α淀粉酶发酵提取和

合集下载

淀粉酶的使用方法

淀粉酶的使用方法淀粉酶的使用方法淀粉酶是一种生物酶制剂，BF7658α―淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经发酵、提取精制而成。

广泛应用于淀粉糖、酒精、啤酒、味精、食品酿造、有机酸、纺织、印染、造纸及其他发酵工业。

近年来有钓友用淀粉酶作鱼饵添加剂，发现其诱鱼效果非常显着，而且价格相对低廉，已成为钓友们制作鱼饵的优良添加剂。

淀粉酶的使用方法：1、直接添加到饵料中。

基础饵料一千克，淀粉酶一百克。

淀粉酶用适量温水溶解后，直接添加到饵料中搅拌均匀，放置半小时左右即可使用。

2、作为酶制剂糖化饵料。

淀粉酶能够把基础饵料中的淀粉发酵分解，变成淀粉糖，而且使饵料变得松软甘甜、富有粘性，增加饵料的适口性。

1〉玉米糁（或者经过脱皮的干玉米粒）一千克，用水浸泡十二小时以上，直到完全泡胀。

2〉把泡好的玉米置于锅中加凉水，加到高于玉米一厘米左右。

取淀粉酶一百克，用凉水溶解，加一半（五十克）到锅中。

3〉慢火加热，过程约半小时。

至沸腾时保持五分钟，停止加热。

4〉放置冷却到七十摄氏度左右（不很烫手的程度）时，加入另一半已溶解的淀粉酶，保温半小时后自然冷却。

5〉把已冷却的玉米用细纱布滤出水分，即可用来做基础饵料。

（滤出的水分不要丢弃，可以浓缩后再加到饵料中，其中含有麦芽糖等多种营养物质）第二种用法实质上就是工业“双酶法”生产淀粉糖的简化过程。

用这种方法处理过的玉米糁或者玉米粒，其中的淀粉已经部分或全部被糖化，玉米也变得松软甘甜，极大提高了饵料的适口性。

糖化后的玉米粒可以直接挂钩作钓饵。

糖化后的玉米糁作基础饵料，再加入适量的氨基酸、DMPT、香味剂等添加剂，配制成适用的饵料。

用糖化玉米做钓饵，对鲫鱼、鲤鱼、草鱼、鳊鱼等鲤科鱼类均有极好的诱钓效果。

α-淀粉酶

α-淀粉酶在结构上的相似性使人们相信它们具有相似的催化机制。McCarter、Davies均提出α-淀粉酶的催化过程包括三步，共发生2次置换反应。第一步，底物某个糖残基要先结合在酶活性部位的-1亚结合位点，该糖基氧原子被充当质子供体的酸性氨基酸(如Glu)所质子化;第二步，-1亚结合位点的另一亲核氨基酸(如Asp)对糖残基的Cl碳原子进行亲核攻击，与底物形成共价中间物，同 C 时裂解Cl-OR键，置换出底物的糖基配基部分;第三步，糖基配基离去之后，水分子被激活(可能正是被刚去质子化的Glu所激活)，这个水分子再将Asp的亲核氧与糖残基的C1之间的共价键Cl-Asp水解掉，置换出酶分子的Asp 残基，水解反应完成。在第二次置换反应中，如果进攻基团不是水分子，而是一个带有游离羟基的糖(寡糖)ROH，那么酶分子的Asp残基被置换出后，就发生了糖基转移反应而非水解反应。
在米曲霉的Taka-淀粉酶A(TAA)中，在活性部位发现有三个酸性氨基酸残基，Asp206， Glu230，Asp 297，定点突变研究发现它们是催化所必需的氨基酸。研究发现TAA中这三个催化所必需的氨基酸在其它的α-淀粉酶以至于α-淀粉酶家族中也是共有的。
Tonozaka(1993)通过对不同来源的37个α-淀粉酶基因分支酶基因，异淀粉酶基因等进行同源序列的比较，微生物与动物和植物产生的α-淀粉酶的氨基酸序列之间的同源性不超过10%，但发现这些淀粉酶有 ABCD四个区域有高度的保守性，推测这些保守区域与其底物的结合或催化中心有关。尽管不同来源的α-淀粉酶在氨基酸序列上是不同的，但它们却共同拥有相同的基本次级结构，如(β/α)8结构(亦称之为TIM－桶)——由8个螺旋包围8个β-折叠组成的筒状结构。该结构被认为具有催化能力的结构。 YJanec k，S.通过对α-淀粉酶家族研究发现大部分α-淀粉酶除了含有八个(β/α)桶状结构的催化中心(domain A)外，还包括domains B、C和 D。其中domain B具有三个β折叠和三个α螺旋，长度和结构随来源的不同而变化。Domain C区是催化区域后面的区域，主要由β折叠组成，该区被认为有保护催化中心疏水氨基酸的稳定性的作用。另外，有一些α-淀粉酶包含一个没有催化功能的淀粉结合位点(starchbinding domain)。此外，几乎所有α-淀粉酶都是金属酶，每个酶分子至少含有一个钙离子，钙离子使酶分子保持适当的构象，从而维持其最大的活性和稳定性。

