关于茎尖脱毒
植物微茎尖培养脱毒原理
植物微茎尖培养脱毒原理植物要是染上了病毒，那可就像人得了重病似的，病恹恹的。
不过呢，科学家们可有个超厉害的办法，就是植物微茎尖培养脱毒。
咱们先来说说植物为啥会染上病毒。
你看啊，这病毒就像小坏蛋一样，在植物之间传来传去的。
有时候是昆虫这个“小媒婆”，带着病毒在植物间串门，把病毒从这株植物带到那株植物。
还有的时候呢，植物在繁殖的时候，比如扦插啊这些方法，病毒就跟着一起“搬家”了。
这病毒一旦在植物身体里安了家，就开始捣乱啦。
植物可能就长不高、叶子发黄、果实也长不好，就像人没了精气神儿一样。
那微茎尖培养脱毒是咋回事呢？这微茎尖啊，就像是植物身体里的一股清流。
你想啊，植物的茎尖这个地方呢，细胞分裂可快啦，就像一群充满活力的小朋友在欢快地玩耍。
这些快速分裂的细胞，就像是一群忙着盖新房子的小工匠，它们可没功夫搭理那些病毒小坏蛋。
为啥呢？因为病毒这个家伙啊，它在植物身体里扩散是有一定速度的，它还没来得及跑到茎尖这个热闹的“建筑工地”呢，这里的细胞就已经快速地分裂生长起来了。
所以呀，茎尖这个地方的病毒含量就特别特别少，几乎可以忽略不计。
咱们把这个微茎尖取出来，就像是把植物身体里最纯净、最健康的一部分给单独拎出来了。
然后把这个微茎尖放到一个专门的培养基里。
这个培养基就像是一个超级温馨的小窝，里面有微茎尖生长所需要的各种营养，就像给它准备了好多好多好吃的、好喝的一样。
在这个小窝里，微茎尖就开始茁壮成长啦。
它慢慢地长成一棵完整的小植株，而且因为它本来就几乎没有病毒，所以这个新长出来的小植株啊，那就是健健康康的，就像一个充满活力的小娃娃。
你再看啊，这微茎尖培养脱毒就像是给植物来了一场超级大变身。
以前被病毒折磨得不成样子的植物，通过这个方法，就可以重新焕发生机。
比如说那些种水果的果农伯伯们，如果他们的果树染上了病毒，果实又小又不好吃。
用了微茎尖培养脱毒这个神奇的办法，新长出来的果树就能结出又大又甜的果子啦。
这对于果农伯伯来说，那可真是像挖到了宝藏一样开心呢。
第三章植物脱毒技术
2、分子生物学检测法
（1）PCR检测法
待测脱毒植物病毒总DNA序列
ACGGGTTATCGGTCGAATAACACGGGCAATTTTACGATTAGACTAACGGGGAGAC TGCCCAATAGCCA 引物 TGCCC 随机引物
ACGGGTTATCGGTCGAATAACACGGGCAATTTTACGATTAGACTAACGGGGAGAC
●同时同样的处理效果也不一样（具有不确定性）。
●对植株有伤害，只有部分植株成活。
●对寄主植物进行较长时间的高温处理有可能钝化植物组织 中的阻抗因子，使寄主植物中抗病毒因子难于活化，从而 增加无效植株的发生率。
三、热处理结合茎尖脱毒
1 把切取的草莓芽洗净后 2 先经过高温短时间热处理，杀死部分病毒； 3 然后在无菌条件下对经过处理的材料，在解剖镜下解剖， 4 切取分生组织尖端0.2-0.3mm生长点， 5 迅速接种到最佳启动培养基上，在25℃下暗培养。 6 待长出愈伤组织后转入光培养， 7 接种到另一种丛芽培养基上，即产生丛生芽及绿苗。 8 将绿苗接种在生根培养基上， 9 20天后待根长2-5cm时即可炼苗移栽，成活率达到95% 以上。
（三）酶联免疫吸附检测法
（四）其它鉴定方法
1、电镜检测法
病毒颗粒一般小于0.1um的微粒，人的眼睛观 察不到，光学显微镜仅观察200nm的微粒，而电子 显微镜则将分辨能力增大至0.5nm。通过电子显微 镜在病毒的薄样品或部分纯化的病毒悬浮液中容易 观察到。采用电子显微镜法鉴定病毒，直接观察有 无病毒颗粒存在，并观察有关病毒颗粒大小、形状 和结构，由于这些特征稳定，对病毒鉴定有很大的 作用。
• 4、生根诱导
茎尖培养脱毒技术
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 3．剥取茎尖与接种 在超净工作台上，将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养 皿中（已灭菌）。在双筒解剖镜下，用解剖针或镊子将材料固 定于视野中，用解剖刀尖仔细剥去幼叶，至出现裸露的生长点。 用刀尖切下带1～2个叶原基的生长点（约0.3～0.5mm)。用解剖 针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上（顶部向上)，每管接 1～2个茎尖。 为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时 更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 5．生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根。而 另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导才能生根成 为完整植株。诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转入生根 培养基，继续培养1～2个月即可形成根。一些植物茎尖离体培 养极难生根，即使转入生根培养基诱导也难奏效（如桃、苹 果），这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。 如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖）， 再培养，即二次茎尖培养脱毒率可达 100％。
