切胶回收的步骤讲课稿
切胶回收的原理
切胶回收的原理咱来聊聊切胶回收这事儿。
这就像是从一堆宝藏里挑出咱想要的那一件宝贝，然后把它单独拿出来好好保存起来。
先说说凝胶电泳吧。
想象一下，各种大小的分子就像一群小伙伴在参加一场马拉松比赛，跑道就是琼脂糖凝胶。
那些小的分子啊，它们身子轻，跑起来就快，能在凝胶里跑得老远；而那些大的分子呢，就像背着重重行囊的人，跑得慢，没跑多远就被落下了。
这样一来，不同大小的分子就按照自己的速度在凝胶里拉开了距离，形成了一条条不同的条带。
这就好比是小伙伴们按照不同的速度在跑道上分散开来，各自在自己的位置上。
然后呢，咱就看到了那凝胶里的条条带带，这里面就有我们感兴趣的那部分。
这时候切胶回收就登场了。
就好像我们在那跑道上，看到了那个我们一直在找的小伙伴，然后把他所在的那一小段跑道给切下来。
那凝胶里的目标条带就像是藏着宝藏的那一小块地方。
那切下来的胶块里可都是宝贝啊。
可是怎么把这宝贝拿出来呢？这就涉及到切胶回收的核心原理啦。
有一种办法呢，是利用溶胶液。
这溶胶液就像是一个超级魔法溶剂。
把切下来的胶块放到溶胶液里，就像把那藏着宝贝的小盒子放到一个能打开它的魔法池子里。
溶胶液会把凝胶慢慢溶解掉，那些原本被困在凝胶里的DNA分子就被释放出来了。
这就好比是把宝贝从那个锁住它的小盒子里解救出来了。
还有一种情况呢，是和吸附有关的。
就像小磁石吸引小铁屑一样。
有些材料可以专门吸附DNA分子。
当把切下来的胶块处理后，那些DNA 分子就被吸附到特定的材料上了。
这时候其他的杂质就被留在一边了，就像把沙子和金子分开一样。
然后再通过一些特殊的溶液把吸附着的DNA 分子从材料上洗脱下来，这样就得到了比较纯净的我们想要的DNA分子啦。
在这个过程中，温度有时候也很关键。
就像不同的花朵需要不同的温度来生长一样。
合适的温度能让溶胶的过程更顺利，也能让吸附和洗脱的效果更好。
如果温度不合适，就像花儿在不合适的温度下长不好一样，切胶回收的效果可能就会大打折扣。
咱再从一个更形象的角度看。
切胶回收注意事项
切胶回收注意事项
以下是 6 条关于切胶回收注意事项：
1. 千万要选对工具啊！就像你去砍柴不能拿个小勺子一样，切胶得用合适的刀片啊。
比如你要是用个钝的不行的刀片去切，那能切得动吗？肯定不行呀！所以选择锋利的工具很重要，可别小瞧这个哦。
2. 切胶的时候可得细心点哟！这可不是开玩笑的，你想想，要是马马虎虎的，把需要的部分没切好或者切坏了，那不就白忙活啦！就好比搭积木，小心翼翼才能搭得稳当，对吧。
3. 做好防护措施呀！难道你不怕胶沾到手上或者其他地方吗？戴手套、穿实验服，这些都要准备好呀！不然万一沾到皮肤上，那多麻烦呀！
4. 操作环境要注意呀！你总不能在乱糟糟的地方切胶回收吧，就像你吃饭也不会在垃圾堆旁边吃呀。
找个干净整洁的地方，才能保证操作顺利呀。
5. 控制好力度啊！别太使劲了把胶都压坏了，也别太轻了切不下来。
就像骑自行车，太用力踩会累，太轻了又不走，得掌握好那个度。
6. 切完之后要妥善处理呀！别随手一扔就不管了。
就像你玩完玩具要收好一样，把切胶后的东西整理好，该放哪里放哪里，这样下次用起来也方便呀！
我觉得切胶回收一定要谨慎仔细，每个步骤都不能马虎，不然很可能前功尽弃呀！。
实验酶切胶回收和连接
NaI存在条件下，加热至55℃，含有DNA片段 的琼脂糖凝胶就会融化，然后可利用硅胶树脂 吸附DNA分子，从而得到纯洁的DNA片段。
硅胶树脂在高盐离子浓度下可以高效专一的吸 附DNA，通过离心可将DNA片段沉淀下来，在 碱性低盐浓度下其与DNA的结合能力会急剧降
操作步骤
1. 取一干净的1.5ml的离心管，称重，标记。
6. 重复步骤5一次。 7. 将Genclean柱放回收集管中，12000rpm ，1min，彻底去除
wash solution。 8. 将Genclean柱放到一干净的1.5ml的离心管中，参加30ml
Elution buffer,37 ℃放置2min, 12000rpm,1min.所得液体即目 的片段。 9. 取5ml目的片段，参加1ml 6×loading buffer，电泳鉴定。剩 余液体可直接用于后续试验或-20 ℃保存。
在我们今天的实验中，用到两种限制性酶分 别是HindⅢ和EcoRⅠ，这两种酶切割后产生 的片段都具有粘性末端，可以保证酶切产物 与载体正确的连接。
