Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE, RNase free)
PCR 各种缓冲液的配方
PCR 各种缓冲液的配方1. 电泳缓冲液50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液终浓度配制1L溶液成分2mol/L Tris碱 242g1mol/L 冰乙酸 57.1 mlEDTA （pH＝8.0） 18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0））水补足1L2. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱54g445 mmol/L 硼酸盐 27.5g 硼酸10 mmol/L EDTA 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）水补足1L染料1％溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
3. 凝胶上样液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠 300ul 10N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）18％聚蔗糖（400型） 1.8g0.15％溴甲酚绿 15mg0.25％二甲苯青FF 25mg水 10ml4. 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）15％聚蔗糖（400型） 1.5g水补足到10ml5.6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25％溴酚蓝 2.5ml 1％溴酚蓝0.25％二甲苯青FF 2.5ml 1％二甲苯青FF15％聚蔗糖（400型） 1.5g水补足到10ml6.6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）50％甘油3ml水 3.9ml7. 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）40％聚蔗糖 4g水补足到10ml8.10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2％溴酚蓝20mg0.2％二甲苯青FF 20mg200 mmol/L EDTA 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 0.1％SDS 100ul 10％ SDS50％甘油 5ml水补足到10ml。
tris-hcl及其他几种缓冲液配方
Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？Tris：三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。
Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。
例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。
由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。
Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。
但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。
由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。
人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。
如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。
这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。
用途：有机合成中间体。
在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。
在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。
Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。
Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。
Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。
此外，Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。
Tris也被用作滴定标准物。
1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl配制量1L配制方法：1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
常用缓冲液配置
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
L Tris-HCl
100mmol/L MgCl2
100mmol/L DTT
2mmol/L ATP
5mmol/L盐酸亚精胺（可选）
ml BSA（组分V）（可选）
3.适量分成小份后，-20℃保存。
17）10 mMATP
组份浓度：10 mMATP
配制量：20 ml
配制方法：
1.称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
2.加20 ml的25 mMTris-HCl（，搅拌溶解。
3.适量分成小份后，-20℃保存。
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加的浓盐酸至的水中。
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
2.高温高压灭菌后，4℃保存。
常用缓冲液配置
