DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制
各种缓冲液配方
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L配制方法1.2.3.加入57.1 ml 的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L 后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris- 硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L配制方法l.2.3.加去离子水将溶液定容至l L 后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L配制方法1.称41.8 g MOPS，置于1 L 烧杯中。
2.加约700 ml DEPC 处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH 调节pH 值至7.0。
4.5.用DEPC6.用0.45 m 滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml) 组份浓度10 mg/ml 溴乙锭配制量100 ml 配制方法 1.称量 1 g 溴乙锭，加入到100 ml 容器中。
2.加入去离子水100 ml ，充分搅拌数h 完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml 。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose 凝胶配制方法1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是0.5×TBE 或1×TAE）。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量）。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
DNA琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳一,实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA 片段的常用技术.把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质(琼脂糖凝胶)的样品孔中,并置于静电场上.由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基,因此在电场中向正极移动.在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应.具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样,因而可依据DNA分子的大小来使其分离.凝胶电泳不仅可分离不同分子质量的DNA, 也可以分离相对分子质量相同,而构型不同的DNA分子.在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测.相对分子质量标准参照物相对可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准.在凝胶中加入少量溴化乙锭(ethidium bromide, EB),其分子可插入DNA的碱基之间,形成一种络合物,在254～365nm波长紫外光照射下,呈桔红色荧光,因此也可对分离的DNA进行检测.一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb～50kb范围内的DNA 片段.本实验介绍琼脂糖凝胶的制备以及琼脂糖凝胶电泳在DNA片段分离中的应用方法.琼脂糖凝胶浓度（%）线状DNA分子分离范围（kb）0.3 5--600.6 1--200.9 0.5--71.2 0.4--61.5 0.2--32.0 0.1--2琼脂糖凝胶电泳是用于分离纯化和鉴定核酸的方法，根据琼脂糖的溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。
低熔点琼脂糖的熔点为62--65,溶解后在37下维持液体状态约数小时,主要用于DNA片断的回收、质粒与外源性DNA的快速连接等。
DNA在琼脂糖凝胶中的迁移速度与琼脂糖浓度、DNA分子量及其构象、电泳缓冲液、电场强度等因素有关，一般说来，DNA片断越大或者琼脂糖浓度越大，其迁移速率越大；而电场强度越高，其迁移速率越大。
不同浓度琼脂糖凝胶DNA分离范围见上图表。
二,仪器及试剂1.仪器及耗材:水平电泳槽,电泳仪,凝胶成像分析系统,微波炉,微量移液器,透明胶带,点样或parafilm,100 ml或250 ml锥形瓶,量筒,吸头等.2.试剂及配制:50×TAE缓冲液的配制:2 mol/L Tris-乙酸,0.05 mol/L EDTA(pH 8.0)配制1000 mlTris 242 g冰乙酸 57.1 ml0.5 mol/L EDTA 100 ml加入600 ml去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L后.高温高压灭菌,室温保存.1×TAE缓冲液的配制:称量20 ml的50×TAE缓冲液,再加入980 ml的去离子水.溴化乙啶贮存液:10 mg/ml 溴化乙啶配制:100 ml称取1 g溴化乙啶,置于100 ml烧杯中,加入80 ml去离子水后搅拌溶解.将溶液定容至100 ml后,转移到棕色瓶中.室温保存.6×上样缓冲液:0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,30%甘油.配制:10 ml溴酚蓝 25 mg二甲苯青FF 25 mg甘油 3 ml用6×TAE缓冲液定溶至10 ml,分装成1 ml/管.-20℃保存.其它试剂:DNA样品,DNA Ladder ,琼脂糖三,操作步骤1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳. (5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.(6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存.四,常见问题及注意事项1.配琼脂糖时应使其完全熔化后方可制胶.2.琼脂糖凝胶易于破碎,操作时要轻缓.3.