最新整理组织病理切片以及HE染色讲课稿
病理切片图专业知识讲座培训课件
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13号片，支病理切气片图管专业知鳞识讲座状上皮化生
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13号片，支病理气切片管图专业鳞知识讲状座 上皮化生
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14号片，急性肺淤血
病理切片图专业知识讲座
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14号片病理，切片急图专业性知识讲肺座 淤血
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14号片病理切，片图急专业知性识讲座肺淤血
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14号片病理切，片图急专业知性识讲座肺淤血
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37号片，直肠腺癌 病理切片图专业知识讲座
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37号片，直肠腺癌 病理切片图专业知识讲座
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39号片，乳腺实体癌
39号片病理，切片图乳专业知腺识讲实座 体癌
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39号片病理，切片图乳专业知腺识讲实座 体癌
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39号片病理，切片图乳专业腺知识讲实座 体癌
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39号片病理，切片乳图专业腺知识讲实座 体癌
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58号片，门脉性肝硬变
58号片病，理切门片图专脉业知识性讲座肝硬变
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58号片病理，切片图门专业脉知识讲性座 肝硬变
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58号片病理，切片图门专业脉知识讲性座 肝硬变
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58号片病理切，片图专门业知脉识讲座性肝硬变
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58号片病理，切片图门专业脉知识讲性座 肝硬变
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58号片，病理切门片图专脉业知性识讲座肝硬变
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15号片病理切，片图慢专业知性识讲肺座 淤血
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15号片病理，切片图慢专业性知识讲肺座 淤血
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15号病片理切片，图专慢业知识性讲座肺淤血
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15号片病理切，片图慢专业知性识讲座肺淤血
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16号片，慢性肝淤血
16号病片理切，片图专慢业知性识讲肝座 淤血
《病理检验技术》课件——石蜡切片的HE染色
5～10分钟 5～10分钟 3～5分钟 3～5分钟 3～5分钟 3～5分钟 1～2分钟 1～2分钟 5～8分钟 2～3秒
石蜡切片的HE染色
11.1%的盐酸乙醇 12.流水冲洗 13.0.5%的伊红水溶液 14.蒸馏水稍洗 15.80%的乙醇 16.95%的乙醇 17.无水乙醇(Ⅰ) 18.无水乙醇(Ⅱ) 19.无水乙醇(Ⅲ) 20.二甲苯(Ⅰ) 21.二甲苯(Ⅱ) 22.中性树胶封片
石蜡切片的HE染色
苏木精
一种天然染料，本身不能染色，氧化后变成苏 木红才成为真正的染料，苏木对细胞核的亲和 力需媒染剂的帮助，此时细胞核呈红色，只有 在碱性环境中，苏木才变成蓝色。
伊红Y
人工合成染料，它可能是通过渗透或弥散作用完 成染色的，故与组织结合不牢固，它对细胞质着 色。
