琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法
实验十一DNA凝胶回收
二、实验目的
1. 从含有目的基因片段凝胶块上回收 DNA。
2.回收目的基因片段为下步连接反应 作准备
三、实验仪器、材料和试剂
仪器及耗材：天平、台式离心机、微量移液器及 吸头、EP管。
材
料： 含有目的基因酶切产物的凝胶块
试
剂： AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒 ；无
水ห้องสมุดไป่ตู้醇；
四、实验步骤
2.低熔点琼脂糖
传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电 泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传 统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法现在用的人已 经不多了。
以前经费紧张，低熔点琼脂糖贵，比较经济方法就是 常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔 点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔 点琼脂糖区域再切出来，这样就非常节约了。
1.在紫外灯下切下含有目的 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽 凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录 1.5 ml 离 心管重量） ，该重量作为一个凝胶体积（如 100 mg=100 μl 体积） 。
2. 加入 3倍凝胶体积的 Buffer DE-A，混合均匀后于 75°C加 热（低熔点琼脂糖凝胶于 40°C加热） ，间断混合（每 23 min） ，直至凝胶块完全熔化（约 6-8 min） 。 * Buffer DE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮 助观察凝胶是否完全熔化。
3. 加 0.5倍Buffer DE-A 体积的 Buffer DE-B，混合均匀。当分 离的 DNA 片段小于 400bp 时，需再加入 1个凝胶体积的 异丙醇。
加Buffer DE-B后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色 溶液。
一、实验原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理首先，将含有目标DNA片段的琼脂糖凝胶切割出来。
这可以通过电泳将DNA片段从DNA混合物中分离出来，然后在紫外灯下观察到DNA片段的迁移带。
然后，将切割的琼脂糖凝胶用试剂盒提供的缓冲液进行均质化处理。
均质化后的琼脂糖凝胶中含有目标DNA片段。
接下来，使用离心机将均质化后的琼脂糖凝胶离心。
离心的目的是将琼脂糖凝胶上的DNA片段分离出来。
DNA片段会沉积到离心管底部的沉淀中。
上清液中则只含有琼脂糖凝胶、缓冲液和其他杂质。
然后，将离心管中的上清液去除。
去除上清液的目的是除去琼脂糖凝胶的残余和其他杂质，以便纯化DNA片段。
最后，向离心管中加入酶切缓冲液和蛋白酶。
酶切缓冲液包含酶切DNA片段所需的盐和缓冲成分，以及一些防止核酸降解的物质。
蛋白酶则会降解琼脂糖和与其结合的蛋白质。
在将酶切缓冲液和蛋白酶加入后，离心管需要在适当的温度下进行酶切反应。
酶切反应的目的是分解凝胶中的琼脂糖和与其结合的蛋白质，从而释放出目标DNA片段。
在酶切反应完成后，离心管需要再次进行离心，以将琼脂糖和其他残留物沉淀到离心管底部。
上清液中则含有纯化后的DNA片段。
最后，将离心管中的上清液转移至干燥消化DNA纯化膜（试剂盒中提供），并根据试剂盒的说明进行后续的DNA回收操作。
根据不同试剂盒的要求，DNA可以通过洗涤、低温离心或其他方法进行最终的回收。
总的来说，胶回收DNA试剂盒的原理是通过离心法和蛋白酶酶解法将凝胶上的目标DNA片段回收，以获得纯化后的DNA样品。
这一方法简单有效，可以应用于分子生物学和生物医学研究中的DNA分析和操作。
实验十 DNA 片段从凝胶中回收
DNA浓缩，去盐及去除杂质 浓缩， 浓缩
加入3倍量的碘化钠溶液于样品DNA溶液中（若 DNA为固态，则先将之溶于适量水或TE中，再加 3倍体积的碘化钠溶液）。 加20ul或更多的“基因纯”试剂（每ul该试剂可 20ul ul 吸附0.3ugDNA，操作者可根据这一指标自行决 定“基因纯”试剂的用量，但不应少于10ul）。 以下步骤与“从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段” 中步骤d到j相同。
从凝胶中分离回收ＤＮＡ的方法
现在常用的技术有： 电洗脱法 低熔点琼脂糖凝胶法 ＤＥＡＥ滤膜插片法等 其中电洗脱法，经济节省，操作方便， 对Ｄ ＮＡ的回收效果好。
低熔点琼脂糖凝胶法
65oC琼脂糖凝胶熔点 低熔点琼脂糖凝胶 37oC 液体
ＤＥＡＥ滤膜插片法
High efficient DNA high quality for microinjection <5kb fragment 100ng DNA fragment 10mmol/L EDTA(pH8.0) 5 minutes 0.5 mol/L NaOH 5 minutes 低盐缓冲液50mM/LTris .Cl 0.15M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0) 高盐缓冲液50mM/LTris .Cl 1M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)