酶切体系
10×M : 2ml
HindⅢ : 1ml
EcoRⅠ: 1ml
ddH2O : 6ml
质 粒 ： 10ml
总体积 : 20ml
将酶切体系按顺序加好后放入已预热的37°C 的水浴锅中， 使反响体系在这个温度下进行酶切。 酶切2h后加2ml 10×loading buffer终止酶切反响，取全部的样品用于胶回收。
蛋白切胶回收步骤
蛋白切胶回收步骤
嘿，咱今儿就来说说蛋白切胶回收这档子事儿哈！
你想想看，这蛋白就像是一个个藏着宝贝的小盒子，咱得把它们从那一大块胶里给挑出来，这可不是个简单活儿呢！
首先啊，得把那含着蛋白的胶给找出来，这就好比在一堆杂物里找你心爱的小物件儿，得仔细着点儿呢！然后，给胶来个“美容”，把它切得整整齐齐的，可别毛毛躁躁的切坏了呀。
接着呢，就像挖宝藏一样，把带着蛋白的那一小块胶给挖出来，这可得小心，别把宝贝给弄丢咯。
把挖出来的胶放进小管子里，加点神奇的溶液，这就开始让蛋白从胶里慢慢跑出来啦。
这过程就好像是蛋白在胶里待久了，想出来透透气，咱就给它们创造个机会。
等它们跑出来一些了，就把管子放那儿，让它们好好地待着。
过了一会儿，再把管子拿出来晃晃，让蛋白和其他东西分离开来。
这就好像是把混在一起的糖果和石子儿给分开一样。
然后啊，把上面的液体吸出来，这里可得注意啦，别吸到不该吸的东西哦！吸出来的液体里可就有咱想要的蛋白啦。
哎呀，你说这蛋白切胶回收是不是挺有意思的。
就像一场小小的冒险，得细心、耐心，还得有点小技巧呢！
想想看，要是没做好这一步，那后面的实验不就都受影响啦？就好比盖房子，基础没打好，那房子能结实吗？所以啊，咱可得把这蛋白切胶回收给做好咯。
这就是蛋白切胶回收的步骤啦，虽然说起来简单，做起来可不容易呢！但只要咱认真对待，就一定能把蛋白好好地回收回来，为后面的实验打下坚实的基础呀！是不是很神奇呢？嘿嘿！。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
pcr切胶回收的步骤
pcr切胶回收的步骤
PCR切胶回收呀，这可是个很有趣的小实验呢。
先说说准备工作吧。
你得有已经跑过PCR并且经过琼脂糖凝胶电泳的胶块哦。
然后呢，把要用的工具都准备好，像干净的刀片啦，还有专门的切胶回收试剂盒。
开始切胶啦。
在紫外灯下看胶块的时候，就像寻宝一样呢。
找到你要的那条DNA 条带，然后用刀片小心翼翼地把它周围的胶切下来。
可别切太大块啦，不然会有好多杂质的。
切的时候就像在给小宝贝做精细的手术一样，要很小心哦。
切好胶之后，就按照试剂盒的说明来操作啦。
一般是把切下来的胶放到一个离心管里，然后加入一些溶液，让胶融化。
这时候你就看着胶慢慢变成液体，感觉就像魔法一样呢。
接着呢，要把融化后的液体加到吸附柱里。
这个吸附柱就像一个小卫士，专门把DNA吸附住，而那些杂质就被留在外面啦。
把液体加进去之后，离心一下，就像坐小过山车一样，让液体在离心力的作用下快速通过吸附柱。
然后呢，要清洗一下吸附柱。
这一步就像是给小卫士洗个澡，把它身上可能残留的杂质都洗干净。
再离心一下，把清洗的液体甩掉。
最后就是把我们想要的DNA从吸附柱上洗脱下来啦。
加入洗脱液，再离心，这个时候我们的DNA就乖乖地跑到洗脱液里啦。
就像把小宝贝从保护它的小房子里接出来一样。
这样，PCR切胶回收就完成啦。
虽然过程有点小复杂，但是只要按照步骤来，就可以得到我们想要的纯净的DNA啦。
每次做这个实验都感觉像是在和小小的DNA分子玩一场有趣的游戏呢。
胶回收方法全攻略
胶回收方法全攻略胶回收方法全攻略说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。
确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。
虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途，不同价钱的快速凝胶回收试剂盒，一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟，操作也大大简化，胶回收就变成“小菜一碟”了。
然而，从bbs逛上一圈下来，发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而烦恼。