染色原理
石蜡切片的HE染色
2.二甲苯脱蜡后按常规 是用无水乙醇洗去二甲 苯。
4.1%盐酸乙醇分 化液分化时间要 根据分化液的新 旧适当调整。
3.苏木精染液要配好，其好 坏决定染色的优劣。要定期 过滤，避免氧化膜及沉淀等 污染切片。
石蜡切片的HE染色
5.盐酸-乙醇分化后用流水冲洗时间要足够， 目的是把酸彻底冲洗干净，使组织返蓝，也 避免切片残留酸液使切片易褪色。
因此，把第16步的无水乙醇改 为苯酚二甲苯(1:3)混合液进行 脱水，可省去第17步的无水乙 醇，脱水时间3～5分钟，可彻 底脱去切片水分
石蜡切片的HE染色
8.苯酚别名石炭酸，为白色针状结晶，配制苯酚 二甲苯前需要将苯酚放入56℃温箱内或水浴加热 溶解。苯酚如被氧化变成红色，不能使用。
9.使用一些二甲苯代替品如松节油代替二甲苯脱 蜡和透明，可避免二甲苯的毒性，但脱蜡和透明 效果会比二甲苯差，需要增加脱蜡和透明时间。
组织病理切片以及HE染色说课讲解
组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
组织切片制作及he染色流程
组织切片制作及he染色流程Title: Organ Section Preparation and HE Staining ProcessTask: To create a document that details the process of organ section preparation and hematoxylin and eosin (HE) staining, with alternating English and Chinese paragraphs.Paragraph 1:The initial step in the organ section preparation process is to fix the tissue.This is done by immersing the tissue in a fixative solution, such as formalin, for a specific period of time.After fixation, the tissue is dehydrated by replacing the fixative with a series of increasing concentrations of alcohol.Dehydration is followed by clearing, where the tissue is immersed in a clearing agent, such as xylene or a xylene substitute.The final step before embedding is infiltration, where the tissue is immersed in a molten embedding medium, such as paraffin wax, until it is fully saturated.切片制作的第一步是固定组织。
病理实验切片 附说明讲课文档
肝硬化 ：肝细胞排列紊乱，形成假小叶，周围有的纤维分割
假小叶 纤维分割
第二十四页，共28页。
急性弥漫性毛细血管内增生性肾小球肾炎 ：毛
细血管球增大，细胞数目增多，肾小球囊腔狭窄
肾小管
毛细血管球
肾小球囊腔
第二十五页，共28页。
毒性甲状腺肿：滤泡上皮乳头状增生，可见吸收空泡，淋巴细胞浸
润 淋巴细胞
病理实验切片 附说明
第一页，共28页。
第二页，共28页。
脾梗死
梗死区色淡红，细胞核 均消失，但该处脾组织 的轮廓还存在，梗死区 周围充血出血带不明显。
肝脂肪变：肝细胞浆内大量脂滴空泡,细胞核被推向一侧。
脂滴 空泡
第三页，共28页。
第四页，共28页。
4
第五页，共28页。
纤维瘤
第六页，共28页。
肺结核病：可见结核结节
肺泡
结核结节
第二十页，共28页。
慢性肺气肿：肺泡间隔断裂，肺泡融合
融合的肺泡 肺泡间隔
第二十一页，共28页。
溃疡病 ：可见坏死组织、炎性渗出物合肉芽组织
炎性渗出物及坏 死组织
肉芽组织
第二十二页，共28页。
Байду номын сангаас
第二十三页，共28页。
急性蜂窝织性阑尾 炎
炎性病变呈扇面形由表浅层向深层扩延， 直达肌层及浆膜层。阑尾壁各层皆为大量 中性粒细胞弥漫浸润，并有炎性水肿及纤 维素渗出。阑尾浆膜面为渗出的纤维素和 中性粒细胞组成的薄膜所覆盖
纤维肉瘤
瘤细胞丰富，弥散 排列，与间质无明 显界限。
淋巴结转移性腺癌：淋巴组织内有腺癌组织
淋巴滤泡 腺癌组织
第七页，共28页。
鳞状细胞癌：癌细胞巢状排列，中间有角化珠，间质有淋巴细胞
标准病理组织制片和染色技术讲课文档
5、脱水、透明、浸蜡时间表 大动物组织脱水、透明和浸蜡时间表
程序
项目
1
75%乙醇
2
85%乙醇
3
95%乙醇
4
95%乙醇
5
无水乙醇
6
无水乙醇
7
无水乙醇
8
二甲苯
9
二ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ苯
10
二甲苯
11
石蜡56－58℃
12
石蜡56－58℃
甲醛为例，甲醛与组织蛋白反应是多样而复杂的。
O
H
P CONH+HCH+P-CONH P -CON---C----P--CON 肽键 甲醛 H 亚甲基桥
蛋白质分子之进行交换，形成亚甲基桥，把蛋白质分子串 联起来，使蛋白变性，破坏了蛋白质的立体结构，达到固 定目的。
现在二十七页，总共一百一十八页。
四、洗涤
缺点：使组织收缩，变脆。
2、 丙酮：比酒精脱水强，收缩厉害。临床病理用 于快速脱水
3、 二氧陆环：有毒性，既脱水又透明使组织收缩 小不硬化
4、 正丁醇：有毒性，既脱水又透明皮肤、骨 叔丁 醇发松子醇
5、 脱水时间： 根据组织大小、类别、种属、分别安排
现在三十三页，总共一百一十八页。
六、透明(clearing)
标准病理组织制片和染色技术
现在一页，总共一百一十八页。
近年来病理技术不断发展，如特殊染色、组织 化学、免疫组织化学（免疫荧光组织化学、免疫酶 组织化学）细胞培养、原位分子杂交、放射自显影、 原位PCR技术等在广泛的应用和提高，大大促进了 病理学科的发展，把病理学推进了一个新的领域， 但这些新技术也都建立在病理组织制片或染色基础 上，所以要认识制片和染色技术的重要性，不但要 学习新技术，更要掌握这一传统的病理技术，共同 推向病理学科的发展。
组织切片HE染色与免疫组化
1 组织切片1、剪取组织,10 %甲醛固定。
2、已经固定好的组织依次在70 %、80 %、90 %、95 %、95 %、100 %的乙醇溶液中浸泡15-20 min，3、再浸入乙醇和二甲苯（1:1）的混合溶液中15-20 min，然后浸入二甲苯直到透明，将透明的组织浸入石蜡和二甲苯（1:1）的混合溶液中浸泡1 h，用石蜡进行固定。
4、包埋、切片2组织切片HE染色染色结果：细胞核呈蓝色，细胞的细胞质呈粉红色。
步骤：1、组织切片用二甲苯脱蜡15 min，再次用二甲苯进行脱蜡15 min，2、浸入二甲苯和酒精混合溶液（1:1）3 min，依次浸入100%、95 %、90%、80%、70%、50%乙醇各2 min。
3、苏木素染色5 min, 自来水冲洗3 min, 1 %盐酸2 s，自来水冲洗2 min, 依次浸入50 %、70 %、80 %乙醇2 min,伊红浸泡5 s。
4、 95 %、100 %、100 %乙醇各2 min，最后连续2次二甲苯各15 min，封片。
3 组织切片免疫组化检测1、组织切片置于58 ℃烘箱内烤片20 min, 然后取出待冷却后，进行脱蜡。
2、连续2次二甲苯脱蜡各15 min，依次浸入100 %、95 %、80 %乙醇、蒸馏水各2 min。
3、高压抗原修：将3 L柠檬酸盐缓冲液注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。
切片置于切片架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖高压锅压阀。
当压力锅开始慢慢喷气时（加热5-6 min）计时1-2 min，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，蒸馏水冲洗，PBS洗，片子室温冷却20 min，再次PBS洗。
4、免疫组化具体方法参照SP试剂盒（福州迈新）：1、室温，正常非免疫动物血清封闭30 min；2、一抗4 ℃ 12 h；3、用PBS清洗两次，每次2 min；4、室温，内源性过氧化物酶阻断1 h；用PBS清洗三次，每次2 min；5、室温，生物素标记的二抗30 min；用PBS清洗三次，每次2 min；6、室温，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶30 min，7、DAB显色5 min，蒸馏水冲洗；8、Gill’s苏木素复染3 min；9、自来水流水冲洗5 min；依次95 %、100 %的乙醇脱水3 min；10、最后用二甲苯透明，封片，镜检，拍照。
病理切片前处理及HE染色(小鼠肺组织为例)
HE染色（该方法对于肺组织较为适宜）
①新鲜组织取出后4%多聚甲醛固定48小时；
②浸入70%酒精中可保存15天;
③脱水（梯度）：70%乙醇1.5小时1次 80%乙醇30min 1次 95%乙醇
15min 2次 1000%乙醇10min 3次；
④透明：二甲苯透明2次（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min（之前是30min）
⑤浸蜡，包埋，烘片程序（56度）
石蜡Ⅰ浸润30min 石蜡Ⅱ浸润90min 石蜡Ⅲ浸润6h（2-4h）包埋
切片烘片
⑥ HE染色
1.脱蜡：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各10min；
2水化：无水乙醇5分钟2次 95%乙醇5分钟2次 70%乙醇五分钟1次，自来水轻晃几下置于蒸馏水中3-5分钟（可一直放于蒸馏水中）；
