生化试剂的基本知识
干生化试剂原理及应用
稍加改进的三层结构
在试剂层上加一多孔胶膜过滤层，其作用 是将样品中的杂质过滤掉，并起保护试剂 层作用。常见的是微量法测定葡萄糖的试 剂条。
三层试剂载体的测定光路是通过透明的塑 料基片，而不经过最上面的过滤层，这样 消除了样品中干扰成分的影响，保证了待 测成分测定的稳定性和准确性。
True Dry Chemistry 真正之干化学
视所采用的分析方法而定，干片的大小大致与 一枚邮票相同，显色剂层呈现的颜色深浅与待 测物浓度成正比。
Components of One Slide 干片之基本组成
Sample 标本
Spreading layer 分布扩散层 Reagent layer 试剂层
Indicator layer 指示剂层 Support layer 支持层
Dry Slide 干片
Methodology 方法学
CM/RT Slide
Colorimetric / Rate Slide
比色 / 速率法干片
Measure chemistry concentration
by color development 通过颜色的变化来测定化学物浓度
比色/速率法干片
用于生化分析的试剂载体最简单的是二层 结构，在支持层塑料基片上有一试剂层纤 维素片，在纤维素片中预固化了全部试剂。 常见的是尿生化分析试剂条：
• 尿液中的待测成分与预固相在纤维素片上 的试剂直接反应，通过反射光度计测定其 颜色的改变，从而计算待测成份的浓度。 这种方法只能对待测成分进行定性或半定 量测定，这样就限制了它在其它须准确定 量的标本的应用。
Spreading Layer 分布扩散层
Spreading layer 分布层
试剂分类三类
试剂分类三类
试剂是科研实验中必不可少的一部分，按照其化学性质、用途和制备方法等不同分类方式，试剂可以划分为三类。
第一类：无机试剂。
无机试剂是以无机化合物为原料制备的试剂，包括各种无机盐、氧化物、酸、碱、金属、卤素等。
无机试剂用途广泛，常用于化学分析、生物化学、药物研究、环境检测、工业生产等领域。
第二类：有机试剂。
有机试剂是以有机化合物为原料制备的试剂，包括有机酸、醇、酮、醛、酯、胺、腈等。
有机试剂用途广泛，常用于有机合成、分析检测、药物研究、环境检测等领域。
第三类：生化试剂。
生化试剂是以生物组分为原料制备的试剂，包括酶、抗体、细胞培养试剂、基因工程试剂等。
生化试剂主要用于生命科学领域的研究和应用，如蛋白质、核酸、细胞等的分离、纯化、检测、研究和应用。
除了以上三类试剂外，还有其他分类方式，如按照用途可以分为分析试剂、标准物质和实验室试剂等；按照制备方式可以分为天然试剂、人工合成试剂、基因重组试剂等。
不同的试剂分类方式可以更好地了解和使用试剂，提高实验效率和科研水平。
关于生化单试剂和双试剂的基本概念
生化单试剂和双试剂是生物学和化学领域内的重要概念，对于研究生物分子和细胞的结构、功能及调控过程至关重要。
在本文中，我将为您深入探讨这两个概念的基本概念，并分析它们在生物科学研究中的重要性。
1. 关于生化单试剂的基本概念生化单试剂是指一种包含多种生物化学试剂以及其它相关试剂成分的复合试剂，用于进行生物分子和细胞的结构、功能、代谢过程、调控及其它生物学过程研究的试剂。
这种试剂不仅可以进行单一目的的研究，还可以进行多种生物学过程的研究，具有广泛的应用范围和研究价值。
生化单试剂的基本概念是其包括多种试剂成分，可以在一个实验中完成多种生物学过程的研究，具有高效性和经济性。
在生化单试剂中，通常包含用于分析和检测的试剂、用于生物分子分离和检测的试剂、用于细胞培养和检测的试剂以及其它相关试剂成分等。
这些试剂的体系结构特点中包括了对生物学过程的涵盖范围具有宽广性和有效性、试剂成分之间相互配合性好等特点。
2. 关于生化双试剂的基本概念与生化单试剂相对应的是生化双试剂。
生化双试剂是指同时包含两种生物化学试剂以及其它相关试剂成分的复合试剂，用于进行生物分子和细胞的结构、功能、代谢过程、调控等生物学过程研究的试剂。
这种试剂相对于生化单试剂，其具体用途更多的是用于对两种相关生物学过程进行研究，并能达到最佳的研究效果。
生化双试剂的基本概念是其包含两种生物化学试剂成分，能够在一个实验中对两个相关生物学过程进行研究，具有高效性和经济性。
这种试剂体系结构特点中包括了对两个相关生物学过程的研究具有高效性和体系独特性、试剂成分之间相互配合性好等特点。
3. 生化单试剂和双试剂的重要性及应用前景生化单试剂和双试剂在生物学研究中具有重要的应用价值。
它们具有良好的研究灵活性，能够满足多种生物学过程的研究需求。
它们具有高效性和经济性，能够为生物学研究提供便利。
生化单试剂和双试剂在生物学研究中具有广阔的应用前景。
在未来，随着生物学研究的不断深入和发展，生化单试剂和双试剂将在生物学研究中发挥越来越重要的作用。
生化试剂常用的溶剂
生化试验中常用的溶剂我们在生化检测或者生化试验中，几乎所有的生化反应都是在溶液中完成的；那么这些生化试剂所处的溶液环境就至关重要。
所以不同类型的溶剂就有着不同的用途。
首先从极性上区分极性顺序：水(最大）>甲酰胺>三氟乙酸>DMSO>乙腈>DMF>六甲基磷酰胺>甲醇>乙醇>乙酸>异丙醇>吡啶>四甲基乙二胺>丙酮>三乙胺>正丁醇>二氧六环>四氢呋喃>甲酸甲酯>三丁胺>甲乙酮>乙酸乙酯>三辛胺>碳酸二甲酯>乙醚>异丙醚>正丁醚>三氯乙烯>二苯醚>二氯甲烷>氯仿>二氯乙烷>甲苯>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油（石油醚）1、常用溶剂：DMF、氯苯、二甲苯、甲苯、乙腈、乙醇、THF、氯仿、乙酸乙酯、环己烷、丁酮、丙酮、石油醚。
2、比较常用溶剂：DMSO、六甲基磷酰胺、N-甲基吡咯烷酮、苯、环己酮、丁酮、环己酮、二氯苯、吡啶、乙酸、二氧六环、乙二醇单甲醚、1,2-二氯乙烷、乙醚、正辛烷。
3、一个好的溶剂在沸点附近对待结晶物质溶解度高而在低温下溶解度又很小。