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 2．茎尖大小与脱毒效果
用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最 大 直 径 0.lmm ； 通 常 是 带 1 ～ 3 个 叶 原 基 的 茎 尖 （ 约 0.3 ～ 0.5mm）。 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过 小，外植体离体培养存活困难，生长缓慢，操作难度大。茎尖 分生组织不能合成自身需要的生长素，而分生组织以下的1～3 个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而 带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖外植体过大，脱毒 效果差。
植物脱毒技术
茎尖培养脱毒的原理
茎尖培养脱毒的原理茎尖培养是将植物茎尖作为外植体在无菌条件下进行培养的技术。
这种技术可以用于脱毒、繁殖、遗传改良等方面。
在进行茎尖培养时，需要采用无菌的培养基，包括营养盐和植物生长因子，以支持植物的生长和分化。
虽然茎尖培养可以提高植物繁殖率，促进遗传改良，但植物在自然环境中存在各种病毒和微生物的感染，如果不加以处理，这些感染会对植物生长产生不良影响。
因此，为了保证繁殖的品质和数量，需要进行脱毒处理。
茎尖培养脱毒的原理是通过对植物进行体细胞培养和细胞选择，帮助植物去除体内的病毒和微生物。
茎尖培养可以分为四个步骤：外植物质的选择、外植物的消毒、外植物体的消化和茎尖的培养。
第一步是外植体的选择。
首先需要选择健康的植物组织作为外植体进行培养，最好是从没有感染过病毒和微生物的植株中选取。
要选择完整、无损伤、新生的芽或茎尖，以保证外植体的健康和完整性。
第二步是外植体的消毒。
在消毒前需要将外植体剪成适当大小并于无菌实验室中进行操作。
将外植体浸泡于含有消毒剂的溶液中，如70%酒精、0.1%汞溴素、0.1%过氧化氢等，在消毒前也需要去除外植体的表层污垢。
消毒的目的是避免残留的病毒和微生物在培养培养过程中再次感染植株，从而保证培养过程的无菌。
第三步是外植体的消化。
在消毒后，外植体的细胞壁依然存在，需要进行消化，使得细胞易于分离和重新生长。
可采用不同的消化酶，如植物生长调节剂，酶解作用可以促进外植体的细胞分离。
这种操作可以改变细胞壁的结构，使得外植体的细胞容易分离和重新生长。
消化过程中要慎重，避免过度消化。
第四步是茎尖的培养。
在消化完成后，取出外植体中的营养组织或茎尖，置于培养基上进行培养和分化。
在培养的过程中要注意维护培养基的无菌和营养条件，以支持茎尖生长和分化。
茎尖要发生新的细胞分化，从而产生更多的细胞，从而最终保证植株生长健康。
总之，茎尖培养脱毒是一种重要的技术。
它可以将健康的植物组织进行体细胞培养和细胞选择，清除体内的病毒和微生物。
植物脱毒方法
植物脱毒方法
1、茎尖培养脱毒:病毒在植物体内的分布并不均匀,越靠近茎端的病毒的感染深度越低,生长点则几乎不含或含病毒很少。
2、愈伤组织培养脱毒法:通过植物的器官和组织的培养,脱分化诱导产生愈伤组织,然后从愈伤组织再分化产生芽,长成小植株,可以得到无病毒苗。
3、珠心胚培养脱毒:病毒一般不通过种子传播,由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的,并具有与母本相同的遗传特性。
4、茎尖微体嫁接:将实生苗砧木在人工培养基上种植培育,再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖,在砧木上进行试管微体嫁接,以获得无病毒幼苗。
5、花药培养脱毒。
6、热处理脱毒:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40°C),即钝化失活。
7、化学处理:抑制或杀死病毒。
茎尖脱毒的原理
茎尖脱毒的原理
茎尖脱毒是一种植物病毒检测和消除方法，其原理基于以下几点：
1. 病毒是通过感染植物细胞来繁殖和传播的，茎尖脱毒利用这个原理，在植物茎尖中包含较少感染病毒的细胞。
2. 植物茎尖是植物生长点，其中的分生组织不仅含有少量病毒感染的
细胞，而且在新的细胞分裂和生长过程中，病毒表达量可能会降低。
3. 茎尖脱毒可以通过提取茎尖细胞、进行培养和再生植株来消除或减
少感染病毒的细胞，重新生成无病毒的植株。
4. 在茎尖脱毒过程中，常常结合使用组织培养技术，例如无菌培养和
激素操纵等方式，可以促进茎尖细胞的分裂和生长，从而更快地实现
植株再生。
5. 茎尖脱毒还需要利用一种或多种病毒检测技术，如酶联免疫吸附检
测(ELISA)、蛋白质印迹等，来确认植株是否已经完全清除了病毒。
茎尖脱毒的原理就是通过提取茎尖细胞，利用细胞分裂和生长的特性
以及病毒检测技术，来消除或减少植物中感染的病毒细胞，重建无病