3苏木精染色5分钟---自来水轻晃1分钟至无苏木精-----1%盐酸酒精分化10秒（变为橙红色）---硫酸锂中返蓝（上下来回，可见切片返回蓝色，蒸馏水中静置3秒；
4.脱水：70%酒精20秒----95%酒精5分钟-----无水乙醇10分钟，95%酒精脱水时可以取出切片显微镜下观察染色效果）；
5透明：二甲苯透明5分钟2次；
6.封片：中性树胶，在二甲苯中取出切片趁二甲苯未干时封片，通风厨中进行后置于通风厨中晾干。
病理学技师讲课稿范文模板
病理学技师讲课稿范文模板病理学技师讲课稿范文一、引言（500字）尊敬的各位同事、热爱病理学的学员们，大家好！我是XX医院的病理学技师XX，很荣幸能够有机会为大家讲解病理学知识。
病理学是医学的基础学科，它通过对疾病的病理变化进行研究，为临床医学提供重要的依据。
本次课程的目标是帮助大家更好地理解和应用病理学知识，为临床工作提供有力的支持。
接下来，我将为大家讲述病理学的基本概念、病理标本的制备与诊断、常见的病理学检查方法等内容。
二、病理学的基本概念（1000字）1. 病理学的定义和分类：病理学是研究细胞、组织、器官和机体发生病理变化及其病因、病理机制、临床表现和转归的学科。
病理学可分为常规病理学和专科病理学两大分类。
2. 病理标本的制备和处理：病理标本的制备需要遵循一系列严格的操作规范，包括标本采集、固定、切片、染色和封片等步骤。
这些步骤的正确执行对于获得准确的病理诊断非常重要。
3. 病理学的基本概念：病理学涉及的基本概念包括病理变化、病理过程、病理病变、病理诊断、病理分级和分期等。
这些概念的理解对于病理学的学习和应用至关重要。
三、病理标本的制备与诊断（1500字）1. 病理标本的采集和处理：病理标本的采集需要根据临床病情确定采集部位和方法，并采用无菌技术进行操作，以避免污染。
采集后的标本应立即放入足够的混合液中进行固定，以保持标本的形态和结构。
2. 病理标本的切片和染色：病理标本在固定后需进行切片，并经过染色处理，以便观察和诊断。
常见的染色方法包括血涂片染色、组织切片染色和免疫组化染色等。
3. 临床和病理诊断的关系：临床诊断是通过病史、体征和实验室检查等手段对患者进行诊断。
而病理诊断则是通过病理标本的观察和分析得出结论。
临床诊断和病理诊断互为补充，共同为疾病的诊断提供准确的依据。
四、常见的病理学检查方法（2000字）1. 常规组织学检查：常规组织学检查是病理学中最常见的检查方法之一，它通过对组织切片的染色和观察，来识别和描述组织病理变化及其性质和级别。
1 HE染色ppt课件
染色后的水洗：为洗去未与切片结合的染液
分化后的水洗：为了中止分化作用
六、分化的作用
苏木素染色后，用水洗去未结合在 切片中残 余的染液，但是对细胞核中结合过多的染料和细 胞浆中吸附的染料必须用分化液 0.5％盐酸酒精脱 去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这 个过程称为染色的分化作用。
分化步骤的准确也是染色成败的关键，若分 化失当则必然引起染色不匀或过淡，过深等现象， 因此分化后一定要镜检，观察胞核是否清晰，胞 浆呈淡白色。否则需再次分化，不然一旦复染后， 组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。
七、返蓝的作用
分化之后苏木精在酸性条件下处红色离子状 态，在碱性条件下则处于蓝色离子状态，而呈蓝 色，所以分化后用水洗去酸而中止分化，再用弱 碱水使苏木素染上细胞核变成蓝色，称蓝化作用， 一般分用自来水浸洗变蓝，也可用稀氨水或温水。
八、染色后的脱水与透明
伊红染色后，用浓度递增的酒精脱水，95％95％-无水-无水（各级1-3分钟），由低→高是为 了逐渐脱去组织中的水份，为二甲苯进入细胞创 造条件，否则组织切片透明度达不到光学显微镜 观察时透光度的要求，在显微镜下不可能看到清 晰的细胞和组织结构。
九、细胞着色
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、 钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染 成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈 反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈 亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。 着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生 活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞 浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退 行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透 明变性时，伊红着色由浅变深。