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 参加约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量参加浓盐酸调节所需要的pH值。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L配制方法：1. 量取以下溶液，置于1 L烧杯中。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 参加约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，参加月40ml的去离子水搅拌溶解2.参加冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L配制方法：1. 称量以下试剂，置于1 L烧杯中。
RACE步骤
1）RNA 提取采用试剂Trizol Reagent (购自invitrogen 公司)2）氯仿；异丙醇；70 % 乙醇；0.1 % DEPC；DEPC 处理的超纯水(2) 聚合酶链式反应（PCR）、核酸电泳试剂1) Tris-硼酸储存（5×TBE）缓冲液：54g Tris 碱，27.5 g 硼酸，20 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)溶于1000 ml 水。
2) 溴化乙啶（10 mg/ml）:100 ml 水中加入1 g 溴化乙啶，磁力搅拌数小时至溶解，避光保存3）点样缓冲液Loading buffer(10×): 0.25 %溴酚蓝，40 %甘油。
4）Ex Taq DNA Polymerase（TaKaRa），琼脂糖DNA 胶回收试剂盒(北京天根生物公司)5）DNA Makers：DL2000，DNA Maker Ⅲ6) 特异引物（上海生工合成）7) 5'RACE 试剂盒购置大连宝生物工程有限公司(3) 目的基因鉴定、培养基及培养液1）液体培养基：胰蛋白胨10.0g，酵母提取物5.0 g，NaCl 10.0g，调pH 至7.0，定容至1L，高压灭菌。
2）固体培养基：加琼脂15g/L，高压灭菌。
3）氨苄50μg/mL；IPTG 25 mg/mL；X-Gal 25 mg/mL 溶于DMF 中4）5×KCM 溶液3.73 g KCl，2.21 g CaCl2，5.08 g MgCl2，定容至100 ml。
总RNA 的提取实验用品的处理：离心管、枪头等塑料制品用0.1 % DEPC于37 ℃浸泡2h，和0.1 %的DEPC 水高压灭菌30min，研体、剪刀、镊子、容量瓶等180℃烘烤6h。
1）称取100 mg小麦叶片，液氮研磨至粉末状，迅速转入含1mL Trizol的1.5 ml离心管中，混匀，室温下静置5 min。
2）加0.2 ml氯仿，剧烈振摇15 sec，20 ℃静置3 min。
各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制某一特定pH的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1mol/L HCl混合，加水将体积调至100ml。
Tris-buffered saline (TBS) (25 mM Tris) (1 liter)1.Weigh out 8 g NaCl, 0.2 g KCl and 3 g Tris base.2.Add 800 ml distilled water to dissolve.3.Add 0.015g phenol red.4.Adjust to pH 7.4 with HCl.5.Make up volume to 1 liter with distilled water.6.Dispense into aliquots and sterilize by autoclaving (20 minutes at15 lb in-2 on liquid cycle).<STORAGE> Store at room temperature.TrisTris中文品名: 三羟甲基氨基甲烷; 氨基丁三醇; 缓血酸胺英文品名: Tris; Tris(Hydroxymethyl)aminomethane英文别名: 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediolTHAM; Tris base; Trometamol通用CAS : 77-86-1产品纯度: 100%(USP药典级) / 99.9%(实验室技术级)产品级别: USP药典级,符合USP/EP/cGMP对药物赋形剂的要求分子式: NH2C(CH2OH)3分子量: 121.14使用用途: 生物制药,体外诊断,个人护理及化妆品原料等保存温度: 常温密封避光保存TRIS是一种最常用的生物缓冲液，常配成PH值为6.8，7.4，8.0，8.8。
常用溶液配置方法[1]
![常用溶液配置方法[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/8327401555270722192ef720.png)
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
实验室常见缓冲液配制
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
值。
4.将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O（或者24.6g无水NaAc）置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE)
北京雷根生物技术有限公司
Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE)
简介：
Tris-硼酸电泳缓冲液简称TBE 。
0.5×TBE 工作液中含有45mM Tris-硼酸、1mM EDTA(pH8.0)。
TBE 是常用的DNA 电泳缓冲液。
Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE)是10倍浓缩的TBE 粉剂，主要由450mM Tris-硼酸，10mM EDTA 等组成。
使用时先溶解于1L 蒸馏水或去离子水即为5×TBE 溶液，工作浓度为0.5×TBE 。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、取Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE)充分溶解于700ml 蒸馏水或去离子水中，补水至1000ml 即为5×TBE 溶液。
2、用蒸馏水或去离子水稀释到0.5×后使用。
注意事项：
1、 10×TBE 储存液不稳定，容易产生沉淀，建议采用5×TBE ，因为5×TBE 储存起来更稳定。
2、 工作液使用0.5×TBE ，亦可以使用0.5～1×TBE 工作液，该工作液缓冲能力相对较强。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 NA0039 Storage Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE) 1L RT 使用说明书 1份。