到底是什么导致了实验新手，甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等，为大家搜罗各种产品和方法的优缺点，注意事项，做一个胶回收全攻略篇。
一、胶回收的关键参数胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。
要想做好胶回收，无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂，最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度)，回收效率，操作方便(速度)，柱子的载量等等。
回收产物质量：回收产物的质量主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
从凝胶中回收DNA片断，产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。
对于大片断DNA回收，质量还包括了产物的完整与否，如果机械剪切力使得回收产物大小不一致，后果决不是你希望碰见的。
而对于较小片断回收，质量其实还包括了回收产物的浓度。
因为产物浓度太小，对后继实验同样也有影响，比如连接、标记实验等等就很不爽，往往不得不再浓缩一次，增加了操作的复杂性。
此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
切胶回收步骤
切胶回收步骤
嘿，咱今儿就来说说切胶回收这档子事儿！
你想想看啊，那凝胶就像是一个藏着宝贝的神秘盒子，咱得小心翼
翼地把里面咱想要的那部分给找出来。
首先呢，咱得把那含有咱目标片段的凝胶给找出来，这就好比在一
堆玩具里找出你最喜欢的那个小汽车，得看准咯！然后呢，用那干净
又锋利的刀片，轻轻地把那一块儿给切下来，可别太用力啦，不然把
宝贝给弄坏喽。
这就跟切蛋糕似的，得恰到好处。
切下来之后，可不是直接就完事儿了哦。
接下来要把这小块凝胶放
到一个专门的管子里。
这管子就像是宝贝的新家，舒舒服服地待在里面。
然后呢，就要加一些专门的溶液进去啦，这些溶液就像是给宝贝洗
个舒服的澡，让它能更好地被我们得到。
再之后，就是把这个管子放到一个合适的温度下，让一切反应好好
地进行。
这就好像是让宝贝在一个温暖的房间里休息，慢慢变得更好。
等反应得差不多了，就该离心啦！这离心就像是把宝贝身上多余的
东西甩掉，让它变得更纯粹。
最后，把那离心出来的液体收集起来，这里面可就有咱心心念念的目标片段啦！这感觉，就像是终于找到了藏在深处的宝藏一样，开心得不行！
你说这切胶回收是不是挺有趣的呀？虽然过程有点小麻烦，但一想到能得到自己想要的东西，那一切都值得啦！就像你为了吃到最喜欢的糖果，就算要跑很远的路去买，你也会很乐意呀！所以呀，别嫌麻烦，好好地去做切胶回收，说不定就能有大收获呢！。
切胶回收DNA
切胶回收DNA（博迈德琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒DR01）
**WB液使用前加入指定量的无水乙醇；
**尽量使胶中的缓冲液减少。
当PH值《7.5时，吸附回收DNA效率最高，正常情况小，溶胶液依旧保持黄色时，说明PH值正常，如果变成橘红或淡紫色说明PH值偏高，可在胶充分溶解时，加入3M醋酸钠5-10ul
实验步骤：
1.40ulPCR反应液琼脂糖凝胶电泳。
在紫外光下切目的片段。
尽量减少胶的体积；
2.将切下的胶放入1.5ml离心管中，称重；
3.加入3倍体积的溶胶液，如果胶的浓度大于2%，则应加入6倍溶胶液DD;
4.56度水浴10分钟至胶完全溶解，2-3分钟涡旋震荡一次加速溶解；
5.将溶解液EC吸附柱中，吸附柱放入收集管中，室温放置1min，12000rpm离心30-60sec，弃收集管中离心液；
6.加入500ul漂洗液WB，12000rpm离心30sec，弃离心液；
7.重复6
8.将吸附柱EC放入空离心管中，12000rpm离心2min，尽量出去漂洗液，以免残留乙醇抑制下游反应；
