Tris-甘氨酸电泳缓冲液(10×)
[精华]tris-hcl及其他几种缓冲液配方
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Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？Tris：三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。
Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。
例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。
由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。
Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。
但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。
由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。
人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。
如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。
这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。
用途：有机合成中间体。
在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。
在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。
Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。
Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。
Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。
此外，Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。
Tris也被用作滴定标准物。
1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl配制量1L配制方法：1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
Tris-HCl及其他几种缓冲液配方
Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？Tris：三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。
Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。
例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。
由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。
Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。
但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。
由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。
人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。
如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。
这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。
用途：有机合成中间体。
在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。
在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。
Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。
Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。
Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。
此外，Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。
Tris也被用作滴定标准物。
1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl配制量1L配制方法：1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(10×)
北京雷根生物技术有限公司
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(10×)
简介：
Tris-甘氨酸电泳缓冲液又称SDS-PAGE 电泳缓冲液。
1×工作液中含有Tris 、250mM 甘氨酸、SDS 。
Tris-甘氨酸电泳缓冲液是常用的蛋白质电泳缓冲液, 本试剂是浓缩的溶液，主要由Tris 、甘氨酸、SDS 组成。
使用时需用蒸馏水或去离子水稀释后使用。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、用蒸馏水或去离子水稀释后使用。
注意事项：
1、 10×电泳缓冲液不如5×的稳定，偶尔会产生浑浊或沉淀，出现上述情况，可加热溶解后使用。
2、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号 名称 PE0092 Storage Tris-甘氨酸电泳缓冲液(10×) 500ml RT 使用说明书 1份 编号 名称 DC0032 Masson 三色染色液 NA0016 MOPS 电泳缓冲液(10×,RNase free) NA0034
Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE) PT0001
BCA 蛋白定量试剂盒 PT0013
考马斯亮蓝快速染色液 PW0053
Western 抗体洗脱液(碱性) TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)。
Westernblot实验技术
Western blot试剂配制1. 30%丙烯酰胺：29.2g丙烯酰胺用温热（利于溶解双丙烯酰胺）的去离子水（超纯水）溶后定容到100ml，过滤后于棕色瓶中储存0.8gN, N’-亚甲双丙烯酰胺注意：丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反映是光催化或碱催化的，故应核算溶液的pH值不超过7.0。
这一溶液置棕色瓶中贮存于4℃，每隔几个月须重新配制。
小心：丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤。
2. 10%SDS：称5gSDS，超纯水溶解后，定容到50ml。
贮存液保存于室温。