DMF、苯、二氧六环、环己烷在低温下接近凝固点，溶解能力很差，是理想溶剂。
乙腈、氯苯、二甲苯、甲苯、丁酮、乙醇也是理想溶剂。
4、含有羟基、氨基而且熔点不太高的物质尽量不选择含氧溶剂。
因为溶质与溶剂形成分子间氢键后很难析出。
5、含有氧、氮的物质尽量不选择醇做溶剂，原因同上。
6、溶质和溶剂极性不要相差太悬殊。
通常，在我们生化试验中，主要分析的对象是血液等体液，这些分析对象主要还是水的溶液或者浊液。
所以我们生化试验中，试剂优先考虑的还是以水作为溶剂的溶液。
德晟生化科技在研发产品试剂时，也考虑到这一点，对试剂进行官能团修饰时，保证试剂都是以水作为溶剂，而且在色原底物，缓冲剂，发光剂方面，血液抗凝剂方面水溶性都做得非常好。
基础16项生化试剂的种类及意义
考核生化试剂的种类及意义一、血脂类检查项目（4项）1.总胆固醇（CHO）参考值：0～5.2mmol/L（90～200mg/dL）高胆固醇血症与动脉粥样硬化的形成有明确关系，血液胆固醇增高多见于甲状腺功能减低，糖尿病等;胆固醇降低见于营养不良，肝功能严重低下等。
血清胆固醇的测定可用作肝脏功能、胆汁功能、肠吸收功能和冠状动脉疾病的诊断指标。
它在高脂蛋白血症的诊断和分类方面也有着重要的意义。
血清总胆固醇超过5.70mmol/L可考虑为高胆固醇血症，高胆固醇血症容易引起动脉粥样硬化，造成堵塞性心脑血管疾病，病理性高胆固醇血症见于肾病综合症、糖尿病、甲状腺功能减退。
胆固醇降低常见于：贫血、肝硬化、甲亢、营养不良等。
因此，胆固醇的测定对于血脂疾病的诊断具有重要的临床意义。
2.甘油三酯（TG）参考值：0.7~1.7mmol/L高甘油三酯血症为心血管疾病的危险因素,降低则见于甲状腺功能亢进,肝功能严重低下等。
测定甘油三酯的重要意义在于诊断和处理高脂血症。
这些疾病可能是原发性的，或是继发于其它疾病如肾病、糖尿病和内分泌失调。
甘油三酯增高常见于：高脂血症、肾病综合症、糖尿病、肝胆疾病、动脉粥样硬化、甲减等。
甘油三酯降低常见于：严重营养不良、脂肪消化吸收障碍、甲亢。
甘油三酯升高已被证实是冠状动脉硬化性心脏病的危险因素。
因此，甘油三酯的测定是对于血脂疾病的诊断具有重要的临床意义。
3.高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）参考值：0.77～2.25mmol/L（47～65mg/dl）降低见于急、慢性肝病,糖尿病,慢性贫血等高密度脂蛋白胆固醇的主要生理功能是转运磷脂和胆固醇，它是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白，是冠心病的保护因子，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关。
临床上以不同种类脂蛋白比例的分析作为不同类型的高脂蛋白症的鉴别诊断。
高密度脂蛋白胆固醇增高常见于：饮酒、长期体力活动等。
高密度脂蛋白胆固醇降低常见于：冠心病、脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化等。
32种常用生化试剂的配制
试剂的配制（1） 2,4—二硝基苯肼溶液Ⅰ．在15 mL浓硫酸中，溶解3g 2,4—二硝基苯肼。
另在70 mL 95%乙醇里加20 mL水。
然后把硫酸苯肼倒入稀乙醇溶液中，搅动混合均匀即成橙红色溶液。
（若有沉淀应过滤）Ⅱ．将1.2g 2,4—二硝基苯肼溶于50 mL 30%高氯酸中。
配好后储于棕色瓶中，不易变质。
I法配制的试剂2,4—二硝基苯肼浓度较大，反应时沉淀多便于观察。
Ⅱ法配制的试剂，由于高氯酸盐在水中溶解度很大，因此便于检验水溶液中的醛且较稳定，长期贮存不易变质。
（2）饱和亚硫酸氢钠水溶液先配制40 %亚硫酸氢钠水溶液。
然后在每100 mL的40 %亚硫酸氢钠水溶液中，加不含醛的无水乙醇25 mL，溶液呈透明清亮状。
由于亚硫酸氢钠久置后易失去二氧化硫而变质，所以上述溶液也可按下法配制：将研细的碳酸钠晶体（Na2CO3·10H2O）与水混合，水的用量使粉末上只覆盖一薄层水为宜。
然后在混合物中通入二氧化硫气体，至碳酸钠近乎完全溶解，或将二氧化硫通入1份碳酸钠与3份水的混合物中，至碳酸钠全部溶解为止。
配制好后密封放置，但不可放置太久，最好是用时新配。
（3）Schiff（希弗）试剂在100 mL热水里溶解0.2 g品红盐酸盐（也有叫碱性品红或盐基品红），放置冷却后，加入2g亚硫酸氢钠和2 mL浓盐酸，再用蒸馏水稀释到200 mL。
或先配制10 mL二氧化硫的饱和水溶液，冷却后加人0．2g品红盐酸盐，溶解后放置数小时使溶液变成无色或淡黄色，用蒸馏水稀释至200 mL。
此外，也可以将0.5 g品红的盐酸盐溶于100 mL热水中，冷却后用二氧化硫气体饱和至粉红色消失，加人0.5 g活性炭，振荡过滤，再用蒸馏水稀释至500 mL。
本试剂所用的品红是para-rossaniline（或称para-fuchsin,又称假红）。
此物与另一类似物rossaniline（或称fuchsin,称洋红）不同，现以它们的盐酸盐为例，对比结构式如下：C NH2 NH2NH2CH2IH-CNH2NH2CI-++3NH2品红溶液原是桃红色，被二氧化硫饱和后变成无色的Schiff试剂，其变化过程如下：C NH2 NH2NH2C NH2NH2+3NH2CI-+H2SO4SO3H+HCI NH2NH2 CSO3H +NHNHHC2SO2HSO2H 2SO2NH2Schiff试剂应密封贮存于暗冷处，倘若受热见光或露置空气中过久，试剂中的二氧化硫易失，结果又显桃红色，遇此情况，应再通入二氧化硫，使颜色消失后使用。
实验室试剂分类及管理
实验室试剂分类及管理一、实验室试剂分类实验室试剂是实验室常用的化学物质，按照其性质和用途不同，可以分为以下几类：1. 无机试剂无机试剂是指化学成分中不包含碳元素的化合物。