１３．12000g，4℃下离心１０分钟，得ＤＮＡ沉 淀。 １４．弃上清，加入７０％乙醇洗涤２次后弃干乙 醇。 １５．加入５０µl ＴＥ溶解ＤＮＡ。 １６．取１０µl ＤＮＡ溶液加入2µl Loading buffer 于０．８％琼脂糖上， ４０伏电泳，３小时。 １７．在紫外透射仪上观察结果。 １８．测定ＤＮＡ溶液OD260,OD280值。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳1.原理琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
琼脂糖凝胶具备网络结构，物质分子通过时会受阻力，大分子物质在汹涌时受的阻力小，因此在凝胶电泳中，磁铁颗粒的拆分不仅依赖于天量电荷的性质和数量，而且还依赖于分子大小，这就大大提高了辨别能力。
但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广为应用于核酸的研究中。
蛋白质和核酸会根据ph不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。
电泳缓冲液的ph在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。
常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的dna片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。
普通琼脂糖凝胶分离dna的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的dna片段。
dna分子在琼脂糖凝胶中泳动时存有电荷效应和分子筛效应。
dna分子在低于等电点的ph溶液中带负电荷，在电场中向负极移动。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链dna几乎具备等量的净电荷，因此它们能够以同样的速率向负极方向移动。
2操作方式流程准备干净的配胶板和电泳槽琼脂糖凝胶电泳：水平电泳注意dna酶污染的仪器可能会降解dna，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。
(1)电泳方法1一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大dna链应该使用脉冲凝胶电泳。
注意巨大的dna链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
(2)凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2%之间，低浓度的用以展开大片段核酸的电泳，高浓度的用以展开大片段分析。
低浓度胶坚硬，小心操作方式和采用质量不好的琼脂糖就是解决办法。
实验七 琼脂糖凝胶中dna片段的回收
实验七琼脂糖凝胶中DNA片段的回收一．原理从琼脂糖凝胶中回收DNA片段．可得到大小一致的DNA片段。
有多种方法可用于琼脂糖凝胶中DNA片段的回收。
例如低融点琼脂糖法、洗脱法等。
本实验方法是先使凝胶被NaI溶解，然后DNA与玻璃粉结合，再从玻璃粉中洗脱出DNA片段。
二．方法1．在琼脂糖凝胶小电泳分离DNA片段，当DNA片段完全分开后，停止电泳。
2．在长波长紫外灯下观察凝胶，切下含所需的琼脂糖部分。
将胶放人预称重的微离心管中。
3．称含凝胶的离心管重量，每0.1g凝胶加200μl NaI溶液。
4．于50℃温育微离心管，每5min颠倒几次离心管混匀离心管，直到琼脂糖完全融解。
5. 每μg DNA加入5μl玻璃粉悬液。
轻轻颠倒使之混匀，于冰上放置10min，使DNA结合在玻璃粉上。
6．于室温离心5秒，收集结合有DNA的玻璃粉。
7．倒掉上清。
加700μl -20℃预冷的清洗缓冲液，轻轻地抽吸，使玻璃粉重悬浮。
冰上放置5min。
8．重复第6与7步两次，于室温离心10秒，使玻璃粉沉淀下来。
倒掉上清，重复离心，小心除去全部残存液体。
9．加入30～50μ1 TE，轻轻吹打使玻璃粉重悬浮。
于50℃温育10min，将DNA洗脱下来。
10．于室温离心l0秒，使玻璃粉沉淀下来。
将上清转移到另一管中。
小心，不要吸人玻璃粉，因为它可抑制许多酶的活性。
三．试剂1.玻璃粉(1)取30g玻璃粉（Sigma 325目二氧化硅）悬于200ml蒸馏水的烧杯中。
搅拌混匀后，静置9min。
(2)将上清转移到离心管中．于6000⨯g离心10min，沉淀玻璃粉。
(3)倒掉上清，将玻璃粉重悬于50ml 25％硝酸中，室温放置过夜。
(4)于6000⨯g沉淀玻璃，用无菌双蒸水洗涤，沉淀玻璃粉4一6次，直到pH值至中性。
(5)用无菌水重悬沉淀，配成10％的浆液。
(6)将此浆液分装成0.1ml一管．贮存于-70℃。
待用的样品呵贮存于-20℃或4⨯。
2．NaI溶液NaI 90.8gNa2SO3 15gddH2O至 100ml3．乙醇清洗液成分为：100mmol／L NaCIlmmol／L DETA，pH8．O10mmol／L Tris—HLc，pH7.550％乙醇四．说明1．本方法琼脂糖凝胶电泳缓冲液只能使用TAE，回收的DNA片段应在0.8～6kb之中。