3. 10%AP（过硫酸铵）：称1gAP，溶于8ml超纯水中，定容到10ml，小量分装（250ul/管）保存于-20℃，过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基，每次使用均要用新鲜的。
4. 1.5MTris-HCl：称18.2gTris（Mr=121.14）加50ml超纯水溶解后，用浓HCl调pH值8.8，定容到100ml。
5. 0.5MTris-HCl：称3gTris（Mr=121.14）加25ml超纯水溶解后，调pH值6.8，定容到50ml。
6. TEMED (N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)：TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。
一旦加入TEMED，立即开始聚合，故应立即快速旋动混合物并进入下步操作。
7. 10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液【10×（25mMTris+0.25M+0.1%SDS）】pH8.330.3g Tris 15.15g Tris187.65g Glycine 溶于超纯水中，定容到1000ml 93.825g Glycine 5×缓冲液10g SDS 5g SDS8. 2×SDS上样缓冲液：2×（50mMTrispH6.8+2%SDS+10%甘油+0.1%溴酚蓝+50mMβ-巯基乙醇）loading buffer10ml 0.5M Tris-HCl (pH6.8)2g SDS10ml 甘油超纯水定容到50ml。
SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项
SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。
作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。
过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。
在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
Westernblot所需溶液的配制
WB所需溶液的配制1Tris-甘氨酸电泳缓冲液(Running buffer) 5×5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tris碱和72ｇ甘氨酸，5ｇ电泳级的SDS，双蒸水定容至1L，pH值为8.3。
使用前，将5×稀释到1×：取200ml 5×，定容到1000ml。
2转膜缓冲液（Sending buffer）（现用现配）必须新鲜配置，因为甘氨酸溶于水后易分解。
小片段可不加SDS。
310% SDS配置电泳级十二烷基硫酸钠也叫SDS（Sodium Dodecyl Sulfate ，SDS,C12H25O4NaS）溶液: 10g SDS，100ml去离子水配制，50-68度搅拌溶解，浓盐酸调pH到7.2，室温保存。
4Tris.HCl的配置注：Tris的分子量是121.4. 4度储存。
5 10% APS (Ammonium persulfate ; 过硫酸铵)的配置称取1g过硫酸铵，加超纯水溶解并定容至10ml，分装到1.5ml微量离心管中，负30度冻存。
使用时尽量现配现用，短期内实验频繁可多配。
4度存则两周内用完，最多不能超过一个月。
负20度可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。
6 10×TBS (Tris-buffered saline)的配置加HCl调pH到7.6，室温储存。
7TBST (Tris-buffered saline with Tween20) 的配置8 上样缓冲液（loading buffer）的配置SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。
按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。
9 stacking gel buffer (4×)调pH到6.8，加双蒸水到10毫升。
蛋白质PAGE电泳 实验总结
蛋白质PAGE电泳实验总结、丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。
)储于棕色瓶，4℃避光保存。
严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
2、十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。
3、分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。
过滤后4°C保存。
4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml 终体积。
过滤后4°C保存。
这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris.CL。
5、TEMED原溶液四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。
PH太低时，聚合反应受到抑制。
AP提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。
去离子水配制数ml，临用前配制.6. 10%过硫酸铵溶液：称取1g过硫酸铵，加超纯水溶解并定容至10ml，分装到1.5ml微量离心管中，冻存。
7、SDS-PAGE加样缓冲液:在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。
8、Tris-甘氨酸电泳缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，临用前稀释10倍。
PH8.39、转移缓冲液：2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37g SDS（可不加），200ml甲醇（临用前加），加水至总量1L。
SDS电泳溶液的配置
1、5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
试剂
浓度
称重
备注
Tris
0.125 M
15.1g
加入800 ml的双蒸水溶解，
定容至1 L，室温保存
甘氨酸（Glycine）
1.25 M
94g
SDS
0.5%（W/V）
5g
2、染色液
试剂
浓度
称重
备注
乙醇
25%（V/V）
250 mL
双蒸水溶解，定容至1 L，滤纸过滤后，室温保存
冰醋酸
8%（V/V）
80 mL
考马斯亮蓝
0.25%
2.5g
3、脱色液
试剂
浓度
称重
备注
乙醇
25%（V/V）
250 mL
定容至1 L，室温保存
冰醋酸
8%（V/V）
80 mL
4、30%丙烯酰胺混合液（29：1）
试剂
浓度
称重
备注
丙烯酰胺
29%（W/V）
29g
加热溶于60 ml双蒸水中，定容至100ml，滤纸过滤，棕色瓶室温保存
9、浓缩胶缓冲液（pH6.8）－0.5mol/L Tris－HCl
试剂
浓度
称重
备注
Tris
0.5mol/L
6.06g
调pH6.8，定容至100ml，
滤纸过滤，室温保存
1mol/L HCl
48%V/V）
48 ml
注：或先加水至80ml,用浓HCl调pH，再定容至100ml.
