测定
（1）水样的稀释（梯度稀释法） 根据水被污染程度的不同，可用无菌吸管作10倍 系列稀释。具体步骤如下：取水样10ml，盛于 有90ml无菌水的三角瓶内，充分振摇15分钟， 此即为10-1浓度的稀释液。静置15秒后，用无菌 吸管取10-1稀释液2 ml加至18ml无菌水试管中， 充分摇匀，此即为10-2浓度稀释液。另取无菌吸 管，依次作10倍知释，制成10-3、10-4……等一 系列稀释液，通常稀释至10-6浓度。
两位以 后的数 字采取 四舍五 入的方 法去掉
四、实验结果
你所测得的1ml待测水样中的细菌数（附详细 的计算过程，列表说明）。
五、思考题
用这种方法是否测得全部水中细菌？为什么？
度试管（3）、培养皿（4）、微量移液器（配枪头）、
三角瓶（2 ） 、计数器。
2. 培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
三、实验操作步骤
1. 水样的采集
供细菌学检验用的水样，必须按一般无菌操作的基
本要求进行采样，并保证在运送、贮存过程中不受
污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况，
水样在采取后应立即送检；一般从取样到检验不应
实验三、水中细菌总数的测定
（平板混匀法）
我国饮用水标准
细菌总数主要作为判断被检水样污染程度的标志。在水
质卫生学检验中，细菌总数是指1ml水样在牛肉膏蛋白
胨琼脂培养基中，于37℃经24小时培养后，所生长的细
菌菌落的总数。我国生活饮用水卫生标准（GB5749-
2006）中规定生活饮用水的细菌总数l ml中不得超过
微生物菌落及计数方法
各种不同情况的计算方法：
① 首先选择平均菌落数在30-300之间者进行计 算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范 围时，则即以该平均菌落数乘以稀释倍数报告 (见表4-3-1例次1)。 ② 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300 之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若 其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则 报告其中较少的菌落总数(见表4-3-1例次2及 3) 。
10-2
10-3
10-4
10-5 10-6
10-1
Байду номын сангаас
（2）接种
以无菌操作方法用无菌吸管吸取原水样l ml或取
2-3个适宜浓度稀释液l ml，注入灭菌平皿中。倾
注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋
白胨琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培
养基充分混匀，每个稀释度平行三皿。另设三皿 空白对照（？）。
表 4-3-1 计算菌落总数的方法举例
例 次 1 2 3 4 5 6 不同稀释度的平均菌落数 10-1 1 365 2 760 2 800 无法计数 27 无法计数 10-2 164 294 271 1 650 11 305 10-3 20 46 60 513 5 12 两个稀释 菌落总数 报告方式 度菌落之 （个/ml） （个/ml） 比 1.6 2.2 16400 37700 27100 513000 270 30500 1.6×104 3.8×104 2.7×104 5.1×105 2.7×102 3.1×104 备注
③ 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按 稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见 表4-3-1例次4)。 ④ 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按 稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见 表4-3-1例次5)。 ⑤ 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间 则以最近300或30的平均菌落乘以稀释倍数报告 (见表4-3-1例次6)。
一、实验目的 二、实验仪器与材料 三、实验操作步骤
四、实验结果
五、思考题
一、实验目的
掌握水样的取样方法； 掌握水体中细菌总数的测定方法； 了解国家的相关法规。
二、实验仪器与材料
1. 仪器： 高压蒸汽灭菌器、恒温箱、冰箱、体视镜(放大镜)、带刻
超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱，
但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
（1）自来水的取样方法
先将自来水龙头用火焰烧灼三分钟灭菌，然后再 开放水龙头使水流5分钟，以排除管道内积存的 死水，再用无菌容器接取水样，以待分析。如水 样内含有余氯，则采样瓶未灭菌前按每采500ml 水样加3％硫代硫酸钠(Na2S2O3· 5H2O)溶液lml的 量预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的 余氯，以防止其继续存在有杀菌作用。
微量移液器的使用方法
吸液时到第一格； 吸液时轻放； 排液时到第二格； 排液时快推。
（3）培养