RT PCR的具体步骤
RT PCR的具体步骤rt-pcr的具体步骤rt-pcr实验步骤一．实验器具：1.移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2.5μl2.吸头：1ml、200μl、20μl3.匀浆管：5ml4.ep管：1.5ml、500μl、200μl5.试剂瓶：棕色试剂瓶(广口，摆75%乙醇)6.量筒：100ml7.容量瓶：1000ml8.试管架：5ml、1.5ml、20μl9.铝制饭盒：1-2个10.大瓷缸：1个11.锡泊纸：一卷12.卷纸：2卷13.三角烧瓶：外盖，稍大二．实验器具处置1.塑料制品：(包括枪头、ep管、匀浆管等)先将depc水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中(注意：小枪头要充分浸泡，必要时需要针筒打入depc水)，过夜后取出(注意：depc水很难自然晾干，所以建议先将刚取出的depc物品甩干，枪头装入枪头盒后甩干，ep管和匀浆管装入饭盒后甩干，然后在37度孵箱烘干)。
高压后烤干备用。
如果depc处理过的物品时间已超过一个星期，再次使用前应再次高压。
2.玻璃制品：泡酸过夜，冲洗整洁，先泡1‰d epc过夜，再塞锡纸烤干水泵。
3.匀浆器：(包含剪刀、镊子)先晒干后，超音波消毒即可(不须要泡depc)。
三．试剂酿制1．depc水：吸出1mldepc放在1000ml容量瓶中加双蒸水定容至1000ml，配成1‰depc水，并充分振荡混匀备用。
2．75%乙醇：用无水乙醇+depc水分体式，然后摆-20℃留存(depc水需先高压，高压时特别注意：1.装depc水的瓶子在盖子和瓶之间Though上线头；2.高压时间在40-45分钟，所以水要适度多加一点；3.高压完结后，不要私自换气，必须使压力自然上升，不然水会燃烧)。
3．异丙醇：放进棕色瓶中。
4．乙醚：放进棕色瓶中。
5．琼脂糖四．缓冲液配制1．电泳缓冲液(5×tbe储藏液)：tris54g、硼酸27.5g、0.5medta20mlph8.0、加蒸滚水至1000ml。
RNA电泳操作步骤
RNA电泳操作步骤1.准备实验材料和设备：-RNA样品：可以是从细胞、组织或血液中提取的总RNA或特定类型的RNA。
-RNA提取试剂盒：用于从样品中提取RNA。
-RNA样品质检：使用纳米光谱计或琼脂糖凝胶电泳检测RNA的浓度和纯度。
-RNA电泳仪和电泳槽：用于电泳分离RNA分子。
- RNA分离缓冲液：常用的缓冲液有甘胺盐酸盐缓冲液（Tris-Acetate-EDTA，TAE缓冲液）和甘胺盐酸盐磷酸盐缓冲液（Tris-Borate-EDTA，TBE缓冲液）。
- RNA标记物：如RNA分子量标记物（RNA molecular weight marker）和RNA荧光标记物（如SYBR Green）。
2.样品制备：- 根据实验需要，将RNA样品转移到RNase-free离心管中，并测量样品的浓度和纯度。
-根据RNA的浓度和纯度，确定要加载的样品量。
通常，加载2-5微克的RNA样品即可。
-将加载样品的体积参考样品体积的比例和实验方案的要求。
3.准备电泳槽和缓冲液：-将电泳槽放在平坦的台面上，并将边缘用胶带密封，以防溶液泄漏。
-根据实验要求，准备好适量的RNA分离缓冲液（TAE或TBE缓冲液），用来填充电泳槽和覆盖样品表面。
4.加载样品：- 将RNA样品与适量的缓冲液混合后，用RNase-free微量移液管将样品缓冲液缓慢地加入电泳槽的样品孔中。
-加载过程中要确保没有气泡进入样品孔内。
5.进行电泳：-将电泳槽放置在电泳仪中，连接电荷电源，并根据实验要求调整电压和时间参数。
-打开电荷电源并开始进行电泳，期间可以观察电泳过程。
6.准备凝胶成像系统：-在电泳仪和电泳槽上盖上透明的盖子，并将紫外灯放在透明盖子的上方。
-打开凝胶成像系统并准备好成像设备。
7.观察和记录：-当电泳进行到一定时间后，关闭电源并将电泳仪取出。
-使用对应的成像设备观察凝胶中RNA带的迁移情况。
-使用专业图像处理软件对凝胶图像进行分析和记录。
DNA提取各种缓冲液的配制
DNA提取各种缓冲液的配制植物总DNA的提取一、所需仪器设备及消耗品剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（1000、500、200、100、50ml）、量筒（1000、500、100、10ml）、烧杯（1000、500、200、100ml）、pH试纸、电子天平、高压灭菌锅、研钵、液氮罐（液氮）、水浴锅、离心机、移液器（ 1 套）、枪头（1ml、200ml、20 口 l ）、枪头盒、离心管（）（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片二、所需化学药品及试剂CTAB NaCI、EDTA-Na? 2fO Tris、冰乙酸、硼酸、B -巯基乙醇、NaAc 氯仿（三氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、溴酚蓝、琼脂糖、蔗糖、溴化乙锭（EB）、 RNase NaOH HCl （浓）、ddHO三、各种缓冲液的配制（一）2%CTA提取缓冲液（300ml）（高压灭菌）4mol/L 的 NaCI 35ml X3 =105ml1mol/L 的 Tris-HCl 10ml X3=30mlL 的 EDTA 4ml X3 =12mlCTAB 2g X3 =6g（二）1X TE （母液）（50ml）（高压灭菌）1mol/L 的 Tris-HCl （）500 口 lL 的 EDTA（）100 口 l最后加ddHO定容到50ml工作液为X TE （45ml灭菌的ddb b O中，加入5ml已灭菌的1X TE）（三）4mol/L 的 NaCI （150ml）（高压灭菌）35.055g 的NaCI,力口 ddHO120ml溶解，再加水定容到 150ml（四）1mol/L的NaCI （400口 l）（用于配制 RNase储存液）取 4mol/L 的 NaCI （已灭菌）100 口 I，力口 300 口 I 灭菌的ddHQ （五） 3moI/L的NaAc溶液（）（50ml）（高压灭菌）NaAc- 3H2O 20.405g加 ddH2O 30mI用冰乙酸调节pH至力口 ddHO定容到50ml（六）RNase储存液（10mg/ml）（ 1ml）1mol/L 的 Tris-HCl （）10 口 l1mol/L 的 NaCI 15 口 lRNase 10mg沸水浴 15~20min（七）EB储存液（1mg/ml）EB 30mgddH2O 30ml磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保存于室温。