α-淀粉酶的生产工艺流程

α-淀粉酶的生产工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!α-淀粉酶是一种重要的工业用酶，广泛应用于食品、制药、洗涤剂等行业。

α淀粉酶

6制药和临床化学分析
已有报道，基于α一淀粉酶的液体稳定试剂已应用于全自动生化分析仪(CibaComingExpress)临床化学系统。
二α—淀粉酶的研究现状
1国内α一淀粉酶研究现状
1965年，我国开始应用淀粉芽孢杆菌BF一7658生产一淀粉酶，当时只有无锡酶制剂厂独家生产。1967年杭州怡糖厂实现了应用α一淀粉酶生产饴糖的新工艺，可以节约麦芽7％～10％，提高出糖率10％左右。1964年我国开始了酶法水解淀粉生产葡萄糖工艺的研究。l979年9月通过了酶法注射葡萄糖新工艺的鉴定，并先后在华北制药厂、河北东风制药厂、郑州嵩山制药厂等单位得到应用，取得了良好的经济效益。
2淀粉的液化作用和糖化作用
α一淀粉酶的主要市场是淀粉水解的产物，如葡萄糖和果糖。淀粉被转化为高果糖玉米糖浆(HFCS)。由于他们的高甜度，被用于饮料工业中软饮料的甜味剂。这个液化过程就用到在高温下热稳定性好的α一淀粉酶。α一淀粉酶在淀粉液化上的应用工艺已经相当成熟，而且有很多相关报道。
3纤维脱浆
由于α一淀粉酶是具有重要应用价值的工业酶，周内外很多课题组对它进行了研究。国内有代表性的研究单位有：四川大学，主要研究α一淀粉酶的生产菌株及其培养条件；江南大学，主要研究α一淀粉酶的结构以及应用性能，如耐热性、耐酸性；西北大学，主要研究α一淀粉酶的变性机理以及环境对α一淀粉酶的影响；华南理工大学，主要研究α一淀粉酶的固定化和动力性质；还有华中农业大学，中国科学院沈阳应用生态研究所，天津科技大学，南开大学生命科学学院，中国农业科学院，中国科学院微生物研究所等多家研究机构对多种α一淀粉酶生产菌的一淀粉酶基因进行了克隆以及表达研究。国外有代表性的研究单位有：加拿大的UniversityofBritishColumbia，他们对人胰腺的一淀粉酶结构和作用机理进行了深入的研究；丹麦的Carlsberg实验室主要研究大麦α一淀粉酶结构域与结合位点；美国的WesternRegionalResearchCenter主要研究大麦的α一淀粉酶与抗菌素的作用以及大麦α一淀粉酶的活性位点。