9.将EC吸附柱放入一个干净的离心管中，在吸附柱中间部位加入50ul洗脱缓冲液EB，（使用前在65-70度水浴中加热效果更好），室温放置2min，12000rpm离心1min，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1min；
10.取2ul离心液电泳，估计DNA量（250bp marker：5ul，1000bp的相当于150ng，余相当于50ng）。
切胶回收的步骤审批稿
切胶回收的步骤
YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液， 55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道；
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
10．重复8，9。
切胶回收一代测序
切胶回收一代测序全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：切胶回收一代测序是一种高效的DNA测序技术，它可以帮助科研人员快速准确地获取DNA序列信息。
这种技术在生命科学研究中发挥着重要的作用，为研究人员提供了丰富的研究数据，促进了科学研究的进展。
切胶回收一代测序的原理是通过将DNA样本分解成小片段，然后通过高通量测序技术对这些小片段进行测序。
这种技术的优势在于可以同时测序多个DNA片段，高效地获取DNA序列信息。
在实际应用中，科研人员通常会使用切胶回收一代测序技术来对某一特定区域的DNA进行测序，以获取该区域的详细序列信息。
切胶回收一代测序技术的工作流程一般包括以下几个步骤：DNA 样本提取、DNA片段化、测序文库构建、高通量测序和数据分析。
科研人员需要从细胞或组织中提取DNA样本，然后将DNA样本分解成小片段。
接着，他们会将这些DNA片段连接到测序文库中，然后通过高通量测序技术对文库中的DNA片段进行测序。
科研人员需要对测序得到的数据进行分析，以获取DNA序列信息。
切胶回收一代测序技术在生命科学研究中有着广泛的应用，可以用于基因组学、转录组学、表观基因组学等研究领域。
在基因组学研究中，科研人员常常使用切胶回收一代测序技术来对生物的整个基因组进行测序，以解析基因组的结构和功能。
在转录组学研究中，科研人员可以利用切胶回收一代测序技术来对生物的mRNA进行测序，以了解其基因表达的特点。
在表观基因组学研究中，科研人员可以利用切胶回收一代测序技术来对生物的表观修饰信息进行测序，以研究表观遗传学的调控机制。
切胶回收一代测序技术的应用还不仅限于基础研究领域，它也在临床医学中得到了广泛的应用。
临床医学研究人员可以利用切胶回收一代测序技术来对患者的基因组进行测序，以帮助医生做出准确的诊断和治疗方案。
通过对患者基因组的测序，医生可以了解患者的遗传病风险，指导临床诊断和治疗。
第二篇示例：随着科技的不断发展，基因测序技术已经成为现代生物学领域中的重要工具。
切胶回收一代测序-概述说明以及解释
切胶回收一代测序-概述说明以及解释1.引言切胶回收一代测序是一种重要的DNA测序技术方法，通过使用凝胶电泳将DNA断裂成片段，然后将这些片段进行回收和测序，以获取DNA 序列信息。
在生物学和医学领域，这种技术有着广泛的应用和重要意义。
本文将探讨切胶回收一代测序的原理、应用和优势，以期为读者提供更深入的了解。
请编写文章1.1 概述部分的内容1.2 文章结构：本文将首先介绍切胶回收一代测序的原理，包括其基本理论和技术流程。
接着将详细探讨切胶回收一代测序在生物学研究中的应用，包括基因组测序、转录组测序等领域。
最后，将总结切胶回收一代测序的优势和不足之处，并展望其在未来的发展前景。
整个结构将沿着从原理到应用再到评估的逻辑线索展开，帮助读者全面了解切胶回收一代测序技术的重要性和价值。
1.3 目的：切胶回收一代测序是一种重要的基因组研究技术，其目的在于通过高效的DNA片段回收和测序分析，实现对特定基因或基因组区域的高质量测序。
通过对目标DNA进行片段化、获取、测序和分析，可以深入了解基因组的结构和功能，探索遗传变异与疾病关联，以及揭示生物进化和种群遗传学等科学问题。
因此，切胶回收一代测序的目的是为了解决基因组研究中的重要问题，并促进生命科学领域的发展和进步。
