(医学课件)非小细胞肺癌患者EGFR基因检测
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21
检测标本
淋巴结标本也可——淋巴结标本中EGFR突变能否 反映原发灶中EGFR状态？
外周血、癌性胸水、经支气管细针穿刺标本有研究 也有阳性结果
外周血标本：血浆中游离DNA（cfDNA）浓度变化 很大（10~1200ng/ml）, cfDNA片段很短（180bp）， 可能多由凋亡产生，肿瘤释放的cfDNA在总cfDNA 中的含量不稳定（3%~93%）
近50% NSCLC驱动基因已经被发现 双基因同时突变罕见 对已知的靶点，已有很多上市或在研
的药物 驱动基因突变状态与人种、性别、病
理类型、吸烟状况等有关，不同类型 用药不同。
6
NSCLC基因检测的意义
基因检测决定了分子靶向治疗 2011年我国制定了: 中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子
KRAS (114)
MEK1 (2) MET AMP (3) NRAS (2) PIK3CA (6)
ALK X
AKT
BRAF EGFR HER2 KRAS MEK1 MET
NRA S
PIK3 CA
1
2
1
1
X
X
1
X
1
3
X
X
1
1
X
1
1
X
X
Kris MG. et al. ASCO 2011, Abstract # CRA75X06.
1
腺癌的驱动基因
EGFR KRAS ELM4-ALK
BRAF HER2 PIK3CA PTEN MET扩增 Nil
LCMC (美国)
17% 22% 7%
2% 1% 1% NA 1% 46%
MSN (法国)
13% 28% 2%
中国
40% 7% 7%
2%
2%
1%
NA
1%
4%
NA
6%
1%
5%
33%
29%
穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质 量仍好，获得较可靠检测结果---使用受限
20
检测标本
固定包埋组织 外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片 段化，但仍获得可靠检测结果---使用受限
支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且 片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。 ---极度受限
10
全国检测情况(基康+迪安)
11
国内EGFR基因突变率
在我国未经选择的NSCLC中EGFR突变约30%，腺 癌突变约42.5%，非腺癌约9.5%。
2012年基康公司共收到1500名患者样品，全部完 成检测，其中108名患者的样品因DNA质量不合格 而终止检测，因此共有1392名患者已出检测结果， 其中660名患者突变阳性（47%），其中腺癌、腺 鳞癌、BAC为52%，鳞癌为14%。
胸水可以做——前景很好
22
标本的处理
新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等） 含有肿瘤组织50%以上；重量≥10ｍg（约米粒大小
，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗 干净。 取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.5cm以下 ，浸没于75～100%的乙醇中60分钟以上；可在4℃冰 箱暂时保存。 送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试 管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。
受体基因突变检测专家共识
7
EGFR基因突变检测的临床意义
EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国 内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI 一线治疗
优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或 少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、 腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。
18
EGFR基因突变检测标本
肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切 除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的 检测。
理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞 （文献报道大于100个即可）
19
检测标本
冰冻组织 外科手术标本：最好标本，可获得高质量肿瘤 DNA，取得可靠检测结果---广泛使用
Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010
日本
50% 15% 5% 1% 3% NA NA 4% 22%
2
97%的基因突变互相排斥
单个突变 数
ALK (38) AKT (1) BRAF (9) EGFR (89) HER2 (3)
8
EGFR基因突变检测的临床意义
EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del 较L858R疗效好,检测的必要性
9
EGFR基因突变检测的临床意义
化疗能改变EGFR突变状态 264例一线化疗的Шb~IV期NSCLC患者的血
DNA标本，EGFR突变率在化疗后显著降低 （23.1%对34.5%，P<0.001） 提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时 机
男 44.4% (8/18) 女 68% (17/25) 男 33.33% (1/3) 女 100 % （1/1） 男 14.3% (1/7) 女 50 % (1/2)
55.7% (24/42)
17
EGFR基因突变检测的一般原则
为使患者尽可能地从最有效的治疗中受 益，所有NSCLC，只要条件许可，都 应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺 癌。
14
EGFR突变率
55份有结果的标本中，29份EGFR突变 阳性，突变率55.7%
15
EGFR突变类型
n
L858R
14
19-del
11
L858R+ 19-del
3
Biblioteka Baidu
G719X
1
合计
29
检出率
48.3% 37.9% 10.3% 4.2% 3.5%
16
EGFR突变与病理类型
突变率
腺癌 腺鳞癌
鳞癌 合计
3
百分比
cMot 5%
EGFR 10%
EML4-ALK 5%
未知 51%
KRAS 25%
BRAF、P13K 4%
高加索人腺癌各基因构成比图
4
4
百分比
cMot 5%
未知 23%
EGFR 44%
BRAF、P13K 5%
KRAS 7%
EML4-ALK 16%
中国人肺腺癌各基因构成比图
5
5
关于“驱动基因”
12
国内EGFR基因突变率
13
铜陵检测结果（ARMS法）
送检66份标本, 11份无结果，55份有结果， 检出率83.33%，不同标本检出率
n 有结果 检出率
手术
30
30
100%
淋巴结活检
6
6
100%
气管镜
13
5
38.5%
肺穿
11
8
72.7%
胸腔镜
1
1
100%
胸水
5
5
100 %
合计
66
55
83.33%
检测标本
淋巴结标本也可——淋巴结标本中EGFR突变能否 反映原发灶中EGFR状态？
外周血、癌性胸水、经支气管细针穿刺标本有研究 也有阳性结果
外周血标本：血浆中游离DNA（cfDNA）浓度变化 很大（10~1200ng/ml）, cfDNA片段很短（180bp）， 可能多由凋亡产生，肿瘤释放的cfDNA在总cfDNA 中的含量不稳定（3%~93%）
近50% NSCLC驱动基因已经被发现 双基因同时突变罕见 对已知的靶点，已有很多上市或在研
的药物 驱动基因突变状态与人种、性别、病
理类型、吸烟状况等有关，不同类型 用药不同。
6
NSCLC基因检测的意义
基因检测决定了分子靶向治疗 2011年我国制定了: 中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子
KRAS (114)
MEK1 (2) MET AMP (3) NRAS (2) PIK3CA (6)
ALK X
AKT
BRAF EGFR HER2 KRAS MEK1 MET
NRA S
PIK3 CA
1
2
1
1
X
X
1
X
1
3
X
X
1
1
X
1
1
X
X
Kris MG. et al. ASCO 2011, Abstract # CRA75X06.
