1.PCR操作流程

PCR操作流程

1.从冰箱取出所需试剂、样品，放置在冰盒上，解冻试剂、样品，点动离心。

2.取所需数量小EP管（200 μl），按附录所示配制反应体系。

3.加完所有试剂和样品后，点动离心，去除管内气泡。

4.在PCR仪上设定合适参数，具体见仪器操作手册。参数设置完成后，将反

应管放入PCR仪内小EP管位，根据所用EP管调整热盖位置，盖紧上盖。

5.启动程序，做好记录。

6.完成后及时取出反应管，关闭仪器。

7.用0.5×TBE配制琼脂糖胶，100 V，电泳15-25 min，紫外灯下观察条带，必

要时拍照记录。

注意事项：

1.节约试剂，所有试剂使用前都应点动离心；若为探索条件或鉴定试验，推荐

25μl反应体系。

2.含酶试剂应尽量保持低温，从冰箱取出解冻后，应尽量放在冰盒里，每次吸

完后也应放回冰盒。

3.加试剂及样品应按顺序进行，模板应在最后加入；自加引物开始，每次吸样

前都必须更换吸头。

4.注意移液器正确使用，吸取或排出微量液体时，应注意保证吸取或加入量的

准确性。

5.加完所有试剂后去气泡应彻底。

6.及时记录仪器使用及状况。

7.琼脂糖胶浓度可根据目的条带大小做适当调整，具体见琼脂糖凝胶电泳操作

流程附录。

附：PCR常用反应体系

如所用试剂为Takara ExTaq/rTaq试剂，则反应体系如下（50 μl）：

ddH2O35.5/34.5 μl

10*Buffer 5 μl

2.5mM dNTP S 4 μl

引物1 2 μl

引物2 2 μl

Taq酶0.5 μl

模板1/2 μl

如所用试剂为Mix则反应体系如下（50 μl）：

ddH2O20/19 μl

2*Mix25 μl

引物1 2 μl

引物2 2 μl

模板1/2 μl

注：反应体系可按比例调整；斜杠后的体系为菌液PCR体系；若使用Takara试剂，菌液PCR使用rTaq酶，其余样本使用ExTaq酶，反应中使用的其它试剂相同。