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
从琼脂糖电泳凝胶中回收dna的几种简便方法
从琼脂糖电泳凝胶中回收dna的几种简便方法1、离心法：琼脂糖电泳回收 DNA 的最常用方法是使用离心法。
使用离心法可以有效地将终端的 DNA 从被琼脂糖共析的蛋白质中取出。
离心法能有效地将含有 DNA 的细胞和细胞渣分离开来。
使用离心机将DNA 扣离出来时，要确保转速足够慢，以免 DNA 粘在管壁上造成损失。
2、萃取法：萃取法通常应用于对密集的 DNA 示踪膜，这是因为此时DNA 的分析效果较好。
此外，萃取法还能够有效地将 DNA 从培养液中取出，并将浓缩液回收到原始膜中，以简化磁珠清洗和萃取物的溶解程序。
此外，也可以使用此方法进行 DNA 的脱除。
3、滴管抽提法：滴管抽提法是一种有效的自动化方法，用于回收从示踪膜中抽提出的 DNA。
此方法可以以有效的速度抽提出溶液中的 DNA，而且每次抽提都可以精确控制浓度，以避免 DNA 丢失。
使用滴管抽提法可以将 DNA 加入到 T-tubes 中，再将其冲洗，并将 DNA 从 T-tube中取出来。
4、超声消解：使用超声波可以将 DNA 从细胞渣中有效地冲解出来。
使用超声技术可以快速准确地提取细胞渣样品中的 DNA，而无需消耗大量的时间和钱。
此外，超声波提取技术具有成本低、时间短、提取收率高和简便操作等优点，特别适用于大批量和连续提取的技术。
5、四环素：四环素是一种能够定向处理 DNA 的有机化合物，其能有效地将DNA 从琼脂糖电泳凝胶上取出来，是DNA 的一种有效抽提剂。
四环素可以通过在 DNA 上形成“饼干层”，以形成介质层从而形成稳定的 DNA 呈平稳状态，从而彻底沉淀 DNA 杂质物质。
四环素可以将DNA 与蛋白质、酶、胆固醇等混合物清除，paramers，DNA 核苷酸和其他损害手性的添加剂；此外，它还可以去除其他 DNA 杂质，被证明是一种有效的 DNA 抽提剂。
PCR产物胶回收实验
PCR产物胶回收实验引言：PCR（聚合酶链式反应）是一种用于扩增DNA片段的常用技术。
在PCR实验中，扩增产物通常需要从琼脂糖凝胶上回收和纯化，以便进一步的分析和应用。
本文将介绍一种PCR产物胶回收的实验方法。
实验材料：1. 扩增产物：经过PCR扩增得到的DNA片段。
2. 琼脂糖凝胶：用于扩增产物分离和纯化。
3. 胶回收缓冲液：用于胶回收的缓冲液。
4. 真空浓缩仪：用于回收DNA片段。
5. 无菌纯水：用于制备实验溶液。
6. DNA电泳仪：用于检测和分析PCR产物。
实验步骤：1. 准备琼脂糖凝胶：a. 根据实验需要，制备适合的琼脂糖凝胶。
b. 加入适量的琼脂糖凝胶染料（如安全染料）。
2. 进行PCR扩增：a. 根据所需扩增片段的序列，设计引物，并合成引物。
b. 准备PCR反应体系，包括DNA模板、引物、Taq DNA聚合酶等。
c. 进行PCR扩增反应。
3. 分析PCR产物：a. 用电泳法将PCR产物与DNA标准品一同进行电泳。
b. 根据需要，记录PCR产物的迁移距离和片段大小。
4. 准备胶回收缓冲液：a. 根据实验所需，制备合适的胶回收缓冲液。
5. 胶回收：a. 使用刮胶刀将PCR产物切下，放入离心管中。
b. 添加足够的胶回收缓冲液，使产物完全浸没其中。
c. 低温热激活离心管以使产物与缓冲液充分混合。
d. 放入离心机中离心，以使产物完全沉积到离心管底部。
6. 剔除上清：a. 使用吸走器小心地吸取上清，避免吸取产物。
b. 检查离心管底部是否完全干燥，如有残余液体则继续吸取。
7. 回收DNA片段：a. 加入适量的无菌纯水，以溶解和洗涤DNA片段。
b. 用手轻轻摇晃离心管，使DNA片段溶于水中。
c. 使用真空浓缩仪，将溶解的DNA片段浓缩至所需浓度。
8. 分析纯化后的PCR产物：a. 用电泳法将纯化后的PCR产物与DNA标准品一同进行电泳。
b. 检查PCR产物的迁移距离并与之前的分析结果进行比较。
结论：通过PCR产物胶回收实验，我们成功地从琼脂糖凝胶中回收和纯化了PCR扩增的DNA片段。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理胶回收DNA试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具，用于从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的方法。
其原理主要基于琼脂糖凝胶电泳的分离特性和DNA与硅胶膜亲和吸附的原理。
下面将详细介绍胶回收DNA试剂盒的原理和方法。
1.原理：1.1琼脂糖凝胶电泳分离：首先，将DNA样品与琼脂糖混合并加热使其溶解后，将混合物加入琼脂糖凝胶槽中，随后进行电泳。
由于琼脂糖具有分子筛的特性，DNA分子根据大小被分离在凝胶中的不同位置。
1.2硅胶膜吸附：电泳结束后，将琼脂糖凝胶取出，然后将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
由于硅胶膜具有强烈的亲和吸附性，它能够有效地吸附DNA分子。
1.3洗脱纯化：在硅胶膜上吸附的DNA分子可以通过洗脱的方式从硅胶膜上释放出来。
一般情况下，通过使用适当的缓冲液可以将DNA洗脱出来，得到纯化的DNA样品。
2.方法：2.1样品制备：将待分离和纯化的DNA样品进行适当的制备处理，如酶切产生的片段、PCR扩增产生的产物等。
根据需要，可以使用酶切缓冲液、PCR停止液等添加剂来优化样品的制备。