毒的植株。
茎尖脱毒的操作流程
茎尖脱毒的操作流程
茎尖脱毒，听起来像是给植物做的一场特殊手术，实际上它就是通过科学手段，帮植物去掉身上的“小坏蛋”——病毒。
让我用轻松幽默的方式，给你揭秘这个操作流程。
首先，得选个好苗子，就像选运动员一样，得挑那些健康、有活力的植物。
这第一步，我们称之为“挑选植株”，找那个最棒的植物来做手术。
接着，就是给植物剪头发”，只不过我们剪的是茎尖，就是植物最顶端的那一点点。
这步叫“切取茎尖”，得小心翼翼，就像是在做微整形。
剪下来的茎尖，得给它消毒，就像去医院做手术前得消毒一样。
我们用一些消毒液泡泡它，这叫“消毒处理”，确保那些“小坏蛋”不敢靠近。
消毒完毕，就该把茎尖放到特制的培养基上，这就像是在给它准备一个无菌的病房。
这步叫“接种培养”，让茎尖在无菌环境下慢慢长大。
等茎尖长出新的小芽和小根，就得给它换个大房子”，也就是转移到新的培养基上，这叫“继代培养”，让植物继续健康成长。
最后，经过一系列的检查，确认这些新长出来的植物确实没有病毒了，就可以把它们移栽到土里，这叫“移栽成活”。
就像是手术后康复出院，重新开始新生活。
总结一下，茎尖脱毒的操作流程就是：挑选植株、切取茎尖、消毒处理、接种培养、继代培养、移栽成活。
这个过程虽然复杂，但每一步都是为了确保植物能够健康成长，无毒一身轻。
利用茎尖培养脱毒苗的原理
利用茎尖培养脱毒苗的原理
利用茎尖培养脱毒苗的原理是通过在无菌环境中培养植物的茎尖，去除植物体内的病毒和细菌，最终得到健康的植株。
这项技术在植物繁殖、育种和保护植物健康方面有着广泛的应用。
这一过程主要包括以下几个步骤：
1.选择健康的母株：选择生长健康、没有病害和病毒感染的母株作为培养材料。
这是确保后续培养的脱毒苗质量的重要一步。
2.表面消毒：采用适当的消毒剂对所采集的茎尖进行表面消毒，以去除表面的微生物污染。
通常使用含氯或含醇的消毒液，例如漂白水或酒精。
3.茎尖切割：在无菌条件下，使用无菌工具对茎尖进行切割。
茎尖是植物生长点的组织，含有高度分化的细胞，有助于培养成新植株。
4.培养基的准备：准备无菌培养基，包括植物生长所需的营养元素、植物激素等。
培养基要保持无菌状态，通常在高温高压条件下灭菌。
5.茎尖培养：将消毒过的茎尖放置在培养基上，利用培养基中的营养物质和植物激素促使茎尖分化和生长。
这个阶段需要严格的无菌操作，以防止外界微生物的污染。
6.分化和生长：在培养基上，茎尖逐渐分化为新的组织，形成新的植株。
这个过程可能需要一段时间，具体取决于植物的种类和培养条件。
7.脱毒：通过检测新植株是否含有病毒和细菌，筛选出脱毒的植株。
通常采用生物学检测或分子生物学方法，例如酶联免疫吸附测定（ELISA）等。
8.移栽：将脱毒的植株从培养基中移植到土壤中，使其继续生长并发育为正常植株。
甘薯茎尖培养脱毒与快繁—甘薯茎尖培养脱毒概述
二、什么是甘薯茎尖培养脱毒技术
1. 甘薯茎尖培养脱毒技术是在无菌条件下，将甘薯苗茎尖 长约0.1-0.3mm，不带或很少带病毒的分生组织在合适的 培养基上经过离体培养诱导再生苗。 2. 茎尖苗经病毒检测确认不带有某种或某些病毒后在防虫 网棚或空间隔离条件下进行扩繁，得到无病毒薯块或薯苗 进行种植。
甘薯脱毒苗
二、什么是甘薯茎尖培养脱毒技术
3. 脱毒试管苗培养程序 培养初级脱毒试管苗、培养中级脱毒试管苗、培养高级脱 毒试管苗。
初级苗病毒检测
高级脱毒苗
二、什么是甘薯茎尖培养脱毒技术
茎尖组织培养甘薯脱毒苗
二、什么是甘薯茎尖培养脱毒技术
甘薯脱毒苗扩繁
二、什么是甘薯茎尖培养脱毒技术
4. 脱毒种薯生产程序 原原种繁育、原种繁育、良种繁育。
种子生产与经营专业教学课件
《薯类种子种苗生产技术》
甘薯茎尖培养脱毒概述
主要内容
一 为什么要对甘薯进行脱毒
二 什么是甘薯茎尖培养脱毒技术
三三 脱毒甘薯的优越性
四三
甘薯脱毒技术是我国甘薯栽培史上的一次 重大技术革命，是生物组织培养技术、病 毒检测技术和良种快繁技术的结晶。
一、为什么要对甘薯进行脱毒
1. 甘薯采用营养繁殖导致甘薯病毒蔓延，致使产量、质量 降低。全世界已经分离鉴别出20余种甘薯病毒。病毒侵染 可造成15％～90％的减产损失。平均减产率达29.4%， 病毒病成为我国甘薯生产的最大障碍之一。
苗床发病
大田发病
一、为什么要对甘薯进行脱毒
2. 甘薯病毒往往呈复合侵染，症状为：地上部长势弱，叶 皱卷、花叶、黄化、羽状斑驳或环斑；结薯少，薯块小， 皮色淡，表皮粗糙、龟裂；种性退化，品质、产量降低。 3. 甘薯病毒尚无药可治，潜在威胁大，茎尖培养是目前防 治甘薯病毒病的最有效方法。
《茎尖培养脱毒技术》课件
05
茎尖培养脱毒技术的发展前景
技术创新与改进
自动化与智能化
通过引入机器人和人工智能技术 ，实现茎尖培养脱毒技术的自动 化和智能化，提高工作效率和准 确性。
高效快速繁殖
研究更高效的繁殖方法，缩短培 养周期，提高脱毒苗的繁殖速度 ，以满足大规模生产的需求。
基因编辑技术
利用基因编辑技术对植物进行精 确的基因改造，提高茎尖培养脱 毒技术的成功率和应用范围。
《茎尖培养脱毒技术》PPT 课件
目录
• 茎尖培养脱毒技术简介 • 茎尖培养脱毒技术的操作流程 • 茎尖培养脱毒技术的优缺点 • 茎尖培养脱毒技术的应用实例 • 茎尖培养脱毒技术的发展前景
01
茎尖培养脱毒技术简介