课件1 HE染色
病理组织切片技术课件
取材
取材是病理组织切片制作的第一步，也是至关重要的一步。 取材时，应选择具有代表性的组织，并注意避免组织自溶和 腐败。同时，要确保取材器械的清洁和消毒，以避免污染和 交叉感染。
取材时，应根据不同的病理类型和病变情况，选择适当的取 材方法和取材量。对于小块病变组织，应尽量取全；对于大 块病变组织，应根据病变特点和部位，选择具有代表性的部 分取材。
固定
固定是病理组织切片制作中不可缺少的一步，其目的是使组织保持其生前的状态 ，防止组织自溶和腐败。常用的固定方法有：甲醛固定法、乙醇固定法和混合固 定法等。
固定液的浓度和固定时间对固定效果有很大影响。一般来说，固定液的浓度越高 、固定时间越长，固定效果越好。但固定时间过长会导致组织变硬，影响切片质 量。因此，应根据具体情况选择适当的固定液和固定时间。
切片质量
切片的质量直接影响到显 微镜观察的结果，因此制 备过程中需要保证切片的 平整、均匀和无气泡。
切片技术分类
01
02
03
04
石蜡切片
将样品包埋在石蜡中，然后进 行切片和染色，是最常用的切
片技术之一。
冰冻切片
将样品快速冷冻后进行切片， 主要用于快速病理诊断。
苏木素-伊红染色
对切片进行染色，以便在显微 镜下观察细胞的形态和结构。
脱水
脱水是病理组织切片制作中非常重要的一步，其目的是去 除组织中的水分，为后续的浸蜡和包埋做准备。常用的脱 水方法有：自然干燥法和人工脱水法等。
脱水液的选择和使用对脱水效果有很大影响。一般来说， 脱水液的浓度越高、脱水时间越长，脱水效果越好。但脱 水时间过长会导致组织变脆，影响切片质量。因此，应根 据具体情况选择适当的脱水液和脱水时间。
H&E染色
常规组织病理技术ppt课件
缺点： ●经酒精固定的标本对核的染色不良，也不利于 染色体的固定。 ●要证明细胞含的脂肪和类脂质时，不能用酒精 固定。 ●如要证明组织内的色素时，不宜以酒精作为固 定剂。 ●不适用于固定大块组织。 ● 酒精价格较贵。
47
80%-95%的酒精作为固定剂为好 高浓度酒精组织硬化显著,放置过久组织 收缩明显且质脆,不但影响制片, 组织形态也 不好。 很少单独使用
甲醛氧化 --- 蚁酸与血红蛋白结合—福尔马林色素 避免长时间固定， 固定后流水冲洗
●尿酸结晶可被溶解。
44
甲醛固定液的配制:
（1）10% formalin
市售甲醛（浓度为37~40%） 1份
水
9份
(2)中性甲醛 以PH7.2-7.4PBS为溶液配制的甲醛固定液
45
优点： ● 如要证明尿酸结晶和保存糖类，则须用 100%酒精固定。 ●在已用别种固定液后，可用70%酒精较 久的保存组织。 ● 酒精既有固定作用，又有脱水作用。
染色
常规染色 染色的目的：增加组织在显微镜下的分辨率
HE染色 主要用以显示各种组织、细胞的一般形
态结构以及疾病过程中病变的发生、发展及修 复的过程。
常规染色 特殊染色
79
（一）染色原理
1、细胞核染色原理：核酸阴离子+苏木素阳离子→蓝色
2、细胞浆染色原理：蛋白质阳离子+伊红阴离子→伊红色
PH值低于蛋白质等电点
传统病理学技术
常规组织病理技术
（formalin固定 石蜡切片 HE）
现代新技术
7
免疫组化
HE
乳腺导管
8
免疫荧光
HE
9
结肠癌 EB病毒原位分子杂交
10
组织病理切片以及HE染色
组织病理切片以及HE染色（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：一、制作切片1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色1. 二甲苯脱蜡2×10 min；2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏水洗1min；7. 伊红染色90s；8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；9. 无水乙醇10min；10.二甲苯2×10 min；11.中性树胶或加拿大树胶封片。
组织切片的染色—冷冻切片HE染色-完整版PPT课件
注意事项： 5.多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，
于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既 不费时也不会乱。
6.放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，如果胡乱放置， 就不能收到很好的效果。
注意事项： 7.组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液。临床快速冰
5～10秒 2～5秒 1分钟 2～5秒 2～3秒 2～5秒
冷冻切片HE染色
操作流程： 7.促蓝液 8.流水冲洗 9.0.5%的伊红水溶液 10.水洗 11.80%的乙醇 12.பைடு நூலகம்5%的乙醇
2～5秒 5～10秒 2～5秒 1～2秒 1～2秒 1～2秒