浙科版 选修1 第四部分 实验13 DNA片段的PCR扩增 教案
通过“PCR扩增DNA片段及凝胶电泳鉴定”实验培养学生科学思维和探究能力一、使用教材及内容分析浙江科学技术出版社高中《生物学选修1生物技术实践》第四部分实验13《DNA片段的PCR扩增》，适用于高二年级。
2017版《高中生物学课程标准》中，要求学生“阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤”。
建议开展“利用聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段并完成电泳鉴定”的实验活动。
本实验有助于学生理解PCR反应的原理，掌握PCR和琼脂糖凝胶电泳技术，认同现代生物技术的应用价值，培养学生运用数学方法探究生物学问题的能力，提高核心素养，因而是十分重要的内容。
基于北京四中高中部的分子生物学实验室，拥有PCR仪、凝胶电泳成像等先进教学设备；且本校的学生学习能力较强、求知欲高,对现代生物学技术非常感兴趣，会以积极认真的态度参与实验过程。
因此，我校开设本实验多年。
二、实验器材PCR仪、琼脂糖凝胶电泳设备（含梳子、胶盒、水平电泳槽和电泳仪电源）、微量移液器及枪头、微量离心管、培养皿、三角瓶、封口膜、橡皮筋、冰盒、记号笔、三脚架、微波炉或水浴锅（枪头、微量离心管使用前需进行高压蒸汽灭菌）。
材料：食用高活性干酵母（酿酒酵母）。
PCR相关试剂（以下溶液在-20℃条件下冷冻保存，课前放于冰盒内或冰块上）市售10×扩增缓冲液(含Mg2+)、市售 10 mmol/L 4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）、市售2 U/μL Taq DNA 聚合酶、10μmol/L引物A溶液：序列为5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’、10μmol/L引物B溶液：序列为5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’、无菌水。
电泳相关试剂Tris-硼酸（TBE）电泳缓冲液：取20 mL市售50×电泳缓冲液,加蒸馏水980 mL、市售6×上样缓冲液（loading buffer）、市售DNA标准溶液（Marker）。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液使用说明
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液使用说明
货号：T1070
规格：500ml
保存：室温保存，有效期1年。
产品说明：
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液是用于蛋白变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验（SDS-PAGE）中的缓冲试剂。
本产品按常规方法配制而成，为5×浓缩液，便于储存、操作简便。
组份浓度：125mM Tris，1.25M Glycine，0.5%（W/V）SDS
使用说明：
本产品为5×浓缩液，临用前稀释成1×工作浓度：取100ml的5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液，加入蒸馏水或去离子水定容至500ml混匀。
注意事项：
1.本产品为高倍浓缩液，环境温度较低时可能会有结晶析出，可加热助溶，待溶解完全后再行稀释使用；密封保存，防止污染。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴手套操作。
硼酸-硼砂缓冲液(pH7.4-9.0)
北京雷根生物技术有限公司
硼酸-硼砂缓冲液(pH7.4-9.0)
简介：
平衡盐溶液(Balanced Salt Solution ，BSS)与细胞生长状态下的pH 值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。
Leagene 硼酸-硼砂缓冲液(pH7.4-9.0)由硼酸、硼砂(又称四硼酸钠)组成，即0.2M 硼酸与0.05M 硼砂按照不同比例混合，客户根据可选pH7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、
8.8、9.0。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
注意事项：
1、 注意密闭保存，避免挥发。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号 名称 IH0209 Storage 硼酸-硼砂缓冲液(pH7.4-9.0) 500ml RT 使用说明书 1份
编号 名称
CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)
CS0001 ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DF0111 中性福尔马林固定液(10%)
DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液
IH0143 PBS 磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH7.2-7.4)
PE0080 Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8)
PT0013 考马斯亮蓝快速染色液
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。
常用缓冲液配置
实验室经常使用缓冲液配置方案之欧侯瑞魂创作1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度： 1 M Tris-HCl 配制量： 1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于 1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
pH值。