电泳时应注意电源线路,预防触电.4.溴化乙淀具有致癌作用,配制及使用时应带乳胶或一次性塑料手套.并在专门的实验室内使用.5.紫外线对人体有损伤作用,开灯时间不宜太长,注意防护.6.DNA带形状模糊:DNA加样过多;电压太高;凝胶中有气泡.7.质粒DNA的存在形式有3种,①共价闭环DNA(cccDNA),常以超螺旋形式存在;②开环DNA(ocDNA),此种质粒DNA的两条链中有一条发生一处或多处断裂,因此可以自由旋转从而消除张力,形成松弛的环状分子;③线状DNA,因质粒DNA的两条链在同一处断裂而造成.因此质粒DNA电泳的结果中有可能出现三条泳带,它们的泳动速度为: cccDNA > 线状DNA > ocDNA.添加来自TIANGEN的资料:1,琼脂糖:不同厂家＼不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同,影响DNA的迁移及其荧光背景的强度,应有选择的使用.2,凝胶的制备:凝胶中所加的缓冲液应该与电泳槽中的相一致,溶化的凝胶应该及时倒入板中,避免倒入之前凝固结块,倒入板中的凝胶应该避免出现气泡,以免影响电泳结果.3,电泳缓冲液:为保持电泳所需的离子强度和PH,应经常更新电泳缓冲液.4,样品加入量:一般情况下,0.5CM宽的梳子可加0.5微克的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片断的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清楚;反之,则应该适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾或扩散,对于较大的DNA此现象更明显.5,DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品中应该使用同样的缓冲条件以消除这种影响.6,DNA迁移率取决于琼脂糖的浓度,迁移分子的形状及其大小.采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子,制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度.小片断DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以提高分辨率.。
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。
普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳操作流程准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。
选择电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。
低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。
注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
电泳的合适电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA 电泳，温度应该低于15℃。
注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。
DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制
DNA 电泳相关试剂及缓冲液的配制1. 0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml 蒸馏水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na 2·2H 2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH 调解pH 值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。
最后定容至1L 。
高压灭菌。
2.5 X TBE:Tris 碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L 。
高压灭菌。
（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。
1 X TBE:5 X TBE 缓冲液与蒸馏水按1: 4稀释就OK。
配置方法方法1：1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g 溴酚蓝定溶于100ml 无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。
方法2：0.05%的溴酚蓝配western blot 用的2*SDS 上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。
实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。
下面是其较合适的配制方法：0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。
变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。
只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。
估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。
方法3：1％溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。
相关词条甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠Western上样缓冲液配制整理● 6×SDS 样品缓冲液 4×Tris·Cl/SDS,PH6.8 (0.28mol/L) 7ml甘油[30%(V/V)]3.0ml（3.8g ） 甘油密度为1.2613g/cm3(20/4℃)SDS [1%（m/V ）] 1g溴酚蓝[0.0012%(m/V)] 1.2mgDTT (0.5mol/L)0.93g如果需要，加去离子蒸馏水至10ml ；等量分装成0.5ml 并于-70℃贮存● 8×Tris·Cl/SDS,PH6.8 ●丽春红S 染色液Tris-base （0.5mol/L ） 6.05g40ml 水中溶解后以1mol/L 盐酸调至PH6.8，补加至100ml 。