冷冻切片HE染色
操作流程： 13.无水乙醇 14.苯酚二甲苯(1:3) 15.二甲苯(Ⅰ） 16.二甲苯(Ⅱ) 17.二甲苯(Ⅲ) 中性树胶封固
2～5秒 2～5秒 2～5秒 2～5秒 2～5秒
冷冻切片HE染色
染色结果：细胞核蓝色,细胞质和纤维红色。 注意事项： 1.乙醚-乙醇液是由乙醚和95%的乙醇各50ml，再加冰醋酸5滴混匀而
成,应密封保存。 2.冷冻切片HE染色操作要求时间短，因此，各种试剂要经常更换新液。
注意事项： 3.如果使用 Harris苏木精染液，应尽可能用新液；如果使用改
良 Lillie-Mayer苏木精染液则需存放1周后才用。
4.防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除 切片残余和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸 擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的 包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整 切出。。
当切片时如果发现冰冻过度时可将冰冻的组织连同支承器取出来在室温停留片刻再行切片或者用口中哈气或者用大拇指按压组织块以此来软化组织再行切片
病理科常规切片HE切片质量PDCA管理循环案例示范
病理科常规切片（HE切片）质虽PDCA管理循环案例示范病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。
一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。
过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。
但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。
目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。
数据收集：参照〈〈临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1）,对今年1-7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2）,总的优级率87.1%,优良率97.6%，总体达标。
表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准优质标准满分（分）质里缺K臼减分组织切面完整，内镜咬检、10组织稍不完整：减1〜3分；不完整：减穿刺标本切面数4〜10分；未达到规定面数：减5分切片薄（3〜5四），厚薄均匀10切片厚（细胞重叠），影响诊断：减6〜10分；厚薄不均匀：减3〜5分切片无刀痕、裂隙、颔痕10有刀痕、裂隙、颔痕，尚不影响诊断：减2分；有刀痕、裂隙、颔痕，影响诊断：减5分切片平坦，无皱褶、折叠10有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶折或折叠，影响诊断：各减5分切片无污染10有污染：减10分无气泡（切片与载玻片间/盖10有气泡：减3分；胶液外溢：减3分片与切片、载玻片问）,盖片周围无胶液外溢透明度好10透明度差：减1〜3分；组织结构模糊：减细胞核与细胞浆染色对比活105〜7分细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红（细胞浆）晰与蓝（细胞核）对比不活晰：减5分切片无松散，裱贴位置适当10切片松散：减5分；切片裱贴位置不当：减切片整洁，标签端正粘牢，105分切片小整洁：减3分；标签粘贴不牢：减3编号活晰分；编号不活晰：减4分合计100注：切片质量分级标准：？①甲级片：290分（优）；②乙级片：75〜89分（良）；③丙级片：60〜74分（基本合格）；④丁级片：<59分（不合格）表2 2012年1-7月常规切片质量抽查情况发现问题：今年1-7月常规切片质量总体达标，但6、7月份常规切片质量的优良率分别仅为90%、93.3% （见表2）,按照〈〈临床技术操作规范病理学分册》切片质量要求，6月份刚达标。
最新常规石蜡制片HE染色技术PPT课件
五、浸蜡
（一）浸蜡目的
浸蜡是将透明过的组织块在熔化的石 蜡中浸渍的过程。目的是用石蜡代替组织 块中的二甲苯，在随后温度下降中，使较 软的组织块变成有一定硬度的组织蜡块， 以便切片机切片
（二）浸蜡的步骤
第1杯熔蜡(软蜡)(熔点54℃以下) 1小时
第2杯熔蜡(硬蜡)(58~60℃)
1小时
第3杯熔蜡(硬蜡)(58~60℃)
2．切片刀与磨刀 石蜡切片常用的切片刀为平楔型切 片刀，也有一次性切片刀
非一次性使用的切片刀在切片前需 要研磨，以保持其锋利；研磨Байду номын сангаас可分为 手工研磨刀和机械研磨刀（磨刀机）两 种
（二）石蜡切片过程
