实验 水中细菌总数的测定 水中大肠杆菌的测定
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水中微生物实验报告实验概述•实验名称：水中微生物总数和大肠菌群的检测•实验时间：2023年•实验地点：实验室实验目的•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况•评估水质卫生状况，指导水资源管理和人群健康实验方法1.采集不同来源的水样。
2.将水样制成不同浓度的稀释液。
3.取一定量的水样稀释液注入培养皿中。
4.加入适当培养基，进行菌落计数和形态特征观察。
5.通过酶促法检测大肠杆菌。
实验结果•来源于自来水厂的水样中，微生物总数为100CFU/mL，大肠菌群未检测到。
•来源于河流的水样中，微生物总数为1000CFU/mL，大肠菌群为20CFU/100mL。
•来源于地下水的水样中，微生物总数为10CFU/mL，大肠菌群未检测到。
结论•来源于自来水厂的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
•来源于河流的水样水质较差，大肠菌群的检出说明存在污染，需进行水质治理。
•来源于地下水的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
实验意义•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况，有利于保障人类健康和水资源的可持续利用。
•提供科学依据和技术支持，指导水资源管理和水质卫生监测。
实验注意事项•实验过程需严格遵守无菌操作规范，防止样本污染。
•实验前需对实验设备、培养基等进行消毒处理，确保实验环境洁净。
•实验结束后，需妥善处理实验产生的废液、废料等。
实验展望•未来可进一步开展对水中其他微生物种类的检测，深入了解水生态系统的生物多样性。
•结合近年来人类活动和气候变化的影响，对水质卫生进行长期监测，及时掌握水质变化趋势。
•根据实验结果，制定针对性的水资源管理和水质卫生治理措施。
结语该实验通过检测水中微生物总数和大肠菌群，评估了水质的卫生状况。
实验结果表明，水质卫生状况与水源的来源密切相关。
希望通过类似的实验，加强对水质卫生状况的监测和管理，确保水资源的可持续利用，保障人们的用水安全和健康。
自来水中细菌菌落数和大肠菌群数的测定
实验五自来水中细菌菌落数和大肠菌群数的测定一、实验目的l．学习水样的采取方法、水样细菌总数测定的方法和平板菌落计数的原则。
2．学习水中大肠菌群数的测定方法。
二、实验原理细菌菌落总数是指水样经过处理，在一定条件培养后，所得1毫升检验样中所含细菌菌落的总数。
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
大肠菌群是肠道中最普遍存在和数量最多的一群细菌，常将其作为人畜粪便污染的标志。
水被大肠菌群污染，就有可能存在病原菌污染，所以，大肠菌群是重要的水质卫生指标。
水中大肠菌群数是以液体稀释培养计数法测定，即100毫升检样中大肠菌群最可能数（most probable number，MPN）。
三、实验器材l．培养基（1）肉膏蛋白胨琼脂培养基蛋白胨1克，牛肉膏0.5克，氯化钠0.5克，琼脂1.5克，蒸馏水100mL，pH7.2～7.4。
121℃灭菌15min，备用。
（2）乳糖胆盐发酵培养液蛋白胨2克，猪胆盐0.5克，乳糖1克，0.5%中性红水溶液0.5mL，蒸馏水100mL，pH 7.4。
分装到三角瓶和试管中，并放入一倒置杜氏小管。
115℃灭菌15min，备用。
双料发酵管除蒸馏水外，其它成分加倍，三倍料发酵管各组分用量增加至三倍。
2. 仪器或其他用具培养箱，试管，杜氏小管，三角烧瓶，带玻璃塞瓶，培养皿，吸管，等。
四、实验内容l．水样的采取(1) 取样瓶的灭菌准备好清洁的容量为100毫升的磨砂口带塞瓶，瓶的颈部和上部用牛皮纸覆盖，并用线捆好，然后160～170℃干热灭菌2h。
(2) 自来水的采取为了取得典型的水样，取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物。
实验八 水中细菌总数,大肠菌群数的测定
2011-11-23 一实验目的1．了解采取水样的方法2 学习水样的细菌总数的检测原理和方法3 学习水样的大肠菌群数的检测原理和方法二实验原理1 、水中细菌总数可说明被有机物污染的程度.细菌数越多,有机物质含量越大. 我国规定自来水1mL的总菌数不得超过１００个．2、本实验应用平板菌落计数技来测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下。
使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出未的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
3若水源被粪便污染，则有可能被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，不易检测．因此要找一个合适非病原的指示菌，来指示水被粪便污染的情况，从而知识水源被肠道病原菌的污染情况．最广泛应用的是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧，革兰氏阴性，无芽孢的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经３７℃２４－４８小时培养能产酸产气．我国规定每升自来水中的大肠菌群不超过３个．4、平板培养基一般使用远藤氏培养基或伊红美蓝琼脂，前者含有碱性复红染料，它可被培养基中的亚硫酸钠脱色，使培养基呈淡粉红色，大肠菌群发酵乳糖后产生的酸和乙醛即和复红反应，形成深红色的复合物，使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色．伊红美蓝琼脂平板含有伊红与美蓝染料，作为指示剂．大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生与远藤氏培养基上相似的，带核心的，有金属光泽的深紫色菌落。