2.2琼脂糖电泳：将样品加入琼脂糖凝胶槽中，通过电泳操作进行DNA分离。
根据需要，使用适当的电泳缓冲液和电泳条件来获得所需的分离效果。
2.3硅胶膜吸附：电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
根据实验要求，可以根据需要对硅胶膜进行预处理，如加热、孵育等。
2.4洗脱纯化：通过使用适当的洗脱缓冲液，将硅胶膜上吸附的DNA 洗脱出来。
通常，洗脱缓冲液中包含盐和其他成分，以提高DNA的纯度和回收率。
2.5最终保存：将洗脱的DNA样品进行适当的保存和处理。
根据实验需求，可以进行浓缩、冻干或直接用于后续实验。
总结：胶回收DNA试剂盒通过利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA，并利用硅胶膜的亲和吸附性，实现了从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的目的。
这种方法简便易行，能够在短时间内获得高质量的DNA样品，广泛应用于分子生物学研究和实验室应用中。
dna 琼脂糖凝胶回收
dna 琼脂糖凝胶回收琼脂糖凝胶回收是分子生物学领域中常见的实验技术，它能够有效地提取DNA，是DNA分析的重要一步。
在本文中，我们将详细介绍琼脂糖凝胶回收的整个过程，并提供一些实用的指导。
琼脂糖凝胶回收是一种通过电泳将DNA从琼脂糖凝胶上分离并回收的方法。
首先，在实验开始之前，我们需要制备琼脂糖凝胶，并在其中加入DNA样品。
随后，我们将琼脂糖凝胶与电泳缓冲液一同放置在电泳槽中并施加合适的电压，使DNA样品在琼脂糖凝胶中垂直迁移。
为了使得琼脂糖凝胶回收更加高效，我们需要根据DNA片段的大小调整电泳条件。
一般来说，小分子量的DNA片段迁移速度较快，而大分子量的DNA片段迁移速度较慢。
因此，为了避免DNA片段过度迁移或者导致DNA片段过度聚集，我们需要根据实验需要选择合适的电泳时间和电压。
在DNA片段迁移至所需位置后，我们可以将琼脂糖凝胶从电泳槽中取出。
此时，我们需要注意避免暴露琼脂糖凝胶于紫外线，以免对DNA造成伤害。
在取出琼脂糖凝胶之后，我们需要使用刮胶刀或者专用工具将 DNA 片段从琼脂糖凝胶上切割或刮下。
琼脂糖凝胶回收后的 DNA 片段可以用于各种实验，比如 PCR 扩增、限制性酶切等。
在进行后续实验之前，我们需要将 DNA 片段从琼脂糖凝胶中纯化出来，并去除琼脂糖残留物、电泳缓冲液等杂质。
其中，琼脂糖凝胶纯化技术有多种方法可以选择，例如利用商用纯化试剂盒、硅胶凝胶纯化法等。
总结起来，琼脂糖凝胶回收是一项关键的实验技术，能够高效地提取 DNA 片段。
通过合适的电泳条件和仔细的实验操作，我们可以获得高质量的 DNA样品。
这些 DNA 片段可以被广泛应用于基因克隆、基因组测序等实验中，为我们深入了解生命机制提供了重要的工具。
希望通过本文的介绍，读者们能够更加全面地了解琼脂糖凝胶回收的过程和原理，并在实验操作中获得更好的结果。
琼脂糖凝胶dna回收原理
琼脂糖凝胶dna回收原理
琼脂糖凝胶DNA回收是一种常用的蛋白质和核酸分离纯化技术，其原理如下：
1. 凝胶电泳：首先，将待回收的DNA样品经过凝胶电泳进行
分离。
在凝胶中，DNA分子根据尺寸和电荷迁移速度的差异
被分离开来。
2. 可视化：然后，用染料（如溴化乙锭）染色凝胶，使DNA
分子在紫外光下能够被可视化。
3. 切取DNA：通过使用灭菌的切割器具（如刮刀或剪刀），
将目标DNA条带切取下来。
注意要避免任何可能的污染。
4. 溶胶化：将切取下的DNA条带放入含有高浓度盐（如氯化
铵或碳酸锂）的洗涤缓冲液中，使DNA溶于溶液中。
5. 沉淀：将洗涤缓冲液中的DNA溶液与等体积的冷乙醇混合，形成DNA沉淀物。
6. 离心：将混合物进行离心，使DNA沉淀下来。
7. 溶解：去除上清液，用无菌蒸馏水洗涤DNA沉淀物，然后
用适当的缓冲液溶解DNA沉淀。
8. 储存：将回收的DNA溶液进行储存，以备后续实验使用。
总之，琼脂糖凝胶DNA回收是通过将目标DNA条带从凝胶中切取下来，然后对其进行溶胶化、沉淀、溶解等操作，最终得到纯化的DNA溶液的过程。
胶回收原理及注意事项
DNA的凝胶回收一、琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法介绍：1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。
全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。
这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。
但是这个方法不适合用于大片段的回收。
2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。
前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，B uffer溶解，(区别在于这里)加入纯化填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片段释放出来，离心，取上清，就是回收的产物。
这个方法适合各种不同大小的片段，特别是大片段的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀;另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。
后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。