常见的无机试剂有盐酸、硫酸、氢氧化钠等，其在化学分析、制备实验和其他实验中起着重要的作用。
2. 有机试剂有机试剂是指含有碳元素的化学物质。
常见的有机试剂有醇类、酮类、酸类等，其在有机合成、生物化学、药物研发等实验中被广泛应用。
3. 生化试剂生化试剂用于生物化学实验和生物学研究。
常见的生化试剂包括酶类、蛋白质、核酸等，在分子生物学、细胞生物学、生物工程等领域有着重要的用途。
4. 分析试剂分析试剂主要用于化学分析和检测。
常见的分析试剂有指示剂、标准溶液、试纸等，能够帮助实验人员进行定性、定量分析和判断。
二、实验室试剂管理1. 贮存环境实验室试剂的贮存环境应符合以下要求：•温度适宜：不同试剂的贮存温度要根据其性质而定，一般要求在常温下保存，避免高温或低温环境。
•防潮防湿：试剂容器应密封良好，避免受潮受湿，以防止试剂性质变化。
•防火防爆：易燃、易爆试剂要单独贮存，禁止与氧化剂混放。
实验室内要有相应的防火设施和器材，并定期检查维修。
2. 标签标识试剂容器上应标明试剂的名称、化学式、纯度、危险性等信息，以便实验人员正确识别和使用。
标签上还应有贮存时间和有效期限的提示，避免使用过期试剂。
3. 存放位置试剂的存放位置要分类放置，避免不同性质试剂混放。
可根据试剂种类或功能进行分区，如将无机试剂、有机试剂、生化试剂、分析试剂分别摆放。
同时，要将易燃、易爆试剂放在易燃物品柜中，有毒试剂放在专用柜中，确保安全性。
4. 使用记录实验室应建立试剂使用记录，记录试剂的名称、规格、批号、领用人、领用时间等关键信息，以便进行溯源和管理。
5. 废弃处理过期或废弃的试剂要进行及时处理，严禁随意倾倒。
应根据试剂的性质，采取相应的处理方式，如回收利用、交由专业机构处理或按照相关法规进行处置。
生化试剂的基础知识
生化试剂的基础知识生化试剂的基本知识一、生化试剂的分类 (4)(一)按照化学性质分类4(二)按照临床应用分类4二、反应速度特性 (5)(一)终点法试剂5(二)动力学法试剂6三、显色原理 (9)(一)NAD-NADH和NADP-NADPH系统9(二)p-NP和p-NA系统10(三)H2O2偶联的指示系统10(四)抗原抗体反应指示系统10(五)其它显色反应11四、性能评价方法 (11)(一)主要性能指标：11(二)性能评价方法12一、生化试剂的分类(一)按照化学性质分类1.酶类：包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE 等。
2.底物/代谢产物类：包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb ,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。
3.无机离子类：包括Ca,P,Mg,Cl等。
4.特种蛋白类：包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子)，IgG,IgA,IgM等。
(二)按照临床应用分类1.无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。
2.肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。
3.肾功能：UA，UREA，Cr等。
4.心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH，AST，MSO。
5.糖尿病：GLU等。
6.前列腺疾病：ACP，p-ACP等。
7.胰腺炎：α-AMY。
8.血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。
9.痛风：UA。
10.有机磷中毒：ChE。
11.免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)， IgG，IgA，IgM，Kappa链，Lambda链。
二、反应速度特性按照反应速度，可以分为终点法试剂和动力学试剂。
而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。
(一)终点法试剂终点法，指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。
生化试剂培训完整ppt课件
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二、常见校准方法
（2） 2点线性法 测定校准液1（试剂空白）与校准液2，形 成 线性工作曲线,校准曲线如图2-7所示：
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二、常见校准方法
（3） 多点线性法 通过空白（或校准液1）和校准液（第2校准液及第6校准液）的测定 用线性回归制成线性工作曲线,校准曲线如图2-8所示:
图2-8 多点线性校准曲线（线性）
生化试剂培训教材
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第一部分 基本术语
• 一、临床化学自动分析使用术语
• 1、双波长 由主波长和副波长构成，可以消除对实 验结果的影响。主波长是生成的产物颜色对光吸收 的特有波长。副波长是为消除其他干扰物质在主波 长造成测定干扰所设定的波长。
• 2、反应杯空白 在特定波长下，光通过以蒸馏水 或空气为反应体系所测得的吸光度值。
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一、测试方法
反应曲线; R1
AL AL 1 2
SB B1 B2 B3
( AM AM 1) 2
时间（s）
分析项目：如酶法的肌酐（CRE）等。
图2-3 2点法终点
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一、测试方法