茎尖培养脱毒技术的定义
茎尖培养脱毒技术是一种利用植物组织培养技术，对植物的茎尖 进行离体培养，诱导产生无病毒的植株，进而实现脱除病毒的目 的。
降低技术难度
简化操作步骤，降低对操作人员的技 术要求。
增强遗传稳定性
研究如何减少茎尖培养脱毒技术获得 的植株在遗传上的变异，提高其后代 的稳定性。
扩大适用范围
进一步探索该技术在更多种类的植物 上的应用，以扩大其适用范围。
04
茎尖培养脱毒技术的应用实例
在马铃薯脱毒中的应用
总结词
茎尖培养脱毒技术在马铃薯脱毒中应用广泛，有效解决了马铃薯病毒病问题，提高了马铃薯产量和品 质。
详细描述
除了马铃薯和草莓，茎尖培养脱毒技术还可应用于其他作物的脱毒处理，如甘蔗、葡萄 、花卉等。该技术的应用能够提高这些作物的抗病性和产量，改善品质，为农业生产和 园艺产业的发展提供有力支持。随着科学技术的不断进步和应用领域的拓展，茎尖培养
脱毒技术将继续发挥重要作用，为农业和园艺产业的可持续发展做出贡献。
植物茎尖脱毒的原理
1.植物茎尖脱毒的原理是什么？
答：茎尖培养脱毒的原理即“植物体内病毒梯度分布学说”：病毒在植物体内的分布是不均匀的，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近顶端分生区域的病毒感染浓度越低，生长点（越0.7-1.0mm）则几乎不含或含病毒很少（由于病毒运转速度慢，加上茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少或无）。
因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。
应注意问题：由于茎尖越小其带毒率越低，脱毒效果越好，但是操作难度越大，培养成活率及形成完整植株的能力越弱；茎尖越大，其操作越容易，茎尖培养成活率及形成完整植株的能力越强，但茎尖的带毒率越高，其脱毒效果就越小，所以在剥离茎尖时，要兼顾脱毒率、成活率及茎尖发育成完整植株的能力。
茎尖培养脱毒
茎尖培养脱毒
茎尖培养脱毒是一种植物组织培养技术，用于去除植物中的病毒，以获得无病毒的健康植株。
该技术的基本原理是利用植物茎尖生长点的分生组织具有较高的分裂能力和较低的病毒感染率的特点，将茎尖组织切下并进行培养，使其分化成新的植株。
在培养过程中，病毒无法复制，从而达到脱毒的目的。
茎尖培养脱毒的具体步骤如下：
1. 选择健康的植株：选择生长健康、无病虫害的植株作为培养材料。
2. 消毒处理：将植株进行消毒处理，以避免外部病菌的污染。
3. 切取茎尖：用解剖刀或显微镜下的微切割工具切取植株的茎尖生长点。
4. 培养茎尖：将切取的茎尖组织放在适宜的培养基上进行培养，提供适当的营养和环境条件，促使其分化成新的植株。
5. 鉴定和筛选：对培养出的植株进行病毒检测，筛选出无病毒的健康植株。
茎尖培养脱毒技术已广泛应用于果树、蔬菜、花卉等植物的脱毒和育种工作中，是一种有效的植物病毒防治方法。
茎尖脱毒的原理
茎尖脱毒的原理
茎尖脱毒是一种用于植物病毒防控的技术，其原理主要包括以下几个方面：
1. 选择健康无病毒的茎尖：茎尖脱毒的前提是选择健康无病毒的植株茎尖作为初始材料。
这些茎尖在外观上没有病毒病征象，通过使用经鉴定为无病毒的母株茎尖进行接种。
2. 经过表面消毒：茎尖脱毒过程中，茎尖需要经过表面消毒以杀灭外部携带的病毒和细菌。
常见的消毒方法包括使用过氧化氢、酒精等消毒剂对茎尖进行处理。
3. 建立无菌环境：茎尖需要在无菌环境下进行脱毒过程。
这包括使用无菌培养基、器具和操作环境，并对操作人员进行无菌操作。
4. 组织培养：将经过表面消毒的茎尖剪切成小段，将其置于含有适宜激素和营养物质的无菌培养基中进行组织培养。
培养基提供了植物生长所需的营养和生长激素，使茎尖得以快速生长和增殖。
5. 分离病毒：在培养基中生长的茎尖经过一段时间后，可以通过分子生物学方法对其进行检测，确认是否存在病毒。
一旦确认存在病毒，可以将无病毒的茎尖分离出来，继续进行培养。
6. 繁殖病毒-free植株：通过不断地对茎尖进行培养和分离，最终可以获得病毒-free的植株。
这些植株在无菌环境中生长，不存在携带病毒的风险。
7. 扩繁和应用：经过茎尖脱毒后的植株可以用于进一步的扩繁和应用。
这些无病毒植株可以用于病毒病的研究、病毒鉴定和病毒防控等方面。
茎尖脱毒介绍终极版
马铃薯茎尖脱毒技术太行山马铃薯科技开发中心编一．马铃薯脱毒的原因二．茎尖脱毒的技术流程三．茎尖脱毒的技术难点四．所用到的主要仪器设备•马铃薯是一种全球性的重要经济作物。
适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。
原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。
•但是，当发现从外地引种栽培1～2个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶的现象产生，经检测证明这是由于病毒引起的退化现象。
1.接触传播：感病植株伤口流出的汁液侵染健康植株的伤口时发生的病毒传播。
2.介体传播：昆虫、线虫和真菌在病、键植株取食、危害所导致的病毒传播。
3.土壤传播：主要包括线虫和昆虫传播。
•症状：植株变矮、簇生，叶片皱缩卷曲，叶色浓淡不均，茎秆矮小细弱。