3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，而且低熔点琼脂糖价格较高现在用的人已经不多了，除非用于大片段的回收。
4.透析带电洗脱法。
切下的条带放在充满TAE的透析带中再电泳一段时间，让DNA走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析带上的DNA赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那块胶通常还要再染色看看残留。
琼脂糖凝胶回收实验操作
琼脂糖凝胶回收实验操作及注意事项操作方案1.柱平衡：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，1200r，1min，倒废液，将吸附柱重新放回吸附管中。
2 切胶：配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。
推荐使用新鲜的TAE电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,旧的电泳缓冲液PH会增加而降低DNA的回收产量;电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA片段切下来.并尽量去除多余的凝胶.注意:DNA在紫外灯下的曝光的时间不要超过30秒,同时在紫外灯下操作的时候一定要戴保护眼镜.3.加等体积PN，50℃水浴：称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积.一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的PN把混合物置于50℃水浴中温浴至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;小于300bp的小片段可完全溶胶后再加入1/2胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶完全全溶后放置至室温在上柱，室温时结合DNA能力较强。
4.上柱：转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个吸附柱CA2中，,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下放置2min,12000rpm离心1min,弃去液体.一个收集柱最多可容纳700μl的溶液,如果DNA-琼脂糖混合物的体积大于700μl,可先转移700μl溶液至柱子,离心完后,将余下的溶液继续加上柱子上.但是每一个柱子最多可以结合25~30μg DNA.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱中.5. 将柱子重新套回收集管中,加600μl PW 柱子中;室温下,12000rpm离心1分钟,弃废液;这一步相当关键,不要忽略此步.6.重复步骤57.将空柱子重新套回收集管中,12000rpm离心1min以甩干柱基质残余的液体.这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的.8. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,室温放置2min,12000rpm离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度.如果再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低.DNA的产量及质量:把纯化产物的样品稀释一定的倍数后,分别在260nm和280nm下测其光吸收值,回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算: DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量. 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率.(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记.如果此值1.8,则意味着核酸的纯度>90%.另一方面,如果纯化产物的产量较低时,可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度.。
实验五 目的DNA片段的回收
Experiments of molecular biology
实验五 目的D．学习从琼脂糖凝胶中回收DNA的技术； 2．掌握从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法 ；
【实验器材】
电泳仪，水平电泳槽，微量移液器（10uL, 100 uL 1000uL），EP管，凝胶成像系统，水浴锅等。
DNA片段的胶回收常用的方法：
1、电泳洗脱法 2、低熔点琼脂糖凝胶电泳挖块法 3、冻融回收法 4、玻璃奶回收法 5、琼脂糖酶回收法 6、吸附柱回收法
待回收的PCR产物首先用1%的琼脂糖凝胶电泳纯化，然后在 紫外灯下小心切下目标条带，放入一干净的EP管中。
一、冻融法
1. 紫外灯下切下含待回收的DNA胶条，称量其重量后将其置于1.5ml离心管中 ； 2. -80℃放置10min; 3. 4℃离心12000rpm×5min，上层液转移到一新的离心管中;
4. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，捣碎，加入等体积酚/氯仿抽提一次，
振荡混匀； 5. -80℃，放置10min；
6. 4℃离心12000rpm×5min，合并上清液；
7. 加入1/10体积3M NaAc(pH 5.2)充分混合，再加入2.5倍体积预冷的无水乙醇 混匀，在 -80℃静置10min； 8. 4℃离心12000rpm×10min，弃上清，再加入75%乙醇洗涤沉淀1次，4 ℃离 心12000rpm×5min，弃上清，倒扣在滤纸上室温晾干。 9.加入20ul的TE溶解沉淀，取5μ l进行电泳鉴定回收效果 。
二、纯化试剂盒法
1. 2. 3. 4. 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内捣碎。 加入等体积(1g/1ml)的溶液I（溶胶液）, 颠倒混匀。 60℃水浴约10min至胶全融，期间混匀3-4次，以加速凝胶融解。 将融后溶液冷却至室温后加入到DNA纯化柱内， 室温放置1分钟。(如果体 积较大，可以把样品分批加到纯化柱内，离心后，再加入剩余的样品。 5. 最高速(约12000rmp)离心1分钟，弃收集管内的液体。 6. 在DNA纯化柱内加入700μ l溶液II（75%乙醇），室温放置1分钟。 7. 最高速离心1分钟，洗去杂质。弃收集管内的液体。 8. 再次加入700 μ l溶液II，最高速离心1分钟，再洗一次。倒弃收集管内的 液体。 9. 最高速再离心2分钟，除去纯化柱内残留液体并让残留的乙醇充分挥发。 10. 将DNA纯化柱置于新的1.5ml离心管上，加入30 μ l溶液III（TE或无菌水 ）至管内柱面上，放置1min。 溶液III需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。也可以用重蒸水 或MiliQ级纯水替代溶液III，但是水的 pH应不小于6.5。 11. 最高速离心1min，离心管中所得液体即为高纯度DNA溶液。
DNA胶回收实验技术的方法和步骤
一. 提高胶回收量的办法1) 增加电泳时的上样量。
2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7) 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
8) 最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
二. 几种PCR产物回收的详方法和步骤1) 普通胶回收如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。
另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。
2) 从低熔点凝胶回收DNA纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。
待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。
反复1-2次。
取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。
PCR产物的酶切及琼脂糖凝胶电泳回收
PCR产物的酶切及琼脂糖凝胶电泳回收限制性内切核酸酶消化DNA限制性内切核酸酶（restriction enzyme) 是一类识别DNA上3-8个特定核苷酸序列并产生切割反应的内切核酸酶(endonuclease)的总称。
在基因操作中，这些酶作为“剪刀”对DNA起剪切作用，是分子生物学研究中不可缺少的酶之一。
限制内切酶切出的三种断口在酶切实验中：如果用同一种酶切割载体和插入DNA两者能正确连接，但不能确定方向。
如果用同的限制酶切割，所得的单链突起能互补，则两者能正确连接。
但也不能确定其方向。
若限制酶切割所得的片段是平末端，虽能连接，但效率低，而且不能确定其方向。
用两种不同的限制酶共同切割载体和插入片断，而且所得两末端结构不同，连接后就能确定其方向。
因此，运用两种不同的限制酶的模式被广泛应用。
在我们今天的实验中，用到两种限制性酶分别是BamH I和Hind III，这两种酶切割后产生的片段都具有粘性末端，可以保证酶切产物与载体正确的连接。
酶切体系PCR产物0.5μg Buffer K（10X）5μlddH2O加至48μlBamHⅠ（20U/ul）1μlHind III（20U/ul）1μl 总体积50μl将酶切体系按顺序加好后柔和混匀，放入已预热的37℃的水浴锅（或37℃培养箱）中，使反应体系在这个温度下进行酶切。
在酶切实验中需要注意的事项1 反应Buffer2 酶切位点的保护碱基3 酶切反应温度4 酶切体系的体积每一种酶都具有相应的反应缓冲液，反应缓冲液可能相同也可能不同。
一般同一公司的酶的缓冲液可以通用，不同公司的一般不相同。
若不同酶使用相同的缓冲液，则可同时加入，若使用不同的缓冲液，则只能在第一个酶切完成后，进行酚抽提，乙醇沉淀，再进行另一个酶的消化。
保护碱基限制性内切酶的酶切位点两侧的保护碱基是在设计PCR的引物时加入的。
BamHⅠ的保护碱基ATT GGATCCATGGCGAATTCCGGCGAAGA Hind III的保护碱基ACC AAGCTTGATGGTGGAAGAAGGAGC酶切反应温度３７°C对于大多数酶来说是最佳反应温度。
生物学实验之凝胶回收基础及操作
4.2 注意事项