常见缓冲液的配方
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
电泳试剂配方
各类试剂DNA extration buffer(1000ml)：1M Tris-HCl（PH8.0） 100ml0.5M EDTA 40ml5 M NaCl 100ml10%SDS 150mlDH2O 6100.5M EDTA(pH8.0)：46.53g(EDTA含2份结晶水，fw＝372.2)溶至200ml，加入4gNaOH调PH=8.0,最后调至250ml；0.5M EDTA(pH8.0)：46.53g(EDTA含2份结晶水，fw＝372.2)溶至200ml加入5gNaOH调PH=8.0,最后定容至250ml5×TBE（1L）: 54g Tris,27.5g硼酸；20ml 0.5M EDTA(pH8.0)1×TBE:（5×TBE稀释5倍）NaOH溶液(400ML):6g NaOH;0.076g四硼酸钠；NaOH溶液(20L): 300g NaOH;3.8g四硼酸钠；40％page：Acrylamide 38g；N-N-Methylenehisacny lamide 2g；ddH2O定容100ml。
APS: 4克过硫酸氨配成40ml固定液中甲醛加入量：400ml NaOH溶液加1.6ml染色液：AgNO3 0.05%--0.1%固定液： NaOH 15g/l甲醛 4ml/l硼砂 0.2g/l6%非变性PAGE胶配制如下（1块胶）：5×TBE 5ml40%PAGE 3.75mlH2O 16mlAPS 200-250ulTEMED 12 ulDNA提取1. 在50 ml带盖离心管中加入10~15 ml抽提液(100 mmol/L Tris-HCL pH8.0，20mmol/L EDTA，500 mmol/l NaCl，1.5% SDS)，在66°C水浴中预热；2. 取剪小的水稻叶片放在研钵内，倒入液氮，磨成细粉，迅速转入经预热的抽提液中，混匀；66°C水浴30 min，保温期间搅动几次；3. 放在摇床上缓慢振荡（60 rpm）10~20 min；4. 加入10~15 ml氯仿，内含4%（V/V）异戊醇，10~20%（V/V）乙醇，混匀，继续缓慢振荡20 min；5. 在室温下离心（3000rpm）20 min；6. 将上清液倒入50 ml离心管，加入0.8至1倍经4°C预冷的异丙醇，混匀，在室温下放置片刻，出现纤维状沉淀；7. 在室温下离心（3000rpm）10 min；8. 弃上清液，然后加入75%乙醇震荡洗涤；9.在室温下离心（3000rpm）10 min；10. 弃乙醇，倒置晾干；11. 加入1 ml 1×TE并溶解，溶解后转移入1.5ml 离心管中，贮藏于-20°C待用.取各单株的1个分蘖提取DNA。
DNA 电泳
[实验原理]琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。
在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭（ethidum bromide ,EB），在紫外光下可以检出10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。
琼脂糖凝胶有如下特点：(1) DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比，分子越大迁移得越慢。
(2) 琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。
(3) 电压低电压时，线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。
但是随着电场强度的增加，不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
(4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。
(5) 嵌入染料荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。
(6) 离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。
在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。
生物实验常用溶液的配制(整理版)
生物实验常用溶液的配制一、DNA电泳相关：1、DNA电泳缓冲液：（1）Tris-乙酸（TAE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。
所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。
① TAE使用液：1×：40mmol/L Tris-乙酸1mmol/L EDTA② TAE贮存液（每L）：50×：242g Tris碱57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）（2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液：① TBE使用液：0.5×：0.045mol/L Tris-硼酸1mmol/L EDTA② TBE贮存液（每L）：5×：54g Tris碱27.5ml 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）（3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液：① TPE使用液：1×：90mmol/L Tris-磷酸2mmol/L EDTA② TPE贮存液（每L）：10×：108g Tris碱15.5ml 85%磷酸40ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程：①制胶：按要求取1g琼脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温，3-5min即可）；②溶液冷却至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混匀；③迅速倒入备好的胶模中；④凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中；⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）；⑥DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样；⑦盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极→红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min 