2.正文2.1 切胶回收一代测序的原理切胶回收一代测序的原理是指通过将DNA样品放置在凝胶片上，然后用特定的酶切割DNA链，将DNA片段分离出来。
这些DNA片段会被电泳运移到凝胶片上的特定位置，形成特定的DNA带。
接着，利用紫外线照射，将特定的DNA带切下来。
这些切割下来的DNA片段被回收并用于测序。
在这个过程中，通过对DNA片段的大小和序列进行测定，可以得到准确的DNA序列信息。
这种方法可以用于研究基因组结构、寻找特定基因序列、检测基因突变等方面的研究。
切胶回收一代测序的原理简单明了，操作方便，并且具有较高的准确性和可靠性，因此在生物学研究和临床诊断中被广泛应用。
胶回收的方法、注意事项以及实验步骤
胶回收的方法、注意事项以及实验步骤DNA片段的分离与回收是基因工程操作中一项重要的技术,如可收集特定酶切片段用于基因克隆或是制备探针,回收PCR产物用于再次鉴定等。
1 各类常用回收方法由于分离方法众多,且各种不同的方法可能同时依据多项原理,所以只能粗略地将各种方法分成五大类:电泳法,收集孔法,机械破碎法,溶(熔)胶法与酶处理法:一,电泳法根据凝胶割否分透析袋法与流动电洗脱法(割胶),滤纸-透析膜法与DEAE膜法(不割胶).(1)透析袋法该方法可回收大于5kb的片段,缺点是操作麻烦并易造成DNA酶的污染.(2)流动电洗脱法该方法回收片段大小为4～50kb,且回收效率高达94～100%,极端条件下可回收大至550kb的片段.缺点是操作繁琐,而且为了取得较高的回收率,需特定的流动电洗脱槽.(3)滤纸-透析膜法回收率平均达70%左右,不需割胶,操作相对简单,但实验中需将滤纸上的DNA洗脱,也较繁琐,也不易控制.(4)滤纸-透析膜法此方法用于回收小片段,一般小于5kb的片段回收效率较高,可达70%以上;对于大片段(>15kb)则难以从DEAE膜上洗脱下.二,收集孔法(1)蔗糖法回收小片段效率较高,564bp的PCR产物带回收效率高达97.6%,并且回收中能将较宽的条带浓缩于收集孔中,但回收中制作收集孔较麻烦,并且收集孔中要加入蔗糖,故获得的DNA样品不能直接用于后续实验.(2)羟基磷灰石法该方法回收效率也较高,不利之处与上述方法相同,获得的DNA需再纯化,操作也较繁琐.三,机械破碎法指用机械力将凝胶压碎后再行回收DNA片段,有冻挤法,冻融法,压碎浸泡法,(单层)滤膜过滤法及双层(亲和)膜过滤法.(1)冻挤法将胶条割下置于塞有玻璃棉的吸嘴或是管底刺有小孔的eppendorf管中,冰冻30min后全速离心5min,收集清液,再经酚抽提,乙醇沉淀等纯化浓缩处理(也可直接沉淀).其基本原理理是利用离心力将凝胶中原有的液体挤出,同时也带出胶中的DNA.从胶浓度为1%琼脂糖中回收650bp,1.1kb,2.0kb,4.5kb的片段时,回收率分别为90%,74%,56%,30%.这是因为大分子DNA更难于被胶中的缓冲液带出,所以此法只适用于回收较小的DNA片段.(2)冻融法割下的胶条放在eppendorf管中,将之捣碎并放于-80℃冰冻5min,取出后迅速放置于37℃保温10min,如此反复3次能使DNA从胶中游离出来,离心获得上清中即含有目的DNA,可通过沉淀浓缩获得高浓度.对一般的DNA片段回收效率在60～80%.操作简单,并不需特殊设备.(3)压碎浸泡法又称醋酸铵法,操作较费时,回收效率较低,一般改良的方法是在冻挤法操作中,加入一定的水并浸泡10min,增加DNA的回收率.四,溶胶法根据物理或化学溶胶可分为低融点法(物理熔胶)与NaI,KI,NaClO4溶胶法(化学溶胶).(1)低融点胶法采用特殊的低融点凝胶,该胶在65℃即溶化,实验中是先灌制正常的凝胶,然后用低融点胶取代其中的部分(即可节约低融点凝胶用量,也能保证电泳中整块凝胶的完整性.)电泳完成后割下的凝胶可于65℃下保温溶解,后直接用于酶切,连接,DNA标记的实验.操作方便简单,但需特殊的低融点凝胶,成本较高,且回收得到的样品浓度较低.(2)化学融胶法琼脂糖能溶解于一些盐溶液中(NaI,KI,NaClO4),然后可用特殊的纯化柱将DNA样品溶液纯化,现在广泛使用的凝胶电泳中DNA片段回收试剂盒基本采用了此中回收原理,能在短时间内获得目的DNA片段,成本也较低.五,酶处理法对于大片段DNA的回收,象酵母人工染色体的克隆实验中,克隆片段可大到2 000kb,一般采用此方法.