三实验器材1 、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板，伊红美蓝琼脂培养基平板．２、无菌生理盐水，无菌吸头，涂布棒，酒精灯等．四实验方法１水样稀释液的制备用lmL移液器，吸取水样lmL，移入装有9mL无菌水的试管中，振荡，让菌液混合均匀，即成10-１稀释液；再用lmL 移液器，吸取10-１稀释液lmL，移入装有9mL无菌水的试管中，振荡，让菌液混合均匀，即成10-２稀释液；再换一支无菌吸头吸取10-２稀释液lmL，移入装有9mL无菌水的试管中，振荡，即成10-３稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5等一系列稀释菌液。
微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测
2，EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？
EMB培养基主要包含以下几种物质：蛋白胨，乳糖，蔗糖，磷酸二氢钾，伊红Y，美蓝，蒸馏水。EMB培养基的机制就是靠微生物在发酵过程中，使培养基发生分解，产生大量的氢离子，从而改变培养基的PH，由于提前添加的指示剂，在PH值的改变下，就会发生颜色的变化，从而鉴定生长的菌种。在检测大肠菌群的时候，蛋白胨提供了氮源，磷酸二氢钾提供了磷元素和钾元素，
-3-5
变，诸如在在10，设置4个重复，而10时候，可以设置8个重复，这样可以在追求最简工作量的时候，获得最简的实验结果。
微生物综合实验水中细菌总数和大肠菌群的测定(精)
微生物综合实验：水中细菌总数和大肠菌群的测定一实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
3、学习检测水中大肠菌群的方法，了解大肠菌群数量与水质状况的关系。
二、实验原理水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
我国规定1ml自来水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~28h能发酵乳糖产酸与产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它们普遍存在于肠道中，且具有数量多，与多数肠道病原菌存活期相近，易于培养和观察等特点。
大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值。
大肠菌群的检测方法有多管发酵法和滤膜法两种。
本实验采用多管发酵法，它被称为水的标准分析法，即将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应的结果，确证大肠菌群的阳性管数后在检索表中查出大肠菌群的近似值。
我国规定：每升自来水中大肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料和用具：1、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培养基，三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基，伊红美兰培养基（EMB培养基）。
2、试剂：无菌水、结晶紫染液、卢氏碘液、95%乙醇、番红染色液。
3、器皿：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，德汉氏小管，载玻片，无菌空瓶，移液管，接种环，酒精灯，注射器，显微镜等。
四、实验步骤第一周（2008-11-11）1、制备无菌水：取4支试管，向每支试管中加入9ml自来水。
2、配制：牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）乳糖蛋白胨培养基（蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，1．6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基（将上述乳糖蛋白胨培养基浓缩3倍配制）3、将以上配制的无菌水和培养基全部进行灭菌处理。
湖水中细菌总数及大肠杆菌数目的测定
湖水中细菌总数及大肠杆菌数目的测定上一篇/ 下一篇 2008-09-23 19:47:01 / 个人分类：论文查看( 65 ) / 评论( 0 ) / 评分( 0 / 0 )湖水中细菌总数及大肠杆菌数目的测定——西安市未央湖湖水的测定宋辉辉勾增航刘志平魏敏敏王燕敏方祎（陕西科技大学资源与环境学院，710021）中文摘要：在给水净化工程中，水源水经处理后才能供给用户。
因此，自来水出厂前要作水质的物理化学分析和细菌卫生检验。
水中大肠菌群数的多少，表明水体被粪便污染的程度。
经过对未央湖湖水的测定，完全符合国家对《景观娱乐用水水质指标》的规定，测量湖水及蒸馏水（对照）水中大肠杆菌群数目，主要采用1.乳糖蛋白胨培养基。
2.三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基。
3.伊红美蓝培养基等进行多管发酵法及复发酵的方法。