左右）；⑧电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)10×TBE Buffer (pH8.3)10×MOPS Buffer ■组份浓度 2 M Tirs-醋酸，100 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Tris 242 gNa2EDTA·2H2O 37.2 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加入57.1 ml的醋酸，充分搅拌。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
■组份浓度 890 mM Tirs-硼酸，20 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Tris 108 gNa2EDTA·2H2O 7.44 g硼酸 55 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
■组份浓度 200 mM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3. 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
4. 再向溶液中加入下列试剂。
1 M NaOAc（DEPC处理） 20 ml0.5 M EDTA（pH8.0）（DEPC处理） 20 ml5. 用DEPC处理水将溶液定容至1 L。
6. 用0.45 μm滤膜过滤除去杂质。
7. 室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml) Agarose凝胶■组份浓度 10 mg/ml溴乙锭■配制量 100 ml■配制方法 1. 称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2. 加入去离子水100 ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。
核酸电泳相关试剂、缓冲液配制方法
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
小心摇动锥形瓶。
使琼脂糖充分均匀熔化。
此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。
NaCl
175.3 g
NaH2PO4·H2O
27.6 g
Na2EDTA·2H2O 7.4 g
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加NaOH调节pH值至7.4(约6.5 ml的10 N NaOH)。 4. 加去离子水将溶液定容至l L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 50 X Denhardt’S溶液 1%(W/V) Ficoll 400(菲可400/水溶性 组份浓度
组份浓度
5×
Denhardt‘s
0.5%(W/V)
SDS
100 g/ml
Salmon DNA
50%(V/V)
Formamlde
配制量
配制方法
1. 称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。
20×SSC(或SSPE) 30 ml
100 mL
50×Denhardt’s
10 ml
10% SDS
5 ml
10 mg/ml Salmon 1 ml DNA
2. 向烧杯中加入约200 ml的去离子水后，加热搅拌充分溶 解。
3. 加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH值 至7.0。
4. 用去离子水定容至500 ml后，室温保存。 10 × Loading Buffer (RNA电泳用) 组份浓度
10 mM
EDTA
50%(V/V)
的OD260值。 7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。 8. 煮沸10min后，分装成小份(1 ml/份)。-20℃保存。 9. 使用前在沸水浴中加热5min后，迅速冰浴冷却。 DNA变性缓冲液 组份浓度 1.5 M NaCl，0.5 M NaOH 配制量 1 L 配制方法
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
学习和掌握琼脂糖电泳法鉴定DNA的原理和方法。
二、实验原理
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下（pH8.0的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选重组子的目的。
⑵加样缓冲液的配制：
0.25%溴酚蓝，40%（W/V）蔗糖水溶液，4℃冰箱保存。
⑶溴化乙锭的配制：
称取0.1g溴化乙锭，溶于10ml水，配成终浓度为10mg/ml的母液，4℃冰箱保存。染色时，吸取12.5μl的母液，加入250ml的水中，使其终浓度为0.5μg/ml，混合均匀。
⑷100倍TE缓冲液的配制：
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按0.3-1.5%的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用0.5%的凝胶，200-2000bp的DNA用1.5%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下（pH8 0的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选重组子的目的。…
DNA的琼脂糖凝胶电泳
一、原理DNA在碱性的溶液中带有负电荷，因此，在电场作用下朝正极移动。
在琼脂糖凝胶中电泳时，由于琼脂糖凝胶具有一定孔径，长度不同的DNA分子由于所受凝胶的阻遏作用大小不一，迁移的速度不同，从而可以按照分子量大小得到有效分离。
溴化乙锭可插入到DNA分子的双链中。