待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于
37℃恒温箱内培养24小时，进行菌落计数，即
为l ml水中的细菌总数。
（4）菌落计数
先计算同一稀释度的平均菌落数，若其中一个平 皿有较大片状菌落生长时，则不予采用，而应以 无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落 数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中 菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2 以代表全皿菌落数，然后再计算该稀释度的平均 菌落数。
（2）待检水样的采集方法
可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。采水样
时，直接将水灌入已灭菌的采样瓶，不需再用样
水洗采样瓶。采样后，采样瓶内的水面与瓶塞底
部间应留有一些空隙，以便在检验时可充分摇动
混匀水样。
2. 水中细菌总数的测定
（1）水样的稀释（梯度稀释法） 根据水被污染程度的不同，可用无菌吸管作10倍 系列稀释。具体步骤如下：取水样10ml，盛于 有90ml无菌水的三角瓶内，充分振摇15分钟， 此即为10-1浓度的稀释液。静置15秒后，用无菌 吸管取10-1稀释液2 ml加至18ml无菌水试管中， 充分摇匀，此即为10-2浓度稀释液。另取无菌吸 管，依次作10倍知释，制成10-3、10-4……等一 系列稀释液，通常稀释至10-6浓度。
两位以 后的数 字采取 四舍五 入的方 法去掉
四、实验结果
你所测得的1ml待测水样中的细菌数（附详细 的计算过程，列表说明）。
五、思考题
用这种方法是否测得全部水中细菌？为什么？
度试管（3）、培养皿（4）、微量移液器（配枪头）、
三角瓶（2 ） 、计数器。
2. 培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
三、实验操作步骤
1. 水样的采集
供细菌学检验用的水样，必须按一般无菌操作的基
本要求进行采样，并保证在运送、贮存过程中不受
污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况，
水样在采取后应立即送检；一般从取样到检验不应
实验三、水中细菌总数的测定
（平板混匀法）
我国饮用水标准
细菌总数主要作为判断被检水样污染程度的标志。在水
质卫生学检验中，细菌总数是指1ml水样在牛肉膏蛋白
胨琼脂培养基中，于37℃经24小时培养后，所生长的细
菌菌落的总数。我国生活饮用水卫生标准（GB5749-
2006）中规定生活饮用水的细菌总数l ml中不得超过
微生物菌落及计数方法
各种不同情况的计算方法：
① 首先选择平均菌落数在30-300之间者进行计 算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范 围时，则即以该平均菌落数乘以稀释倍数报告 (见表4-3-1例次1)。 ② 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300 之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若 其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则 报告其中较少的菌落总数(见表4-3-1例次2及 3) 。
10-2
10-3
10-4
10-5 10-6
10-1
Байду номын сангаас
（2）接种
以无菌操作方法用无菌吸管吸取原水样l ml或取
2-3个适宜浓度稀释液l ml，注入灭菌平皿中。倾
注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋
白胨琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培
养基充分混匀，每个稀释度平行三皿。另设三皿 空白对照（？）。
表 4-3-1 计算菌落总数的方法举例
例 次 1 2 3 4 5 6 不同稀释度的平均菌落数 10-1 1 365 2 760 2 800 无法计数 27 无法计数 10-2 164 294 271 1 650 11 305 10-3 20 46 60 513 5 12 两个稀释 菌落总数 报告方式 度菌落之 （个/ml） （个/ml） 比 1.6 2.2 16400 37700 27100 513000 270 30500 1.6×104 3.8×104 2.7×104 5.1×105 2.7×102 3.1×104 备注
③ 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按 稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见 表4-3-1例次4)。 ④ 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按 稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见 表4-3-1例次5)。 ⑤ 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间 则以最近300或30的平均菌落乘以稀释倍数报告 (见表4-3-1例次6)。