关键词：湖水，大肠杆菌，多管发酵，复发酵。
Abstract: measuring the water and distilled water (control) group of E. coli in water. Mainly uses: 1 lactose peptone medium; 2. Tripled concentrated lactose peptone medium, 3. Yihong, such as blue medium multi-tube fermentation and fermentation methods.Topic: In water purification project, the source water can be treated to supply customers. Therefore, the tap water factory to make the physical and chemical analysis of water quality and health testing of bacteria. The number of coliform. bacteria in water that the water body was faecal pollution.正文：1. 引言：西安未央湖游乐园是以集休闲、娱乐为一体的现代大型游乐园，占地近千亩，其中水域面积480亩，是西北最大的人工湖。
某水源地取水口水体中细菌总数和大肠杆菌数测定
水体中细菌总数和大肠杆菌数的测定一、实验目的要求l．学习水样的采样方法和水样细菌总数和大肠杆菌数测定的方法。
2．了解水源水的平板菌落计数的原则。
二、实验原理本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值，目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖，产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，实验用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌，求得水样中的总大肠菌群数。
三、实验仪器与试剂仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、冰箱、生物显微镜、载玻片、酒精灯、镍铬丝接种棒、培养皿(直径100mm)，试管(5，150mm)，小倒管，吸管(1，5，10ml)，烧杯(200，500，2000ml)，锥形瓶(500，1000ml)，采样瓶试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、乳糖、磷酸氢二钾、2%伊红水溶液、0.5 %美蓝水溶液、蒸馏水、四、实验步骤1.仪器的灭菌将培养皿、试管、吸管、烧杯、锥形瓶、采样瓶于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
2.培养基的配制2.1牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、氯化钠0.5g比例放入烧杯候中，加入少许蒸馏水用玻棒搅匀，放在石棉网上加热使其溶解，再加入琼脂加热融化，并不断搅拌，调节PH，放置在121.3℃，20min高压蒸汽灭菌，将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24-48小时，以检查灭菌是否彻底。
2.2伊红美蓝培养基先将琼脂20~30g加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾2g及蛋白胨10g，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖10g，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以121.3℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水是一种重要的自然资源，因此水的质量非常重要。
水的污染问题已经引起了越来越多的人关注。
而微生物是水中的主要污染物之一，尤其是细菌总数和大肠菌群，这些污染物对人体的影响是非常大的。
在这篇报告中，我们将介绍我们对这两种污染物的检测结果。
1. 实验材料我们使用了以下材料进行实验：- 水样：我们选择了来自自来水厂和自然水源（例如河流和湖泊）的样本。
- 培养基：我们使用了通用富营养基和多氯芬酸钠培养基进行实验。
2. 实验方法我们使用了以下步骤来检测水中的微生物：- 取样：我们使用无菌技术取样。
具体而言，我们先用消毒过的杯子收集水样，然后用无菌注射器将水转移到无菌容器中。
- 稀释：我们用无菌盘子将水样稀释至适当的浓度。
- 培养：我们将每个稀释后的水样盛放于培养基中，然后将培养皿放入孵化箱，控制温度在30℃，进行孵化48小时。
- 计数：我们使用显微镜和计数计数室对每个水样中的细菌进行计数。
3. 实验结果我们进行了3次独立的实验，每次实验都使用了来自不同水源的样本。
下面是我们的检测结果。
- 细菌总数我们使用通用富营养基在每个水样中进行了细菌总数的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源细菌总数（CFU/mL）自来水厂8 × 104 5 × 104湖泊2 × 105 3 × 105河流5 × 105 6 × 105-大肠菌群我们使用多氯芬酸钠培养基进行了大肠菌群的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源大肠菌群（CFU/mL）自来水厂不可检测不可检测湖泊1 × 103 1 × 103河流2 × 103 2 × 1034. 结论我们的实验结果表明，不同来源的水样中细菌总数和大肠菌群的数量有很大的不同。