我国的马铃薯平均单产仅为2000斤/亩，是世界单产最高国荷兰（6000斤/亩）的1/3。
造成如此大的差别，最主要的因素就是种薯质量差，品种布局不合理。
采用脱毒快繁技术，种用脱毒种薯，一般可增产30-50%。
一．马铃薯脱毒的原因二．茎尖脱毒的技术流程三．茎尖脱毒的技术难点四．主要仪器设备外植体材料的选取外植体材料的灭菌初代培养继代培养芽苗生根与移栽•茎尖是用于微繁殖的常用材料。
马铃薯的茎尖很容易取得，在室内促使马铃薯块茎上的芽萌发生长就可以得到。
在促进块茎萌发生长的过程中可结合进行热疗处理，对古巴花叶病毒、X病毒和S 病毒尤为有效。
•方法：在暗处萌芽，待芽长到1～2cm时，用35℃的温度处理14d左右。
方法：切取顶端茎端，在自来水下冲洗干净，无菌条件下先用70％的酒精浸润组织15-20秒，再用以有效氯1%的次氯酸钠溶液灭菌7min，然后用无菌水冲洗3～4次。
一、获取腋芽丛苗由于茎尖脱毒的技术难度高，成功率低，所以需大量的重复操作，为了获取样本植物的大量茎尖，可以采取组培的方法获取腋芽丛苗。
方法：切取顶芽或带芽的茎段，接种在含有0.5mg/L KT的MS液体培养基中，放在18℃和16h/d光照的条件下培养，每天以50r/min的振荡速度振荡1.5h。
茎尖培养脱毒法
茎尖培养脱毒法概述茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗，其方法是在解剖镜下，用锋利的解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离，因为茎尖分生组织基本不带病毒，利用植物茎尖分生组织进行离体培养，再结合病毒检测，就可以获得无病毒的植株。
茎尖培养中最主要的影响因素就是切取茎尖的大小，一般要求茎尖长度小于1mm。
技术上通常切取茎尖越小，脱毒效果越好，但是茎尖培养成活率变低。
曹为玉等研究发现葡萄茎尖长度与存活率成正相关，与脱毒率成反相关。
当切取茎尖长度为0.2~0.3mm时，存活率为21%~38%，脱毒率为91.4%~97%；当切取0.5mm以上时，存活率为75%~83%，脱毒率仅为70.6%~76.5%。
茎尖培养脱毒法脱毒率高，脱毒速度快，能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料，但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。
为了克服这一缺点，现在经常是将茎尖培养与热处理相结合来使用。
茎尖培养与热处理相结合之所以能够提高脱毒效果，是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大，有利于切取较大的茎尖（在1mm左右），从而能够提高培养或嫁接的成活率。
如大樱桃置于45℃的恒温培养室内，培养35天，再切取0.2~0.4mm的茎尖培养，平均脱毒率为98%。
原理茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动，分生组织中没有维管束存在，病毒只靠胞间连丝移动，速度很慢，难以追上生长活跃的分生组织，所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。
Shoot tip culture of virus-free method OverviewShoot tip culture of virus-free is to take tip meristem in vitro culture methods to obtain virus-free in vitro, and its approach is endoscopic anatomy, with a sharp scalpel to the tip to divest quickly and accurately as meristem tip basic non-virus, use of plant shoot tip meristem culture in vitro, combined with virus detection, it can be virus-free plants.Shoot tip culture in the most important factor is the impact of the cut tip size, tip length is less than the general requirements of 1mm. Technical tip is usually the smaller the cut, the effect of virus-free as possible, but low survival rate of shoot tip culture. Yu Cao, such as for the study found that grape shoot tip length was positively correlated with survival, and virus-free rate as the anti-related. When the cut tip length