10、5×上样缓冲液
试剂
浓度
称重
备注
0.5mol/LTris－HCl（pH6.8）
SDS-PAGE 操作标准
SDS-PAGE 操作标准一、电泳相关溶液的配制：1、30%丙稀酰胺混合溶液（100ml ）：丙稀酰胺 29g （实际可以为29.2g ） 双丙稀酰胺 1g （实际可以为0.8g ）用水溶解定容到100ml ，过滤，4摄氏度保存一个月。
2、5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：5× 1×Tris base 15.1g 25mmol/L 甘氨酸 94g 250mmol/L （pH8.3） 10%SDS （m/V ） 50mL 0.1%（m/V ） dH2O 定容至1000ml 。
3、2×SDS 凝胶加样缓冲液：1.0 mol/L pH6.8 Tris-Cl 10 mL 1.0 mol/L 二硫苏糖醇(DTT ) 20 mLSDS 4g 溴酚蓝 0.2g 甘油 20mL加水定容至100mL ，于4℃保存。
注：1.0 mol/L DTT 可替换为10% β-巯基乙醇 4、染色液的配制（1000ml ）: 甲醇或者乙醇 500ml2010.06.28药物部王红勋乙酸 100ml考马斯亮蓝R250 2.5g，去离子水补至1000ml。
充分混匀后进行过滤，收集滤液备用。
当过滤速度变慢时要更换滤纸，快速过滤完，不可隔夜以免影响染色效果。
5、脱色液（1000ml）:甲醇或者乙醇 250ml乙酸 80ml去离子水补至1000ml,混匀，备用。
二、SDS-PAGE分析：1、20uL收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。
表一：SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围：丙烯酰胺浓度/% 线性分离范围/kDa15 10-4312 12-6010 20-807.5 36-945.0 57-212注：丙烯酰胺:双丙烯酰胺的分子比=1:29表二、5%浓缩胶配方（积层胶、压缩胶）配制不同体积凝胶所需要各成份的体积/mL成份1 2 3 4 5 6 8 10 5%浓缩胶水 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺混合溶液 0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 1.71.0mol/Tris（pH6.8） 0.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0.75 1.0 1.2510%SDS 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 10%过硫酸铵 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1TEMED 0.0010.0020.0030.0040.0050.006 0.008 0.01表三：分离胶配方配制不同体积和浓度凝胶所需要各成份的体积/mL 成份5 10 15 20 25 30 40 50 6%胶水 2.6 5.3 7.9 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%丙烯酰胺混合溶液 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.01.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0040.0080.0120.0160.02 0.024 0.032 0.04 8%胶水 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 16.5 23.2 30%丙烯酰胺混合溶液 1.3 2.7 4.0 5.3 6.7 8.0 10.7 13.31.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0030.0060.0090.0120.0150.018 0.024 0.03 10%胶水 1.9 4.0 5.9 7.9 9.9 11.9 15.9 19.8 30%丙烯酰胺混合溶液 1.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10.0 13.3 16.71.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0020.0040.0060.0080.01 0.012 0.016 0.02 12%胶水 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16.5 30%丙烯酰胺混合溶液 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 16.0 20.01.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.01 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.01 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0020.0040.0060.0080.01 0.012 0.016 0.02 15%胶水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5 30%丙烯酰胺混合溶液 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 20.0 25.01.5mol/Tris（pH8.8） 1.32.53.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.510%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5TEMED 0.0020.0040.0060.0080.01 0.012 0.016 0.022、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶，安装好电泳仪，在槽中加入电极缓冲液。