利用琼脂糖酶降解琼脂糖,能较温和的裂解琼脂糖,最终成功回收DNA片段.2 DNA回收中的注意事项除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点:(1)防止抽提过程中污染DNA酶与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末端时也会导致严重的连接困难.(2)紫外照射选择长波段回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射.(3)实验操作要轻柔特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离心管等操作均应缓慢,轻柔.综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础.3 实验步骤一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例)(1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率)(2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN)(3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀.(4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒.(5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟.(6)重复步骤5一次.(7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm离心2分钟.(8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放置2分钟.(9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA片段.二、冻融,挤压回收法(1)用手术刀在DNA紫外检测仪下切割下含有所要DNA片段的凝胶块置于Eppendorf管中,甩至管底,-20℃冻存30min,(2)取出后用牙签将凝胶块尽量捣碎,剪去管上部,用烧红的针头在管底扎几个微孔,孔径越细越好.(3)将管套入另一个Eppendorf管中,常温下,15 000rpm离心10分钟.(4)将上清液吸到收集管中,向沉淀中加入100μl重蒸水.(5)重复步骤(2),(3),(4)两遍(如图所示).(6)收集的上清于15 000rpm,4℃离心20分钟,吸取上清液,补足400μl.(7)收集的上清液加入0.1V 的KAc(pH=5.5,3M)和2.0～2.5V 的无水乙醇,充分混匀后-20℃放置30min,取出15 000rpm,4℃离心30min.(8)弃上清,加入400μl 70%的乙醇,15 000rpm,4℃离心5min.(9)弃上清并倒扣3~5min,然后37℃烘干(30min左右即可).(10)烘干沉淀可用30ml ddH2O溶解,待用.。
废旧橡胶回收工艺
废旧橡胶回收工艺一、切胶经过分类和去除非橡胶成分的废旧橡胶，由于大小长短不一，厚薄不均，一般要先将其切成一定规格大小，以便于后续的水洗和粉碎。
因为废旧橡胶太大，不仅影响下一步的洗涤质量，而且如果太大的胶块直接投人粉碎，会严重影响粉碎设备的安全。
切胶设备有曲辊切胶机和回转式切胶机。
中小型胶粉生产厂一般是在曲辊切胶机中进行的。
切胶的具体要求是:胎面胶宽在lOcm,厚在3cm以下的，切割长度不大于25cm;胎面胶宽在lOc:m，厚在3cm以上的，切割长度不大于15cm;帘布层胶宽度在lOcm，厚度在3cm以下的，切胶长度不大于25cm;水胎、胶带、胶管等长条废胶，厚度在2cm以下，切胶长度要求应不大于30cm;胶鞋类和零星模压小尺寸杂品等可不切胶;其他的废旧橡胶应视具体情况确定切胶的尺寸大小。
目前，已有一些大型液压剪切机面市，可放宽切胶尺寸，并连胎圈一起切断，而后用液压胎圈拉丝机将胎圈上的半钢丝拉掉。
切胶时，使用剪切机应注意安全、防止发生事故。
而大型胶粉生产厂应采用回转式切胶机，其结构见图2-30。