在紫外光的照射下，插入溴化乙锭的DNA呈橙红色荧光，所以溴化乙锭可以作荧光指示剂指示DNA含量和位置。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：分子量不同的DNA片段。
（二）仪器设备：1. 电泳仪；2. 紫外检测仪；3. 水平电泳槽；4. 移液器；5. 一次性手套。
（三）试剂：1. pH8.3 Tris－硼酸－EDTA缓冲液：称取10.78gTris，5.500g硼酸，0.930gEDTA －Na2溶于无离子水，定容到100ml，用时稀释10倍；2. EB溶液：溴化乙锭（10mg/ml）（用时稀释10倍）；3. 加样缓冲液：50％甘油＋0.25％溴酚蓝；4. 琼脂糖。
三、实验步骤（一）琼脂糖凝胶的制备：1. 称取琼脂糖1g，加入10倍电泳缓冲液10ml，再加入蒸馏水90ml，在电炉上加热溶解，配制成1％琼脂糖凝胶；稍凉后加入配好的EB溶液数滴。
2. 将电泳模板两端密封，倒入琼脂糖凝胶溶液，插入梳子。
3. 冷凝后将梳子拨出，电泳胶放入电泳槽中。
（二）加样：取样品溶液20μl，加入1／5体积加样缓冲液，混匀后，将溶液加到样品孔中，同时在另一样品孔中加入标准分子量DNA。
一般DNA样品最好控制在0.5～1.0μg之间。
（三）电泳：加入pH8.3Tris－硼酸－EDTA缓冲液，通电维持2～4V／cm，电泳至溴酚蓝走到胶底部边缘时停止电泳。
（四）染色及观察：电泳完毕，取出凝胶模具，将其推到一块干净的玻璃板上，于254nm或300nm波长紫外灯下观察，DNA存在的位置呈现橙黄色荧光，放置时间超过4～6h后荧光减弱，因此应立即用用国产全色胶卷拍照，并应加上红色滤色镜。
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
⑸100倍电泳缓冲液的配制：
4mol/LTris-HCl（pH8..0），2mol/L醋酸钠，200mmol/LEDTA
称取，无水乙酸钠，，先用400ml双蒸水加热搅拌溶解后，再用冰乙酸调pH至（大约加入冰乙酸50ml），然后定容至500ml。用时稀释100倍。
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下（pH8 0的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选重组子的目的。…
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品与加样缓冲液（loading buffer）按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用%的凝胶，200-2000bp的DNA用%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
实验二、DNA凝胶电泳
实验二、DNA凝胶电泳
二、琼脂糖凝胶电泳：
1．DNA分子大小：线性DNA分子在一定琼脂糖浓度内的迁移率与DNA分 子量的对数成反比。
2．琼脂糖浓度：小于0.5kb 的DNA片段所需的凝胶浓度为1.2-1.5%; 分离大于10kb 的DNA片段所需的凝胶浓度为0.3-0.7%; DNA片段大 小在两者之间的所需的凝胶浓度为0.8-1.0%。
3、DNA分子构象：对相同分子量的质粒DNA的三种构象，超 螺旋DNA移动最快，而线状双链DNA移动最慢。
4．电源电压：在低电压时，线性DNA片段的移动速率与所 加电压成正比，但电压增高，不同分子量的DNA片段的移 动速率将以不同幅度增加；片段越大，升高的幅度也越 大。因此电压增高，琼脂糖有效分离范围将缩小。一般 所加电压不得超过5V/cm.
箔或黑纸包裹容器，储于温室即可。 4、DNA分子量标准：
DNA/EcoR I/Hind III: DNA/EcoR I: 21.2, 7.4, 5.8, 5.6, 4.9和 2.5kb。 DNA/ Hind III: 23.1, 9.4, 6.6, 4.4, 2.3, 2.0, 0.56和 0.12kb.
实验二、DNA凝胶电泳
三、试剂： 1、5TBE缓冲液：Tris. 54g, 硼酸27.5g, 加入20ml
的0.5mol/L EDTA(pH8.0), 定溶至1000ml. 2、6上样缓冲液：0.25% 溴酚兰, 40%(w/v)蔗糖水溶液。 3、溴化乙啶（EB）溶液母液：将EB配制成10mg/L，用铝
实验二、DNA凝胶电泳
实验二、DNA凝胶电泳
一、概述
琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离和纯化DNA片段 的标准方法。其中，琼脂糖凝胶分离DNA片段大小范围较 广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的 DNA片段。
分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制
分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制1、6*Loading Buffer（DNA电泳用，50ml配方）组分浓度：100mM EDTA, 40%(V/V) 蔗糖, 0.05%（W/V）xylene cyanol FF, 0.05%（W/V）溴酚蓝配制方法：称取25mg溴酚蓝，25mg xylene cyanol FF，5ml 0.5MEDTA，加入约20ml去离子水，加热搅拌，充分溶解，加入20g蔗糖，去离子水定容至50ml。
2、10*PBS（pH7.2～7.4，分子克隆推荐配方）组分浓度：NaCl 137 mmol/L，KCl 27 mmol/L，Na2HPO4 100 mmol/L，KH2PO4 20 mmol/L配置方法：用800ml去离子水溶解80 g NaCl, 2 g KCl，14.4 g Na2HPO4和2.4 g KH2PO4。
用盐酸调节pH 至7.4，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。
3、20*SSC （pH约7.0）组分浓度：300 mmol/L 柠檬酸三钠，3 mol/L 氯化钠配制方法：称取柠檬酸三钠·2H2O 88.23 g，氯化钠175.3 g，加入800 ml去离子水充分溶解，用14 N HCl 调pH为7.0，去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后室温保存。
4、10*Tris-甘氨酸转膜液（pH约8.3）1 L组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸配制方法：甘氨酸144.13 g，Tris 30.29 g，去离子水溶解定容至1 L。