Westernblot试剂配制及操作步骤(最新整理)
Western blot试剂配制1．30％丙稀酰胺储存液丙稀酰胺29gN，N’-亚甲双丙稀酰胺1g双蒸水定容到100ml，经高压蒸汽灭菌的滤纸过滤避光，4℃保存于棕色瓶中2．1.5 M Tris-HCl (MW=121.1)pH 8.8Tris碱90.75g双蒸水400ml用浓HCl调pH至8.8，加双蒸水定容至500ml。
4℃冰箱保存3．1.0 M Tris pH6.8Tris碱12g双蒸水60ml用浓HCl调pH至6.8，加双蒸水定容至100ml。
4℃冰箱保存4．10％SDS(w/v）SDS 10g溶于加水至100ml，室温放置5．10％过硫酸胺（10%APS）过硫酸胺1g溶于10ml双蒸水中。
可在密闭的管子里4℃保存一周6．10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液Tris 30.3g甘氨酸144gSDS 10g定容至1000ml室温放置。
临用时稀释成1×电泳缓冲液7．1%溴酚蓝（w/v）溴酚蓝Tris-base MilliQ 水100 mg60 mg定容至10 ml8．TEMED原液，4℃冰箱保存9．2×sample buffer(2×样品缓冲液)1.0 M Tris pH6.82.5mlSDS 0.8gDTT 0.3085g甘油3ml溴酚蓝0.004g加双蒸水至10ml，分装—20℃保存10. 4×SDS加样缓冲液10ml1M Tris-HCl(ph:6.8) 2.5mlSDS 0.8g溴酚蓝0.004g甘油4mlTakara5x buffer 总5ml1M Tris-HCl(ph:6.8) 1.25mlSDS 0.5g溴酚蓝BPB 25mg甘油 2.5ml500ul每管分装，使用前将25ul的2-ME加到没管中11．转膜缓冲液Tris 碱 5.8g甘氨酸 2.9gSDS 0.37g甲醇200ml加双蒸水至1000ml，临用前配制，4℃冷却12．1×TBSTTris 碱 3.0285 g氯化钠8.766gTween-20 500ul加双蒸水至1000ml，现配现用。
电泳相关信息和配方
（1）Acr-Bis液（丙烯酰胺溶液）500 mL：于800 mL洁净的烧杯中，依次称取双丙烯酰胺4 g，丙烯酰胺146 g，缓慢倒入双蒸水约350 mL，以玻璃棒缓慢搅拌促进溶解。
注意，双丙烯酰胺粉末易漂浮在空气中，所以要称重时注意周围空气流速，称取丙烯酰胺时可以将烧杯中的双丙烯酰胺掩盖。
玻璃棒搅动幅度不要太大以免溶液底部的双丙烯酰胺浮起并扩散到空气中。
完全溶解的溶液应清澈无色透明。
待溶解完全后补加双蒸水至500 mL，倒入无色玻璃试剂瓶中，4℃冰箱可保存10个月。
（2）4×分离胶缓冲液，500 mL：于500 mL洁净的量筒中，依次加入375 mL 2 M Tris-HCl (实测pH 8.9±0.1，25℃)，100 g/L SDS 溶液（冰箱取出后可微波加热促进储存液的溶化）20 mL，最后加入适量双蒸水至500 mL。
倒入无色玻璃试剂瓶中，4℃冰箱最少可保存12个月。
有时冰箱温度过低会使储存液混浊，微波略微加热使其澄清后即可使用。
（3）100 g/L 过硫酸铵溶液(ammonium persulfate, AP)20 mL：2g过硫酸铵加20 mL 双蒸水，倒入无色塑料试剂瓶中，4℃冰箱最少可保存10个月。
注意配胶时不要交叉污染TEMED，可以以5 mL分装到4个无色塑料试剂瓶中分别保存。
（4）TEMED 成品液：购买后分装成2或5 mL小管装使用可避免母液受到污染。
（5）5×样品缓冲液，100 mL：依次加入50 mL 75%（v/v）甘油，20 mL 100 g/L SDS 溶液，10 mL 10 g/L 溴酚蓝溶液，5 mL 2 M Tris-HCl (实测pH8.9±0.1，25℃)，5 mL巯基乙醇，9 mL 双蒸水。
混合母液倒入无色玻璃试剂瓶中，4℃冰箱至少可保存12个月。
可分装成10 mL 使用，不会使母液受到蛋白污染。
（6）10×电泳缓冲液，1000 mL：称取10 g SDS，30 g Tris base，144g 甘氨酸（事先要明确甘氨酸溶液的颜色，选用溶解后澄清无色的产品）于1000 mL的烧杯中，加水约700 mL 溶解，可微波炉加热（< 80℃）以促进溶解，注意不要使其沸腾，加热至烧杯烫手即可，间歇用玻璃棒搅拌。
Westernblot所需溶液的配制
.WB所需溶液的配制5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tris碱和72ｇ甘氨酸，5ｇ电泳级的SDS，双蒸水定容至1L，pH值为8.3。
使用前，将5×稀释到1×：取200ml 5×，定容到1000ml。
必须新鲜配置，因为甘氨酸溶于水后易分解。
小片段可不加SDS。
310% SDS配置电泳级十二烷基硫酸钠也叫SDS（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS,CHONaS）41225溶液: 10g SDS，100ml去离子水配制，50-68度搅拌溶解，浓盐酸调pH到7.2，室温保存。
注：Tris的分子量是121.4. 4度储存。
5 10% APS (Ammonium persulfate ; )的配置过硫酸铵称取1g过硫酸铵，加超纯水溶解并定容至10ml，分装到1.5ml微量离心管中，负30度冻存。
使用时尽量现配现用，短期内实验频繁可多配。
4度存则两周内用完，最多不能超过一个月。
负20度可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。
加HCl调pH到7.6，室温储存。
1 / 3.SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris1:21:1或H2O 32ml混匀备用。
按3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，12.8ml，巯基乙醇，总蛋20-25ul3min比例与蛋白质样品混nonfat dried milk 或者0.01% antifoam A (Sigma)0.01%(v/v) sodium azide丽春红溶液：12 10毫升。