of 0.2 ~ 0.3mm, the survival rate was 21% ~ 38%, virus-free rate was 91.4% ~ 97%; when cut more than 0.5mm, the survival rate was 75% ~ 83%, virus-free rate only 70.6% ~ 76.5%.Shoot tip culture of the high rate of virus-free method of virus-free, virus-free high speed in a short period of time most of the original species of breeding material,but the existence of the shortcomings of this approach is the low survival rate of plants. In order to overcome this shortcoming, the tip is now often a combination of training and heat treatment to use. Shoot tip culture with a combination of heat treatment have been able to increase the detoxification effect of plant growth as a result of heat treatment can have their own area of the top of the expansion of immunization and is conducive to a larger cut of the tip (in 1mm or so) in order to improve the training or graft survival rate. Such as Cherry thermostat at 45 ℃for indoor training, training for 35 days, and then cut 0.2 ~ 0.4mm of shoot tip culture, with an average rate of 98% virus-free.PrincipleShoot tip culture is the principle of detoxification plant vascular system by mobile viruses, sub-vascular Health Organization does not exist, the virus only plasmodesma moving very slow, it is difficult to catch up with the growth of active meristematic tissue, so strong root growth, shoot tip is generally little or no virus, the virus distribution.。
红薯茎尖脱毒工作总结
红薯茎尖脱毒工作总结
红薯是我国重要的经济作物之一，但是红薯作为一种地下茎类植物，容易受到
各种真菌、细菌和病毒的侵害，影响产量和质量。
为了保障红薯的生产和质量，红薯茎尖脱毒工作显得尤为重要。
在过去的一段时间里，我们进行了一系列的红薯茎尖脱毒工作，现在我将对这些工作进行总结。
首先，我们对红薯茎尖进行了严格的筛选和鉴定工作。
通过对不同地区和不同
品种的红薯茎尖进行采集和观察，我们发现了一些受到真菌、细菌和病毒侵害的茎尖，并及时予以处理和清除，避免了这些病害的传播和扩散。
其次，我们进行了红薯茎尖的消毒工作。
在采集到的健康红薯茎尖上，我们采
用了一系列的消毒方法，包括化学消毒和生物消毒，以确保茎尖的健康和无菌状态。
这些消毒工作不仅能够有效地杀灭潜在的病原体，还能够保护红薯茎尖的生长和发育。
最后，我们进行了红薯茎尖的培养和繁殖工作。
通过对消毒后的红薯茎尖进行
培养和繁殖，我们成功地获得了大量的健康茎尖，并将其用于红薯的种植和繁殖工作中，为红薯的生产和质量提供了可靠的保障。
通过以上的工作总结，我们可以看到，红薯茎尖脱毒工作是一项非常重要的工作，它直接关系到红薯的生产和质量。
我们将继续加强对红薯茎尖脱毒工作的研究和实践，为红薯产业的发展做出更大的贡献。
茎尖脱毒的流程
茎尖脱毒的流程茎尖脱毒的那些事儿。
一、啥是茎尖脱毒呢？简单来说呀，茎尖脱毒就是一种很厉害的技术。
植物有时候会被病毒侵害，就像人生病了一样难受。
而茎尖脱毒就是要把植物茎尖那一小丢丢特别的部分取出来，因为这个地方可能没有病毒或者病毒特别少，然后用这个茎尖来培育出没有病毒的新植物。
你可以想象成是从一群有点“生病”的小伙伴里，找到那个最健康的小不点，然后让这个小不点发展出一群健康的小伙伴。
二、准备工作可不能少。
1. 植物材料的选择。
要找那种看起来虽然可能被病毒感染了，但是还有希望“抢救”的植物。
就像在医院里，医生要挑选那些虽然生病了但是还有生机的病人一样。