６.切胶是, 紫外照射时间应尽量短, 以免对DNA 造成损伤。 7.回收<100bp及>10kb的DNA片段时, 应加大 溶胶液的体积, 延长吸附和洗脱的时间。 8.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关, 初始量 越少、洗脱体积越少, 回收率越低。
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目录
一 胶回收基础知识 二 方法及应用 三 试剂耗材与设备 四 操作流程 五 常见问题解答
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4.2 注意事项
3.电泳时最好使用新的电泳缓冲液, 以免影响电泳 和回收效果。 4.如下一步实验要求较高, 则应尽量使用TAE电泳 缓冲液。 ５.如果回收率较低, 可在胶充分溶解后检测pH值, 如pH值大于7.5, 可向含有DNA的胶溶液中加 10~30μL3M醋酸钠（pH5.2)将pH值调制5~7之 间。
切割 回收
Lane M:1kb DNA Marker Lane 1:胶回收前的2.7kb DNA段 Lane 2:胶回收后的2.7kb DNA段 切割Lane 1后, 经处理回收DNA, 经 电泳得到Lane 2。
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1.2 胶回收原理
利用核酸在裂解液 下与硅胶膜吸附柱 特异性结合, 在洗脱 液条件下被洗脱, 从 而达到核酸纯化回 收的目的。
TAE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致pH值升高，降低DNA和膜的吸 附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好
回收前的样品量太少，加大点样量
洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可 以有效提高回收率30%以上
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5 常见问题解答
问题
解决方法
胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并 加入溶胶液温浴后，液体仍很粘 增加上下颠倒次数帮助溶胶 稠或后续步骤有堵柱子现象？ 胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，
低熔点胶回收方法
换用新的电泳缓冲液10 ×TAE（10 ×Tris-乙酸）。
2、当溴酚蓝迁移至足够距离时（至少2 cm以上），在长波紫外灯下观察，用清洗过的刀片在目的片段前切下与目的片段同长，宽度适当（一般2 cm左右）的胶块。
注意：①不要忘记在胶下垫一个新的塑料手套防止污染。
②小心不要将回收胶切裂，同时注意与目的带相邻的切面要尽量平整。
3、将切好的回收胶块放在回收胶槽内，在切去胶块处加入低熔点琼脂糖胶，待其凝固后将其小心放回电泳槽继续进行电泳。
小心低熔点琼脂糖凝胶块与原回收胶块的交界面易断裂。
4、待目的带完全进入低熔点琼脂糖胶后，在长波紫外灯下用清洗过的刀片切下含有所需DNA带的凝胶条，置于新的灭菌的1.5 mL Eppendorf管中，加300 µL TE。
5、65℃水浴10 min或更长使胶块完全融化。
6、立即加入等体积（300~350 µL）Tris-Cl饱和酚（pH 8.0），摇晃混匀。
7、12000 rpm离心5 min。
8、小心将水相移到另一1.5 mL Eppendorf管中，加入2.5~3倍体积（780 µL即可）预冷无水乙醇。
注意不要吸入下层杂质及酚相，没把握时宁可放弃一些上层水相。
9、12000 rpm离心5 min。
10、小心将水相移到另一1.5 mL Eppendorf管中，加入2.5~3倍体积（780 µL即可）预冷无水乙醇。
注意不要吸入下层杂质及酚相，没把握时宁可放弃一些上层水相11、置液氮3 min，取出后可置于－20℃放几min。
小心防止管子爆裂。
12、12000 rpm离心10 min。
DNA胶回收电泳上样技巧
DNA胶回收电泳上样技巧
刘斌
北京工业大学生命科学与生物工程学院
DNA胶回收电泳时通常选择跑大孔的琼脂糖凝胶。
对于大孔的琼脂糖凝胶，电泳之后的待回收DNA条带通常分布面积较大，弥散且不够清晰，给后续的切胶和回收带来不便。
尝试用小孔加样方式对待回收DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，取得了不错的效果。
选择两种不同长度的待回收DNA样品〔约800 bp和1700 bp〕，分别用小孔和大孔琼脂糖凝胶〔浓度均为1.5 %〕进行电泳。
每种待回收的DNA样品体积均为50 μl，对于小孔琼脂糖凝胶电泳，将待回收的DNA样品加样于相邻的5个小加样孔中，每孔加样10 μl；对于大孔琼脂糖凝胶电泳，直接将50 μl待回收的DNA样品加样于大加样孔中。
电泳结果如下列图所示。
〔1〕〔2〕
图1 DNA样品胶回收的比拟〔约800 bp〕
〔1〕小孔琼脂糖凝胶；〔2〕大孔琼脂糖凝胶。
〔1〕〔2〕
图2 DNA样品胶回收的比拟〔约1700 bp〕
〔1〕小孔琼脂糖凝胶；〔2〕大孔琼脂糖凝胶。
图中被白色方框框出的条带即为待回收的DNA。
从图中可以看出，与大孔琼脂糖凝胶相比，小孔琼脂糖凝胶中的目的DNA条带更为清晰、锐利，有利于切胶操作及后续的胶收回过程。