• 2点速率 测定2个测光点，此两点既不测反应初始吸
光度也不是终点吸光度，在单位时间内计算2点 间的吸光度之差用于样本浓度的计算，称为2点 速率法，反应曲线如图2-4所示：
• 5、延迟时间
•
指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。
一般用于两点法和速率法。
• 注意：在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩 短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底 物耗尽.ALT,AST,BUN,HBDH等负反应试剂 ，浓度 极高时测值不一定是超线性，还有可能是底物耗尽 而导致测值很低，这时要注意看线并且把吸光度界 限设定在0.5 。当有吸光度界限超出报警进行稀释再 测定。一般进行10倍稀释再做，如有超出继续稀释。
生化试剂的基础知识
生化试剂的基本知识一、生化试剂的分类1(一）按照化学性质分类1(二)按照临床应用分类1二、反应速度特性2(一）终点法试剂2（二)动力学法试剂3三、显色原理4(一)NAD-NADH和NADP-NADPH系统4（二)p—NP和p-NA系统5(三)H2O2偶联的指示系统5(四)抗原抗体反应指示系统5（五)其它显色反应5四、性能评价方法5(一）主要性能指标：5(二）性能评价方法6一、生化试剂的分类(一)按照化学性质分类1.酶类：包括ALT，AST，ALP,ACP，r—GT,α-HBDH，LDH，CK,CK-MB，α—AMY,MSO,ADA,ChE等。
2.底物/代谢产物类：包括TG,TC,HDL—C，LDL—C,UA,UREA，Cr，Glu,TP,Alb,T—Bil，TBA，NH4+，CO2等。
3.无机离子类:包括Ca，P,Mg，Cl等。
4.特种蛋白类：包括apoAl，apoB,Lp(a)，C3，C4,PFB（B因子),IgG,IgA,IgM等。
(二)按照临床应用分类1.无机离子：包括Ca,P，Mg，Cl等。
2.肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO,T—Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。
3.肾功能:UA,UREA，Cr等。
4.心肌酶谱：CK，CK-MB,LDH,α-HBDH，AST，MSO。
5.糖尿病:GLU等.6.前列腺疾病：ACP，p-ACP等.7.胰腺炎:α—AMY。
8.血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp（a)。
9.痛风:UA。
10.有机磷中毒：ChE。
11.免疫性疾病:C3,C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM，Kappa链,Lambda链。
二、反应速度特性按照反应速度，可以分为终点法试剂和动力学试剂。
而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。
(一)终点法试剂终点法，指经过一段时间（一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。
常用生化试剂作用
常用生化试剂作用：1、蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，在尿素和SDS中稳定。
一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。
2、SDS：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。
3、IPTG：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，常用于蓝白斑筛选及IPTG 诱导的细菌内的蛋白表达等。
IPTG和乳糖的结构相似，所以它和乳糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。
与乳糖不同的是，IPTG不被β-半乳糖苷酶水解。
常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。
作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。
4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的显色试剂，在IPTG的催化下显蓝色。
常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。
5、G418：一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最常用的选择试剂。
当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后，则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。
Ｇ418的这一选择特性，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
6、DMSO：二甲基亚砜。
实验室常用于作液体层析溶剂，同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。
能溶于所有烷烃和烯烃。
7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用，能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40。