1．修块 2．蜡块和切片刀固定 3．调整蜡块切面和切片刀角度(10°以内) 4. 调整刀台与标本台距离 5. 修整蜡块切面，暴露完整组织切面 6. 调整切片厚度调节器(厚度为6~8μm) 7. 正式切片 8．切片展平 9．贴片和烘片
四、透明
（一）透明意义及透明剂
组织脱水后，内部仅含脱水剂，但大多数脱 水剂不能与石蜡相溶，石蜡仍不能浸入组织内进 行包埋和切片。为此，需要一种既能溶于脱水剂 又能溶于包埋剂（石蜡）的溶剂，以便逐步将脱 水剂置换成包埋剂。这一过程往往使组织呈半透 明状，故称透明
二甲苯为石蜡包埋法中最常用的透明剂；它 透明能力强，但易使组织收缩、变脆，故组织块 的透明时间不宜太长，小组织块以30分钟为宜， 较大组织块适当延长但不超过2小时
5ml
0.2 mol/L PB（pH 7.4）
～100ml
第二节 固定后处理及切片
一、组织修整
固定结束后，将受挤压或不需要的 部分组织修切或整形，同时选择好包埋 面，称组织修整。修整可在冲洗前、也 可放在冲洗后
病理学技师讲课稿模板范文
病理学技师讲课稿模板范文病理学技师讲课稿模板：病理学基础知识尊敬的各位同事，大家好！我是XX医院的病理学技师，今天非常荣幸能够为大家讲授有关病理学基础知识的课程。
病理学作为医学的基础学科，对于日常临床工作和研究具有重要的意义。
一、病理学的概念和作用病理学是研究人体疾病发生发展规律以及疾病与病变的本质和机制的学科。
它是临床诊断的基础，是评估疾病预后和制定治疗方案的重要依据。
通过病理学的研究，我们可以了解疾病的发生原因、发展过程和病理变化，进而开展有效的治疗和预防工作。
二、病理学的分类和内容病理学按研究对象的不同可以分为：常规病理学、细胞病理学和分子病理学。
1.常规病理学是研究组织和器官在形态、结构上的病理变化的学科。
常规病理学的内容包括常规组织学、病理生理学和病理化学。
2.细胞病理学是研究细胞和细胞器在形态、结构上的病理变化的学科。
细胞病理学的内容包括细胞学与组织胚胎学。
3.分子病理学是研究分子水平上的病理变化的学科。
分子病理学的内容包括基因组学、转录组学、蛋白质组学等。
三、病理学常用技术和仪器1.组织处理技术：包括固定、包埋、切片、染色等步骤。
固定是将组织或细胞的结构保持在活体状态的过程，常用的固定剂有福尔马林、生理盐水、酒精等。
包埋是将固定后的组织或细胞嵌入石蜡中，以便进行切片。
切片是将包埋后的组织或细胞切成薄片，常用的切片工具有旋转式切片机和冷冻切片机。
染色是为了突出组织或细胞的特定结构而进行的染色过程，常用的染色方法有苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色等。
2.显微镜：是病理学技师常用的仪器之一，主要用于观察组织或细胞的形态和结构。
常用的显微镜有光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜适用于观察常规组织学和细胞学的切片，电子显微镜适用于观察细胞器、亚细胞结构和微生物等微观物体。
3.免疫组化技术：是指利用特异性抗体与抗原相互作用，通过染色、荧光等方法来检测组织或细胞中特定蛋白质表达的技术。
常用的免疫组化技术包括免疫组织化学方法、免疫荧光法等。
病理科常规切片（HE切片）质量PDCA管理循环案例示范教学资料
病理科常规切⽚（HE切⽚）质量PDCA管理循环案例⽰范教学资料病理科常规切⽚(H E 切⽚)质量P D C A管理循环案例⽰范病理科常规切⽚（HE切⽚）质量PDCA管理循环案例⽰范病理切⽚质量的好坏关系到病理诊断质量和⽔平的⾼低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切⽚质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚⾄会带来错误的结果。
⼀张好的病理切⽚与标本的固定、取材、脱⽔、包埋、切⽚、染⾊等环节有密切的关系。
过去，我科⼀直严抓病理切⽚质量，每⽉都随机抽查30例常规切⽚进⾏质量评价，总体来说切⽚质量较⾼，基本达到诊断的要求。
但是每⽉的切⽚质量检查或多或少总发现存在⼀些缺陷，如切⽚⼑痕、裂隙、⽓泡、胶液外溢等。
⽬的：通过检查常规切⽚质量，发现存在影响切⽚质量的问题，查找原因，提⾼切⽚质量。
数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规⽯蜡包埋-HE染⾊切⽚质量的基本标准（见表1），对今年1-7⽉常规病理切⽚进⾏质量分级评定（每⽉随机抽查30例常规切⽚，见表2），总的优级率87.1%，优良率97.6%，总体达标。