二、洗涤废旧橡胶生产胶粉的主要原料来源是废轮胎和胶鞋，这两种产品在使用过程中长期接触地面，夹带许多泥沙杂质，如不清除，在粉碎过程，「，将造成尘土飞扬，污染环境，影响人体健康。
而且这些杂质若带人生产胶粉‘卜，势必影响胶粉的质量。
因此，废旧橡胶在粉碎前应尽量除去这些夹带在废旧橡胶中的泥沙杂质，做到文明生产和提高产品质量。
废旧橡胶洗涤在我国采用的是一种锥形圆筒转鼓洗涤机。
废旧橡胶洗涤是将切割好的废旧橡胶定量定时地投人洗涤机中，投料要均匀，水量要充足，洗涤后的废旧橡胶要达到基本无泥沙杂质，并保持清洁、干燥后堆放于车间内备用。
由于水分对胶粉的应用性能影响较大，故洗涤后废旧牌}}r干慢相当重要.应干燥至水分在1%以下，以便于粉碎，保证胶粉质量。
切胶与洗涤一般是连在一起的，中小型胶粉厂切胶机的基本参数是:曲辊切胶机刀口长度600mm，开口高度320mm，刀速为“次/min(可调)，电动机型号为JO-62-6，其功率为7kW，转速3600r/min;洗涤机为锥形转鼓式(连续式)，洗涤鼓直径:d为600mm,D为720mm，洗涤鼓长度3500mm，电动机型号为JO一52一6，其功率4.SkW，转速960r/min这种切胶洗涤机生产能力为800一1000k岁ho而大型胶粉厂可采用回转式切胶机及大规格洗涤机，其主要性能参数见表2一3。
KCL染色切胶回收
KCL染色切胶回收
1．蛋白粗提掖进行SDS-PAGE；
2．预冷（预先放在4℃冰箱中）0.25M KCl染色，检测蛋白条带（这种染色方法灵敏度比考马斯亮蓝染色低很多）；
3．用一干净刀片切下蛋白所在凝胶条带，将凝胶条在蒸馏水中浸泡，使KCl离开胶条，直至无色透明（5-10min，条带变为无色）；
4．将无色透明的胶条从蒸馏水中取出，装入已准备好的1.5ml离心管中，用镊子夹碎（或用刀片切碎），然后在管里加入所需溶解蛋白的溶液，比如蒸馏水、生理盐水或PBS；
5．将离心管放入4℃冰箱中过夜，第二天吸出管中的液体（吸之前振荡一下），至少50%的蛋白可以从凝胶中析出，再加入蒸馏水抽提两次，就可以将胶条中绝大部分蛋白提出；
6．抽提蛋白冻干浓缩后，可用考马斯亮蓝染色法测蛋白浓度，可以用SDS-PAGE 验证纯度，看是否有杂带；提取蛋白样品≥5mg，可供免疫一只兔子用。
胶回收 PPT
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大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安静
2.1.2 玻璃奶/纯化填料法
玻璃奶/纯化 填料法
➢ 利用特殊玻璃微珠吸附DNA 的特性，根据每次回收实验 时预期回收量来调整纯化填 料的量，使得实验不受限于 柱子的载量，也不会造成浪 费。
➢ 适合各种不同大小的片断， 特别是大片断的回收。
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3.3 设备
离心机
水浴锅
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3.3 设备
凝胶成像系统
水平电泳仪
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目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
1.实验流程 2.注意事项
4.1 实验流程
4.1.1 柱平衡步骤
1
2
向吸附柱CA2柱 加入500μL 平衡液BL
12000rpm, 离心1min
胶回收
目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
1.胶回收的概念 2.胶回收的原理
1.1 胶回收概念
➢ 从电泳后的凝胶中回收目的DNA的过程，其目的 是将目标DNA重新利用。
至胶块完全溶解。
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4.1 实验流程
4.1.4 吸附DNA
1
2
将所得溶液加入 一个吸附柱CA2中，
室温放置2min
12000rpm, 离心30~60sec
3
弃废液，将吸附柱 重新放回收集管中