微升冰醋酸，加入0.05克丽春红，用水稀释至100 毫升）（10004%1）多聚甲醛（PFA）的配制微升氢氧化钠，全300毫升水，60度搅拌溶解，加入40克多聚甲醛，加入800毫升。
调1000PBS，加水定容到度，再加入100毫升的10×部溶解后冷却到4 4。
通风橱过滤，度保存。
pH到7.2-7.4步骤：；至7.4pH0.2%NaOHEDTA,10-20首先加毫升的水溶解再加入使溶解，再调应溶解一个再加另外一个；然后分别加入其他成分，去氧胆酸钠开盖后会飞出，2 / 3.戴口罩。
聚丙烯酰胺凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）5101520253040508%水 2.3 4.6 6.99.311.513.918.523.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.74 5.3 6.7810.713.3 1.5 mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.0240.03 10%水 1.94 5.97.99.911.915.919.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.35 6.78.31013.316.7 1.5 mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 12%水 1.6 3.3 4.9 6.68.29.913.216.5 30%丙烯酰胺溶液246810121620 1.5 mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 12.5%水 1.5 3.1 4.65 6.37.89.412.515.6630%丙烯酰胺溶液 2.1 4.2 6.258.310.412.516.720.84 1.5 mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 15%水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.99.211.5 30%丙烯酰胺溶液 2.557.51012.5152025 1.5 mol/L Tris(pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02表2 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）1234568105% 水0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831 1.3 1.7 1.0 mol/L Tris(pH6.8)0.130.250.380.50.630.7501.25 10% SDS0.010.020.030.040.050.060.080.1 10%过硫酸铵0.010.020.030.040.050.060.080.1 TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01相关溶液贮液的配制30% 聚丙烯酰胺贮液：丙烯酰胺 150g甲叉双丙烯酰胺 4gMilliQ水 500ml 滤纸过滤后，棕色瓶4℃冰箱保存。
分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制
分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制1、6*Loading Buffer（DNA电泳用，50ml配方）组分浓度：100mM EDTA, 40%(V/V) 蔗糖, 0.05%（W/V）xylene cyanol FF, 0.05%（W/V）溴酚蓝配制方法：称取25mg溴酚蓝，25mg xylene cyanol FF，5ml 0.5MEDTA，加入约20ml去离子水，加热搅拌，充分溶解，加入20g蔗糖，去离子水定容至50ml。
2、10*PBS（pH7.2～7.4，分子克隆推荐配方）组分浓度：NaCl 137 mmol/L，KCl 27 mmol/L，Na2HPO4 100 mmol/L，KH2PO4 20 mmol/L配置方法：用800ml去离子水溶解80 g NaCl, 2 g KCl，14.4 g Na2HPO4和2.4 g KH2PO4。
用盐酸调节pH 至7.4，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。
3、20*SSC （pH约7.0）组分浓度：300 mmol/L 柠檬酸三钠，3 mol/L 氯化钠配制方法：称取柠檬酸三钠·2H2O 88.23 g，氯化钠175.3 g，加入800 ml去离子水充分溶解，用14 N HCl 调pH为7.0，去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后室温保存。
4、10*Tris-甘氨酸转膜液（pH约8.3）1 L组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸配制方法：甘氨酸144.13 g，Tris 30.29 g，去离子水溶解定容至1 L。
使用前，100 ml 10*转膜液，加入200 ml甲醇，700 ml去离子水成为1*转膜液5、10*Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液（SDS-PAGE电泳缓冲液，pH约8.6）组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸，1%（W/V）SDS配制方法：称取30.29 g Tris，,144.13 g甘氨酸，5 g SDS，加入800 ml去离子水搅拌溶解，定容至1 L，常温保存。
XX第X医科大学药学院2024年秋季学期本科教学实验用低值易耗品采购项目参数要求(2024年)
4
药学院
中鉴
253