4. 将溶液定容至 1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保管。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变更差别很大，温度每升高1℃，溶液的pH 值大约降低个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量： 1 L配制方法：去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至 1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保管。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度： 1.5 M Tris-HCl 配制量： 1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于 1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至。
4. 将溶液定容至 1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保管。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变更差别很大，温度每升高1℃，溶液的pH 值大约降低个单位。
4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml 配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保管。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量： 1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
tbe电泳缓冲液工作浓度
tbe电泳缓冲液工作浓度TBE电泳缓冲液是一种常用于核酸电泳实验的缓冲液，它的工作浓度对于实验结果的准确性和稳定性至关重要。
本文将就TBE电泳缓冲液的工作浓度进行详细介绍。
一、TBE电泳缓冲液的概述TBE电泳缓冲液是由三种成分组成的混合物，分别是三种缓冲盐——三硼酸（Tris-borate）、乙酸（boric acid）和EDTA（乙二胺四乙酸）。
二、TBE电泳缓冲液的工作浓度TBE电泳缓冲液的工作浓度一般为1×，即经过稀释后得到的浓度为1倍的TBE缓冲液。
这种浓度被广泛应用于核酸电泳实验中，能够提供良好的电泳条件和分离效果。
三、TBE电泳缓冲液的配制方法1. 准备所需试剂：三硼酸、乙酸和EDTA。
2. 按照一定比例称取相应质量的三硼酸、乙酸和EDTA。
3. 将三硼酸、乙酸和EDTA溶解在适量的去离子水中，并充分搅拌混合。
4. 调节溶液的pH值至所需范围，一般为8.0左右。
5. 最后用去离子水稀释溶液，得到所需浓度的TBE电泳缓冲液。
四、TBE电泳缓冲液的作用1. 提供适当的离子强度和pH值，维持电泳系统的稳定性。
2. 保持DNA或RNA在电泳过程中的一定带电状态，使其能够在电场中迁移。
3. 提供足够的缓冲能力，抵消电泳过程中酸碱产生的变化，保持电泳系统的稳定性。
4. 在电泳过程中形成一个适当的离子环境，促使DNA或RNA分子发生准确的迁移。
五、TBE电泳缓冲液的注意事项1. 在配制过程中要严格按照配方比例和步骤进行，保证溶液的准确性和稳定性。
2. 注意缓冲液的pH值，过高或过低都会影响电泳结果。
3. 配制好的TBE缓冲液应密封保存，避免受到空气中的二氧化碳和杂质污染。
4. 在使用TBE缓冲液时，应根据实验需求进行稀释，避免浪费和过量使用。
六、TBE电泳缓冲液的优缺点1. 优点：TBE电泳缓冲液的成本相对较低，制备简单，能够提供较好的电泳条件和分离效果。
2. 缺点：TBE电泳缓冲液中含有乙酸，具有一定的刺激性和挥发性，使用时需注意安全防护。
常用缓冲液配置之欧阳与创编
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量： 1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于 1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
容至 1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量： 1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
3. 将溶液定容至 1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度： 1.5 M Tris-HCl 配制量： 1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于 1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至 1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至 5.23.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量： 1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
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北京雷根生物技术有限公司
Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE, RNase free)
产品简介：
Tris-硼酸电泳缓冲液简称TBE。
0.5×TBE工作液中含有45mM Tris-硼酸、1mM EDTA(pH8.0)。
TBE是非常常用的DNA电泳缓冲液。
一般情况下，DNA电泳常使用0.5×TBE工作液，Tris-乙酸电泳缓冲液的优点: 缓冲能力弱，适宜分离相对较小(小于2000bp)的DNA片段。
亦可以使用0.5～1×TBE工作液，该工作液缓冲能力相对较强。
本试剂是10倍浓缩的TBE，使用时需用DEPC处理水稀释为0.5×TBE后使用，常用于RNA电泳。
主要成分：主要由450mM Tris-硼酸，10mM EDTA、DEPC处理水等组成。
操作步骤（仅供参考）：
1、用DEPC处理水稀释到0.5×后使用。
注意事项：
1、10×TBE储存液不稳定，容易产生沉淀，建议采用5×TBE，因为5×TBE储存起来更稳定。
2、工作液使用0.5×TBE，亦可以使用0.5～1×TBE工作液，该工作液缓冲能力相对较强。
3、操作过程中，避免RNase污染。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关产品：
产品编号 产品名称
NA0015MOPS电泳缓冲液(1×,RNase free)
NA0021RNA凝胶加样缓冲液(6×)
NA0034Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE)。