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琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambroo k和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA 和EB染料观测DNA 相结合的技术。
现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法：
1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。
全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。
这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。
但是这个方法不适合用于大片断的回收。
2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。
前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，Buffer溶解，（区别在于这里）加入纯化填料填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片断释放出来，离心，取上清，
就是回收的产物。
这个方法适合各种不同大小的片断，特别是大片断的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀；另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。
后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。
3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，现在用的人已经不多了。
想当年经费紧张的时候，低熔点琼脂糖贵，不舍得这么浪费的，比较取巧省钱的法子就是常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔点琼脂糖区域再将那块家伙切出来，就可以非常非常节约了。
除了直接酚抽低熔点琼脂糖凝胶，还有人用琼脂糖酶来消化琼脂糖凝胶，条件也相当温和，只是那酶价格并不便宜（光那酶的成本就至少5-6块，还不算其他的麻烦事），多数的酶只适合用低熔点琼脂糖，问题是我不用酶也可以直接酚抽，费时间还特长，所以，并不觉得特别好用。
后来据说T家的琼脂糖酶可以用于常规琼脂糖，前提是你有办法在65度把那胶化了。
但那需要极好的耐心。
后来有老师从美国回来了，才有机会尝试更好的低熔点琼脂糖――FMC（现在叫做Cambrex了）的GTG级别低熔点琼脂糖！那才是最简单的方法呀！洗的超级干净的电泳槽灌胶，电泳后，直接将条带切下65度保温融化，就可以直接在融化的琼脂糖―DNA 混合物中加酶进行后继实验――所谓的GTG就是遗传技术级，可以在凝胶中进行各种酶反应的哦！实验条件非常温和，非常适合大片断的回收。
4.透析带电洗脱法。
烦，简直不堪回首。
切下的条带放在充满T AE的透析带中再电泳一段时间，让DNA 走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析带上的DNA 赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那块胶通常还要再染色看看残留。
由于绑透析带非常难搞，只有在万不得已的非常大的片断时才会考虑的。
也是丙烯酰胺电泳凝胶产物回收的方法之一。
后来看到以色列的一个小公司GeBA有出简易透析管，就是将小指管两边各开一小窗，贴上透析膜，把胶块放在管中再电泳。
由于不需要绑透析带，使用方便；而且管中溶液体积小，容易处理；膜的面积也小吸附也少；顿时觉得是救星。
后来貌似Pierce也推出了类似的东西，买起来更方便一点。
5.DEAE纤维素膜纸片法和其他改良法。
早期实验室最常用方法
之一。
将DEAE纤维素膜裁成小条活化处理。
电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的DEAE纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳一会儿，条带上的DNA 被膜片截留，取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保温洗脱，直到膜上没有DNA 了，将溶液用酚氯仿抽提沉淀。
这个方法不适合做较大的DNA ，因为洗脱比较困难。
曾经常用的另一方法是在电泳胶前挖小槽，加入缓冲液，电泳一小会儿，手提紫外监视，等条带进入槽中，还没在另一头上岸时停止电泳，吸出溶液酚氯仿抽提（加点甘油可降低DNA 在溶液中的移动速度，防止那边还没全部下水，这边就已经上岸了的情况。
当然也可以挖大点的孔或者多吸几次，反正是要沉淀的，体积大些不要紧）。
不过这些方法在柱回收试剂盒推出后都渐渐要淘汰了。
毕竟比较麻烦费时间，而且回收的产物纯度也不比试剂盒――前者是纯化介质吸附DNA 后彻底除去溶液，经过洗涤残留在纯化介质上的杂质，最后洗脱；手工的方法多是用酚氯仿抽提溶液后乙醇沉淀，由于有些多糖沉淀属性和DNA 相似时就容易共沉淀下来。
鉴于竞争的日趋激烈,纯化试剂价格逐渐向下,连核酸纯化领域的顶级名牌Qiagen也开始大幅度的折扣优惠,所以,有条件还是选择试剂盒,比自己慢慢摸索要更能
节约宝贵的青春。