1
腺癌的驱动基因
EGFR KRAS ELM4-ALK
BRAF HER2 PIK3CA PTEN MET扩增 Nil
LCMC (美国)
17% 22% 7%
2% 1% 1% NA 1% 46%
MSN (法国)
13% 28% 2%
中国
40% 7% 7%
2%
2%
1%
NA
1%
4%
NA
6%
1%
5%
33%
29%
穿刺活检、支气管镜标本：量少，但肿瘤DNA质 量仍好，获得较可靠检测结果---使用受限
20
检测标本
固定包埋组织 外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片 段化，但仍获得可靠检测结果---使用受限
支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且 片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。 ---极度受限
10
全国检测情况(基康+迪安)
11
国内EGFR基因突变率
在我国未经选择的NSCLC中EGFR突变约30%，腺 癌突变约42.5%，非腺癌约9.5%。
2012年基康公司共收到1500名患者样品，全部完 成检测，其中108名患者的样品因DNA质量不合格 而终止检测，因此共有1392名患者已出检测结果， 其中660名患者突变阳性（47%），其中腺癌、腺 鳞癌、BAC为52%，鳞癌为14%。
胸水可以做——前景很好
22
标本的处理
新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等） 含有肿瘤组织50%以上；重量≥10ｍg（约米粒大小
，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗 干净。 取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.5cm以下 ，浸没于75～100%的乙醇中60分钟以上；可在4℃冰 箱暂时保存。 送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试 管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。
受体基因突变检测专家共识
7
EGFR基因突变检测的临床意义
EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国 内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI 一线治疗
优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或 少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、 腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。
18
EGFR基因突变检测标本
肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切 除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的 检测。
理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞 （文献报道大于100个即可）
19
检测标本
冰冻组织 外科手术标本：最好标本，可获得高质量肿瘤 DNA，取得可靠检测结果---广泛使用
Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010
日本
50% 15% 5% 1% 3% NA NA 4% 22%
2
97%的基因突变互相排斥
单个突变 数
ALK (38) AKT (1) BRAF (9) EGFR (89) HER2 (3)
8
EGFR基因突变检测的临床意义
EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del 较L858R疗效好,检测的必要性
9
EGFR基因突变检测的临床意义
化疗能改变EGFR突变状态 264例一线化疗的Шb~IV期NSCLC患者的血
DNA标本，EGFR突变率在化疗后显著降低 （23.1%对34.5%，P<0.001） 提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时 机
男 44.4% (8/18) 女 68% (17/25) 男 33.33% (1/3) 女 100 % （1/1） 男 14.3% (1/7) 女 50 % (1/2)
55.7% (24/42)
17
EGFR基因突变检测的一般原则
为使患者尽可能地从最有效的治疗中受 益，所有NSCLC，只要条件许可，都 应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺 癌。
14
EGFR突变率
55份有结果的标本中，29份EGFR突变 阳性，突变率55.7%
15
EGFR突变类型
n
L858R
14
19-del
11
L858R+ 19-del
3
Biblioteka Baidu
G719X
1
合计
29
检出率
48.3% 37.9% 10.3% 4.2% 3.5%
16
EGFR突变与病理类型
突变率
腺癌 腺鳞癌
鳞癌 合计
3
百分比
cMot 5%
EGFR 10%
EML4-ALK 5%
未知 51%
KRAS 25%
BRAF、P13K 4%
高加索人腺癌各基因构成比图
4
4
百分比
cMot 5%
未知 23%
EGFR 44%
BRAF、P13K 5%
KRAS 7%
EML4-ALK 16%
中国人肺腺癌各基因构成比图
5
5
关于“驱动基因”
12
国内EGFR基因突变率
13
铜陵检测结果（ARMS法）
送检66份标本, 11份无结果，55份有结果， 检出率83.33%，不同标本检出率
n 有结果 检出率
手术
30
30
100%
淋巴结活检
6
6
100%
气管镜
13
5
38.5%
肺穿
11
8
72.7%
胸腔镜
1
1
100%
胸水
5
5
100 %
合计
66
55
83.33%