而且不同的植物在选择的时候还有不同的小窍门呢。
比如说有些植物要选长得比较壮实的，哪怕它有病毒症状，因为这样的植物本身的底子好，茎尖可能更有活力。
2. 工具和环境。
我们得有超级锋利的刀具，这样才能干净利落地切下茎尖，就像厨师切菜得有把好刀一样。
还有培养的容器啊，要干净又卫生，就像我们住的房子要打扫得干干净净才能住得舒服。
环境也很重要哦，要在一个无菌的环境里操作，这就好比是给植物做手术，得在超级干净的手术室里，不然到处都是细菌、病毒，这手术还怎么做呀。
三、茎尖的切取。
这可是个技术活呢。
茎尖特别特别小，就像小芝麻粒那么一丢丢。
我们得小心翼翼地把植物的茎尖切下来。
这就像是在做精细的手工活儿，稍微一不注意，可能就把茎尖切坏了，或者把周围带病毒的部分也带进去了。
而且不同植物的茎尖切取的大小还不太一样，有的植物茎尖可能稍微大一点没关系，有的就得特别特别小，简直是在考验我们的眼力和手的稳定性呢。
四、培养茎尖。
把切下来的茎尖放到专门的培养基里。
这个培养基就像是茎尖的小窝，里面有各种营养成分，就像妈妈给宝宝准备的各种好吃的一样。
茎尖在这个培养基里就开始慢慢生长啦。
它会先长出一点点小芽，然后慢慢地变成小幼苗。
这个过程就像看着一个小婴儿慢慢长大一样，充满了期待。
不过在这个过程中，我们得时刻关注着它，看看温度合不合适呀，光照够不够呀。
植物的茎尖培养脱毒技术
• 茎尖越小，去病毒机会越大，脱毒效果就越好， 但同时因为其含营养及水量太低，故培养时对培 养基的要求就越高，对剥离技术要求也越高。
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植物的茎尖培养脱毒技术应用
• 茎尖脱毒培养对植物病毒的脱除效果好，后代遗 传性稳定，是目前生产上最常用的脱毒措施，已 在马铃薯、花卉、水果、蔬菜等作物脱毒快繁上 得到了广泛应用。
接种
盖好瓶塞
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几种方法的配合使用是提高植物脱毒效果：
• (1) 高温热处理与微茎尖脱毒培养技术 • (2) 高温热处理与微（体）茎尖嫁接培养技术 • (3) 化学处理与茎尖脱毒培养技术
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香石竹脱毒的具体操作过和如下：
（1）热处理 将盆栽植株或离体瓶苗，在36～38℃下处理2周，或每天 在36℃16小时和38℃8小时处理共30天，光照为3000lx。
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主要方法步骤
• （1）茎尖的剥离：此步是技术关键，一般在解剖镜下操作。23cm的茎段，剥去大叶，水冲洗1h左右，酒精快速消毒，无菌条件 下5%漂白粉溶液（或其他消毒剂）消毒7-10min，无菌水清洗， 解剖镜下剥取茎尖。
• （2）切取茎尖的大小虽然切取茎尖越小，带有病毒的可能性就越小， 但组织培养中，切取的茎尖太小，则不易成活。不同种类的植物和 不同病毒，切取的最适茎尖大小也不同。
• （3）组织培养常用基本培养基是MS培养基，它有较高浓度的无机 盐，对促进组织分化和愈伤组织生长有利；植物生长调节的种类和 配比依培养种类和生长时期来调整。
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（一）、茎尖脱毒
1、茎尖脱毒的依据。
病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。
2、茎尖培养法脱除植物病毒的技术关键
（1）、被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内的分布
再脱毒之前，应了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置，以确定培养茎尖的大小
（2）、母体植株的选择和预处理
母体的选择：
欲脱毒材料的品种典型性：关系到脱毒以后的脱毒苗是否保持原品种的特征特性
植体健康程度选择：应选感病轻、带毒量少的健康植株作为脱毒的外植体材料，这样更容易获得脱毒株。
外植体预处理：
（3）、茎尖的剥离
在剥取茎尖时，把茎芽置于解剖镜下（8~40倍），一只手用镊子将其按住，另一只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针要常常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。
但要注意解剖针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。
当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下来，为了提高成活率，可带1-2枚幼叶，然后将其接到培养基上。
接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接种即可。
剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。