使用前，100 ml 10*转膜液，加入200 ml甲醇，700 ml去离子水成为1*转膜液5、10*Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液（SDS-PAGE电泳缓冲液，pH约8.6）组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸，1%（W/V）SDS配制方法：称取30.29 g Tris，,144.13 g甘氨酸，5 g SDS，加入800 ml去离子水搅拌溶解，定容至1 L，常温保存。
缓冲液的配制
缓冲液的配制Elisa 相关试剂的配制1、抗体或免疫球蛋⽩稀释液0.01mol/L pH7.2PBSNaH2PO4·2H2O——0.39克；Na2HPO4——1.27克；NaCl——0.85克；NaN3——200 mg；H2O（蒸馏⽔）⾄1000ml2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液PH7.4，PBSTNaCl——2.0克；KH2PO4——0.2克；Na2HPO4·12H2O——2.9克；KCl——0.2克；NaN3——0.2克；H2O⾄1000ml 吐温（Tween）20 0.5ml；4°C保存备⽤3、包被液（简称CB）pH9.6Na2CO3——1.59克；NaHCO3——2.93克；NaN3——0.2克；H2O⾄1000ml 密封盖好，4°C存放备⽤4、ELISA底物液（可溶性底物）磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ML）——24.3ml；0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/L)——25.7ml；H2O ——50ml；4°C存放备⽤5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）0.05mol/L pH7.6 tris-HCLTris——6.05克；HCL(36%)——3.15克（约2.7ml浓HCL）；H2O ⾄1000ml DAB为3′，3′⼆氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红⾊ELISA试剂配制及实验流程是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
以双抗体夹⼼法举例说明。
试剂配制：(1) 包被缓冲液(PH9.6 +0.2 0.05M碳酸盐缓冲液)： Na2CO3——1.59g ;NaHCO3 ——2.93g ；加蒸馏⽔⾄1000ml。
（⽤时稀释成1x，加0.1%BSA）(2)洗涤缓冲液(PH7.4 0.15M PBST)：0.05%Tween-20——0.5ml；加在PBS缓冲液1000ml 中。
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DNA 电泳相关试剂及缓冲液的配制
1. 0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml 蒸馏水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na 2·2H 2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH 调解pH 值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。
最后
定容至1L 。
高压灭菌。
2. 5 X TBE:Tris 碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L 。
高压灭菌。
（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。
1 X TBE:5 X TBE 缓冲液与蒸馏水按 1: 4
稀释就OK 。
配置方法方法1：1%的溴酚蓝
将托盘天平上称取1g 溴酚蓝定溶于100ml 无水乙醇中，转移入
滴瓶中，贴标签备用。
方法2：0.05%
的溴酚蓝
配western blot
用的2*SDS 上样缓冲液需要用到0.1%
的溴酚蓝，
2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。
实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。
下面是其较合适的配制方法：
0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。
变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。
只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。
估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。
方法3：1％溴酚蓝
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。
相关词条
甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠
Western上样缓冲液配制整理
● 6×SDS 样品缓冲液 4×Tris·Cl/SDS,PH6.8 (0.28mol/L) 7ml
甘油[30%(V/V)]
3.0ml
（3.8g ） 甘油密度为 1.2613g/cm3 (20/4℃)
SDS [1%（m/V ）] 1g
溴
酚
蓝[0.0012%(m/V)] 1.2mg
DTT (0.5mol/L)
0.93g
如果需要，加去离子蒸馏水至10ml ；等量分装成0.5ml 并于-70℃贮存
● 8×Tris·Cl/SDS,PH6.8 ●丽春红S 染色液
Tris-base （0.5mol/L ） 6.05g
40ml 水中溶解后以1mol/L 盐酸调至PH6.8，补加至100ml 。
HCl
调至6.8 0.45um 滤膜过滤，再加0.4gSDS
SDS[0.4%(m/V)] 0.4g 4℃可保存1月
1. Prepared using Tris base, pH adjusted with HCl.
2. If 2-ME is used, omit DTT.
3. If DTT is used, omit 2-ME.。