注：吸附柱容积为800μL，若样品体积大于800μL可分批加入。
切胶回收的步骤教学教材
切胶回收的步骤
精品文档
切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液， 55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道；
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
10．重复8，9
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胶回收
质粒提取 -E.Z.N.A® Plasmi
• 在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中，细菌的线性大分子 量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA 虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性 并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体 DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的 作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。 通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、 RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，然后用酚、 氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。
转化步骤
• 1. 于超净台中取连接产物10µl与100µl大肠杆菌感受态细胞 混合，置冰浴中30分钟。 • 2. 42℃热休克90秒，置冰浴中3-5分钟。 • 3. 于超净台中加LB培养基900µl，37℃水浴1小时。 • 4. 4000rpm离心3分钟，弃上清，取残余液体重悬细菌。 • 4. 取l上述混合物均匀涂布于含100µg/ml氨苄青霉素的LB琼 脂平板上。 • 5. 37℃孵箱培养12~16小时，可见长出单菌落。 • 6. 挑选单菌落，使用PCR法确认T载体中插入片段的长度 大小，或提质粒酶切、测序鉴定。
CaCl2转化原理
• 正在生长的大肠杆菌在0°C下加入到低渗的冰冷 的CaCl2溶液中，便会造成细胞膨胀成球（感受 态细胞）。 • 感受态细胞与外源质粒DNA形成一种黏着在细胞 表面上的对DNA酶抗性的羟基钙磷酸复合物。 • 42°C下作短暂的热刺激期间，这种复合物便会 被细胞吸收。 • 进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗 传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可 筛选出转化子。
酶切鉴定
• 1. 建立酶切反应体系： 建立酶切反应体系： DNA 5.0µl（约1µg） 10×EcoRI buffer 1.0µl EcoRI 0.5µl ddH2O 3.5µl Total 10µl • 2. 37°C酶切2h。 • 3. 电泳检测
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切胶回收的步骤
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切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液， 55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道；
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
10．重复8，9
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