可在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，有助于防止茎尖变干。
将接种好的茎尖置于25℃左右的温度下。
每天以16小时2000-3000lx的光照条件下培养。
由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。
微茎尖需数月才能成功。
继代培养得到足够的检测苗、进行病毒检测。
（4）、脱毒效果检测
A 指示植物鉴定(indicator test plants) 所谓指示植物是指具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。
每种病毒都有自己敏感的植物，例如：
马铃薯病毒的敏感植物有千日红、黄花烟、心叶烟、毛叶曼佗罗
大丽花病毒的敏感植物为：矮牵牛、黄瓜、苋色蓠
菊花病毒：矮牵牛、豇豆
指示植物鉴定病毒的方法
a.摩擦接种法：
取培养植株的叶片置于研钵中，加入少量的水和等量的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），磨成匀奖，将其涂抹在指示植株叶片上，在指示植物的叶片撒上金刚砂，通过轻轻摩擦使汁浸入叶片表皮细胞而又不损伤叶片。
5分钟后用清水清洗叶面。
将指示植株放于防蚜虫网罩的温室内。
然后视其病斑的有无，来判断是否脱除了病毒。
例如：植物液接种后如使千日红叶片枯斑，黄花烟、心叶烟呈花叶，证明该植物体内具有马铃薯X病毒
b、嫁接法
有些病毒不是通过汁液传播，而是通过专门的介体传播的，例如草莓黄花病毒、草莓丛枝病毒是通过一种特殊的蚜虫为介体进行传播的。
这种病毒的鉴定，需将培养植株的芽嫁接在敏
感植物上，根据敏感植株的病症来判断是否脱除了病毒
B 血清鉴定(serologic test) 试管沉淀反应；免疫双扩散；酶联免疫吸附测定(ELISA)。
a、试管沉淀反应
在抗原-抗体最适比例的条件下，观察有无沉淀的产生来确定被测植株是否带病毒。
试管沉淀反应操作简单，需注意的问题：
①、叶绿体的自发凝聚
可用磷酸缓冲液提取汁液，再用氯仿处理除去叶绿体，pH 保持在6.5-8.5）
②、抗原抗体的比例要适当，当抗原过量时回抑制沉淀的形成
b、免疫双扩散
在半固体凝胶中测定在其中扩散的抗原和抗体间的沉淀反应的方法。
与沉淀法比较起来有两个优点：一是节约血清，二是汁液不用特殊处理。
步骤：
①倒胶，一般厚2mm
②打孔，多打成梅花型
③加样，加血清和汁液。
一般加样后在37℃恒温过夜，即可进行结果观察。
有扩散沉淀的即为带毒株，没有则为不带毒株
c、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）
它是将抗原、抗体的免役反应和酶的高效催化反应有机结合起来的一种综合性技术。
即通过化学的方法将酶与抗体或抗原结合起来，形成酶标记物。
然后将它与相应的抗原或抗体起反应，形成酶标记的免疫复合物。
结合在免疫复合物的酶，在遇到相应的底物时，催化无色底物生成有色底物，通过比色计可以准确测定。
优点是灵敏度高，测定快速，每次可以同时测定多个样品。
C 电镜检查法
采用电子显微镜，可直接观察样品材料有无病毒存在，还可以进一步鉴定病毒颗粒大小、形状和结构，这些特征相当稳定，因此电镜检查法即准确又有效，但需要有一定的设备和技术。
D 分子检测法
例如RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reation）将待测的样品的总RNA与cDNA合成的试剂盒进行反应，合成cDNA，然后利用病毒DNA特有的序列设计引物进行PCR反应，即可知道在寄主中是否有病毒基因的表达
n 脱毒苗的离体保存与繁殖:一般是在实验室进行，一般每月继代一次，可以在培养基中加入生长延缓剂，如B9和矮壮剂可2-3个月继代一次，也可放到液氮或4℃冰箱中保存n 建立脱毒种苗生产繁殖网络体系：如果试管苗生产成本过高或移栽困难，可将试管苗选择种植在一定的控制区域，从繁殖技术和环境隔离上保证较高水平，使得繁殖的种苗能有效的防止病毒的再侵染
（5）影响脱毒效果的因素
n 母体材料病毒侵染的程度:单一病毒感染的植株脱毒较容易,而复合浸染的植株脱毒较难
n 外植体的生理状态:顶芽的脱毒效果比侧芽好,生长旺盛的芽比休眠芽或快进入休眠的芽好
n 起始培养的茎尖大小:不带叶原基的生长点培养脱毒效果最好,带1-2个可获得40%脱毒苗
实例：
1.马铃薯是用块茎种植的无性繁殖作物，在生长期间容易被病毒侵染造成
病毒性退化，并常受晚疫病、环腐病、青枯病和黑胫病等多种病害侵袭。
所以马铃薯虽然是高产作物，但常常并不高产、稳产。
特别是病毒性退化，是各地马铃薯生产的主要威胁。
为了解决这一问题，我国于70 年代引进了马铃薯茎尖脱毒技术，80 年代逐渐普及到各省、市、自治区。
现在许多研究单位均已掌握了马铃薯脱毒苗的生产与快繁技术，脱毒薯正在迅速推广，并比一般种薯增产30％～50％，甚至一倍以上，很受农民欢迎。
同时我国各地在马铃薯生产过程中，因地制宜地创造了多种保种技术，如一季作地区的夏播留种；中原二季作地区的阳畦留种和春季早收留种并实行秋播；云南一些地区的三季薯留种法等。
这对防止马铃薯种薯的迅速退化和减产都有显著作用。
脱毒薯和留种技术相结合，既能增产，又能延长种薯使用年限。
2.南罗平小黄姜的茎尖脱毒组培快繁。