8、NP-40：很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
一些试剂的生化作用原理
8．如何选择聚乙）沉淀DNA，大小不同的DNA分子所用的PEG的浓度也不同，PEG的浓度低，选择性沉淀DNA分子量大，大分子所需PEG的浓度只需1％左右，小分子所需PEG浓度高达20％。本实验选择性沉淀4.3kb的pBR322质粒DNA，每毫升加入0.4毫升的30％ PEG，其最终PEG浓度为12％。PEG选择性沉淀DNA的分辨率大约100bp。
11．为什么要用pH8的Tris水溶液饱和酚？呈粉红色的酚可否使用？如何保存酚不被空气氧化？
1．溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
7．为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？
在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。磷酸盐缓冲系统（pKa＝7.2）和硼酸系统（pKa=9.24）等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2＋产生Ca3(PO4)2沉淀；在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定DNA的活性。
生化诊断试剂
生化诊断试剂的界定及分类—、定义诊断试剂从一般用途来分，可分为体内诊断试剂和体外诊断试剂两大类。
除用于诊断的如旧结核菌素、布氏菌素、锡克氏毒素等皮内用的体内诊断试剂等外，大部分为体外诊断制品。
目前国内市场上所应用的体外诊断试剂主要包括临床生化诊断试剂、免疫诊断试剂和核酸诊断试剂等。
临床生化诊断试剂和免疫诊断试剂目前市场份额较大，而核酸分子诊断试剂是诊断试剂中技术最尖端，增长最快的类别。
生化诊断是指有酶反应参与、或者抗原抗体反应参与，主要用于测定酶类、糖类、脂类、蛋白和非蛋白氮类、无机元素类等生物化学指标、机体功能指标或蛋白的诊断方法。
生化诊断试剂主要是针对血常规、尿常规、肝功能、肾功能、胰腺、糖尿等疾病的诊断试剂。
生化诊断是最早实现自动化的检测手段，也是目前最常用的体外诊断方法之一。
二、分类生化诊断试剂涵盖肝功、肾功、血脂、心肌酶、胰腺、特殊蛋白等，能够满足终端用户的各种生化检测需求。
图表1生化诊断试剂分类行业发展概述—、国内外生化诊断试剂行业发展概况1．全球生化诊断试剂行业发展概况2000年，全球体外诊断市场的购买力约为180亿～200亿美元（包括器械、试剂和其他消费品）。
以专业划分，整个诊断用品市场大体由8个部分构成，其中临床化学最大，市场份额34％，接下来依次为免疫化学29％，血糖检测14％，血液学7％，微生物学5％，血库4％，核酸探针3％，其他（包括凝结剂）4％。
2008年全球诊断市场规模约为550亿美元左右（包括仪器、试剂），以5%-7%的年复合增长率增长。
据美国医药咨询公司F&S预测，2014年，全球体外诊断市场规模将增至503亿美元。
在全球的体外诊断市场中，美国、欧洲、日本占据大部分的市场份额，新兴市场占据的份额很小。
随着生物医药科技的突飞猛进以及整个诊断试剂产业的突破和发展，这一切无疑将给遭受各种疾病折磨的患者带来更多的新生机会。
在世界经合组织国家中，最大的体外诊断试剂市场为北美地区，2010年北美市场销售额为184.5亿美元，到2012年增长到221亿美元；而西欧市场2010年为137亿美元，到2012年达到150亿美元。
生化检验实验室基本知识
酸（氧二化）酶单，试但剂不与含双脂试蛋剂白脂肪酶），消耗 游动离TG甘反油应。。试比剂优如2点酶（法含测脂定蛋G白LU脂、肪C酶H缺O）点、起 U酶单A，、操清H作D除简L维单等、C，对快试速Tr剂in1d含er维反生应素的C干12氧..抗 分扰化干 析扰 误本能 差科力 较差 大
三、生化检验项目
(一)常规检验项目 1.单检验项目 实用性：经济、快速 可靠性：针对性强 2.组合检验项目 全面性：提供全面的检验信息 高效性：提高检验和诊断效率
三、生化检验项目
（二）急诊生化检验项目
急诊项目：指对临床危急、重症病人的诊断、 抢救和治疗有重要指导意义的检验项目。一 般要求从“标本采取”到“检验报告”发出 控制在2h内。如血气分析、肾功、电解质、 心功等
二、生化试剂盒
商品化试剂盒的广泛应用，对检验医学的发 展产生了深远的影响，它不仅使检验操作更 简便，而且使试剂生产和检验操作更易标准 化和规范化，尤其是有利于提高检验质量
二、生化试剂盒
方法学 物理性状
组合方式
化学法 液体型试剂（自配） 多剂型试剂
操作方式
手工多步骤操作
酶 法 冻干型试剂 单剂型试剂 离心式自动分析仪
急 诊 项 目
危 急 值
常 规 项 目
检验项目
三、生化检验项目
（三）特殊项目 指标本采集技术高，或标本数量少，或含有
传染性病毒或细菌的标本，这些标本中的项 目不管是急诊还是常规项目均属于特殊项目
四、生化仪器
(一)离心机 (二)电解质分析仪 (三)血气分析仪 (四)生化分析仪
（一）离心机
离心机：利用离心力分 离液体与固体颗粒或液 体与液体的混合物中各 组分的机械
生化试剂分类和特点
生化试剂分类和特点一、试剂盒的分类和特点目前临床生化诊断试剂有液体型、粉剂型、片剂型，有单一试剂、双试剂、干试剂、多试剂等。
（一）液体型试剂无论是单试剂还是双试剂型试剂，目前乃至今后仍以液体型为主要剂型。
其优点是液体型试剂的试剂组分高度均一，瓶间差异小，测定重复性好而且使用方便；它也无需加入辅助试剂及蒸馏水，防止了外源性水质对试剂的影响，性能较稳定，测定结果比较准确。
缺点是液体型试剂（尤其是酶试剂）保存时间较短，不便于运输。
1．液体单试剂所谓液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起，组成为一种试剂。