实验十一 水中细菌总数和大肠菌群数的检测
3、结果计算
根据阳性管数查表得大肠菌群数。
五、思考题
1、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。 2、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？
实验十一
水中细菌总数和大肠菌群 数的检测
一、实验目的
1、学习并掌握水体细菌学的检验 2、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法
二、实验原理
1、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）
2、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（MPN法） 大肠菌群以大肠杆菌为主，能在37℃48h内发酵乳糖产酸、
产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。
Байду номын сангаас（最好在30~300个之间）
（二）水中大肠菌群数的测定
1、初发酵实验
在3倍浓缩乳糖培养基中加入3个梯度样品各10ml（5个重
复），混匀37 ℃培养24h。
2、平板分离
不产酸不产气和不变浑浊 阴性
产酸产气或仅产酸
阳性
划线接种 于伊红美 兰平板， 37 ℃培养
24h
菌落为深紫黑色，具 金属光泽或紫黑色不 带金属光泽或淡紫红 色中心较深
最大概率数法：对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算 取三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管 的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为 阴性，然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。
三、实验材料
1、水样 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、3倍浓缩乳糖蛋白胨培养
基（带指形管）、伊红美兰固体培养基
四、实验方法
（一）水中细菌总数的测定（混合平板法） 1、样品采集和稀释
自来水、纯净水、饮料作原样、 10-1 、10-2三个稀释度 污水作10-1 、10-2 、10-3三个稀释度 2、取3个稀释度样品各1ml于平皿中，再倒入50℃左右牛肉 膏蛋白胨培养基约15ml，轻轻转动混合均匀。凝固后37 ℃倒置培养。每个稀释度作3个重复。 细菌总数＝同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数
实验八九水中细菌总数与大肠菌群数的测定
例次
不同稀释度的平均菌落数
10-1
10-2
10-3
仅有一个稀释度在此范围： 1365
164
20
菌落数×稀释倍数 有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比<2，取平均值
2760
295
46
有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比>2，选较小值
3890
271
60
所有稀释度均>300 取稀释倍数最大者
入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取10ml原水样 ，注入装有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，37 ℃培 养24h，24h未产气继续培养至48h。
普通浓度发酵管中参加20%乳糖0.55ml，3倍浓缩发酵管中参 加乳糖0.75ml
实验方法
多管发酵法测定水中总大肠菌群
3.平板别离： 〔1〕制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注15ml 〔2〕选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板〔分区划线
无法计数 1650 513
所有稀释度均<30 取稀释倍数最小者
27
11
5
没有任何稀释度在30-300之间 无法计数 305
12
选最接近该范围者
两个稀释度 菌落之比
菌落总பைடு நூலகம் （CFU/ml）
——
1.6×104
1.6
3.8×104
2.2
2.7×104
—— —— ——
5.1×105 2.7×102 3.1×104
实验八-九 水中细菌总数与大肠菌群数 的测定及计数
目的要求
1、学习检测水中细菌总数和大肠菌群数的方法 2、掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数 的方法 3、学习使用大肠菌群检索表
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测.docx
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（1）录入时间 :2010-9-25 11:17:29来源：生物信息网（一 ) 实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