表1 常规⽯蜡包埋-HE染⾊切⽚质量的基本标准优质标准满分（分）质量缺陷减分组织切⾯完整，内镜咬检、穿刺标本切⾯数10 组织稍不完整：减1～3分；不完整：减4～10分；未达到规定⾯数：减5分仅供学习与交流，如有侵权请联系⽹站删除谢谢2切⽚薄(3～5µm)，厚薄均匀10 切⽚厚(细胞重叠)，影响诊断：减6～10分；厚薄不均匀：减3～5分切⽚⽆⼑痕、裂隙、颤痕10 有⼑痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分；有⼑痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分切⽚平坦，⽆皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶折或折叠，影响诊断：各减5分切⽚⽆污染10 有污染：减10分⽆⽓泡（切⽚与载玻⽚间/盖⽚与切⽚、载玻⽚间），盖⽚周围⽆胶液外溢10 有⽓泡：减3分；胶液外溢：减3分透明度好10 透明度差：减1～3分；组织结构模糊：减5～7分细胞核与细胞浆染⾊对⽐清晰10 细胞核着⾊灰淡或过蓝：减5分红(细胞浆)与蓝(细胞核)对⽐不清晰：减5分切⽚⽆松散，裱贴位置适当10 切⽚松散：减5分；切⽚裱贴位置不当：减5分切⽚整洁，标签端正粘牢，编号清晰10 切⽚不整洁：减3分；标签粘贴不牢：减3分；编号不清晰：减4分仅供学习与交流，如有侵权请联系⽹站删除谢谢3合计100注：切⽚质量分级标准：①甲级⽚：≥90分（优）；②⼄级⽚：75～89分（良）；③丙级⽚：60～74分（基本合格）；④丁级⽚：≤59分（不合格）表2 2012年1-7⽉常规切⽚质量抽查情况注：每⽉随机抽查30例常规切⽚。
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组织病理切片以及HE染色
（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：
一、制作切片
1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋
组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。
脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。
组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。
在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。
组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。
用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。
为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。
一般用于浸蜡的石蜡熔
点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。
石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。
用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。
但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片
石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。
切片厚度一般为3-5μm。
切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。
也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色
1. 二甲苯脱蜡2×10 min；
2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；
3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；
4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；
5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；
6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏
水洗1min；
7. 伊红染色90s；
8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；
9. 无水乙醇10min；
10.二甲苯2×10 min；
11.中性树胶或加拿大树胶封片。
（三）实验结果：细胞核呈蓝色；细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。
钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。
（四）实验分析：HE染色时病理学中常用的一种诊断方法，通常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理学变化，从而做出病理学诊断。