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
5倍浓缩
瓶
10
药学院
中鉴
254
10×电转液
10倍浓缩
瓶
10
药学院
中鉴
Solarbio
255
10×TBST缓冲液
10倍浓缩
瓶
10
药学院
中鉴
Solarbio
256
DMEM高糖培养基
500ml/瓶
瓶
5
药学院
中鉴
Solarbio
257
牛血清白蛋白
BSA/100G/瓶
硝酸银
100g
瓶
2
药学院
食品
原报500克后电话联系江改100克2瓶
401
铬酸钾
500mL
瓶
1
药学院
食品
402
盐酸
500mL
瓶
40
药学院
食品
403
无水乙醚
500mL
瓶
4
药学院
食品
404
玻璃棒
15cm
个
100
药学院
食品
405
2，3，5-氯化三苯四氮唑
100g
瓶
1
药学院
食品
医用凡士林
500g/瓶
瓶
5
药学院
中鉴
213
水合氯醛
500g/瓶
瓶
10
药学院
中鉴
214
氢氧化钠
500g/瓶
瓶
10
药学院
中鉴
215
试管刷
长20cm，直径2cm
个
20
常用溶液的配制
常用溶液的配制本文为您带来分子生物学实验中常用溶液的配制方法（详细配方请参阅对应编号的具体配制方法）：1. 1 mol/LTris-HCl 溶液（pH 8.0）2. 50 mmol/LTris-HCl 溶液（pH 8.0）3. 0.5 mol/LEDTA 溶液（pH 8.0）4. TE 缓冲液（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA，pH 8.0）5. 20 mg/mL 蛋白酶 K6. 5 mol/LNaCl 溶液7. CTAB/NaCl溶液（0.7 mol/LNaCl，10％CTAB）8. 3 mol/L 乙酸钠溶液（pH 5.2）9. 苯酚/氯仿/异戊醇（PCI，25∶24∶1）10. 氯仿/异戊醇11. 0.1 mol/L CaCl2 溶液12. 0.5 mol/L CaCl2 溶液13. 氨苄青霉素（Amp）储存液（100 mg/mL）14. 羧苄青霉素（Car）储存液（100 mg/mL）15. IPTG 储存液（100 mmol/L）16. X-gal 贮备液17. 10% SDS 溶液18. 10% 过硫酸胺（APS）19. 50 × TAE电泳缓冲液20. SDS-PAGE 蛋白电泳试剂1). 30% 聚丙烯酰胺溶液2). 2 ×加样缓冲液3). 蛋白电泳缓冲液（4 ×）4). 4 ×分离胶缓冲液5). 4 ×浓缩胶缓冲液6). 染色液21. ELISA 分析试剂1). 包被缓冲液（0.1 mol/L Na2CO3，0.1 mol/L NaHCO3，pH 9.6）2). 磷酸盐缓冲液（10 × PBS）（1.37 mol/L NaCl，0.027 mol/L KCl，0.1 mol/L Na2HPO4，0.02 mol/L KH2PO4，pH 7.4）3). 洗涤液 PBST（PBS，0.1% Tween-20）4). 封闭液（PBST，5% BSA）5). 稀释液（PBST，1% BSA）6). 反应终止液22. Western blot 试剂1). 转印缓冲液（10 ×）（1.92 mol/L 甘氨酸，0.25 mol/L Tris，pH 8.3）2). 磷酸盐缓冲液（10 × PBS）（1.37 mol/L NaCl，0.027 mol/L KCl，0.1 mol/L Na2HPO4，0.02 mol/L KH2PO4，pH 7.4）具体配制方法如下：1. 1 mol/LTris-HCl 溶液（pH 8.0）：称取 12.191 g Tris，溶于 80 mL 双蒸水中，用浓盐酸调pH 8.0，定容至 100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。
Westernblot所需溶液的配制
WB所需溶液的配制1Tris-甘氨酸电泳缓冲液(Running buffer) 5×5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tris碱和72ｇ甘氨酸，5ｇ电泳级的SDS，双蒸水定容至1L，pH值为8.3。
使用前，将5×稀释到1×：取200ml 5×，定容到1000ml。
2转膜缓冲液（Sending buffer）（现用现配）必须新鲜配置，因为甘氨酸溶于水后易分解。
小片段可不加SDS。
310% SDS配置电泳级十二烷基硫酸钠也叫SDS（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS,C12H25O4NaS）溶液: 10g SDS，100ml去离子水配制，50-68度搅拌溶解，浓盐酸调pH到7.2，室温保存。
4Tris.HCl的配置注：Tris的分子量是121.4. 4度储存。
5 10% APS (Ammonium persulfate ; 过硫酸铵)的配置称取1g过硫酸铵，加超纯水溶解并定容至10ml，分装到1.5ml微量离心管中，负30度冻存。
使用时尽量现配现用，短期内实验频繁可多配。
4度存则两周内用完，最多不能超过一个月。
负20度可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。
6 10×TBS (Tris-buffered saline)的配置加HCl调pH到7.6，室温储存。
7TBST (Tris-buffered saline with Tween20) 的配置8 上样缓冲液（loading buffer）的配置SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。
按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。
9 stacking gel buffer (4×)10 5×Sample buffer (10ml)11封闭液的配置Blocking solution 要用TBST配制牛奶5% (w/v) nonfat dried milk 或者1%BSA0.01% antifoam A (Sigma)0.01%(v/v) sodium azide12丽春红溶液：100微升冰醋酸，加入0.05克丽春红，用水稀释至10毫升。