应用时，只须将标本和试剂按比例混合，即可进行相应的生化反应，然后用适当的方法检测结果。
应用十分方便。
2．液体双试剂所谓液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的试剂，按用途科学地分成两类，分别配成两种试剂，通常试剂加入后可起到全部或部分消除某些内源性干扰的作用，**试剂为启动被检测物质反应的试剂，两种试剂混合后才共同完成被检项目的生化反应。
然后用适当的方法检测结果。
双试剂型试剂盒，它保持了单试剂的优点，增强了抗干扰能力和试剂的稳定性，提高了测定的准确性。
目前市场上的生化检测试剂盒主要以液体双试剂为主，与其它类型试剂比较具有液体试剂和双试剂的优点：提高了抗干扰反应的能力、使测定更科学合理、稳定性能优良。
（二）粉（片）剂型试剂所谓粉剂型及片剂型试剂，即是将试剂的各组分用球磨技术粉碎成粉剂或混合后压成片剂，使用前再加入指定的溶液复溶成液体试剂。
（三）快速反应试剂盒快速反应试剂盒主要是为了适应生化分析的技术进步，缩短反应时间，提高工作效率。
目前要求这种快速反应的试剂用户不多。
（四）一步法试剂盒这是随着方法学的改进，特别是**技术的进步，利用特异性抗体参与反应的新型试剂。
（五）多项同测组合试剂盒这类型试剂主要是用于三点双项同测终点法、三点双项同测连续监测法和三点双项同测终点速率法测定的试剂盒。
实验室最危险的生化试剂
实验室最危险的17种东西1.DMSO：DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。
用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。
是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。
对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。
也可作为农药的添加剂。
也是一种十分重要的化学试剂。
DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。
但是研究表明，DMSO存在严重的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性。
DMSO是毒性比较强的东西，用的时候要避免其挥发，要准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤.最为常见的为恶心、呕吐、皮疹及在皮肤、和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味。
吸入：高挥发浓度可能导致头痛，晕眩和镇静。
皮肤：能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感，如同所见的皮疹及水泡一样。
若二甲基亚砜与含水的皮肤接触会产生热反应。
要避免接触含有毒性原料或物质的二甲基亚砜溶液，因其毒性不为人所知，而二甲基亚砜却可能会渗入肌肤，在一定条件下会将有毒物质代入肌肤。
吸收：吸收危险性很低。
2.EB：EB（Ethidium bromide，溴化乙锭）溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。
溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。
它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。
当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。
这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。
生化试剂的基础知识详解
生化试剂的基础知识——详解一、生化试剂的分类(一)按照化学性质分类1.酶类：包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE等。
2.底物/代谢产物类：包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。
3.无机离子类：包括Ca,P,Mg,Cl等。
4.特种蛋白类：包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子)，IgG,IgA,IgM等。
(二)按照临床应用分类1.无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。
2.肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。
3.肾功能：UA，UREA，Cr等。
4.心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH，AST，MSO。
5.糖尿病：GLU等。
6.前列腺疾病：ACP，p-ACP等。
7.胰腺炎：α-AMY。
8.血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。
9.痛风：UA。
10.有机磷中毒：ChE。
11.免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM，Kappa链，Lambda链。
二、反应速度特性按照反应速度，可以分为终点法试剂和动力学试剂。
而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。
(一)终点法试剂终点法，指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。
如图（1）。
整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。