（二 ) 实验原理水是微生物广泛分布的天然环境。
各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物( 如光合藻类 ) 、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。
水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过 3 个，细菌总数每mL不超过100 个。
所谓细菌总数是指算的是平板上形成的菌落1mL或 1g 检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在 37℃24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。
这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测
实验六水中细菌总数与大肠菌群的检测摘要:本实验以测定公园河流水的细菌总数与大肠菌群的数量,来测定特定地点的水质情况。
初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标,判定水体的质量。
对该实验点的水源作出了定性的评价,以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。
关键字:河流水;细菌总数测定;大肠菌群;EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关,因而就是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数就是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)],可用稀释平板计数法检测。
水中大肠菌群的数量可用来判断水源就是否被粪便污染,并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。
特征:G-无芽孢杆菌,兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。
多管发酵法初发酵:适当稀释样品,乳糖发酵培养,产酸产气;分离培养:伊红美蓝(EMB)平板上划线分离,出现紫色、粉红色特征性菌落;复发酵验证:挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。
材料与方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用于水中细菌总数测定牛肉膏5g,蛋白胨10g, NaCl 5.0 g,琼脂8g, 蒸馏水1000ml; pH 7、0乳糖胆盐蛋白胨培养基:用于初发酵1×:蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0、04%溴甲酚紫水溶液25mL(调pH值后加)、水1000mL、pH 7、2－7、4三倍浓缩液(3×):除水以外,其余成分取三倍用量分装:1×的培养基分装9ml/管, 3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶,均装上德汉氏小管。
灭菌条件:115℃,15min。
EMB培养基:用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基,按说明书操作,水用量为90%。
水源:紫竹院河水仪器:高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。
试剂:牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂粉,伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0、04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤:1),相关器械的灭菌操作,以及前往紫竹院取少量的样品水。
实验十二 水中细菌总数和大肠杆菌检测 ppt课件
一 实验目的
1、掌握细菌总数的测定方法 2、掌握大肠杆菌的鉴定和计数
方法 3、巩固无菌操作技术
二 实验原理
1.细菌总数测定原理
用营养琼脂倾注平板，测定被检物在单 位重量或体积（g或ml）内所含有的活细 菌数量，以判明被检物被细菌污染的程度。
三、实验器材
板 牛肉膏蛋白胨培养基:150ml，6个平板
4400
3
2
2
2100
350
4700
3
2
3
2900
3
3
0
2400
360
13000
3
3
1
4600
710
24000
3
3
2
11000
1500
48000
3
3
3
≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试 管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生， 需进一步试验。
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌 落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰 氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培 养24h±2h，观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告 为大肠菌群阳性。
10-3无法计数
菌落计数的报告:
菌落数
报告结果
1、 30~300 之间
平均菌落数 X 稀释倍数
2、 (若有两个稀释度) 在30~300之间
水中细菌总数及大肠菌群的测定
实验日期：2017.11.22 实验班级：生物技术指导教师：张建丽
姓名：高熹学号：1120152430
水中细菌总数及大肠菌群的测定
一、实验目的
1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
二、实验原理
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度。
细菌数越多，有机物质含量越大。
细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中，37℃经24小时培养后，所生长的菌落数。
我国规定自来水1ml的总菌数不得超过100个。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样
3、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂固体培养基
四、实验步骤
1、水样的采取
自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，以灭菌三角烧瓶接取水样，备用。
2、平板的制作
（1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。
共做两个平皿。
（2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
（3）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。
五、实验结果及分析
实验组，观察到有16个菌落
对照组
六、实验反思
实验中水流时间不够，实验应做好提前准备做好规划。
水中细菌总数和总大肠菌群的测定
自来水中细菌总数的测定【摘要】水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物含量越大。
本实验应用平板菌落记数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值。
本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。
所谓细菌总数，指1毫升或1克检样中所含的细菌菌落的总数。
通过观测得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种类繁多，取其平均值得到，菌落数为每毫升自来水中21个细菌菌落。
【关键词】自来水普通营养琼脂培养基平板菌落计数技术细菌总数乳白色菌落【前言】微生物学指标是评价饮用水生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。
水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的[1]。
各种天然水中常含一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
自来水指通过水处理厂净化、消毒后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活、生产使用的水。
我国饮水卫生标准规定每毫升水样细菌总数37度培养24个小时不得大于100个。
微生物学指标是评价水中生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。
近年来随着环境污染加重我国水质不断下降，给居民饮水安全带来隐患。
因此，我们想通过测定自来水中的细菌总数，了解水质情况，呼吁人们保护水资源。
本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
通过此实验我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染[2]。
1 材料与器具1.1实验试剂牛肉膏蛋白胨 NaCl 1moL/LNaOH 1moL/LHCL灭菌水1.2实验仪器高压蒸气灭菌锅培养皿三角烧瓶带玻璃塞瓶天平试管牛角匙 pH试纸（pH5.5-9.0）棉花记号笔纱布吸管麻绳牛皮纸量筒玻璃棒电热炉称量杯2 实验方法2.1 水样的采取先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再放开水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
水中细菌总数和大肠杆菌检测
（EMB）、牛肉膏蛋白胨培养基
四、实验步骤-细菌总数测定
1.以1ml无菌吸管吸取样品1ml加入9ml 无菌生理盐水， 使样品（自来水、饮用水、饮料等）成 1：10 、1： 100 、1：1000 等几个稀释度；样品（下水道水、牛 奶）稀释度要适当高。 2.分别在无菌平皿内加入1：100、1：10、原样的样品 各1ml，每个稀释度均做一个平板。 注意 ：先加浓度低的样品，再加浓度高的样品 3.将冷却45℃的营养琼脂倾注于平皿中，摇匀，置37 ℃培养24小时。
3
2,890
271 60
2.2 27，100 27，000或2.7×104
4
不可计 4，650 513
— 513，000 510，000或5.1 ×105
5
27 11 5 —
270
270或2.7 ×102
6Leabharlann 不可计 305 12— 30，500 31，000或3.1 ×104
7
不可计 不可计 不可计 —
200
70
890
2
1
2
270
2
1