MOPS电泳缓冲粉剂(10×)
北京雷根生物技术有限公司
MOPS 电泳缓冲粉剂(10×)
简介：
3-(N-吗啉基)丙磺酸简称MOPS ，分子式为C 7H 15NO 4S ，分子量为209.26，CAS 号为1132-61-2。
MOPS 属于生物缓冲剂，经常用于配制RNA 电泳缓冲液。
Leagene MOPS 电泳缓冲粉剂(10×)由MOPS 、乙酸钠、EDTA 组成， 未经RNase free 处理，主要用于RNA 电泳。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 溶解于DEPC 处理水并补加DEPC 处理水至1L ，即为MOPS 电泳缓冲液(10×)。
2、 用DEPC 处理水稀释到1×后使用。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 配制的缓冲液见光后易变黄，淡黄色完全可以使用，颜色过深后不宜使用。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 24个月有效。
相关：
编号 名称 NA0013 Storage MOPS 电泳缓冲粉剂(10×) 1L RT 使用说明书 1份 编号 名称 CC0130 胰蛋白酶-EDTA 溶液(0.25%:0.02%) NA0034
Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE) PE0080
Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8) PE0092
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(5×) PW0040
Western blot 一抗稀释液 TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法
SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决⽅法SDS－PAGE电泳过程中常见问题以及解决⽅法⼏乎所有蛋⽩质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进⾏，⽽所有条件总要确保蛋⽩质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常⽤的就是SDS－PAGE电泳技术，关于⼤家在此过程中经常遇到的问题进⾏⼀些讨论：Q：SDS－PAGE电泳的基本原理A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS （⼗⼆烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋⽩带负电荷，由于多肽结合SDS的量⼏乎总是与多肽的分⼦量成正⽐⽽与其序列⽆关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的⼤⼩有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。
当分⼦量在15KD到200KD之间时，蛋⽩质的迁移率和分⼦量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分⼦量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分⼦量的标准蛋⽩质的迁移率对分⼦量对数作图，可获得⼀条标准曲线，未知蛋⽩质在相同条件下进⾏电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分⼦量。
Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响A：在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使⽤的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是，分离胶；⽽电泳缓冲液使⽤的Tris－⽢氨酸缓冲系统。
在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此⽢氨酸解离很少，其在电场的作⽤下，泳动效率低；⽽CL离⼦却很⾼，两者之间形成导电性较低的区带，蛋⽩分⼦就介于⼆者之间泳动。
由于导电性与电场强度成反⽐，这⼀区带便形成了较⾼的电压剃度，压着蛋⽩质分⼦聚集到⼀起，浓缩为⼀狭窄的区带。
当样品进⼊分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，⽢氨酸⼤量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离⼦之后，同时由于分离胶孔径的缩⼩，在电场的作⽤下，蛋⽩分⼦根据其固有的带电性和分⼦⼤⼩进⾏分离。
所以，pH对整个反应体系的影响是⾄关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应⾸要考虑该因素。
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Tris-甘氨酸电泳缓冲液(10×)
简介：
Tris-甘氨酸电泳缓冲液又称SDS-PAGE 电泳缓冲液。
1×工作液中含有25mM Tris 、250mM 甘氨酸、1%SDS 。
Tris-甘氨酸电泳缓冲液是常用的蛋白质电泳缓冲液, 本试剂是10倍浓缩的溶液，主要由250mM Tris 、2.5M 甘氨酸、10%SDS 组成。
使用时需用蒸馏水或去离子水稀释10倍后使用。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、用蒸馏水或去离子水稀释到1×后使用。
注意事项：
1、 10×电泳缓冲液不如5×的稳定，偶尔会产生浑浊或沉淀，出现上述情况，可加热溶解后使用。
2、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 PE0092 Storage Tris-甘氨酸电泳缓冲液(10×) 500ml RT 使用说明书 1份。