终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可，是最理想的反应模型。
生化试剂的种类与意义
考核生化试剂的种类及意义一、血脂类检查工程〔13项〕1.总胆固醇〔CHO〕参考值：0～5.2mmol/L〔90～200mg/dL〕高胆固醇血症与动脉粥样硬化的形成有明确关系，血液胆固醇增高多见于甲状腺功能减低，糖尿病等;胆固醇降低见于营养不良，肝功能严重低下等。
血清胆固醇的测定可用作肝脏功能、胆汁功能、肠吸收功能和冠状动脉疾病的诊断指标。
它在高脂蛋白血症的诊断和分类方面也有着重要的意义。
血清总胆固醇超过5.70mmol/L可考虑为高胆固醇血症，高胆固醇血症容易引起动脉粥样硬化，造成堵塞性心脑血管疾病，病理性高胆固醇血症见于肾病综合症、糖尿病、甲状腺功能减退。
胆固醇降低常见于：贫血、肝硬化、甲亢、营养不良等。
因此，胆固醇的测定对于血脂疾病的诊断具有重要的临床意义。
2.甘油三酯〔TG〕参考值：0.7~1.7mmol/L高甘油三酯血症为心血管疾病的危险因素,降低则见于甲状腺功能亢进,肝功能严重低下等。
测定甘油三酯的重要意义在于诊断和处理高脂血症。
这些疾病可能是原发性的，或是继发于其它疾病如肾病、糖尿病和内分泌失调。
甘油三酯增高常见于：高脂血症、肾病综合症、糖尿病、肝胆疾病、动脉粥样硬化、甲减等。
甘油三酯降低常见于：严重营养不良、脂肪消化吸收障碍、甲亢。
甘油三酯升高已被证实是冠状动脉硬化性心脏病的危险因素。
因此，甘油三酯的测定是对于血脂疾病的诊断具有重要的临床意义。
3.高密度脂蛋白胆固醇〔HDL-C〕参考值：0.77～2.25mmol/L〔47～65mg/dl〕降低见于急、慢性肝病,糖尿病,慢性贫血等高密度脂蛋白胆固醇的主要生理功能是转运磷脂和胆固醇，它是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白，是冠心病的保护因子，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关。
临床上以不同种类脂蛋白比例的分析作为不同类型的高脂蛋白症的鉴别诊断。
高密度脂蛋白胆固醇增高常见于：饮酒、长期体力活动等。
高密度脂蛋白胆固醇降低常见于：冠心病、脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化等。
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属于零级动力学法的试剂主要有：
ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，α-HBDH，LDH，CK， CK-MB,α-AMY，MSO，ADA，ChE ，TBA等
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反应速度特性之动力学法
一级动力学法(固定时间法）
在一定的反应时间内，反应速度与底物 浓度的一次方成正比,由于底物在不断的消耗， 因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸 光度的增加(或降低)速度越来越小，这类反应 A 达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时 间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应 刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一 段延迟时间才能进入稳定反应期，必需在特 定时间段内进行监测，各试剂商对这段时间 有严格规定。
作为该指示系统常用的工具酶有LDH、MDH、 GLDH和G6PDH
目前利用此指示系统进行测定的临床项目有： ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH 、 Glu、 UREA、NH4+ 、CO2等。
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显色原理
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p-NP和p-NA指示系统
p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收 峰，根据405nm吸光度的变化，可以测 定物质的浓度或活性。
在一固定时间间隔中，底物浓度的变化 量正比于底物的初浓度。这是一级反应的通 性。该段时间内吸光度的增加(或)降低与被测 定物的浓度成正比。
t1 t2 t3
t4 t
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反应速度特性之动力学法
属于一级动力学法的试剂主要有：
Cr（苦味酸法），UREA（紫外监测法）
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反应速度特性之动力学法
零级动力学法
指反应过程中反应速度维持不变，达到
最大，与底物浓度无关，因此，在整个反应
过程中，反应物可以匀速地生成某个产物， A
导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地
减小或增加，减小或增加的速度(△A/min)
与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶
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生化试剂的基本知识
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主要内容介绍