3
340
2
2
0
210
40
470
2
2
1
280
100
1500
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2
2
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2
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420
2
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290
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3
1
360
2
3
2
440
2
3
3
530
3
0
0
230
40
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实验2 水中大肠菌群数的测定一、目的要求1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数二、原理若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。
最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37ºC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。
检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。
多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。
三、实验仪器和材料1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。
2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液3．显微镜4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。
6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。
四、实验前准备工作（一）配培养基1．乳糖蛋白胨培养基（供多管发酵法的复发酵用）配方：蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1 ml、蒸馏水1 000ml、pH＝7.2～7.4。
制备：按配方分别称取蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1 000 ml蒸馏水，调整pH为7.2～7.4。
加入1．6％溴甲酚紫乙醇溶液1 ml，充分混匀后分装于试管内，每管10 ml，另取一小倒管装满培养基倒放入试管内。
塞好棉塞、包扎。
置于高压灭菌锅内以0.7kg/cm2（115℃）灭菌20min，取出置于阴冷处备用。
2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（供多管法初发酵用）按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制，分装于试管中，每管5ml。
再分装大试管，每管装50ml，然后在每管内倒放装满培养基的小导管、塞棉塞、包扎，置高压灭菌锅内以0.7kg/cm2（115℃）灭菌20min，取出置于阴冷处备用。
3．品红亚硫酸钠培养基（即远滕氏培养基），供多管发酵法的平板划线用配方：蛋白胨10g、乳糖10g、磷酸氢二钾3.5g、琼脂20～30g、蒸馏水1000ml、无水亚硫酸钠5g左右、5％碱性品红乙醇溶液。
制备：先将琼脂加入900ml蒸馏水中加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，加蒸馏水补足至l 000 ml，调整pH为7.2～7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于锥形瓶内，置高压灭菌锅内以0.7 kg/cm2灭菌20min，取出置于阴冷处备用。
现市场上有售配制好的乳糖发酵培养基，使用方便。
4．伊红美蓝培养基配方：蛋白胨10g、乳糖10 g、磷酸氢二钾2 g、琼脂20～30 g、蒸溜水1000ml、2％伊红水溶液10 m1、0.5％美蓝水溶液13 ml制备：按品红亚硫酸钠的制备过程制备。
现市场上有售配制好的伊红美蓝培养基，使用方便。
五、实验方法与步骤（一）大肠菌群的测定1．多管发酵MPN法（按三个步骤进行）多管发酵法适用于饮用水、水源水，特别是浑浊度高的水中的大肠菌群测定。
（1）生活饮用水的测定步骤①初步发酵试验在2支各装有50 ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大发酵管中，以无菌操作各加入100ml水样。
在10支各装有5 ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，以无菌操作各加入10ml水样．混匀后冒于37ºC恒温箱中培养24h，观察其产酸产气的情况。
情况分析：a．若培养基红色不变为黄色，小导管没有气体，即不产酸不产气，为阴性反应，表明无大肠菌群存在。
b．若培养基由红色变为黄色，小导管有气体产生，即产酸又产气，为阳性反应，说明有大肠菌群存在。
c．培养基由红色变为黄色说明产酸，但不产气，仍为阳性反应，表明有大肠菌群存在。
结果为阳性者，说明水可能被粪便污染，需进一步检验。
d．若小倒管有气体，培养基红色不变，也不浑浊，是操作技术上有问题，应重作检验。
②确定性试验用平板划线分离，将经培养24 h后产酸（培养基呈黄色）、产气或只产酸不产气的发酵管取出，以无菌操作，用接种环挑取一环发酵液于品红亚硫酸钠培养基（或伊红美蓝培养基）平板上划线分离，共三个平板。
置于37℃恒温箱内培养18～24 h，观察菌落特征。
如果平板上长有如下特征的菌落并经涂片和进行革兰氏染色，结果为革兰氏阴性的无芽孢杆菌，则表明有大肠菌群存在。
在品红亚硫酸钠培养基平板上的菌落特征：a．紫红色，具有金属光泽的菌落；b．深红色，不带或略带金属光泽的菌落；c．淡红色，中心色较深的菌落。
在伊红、美蓝培养基平板上的菌落特征：a．深紫黑色，具有金属光泽的菌落；b．紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；c. 淡紫红色，中心色较深的菌落。
③复发酵试验以无菌操作，用接种环在具有上述菌落特征、革兰氏染色阴性的无芽孢杆菌的菌落上挑取一环于装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨培养基的发酵管内，每管可接种同一平板上（即同一初发酵管）的1～3个典型菌落的细菌。
盖上棉塞置于37ºC恒温箱内培养24h，有产酸、产气者证实有大肠菌群存在。
根据证实有大肠菌群存在的阳性菌（瓶）数查表。
报告每升水样中大肠菌群数。
（2）水源水中大肠菌群的测定步骤（一）①稀释水样根据水源水的清洁程度确定水样的稀释倍数，除严重污染外，一般稀释倍数为10-1及10-2，稀释方法如实验七中所述的10倍稀释法（均需无菌操作）。
②初步发酵试验以无菌操作，用无菌移液管吸取1ml 10-2、10-1的稀释水样及l ml原水样，分别注入装有10 ml普通浓度乳糖蛋白胨培养基的发酵管中，另取10ml原水样注入装有5 ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基的发酵管中（注：如果为较清洁的水样，可再取100ml 水样注入装有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养基发酵瓶中）。
置37ºC恒温箱中培养24h后观察结果。
以后的测定步骤与生活饮用水的测定方法相同。
根据证实有大肠菌群存在的阳性管数或瓶数查表，报告每升水样中的大肠菌群数。
（3）水源水中大肠菌群的测定步骤（二）①稀释水样将水样作10倍稀释。
②于各装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中，各加10ml水样。
于装有10 ml乳糖蛋白胨培养液的5个试管中，各加l ml水样。
于装有10ml乳糖蛋白胨培养液的5个试管中，各加1 ml 10-1的稀释水样。
三个稀释度，共计15管。
将各管充分混匀，置于37ºC 恒温箱中培养24h。
③平板分离和复发酵试验的检验步骤同“生活饮用水检验方法”。
④根据证实大肠菌群存在的阳性管数查表，即可求得每100ml水样中存在的大肠菌群数。
乘以10即为1L水中的大肠菌群数。
2．滤膜法适用范围：适用于测定饮用水和低浊度的水源水（1）原理：滤膜是一种微孔薄膜，孔径0.45～0.65微米，能滤过大量水样并将水中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落，算出每L水样中含有的大肠菌群数。
（2）仪器与材料：除与多管发酵法的相同外，另还有：过滤器、抽滤设备、无菌镊子、滤膜（直径3.5 cm和4.7 cm）。
（3）培养基：品红亚硫酸钠培养基（乙）配方：蛋白胨10g、酵母浸膏5g、牛肉膏5g、乳糖10g、磷酸氢二钾3.5g、琼脂15～20g、无水亚硫酸钠5g左右、5％碱性品红乙醇溶液20ml、蒸馏水1 000ml，pH＝7.2～7.4。
乳糖蛋白胨培养液（与多管发酵法相同）。
乳糖蛋白胨半固体培养基：配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、酵母浸膏5g、乳糖10g、琼脂5g、蒸馏水l 000ml，pH ＝7.2～7.4。
（4）操作步骤：首先要作好准备工作，而后才是过滤水样。
准备工作主要是滤膜和滤器的灭菌。
滤膜灭茵时，将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min，前两次煮沸后需更换蒸馏水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。
滤器灭菌使用高压灭菌锅在121ºC下，灭菌20min。
过滤水样时，用无菌镊子夹住滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴在滤器上，稳妥地固定好滤器，将333ml水样（如果水样中含菌量多，可减少过滤水样）注入滤器中，加盖，打开滤器阀门，在-500Pa下抽滤。
水样滤毕，再抽气5s，关上滤器阀门，取下滤器，用镊子夹住滤膜边缘移放在品红亚硫酸钠培养基平板上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37ºC恒温箱内培养22～24h后观察结果。
挑取具有大肠菌群菌落特征的菌落（菌落特征见上述多管发酵法）进行涂片、革兰氏染色、镜检。
将具有大肠菌群菌落特征、革兰氏染色阴性的无芽孢杆菌接种到乳糖蛋白胨培养液或乳糖蛋白胨半固体培养基。
经37℃培养，前者于24h产酸产气者；或后者经6～8h培养后产气者，则判定为大肠菌群阳性。
计算每L水样中大肠菌群数，即将平板上长出的大肠菌落总数乘以3。
六实验报告1 记录结果，根据你的结果判断所取水样是否符合标准。
2 测定大肠菌群数有何实际意义？为什么选用大肠菌群作为水的卫生指标？。