生化试剂的分类 反应速度特性 显色原理 性能评价方法
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生化试剂的分类
按照化学性质分
酶类：包括ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，α-HBDH，LDH，CK， CK-MB,α-AMY，MSO，ADA，ChE等。
底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，UREA，Cr， Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，TBA，NH4+，CO2等。
无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl等。
特种蛋白类：包括apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因子)，IgG， IgA，IgM等。
目前利用此指示系统进行测定的临 床项目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。
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显色原理
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反应速度特性
按照反应速度，可以将生化试剂分为二大类：
终点法试剂； 动力学法试剂：又可再分为零级动力学法和一
级动力学法
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反应速度特性之终点法
• 终点法
指经过一段时间(一般为几分钟)的
反应，反应进行到完全，使全部底物(被 A 测物)转变成产物，称终点法，更确切地
最理想的反应模型。
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t3
t
全球信赖的迈瑞
A world together
反应速度特性之终点法
属于终点法的试剂主要有：
TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，Glu，TP，Alb，TBil，D-Bil，Cr（氧化酶法），NH4+，CO2 ， Ca，P， Mg，Cl ， apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因 子)，IgG，IgA，IgM等。
活性的测定。
实际上，由于底物浓度不可能足够大，
随着反应的进行，底物消耗到一定程度后， 反应速度不再维持不变，同样从启动反应到
t1 t2 t3
tn
t
达到最大速度需要一定时间。因此，零级动
力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂
商对这段时间有严格规定。
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反应速度特性之动力学法
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生化试剂的分类
按照临床应用分
胰腺炎：α-AMY。 血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。 痛风：UA。 有机磷中毒：ChE。 免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)， IgG，IgA，IgM，
Kappa链，Lambda链。
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生化试剂的分类
按照临床应用分
无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。 肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，
D-Bil，TBA，TP，Alb等。 肾功能：UA，UREA，Cr等。 心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH，AST，MSO。 糖尿病：GLU等。 前列腺疾病：ACP，p-ACP等。 胰腺炎：α-AMY。
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全球信赖的迈瑞
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显色原理
NAD-NADH和NADP-NADPH系统 p-NP和p-NA系统
H2O2偶联的指示系统
抗原抗体反应指示系统 其它显色反应
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全球信赖的迈瑞
显色原理
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NAD-NADH和NADP-NADPH系统
NADH和NADPH在340nm有特征性吸收峰，而 NAD和NADP在340nm无特征性吸收峰，利用其偶联 的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可 以测定物质的浓度或活性。
说应称平衡法，这是最理想的分析类型。
整个反应达到平衡，由于正向反应的平
衡常数很大，可认为所有的被测定物已
转变为产物，反应液的吸光)程度
与被测定物的浓度成正比。 终点法对反应条件(如酶量、pH、温
t1 t2
度)小的改变不敏感，只要这种改变不影
响在一定时间内反应达到平衡即可，是