实验二α-淀粉酶的初步纯化

完整版pt
9
四、实验方法
发酵液的预处理
将发酵液收集起来，过滤滤去菌体，收集
滤液，测量其体积。取5 mL出来留作淀粉酶的活力测定，剩余发酵液则进行初步纯化。
在剩余发酵液中加入CaCl2 和Na2HPO4 各 0.8%-1%进行絮凝作用，并加热到55~60 ℃ 处理30 min，以破坏蛋白酶，促使胶体凝聚后再过滤，收集滤液，测量其体积，并测酶
完整版pt
8
三、仪器和试剂
仪器：
分光光度计、恒温水浴锅（控温精度±0. 1℃）、干燥箱、离心机、移液管、试管、烧杯、容量瓶、玻璃棒、三角瓶、秒表、标签、培养皿、量筒、漏斗、中速滤纸。
试剂：
碘、碘化钾、 α-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）、氯化钙、磷酸氢二钠、硫酸铵、乙醇。
医药、分析、科研
浓缩
浓缩
（蒸发、超滤、沉淀）
分离纯化
浓缩液配方
（离心、沉淀、膜分离、层析、电泳、萃取、结晶）
配方、制剂
干燥液体酶
干燥液体酶
固体酶
固体酶
完整版pt
4
二、实验原理
α-淀粉酶是一种胞外酶，胞外酶的初步分离纯化通常是将发酵液经过预处理后采用过滤或离心的方法将酶液与菌体分离，然后在酶液中加入(NH4)2SO4 盐析沉淀获得酶泥，最后干燥即可。
完整版pt
5
二、实验原理
在酶的分离纯化过程中，每步都需要测定酶活力、体积，以计算酶的总活力和比活力，进而计算酶活力回收率和纯化倍数，以监测每步纯化步骤中酶的回收和纯化效果，从而可以判断每步所使用的纯化手段是否适宜目的酶的分离。
完整版pt

淀粉酶

淀粉酶说明宁波北仑雅旭化工有限公司优质生产商，α-淀粉酶的厂家电话，α-淀粉酶的CAS号，α-淀粉酶的详细说明，α-淀粉酶最新报价，α-淀粉酶的价格，α-淀粉酶的作用，α-淀粉酶厂家总代理，α-淀粉酶厂家最新报价，α-淀粉酶的添加量，α-淀粉酶的分子式、α-淀粉酶的分子量。

英文：a-Amylase活力：1万CAS：9000-90-2。

概述：中温α-淀粉酶采用枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)经深层发酵提炼而成。

广泛应用于酒精、啤酒、味精、淀粉糖、发酵工业的液化以及纺织、印染退浆等。

原理：能水解淀粉分子中的α-1.4葡萄糖苷键，任意切断成长短不一的短链糊精及少量的低分子糖类，直链淀粉和支链淀粉均以无规则的形式进行分解，从而使淀粉糊的粘度迅速下降，即“液化”作用，故又称液化酶。

产品特性：1、热稳定性：在60οC以下较为稳定，最适作用温度60 -70οC，可适用于最高达90οC的液化过程。

2、PH稳定性：在PH6.0-7.0时较稳定，最适PH6.0，PH5.0以下失活严重。

3、钙离子浓度对酶活力的影响：钙离子对酶活力的稳定性有提高作用，没有钙离子，酶活力完全丧失。

应用方法：1、在饴糖、酶法味精上的应用淀粉浆浓度为16-17B，调PH至6.2-6.4，并加入0.2%氯化钙(按原料重量计算)，然后将淀粉酶加入淀粉浆中(每克原料用酶6-8个单位)，充分混合后，加热至85 -90οC，液化30分钟左右。

2、在啤酒生产上的应用使用大米、玉米为辅料时先磨粉通过40目以上筛孔，在糊化锅中调浆后加淀粉酶，加酶量在6个单位/克原料左右，在85 -90οC液化30分钟。

3、在纺织品退浆上的应用使用精制的液体淀粉酶作为退浆剂，适用于不耐高温的丝绸、化纤、棉毛织品的退浆工艺，加酶量在0.2%(2000u/g)左右，在水浴50 -80οC 20-40分钟。

4、其它工业一般控制在加酶量在每克淀粉6-8个酶活力单位，钙离子浓度150ppm。

实验6：α淀粉酶固定化

3、使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱，在流出5ml后接收0.5ml流出液。加入1-2滴KI-I2 溶液，观察颜色变化。
实验预期结果：水解产物糊精遇碘呈红色.
固定化酶技术生产果糖浆的图示：
把酶固定在反应柱上有何好处？
反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高果糖的产量和质量。
三、酶的固定化方法
1、物理吸附法：将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性碳、多孔玻成格子型或包埋成微胶囊型
酶的固定化方法
酶物理吸附法交联法包埋法
直接使用酶和固定化酶的优缺点
类型优点
不足
直接使用酶
催化效率高，低耗对环境条件非常敏感，容易
二、酶的特点 ①天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活 ②溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本 ③反应后，酶会混在产物中，影响产品质量，难以在工业生产中广泛应用
固定化酶：将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。
能、低污染等
失活；溶液中的酶很难回收，
不能被再次利用，提高了生
产成本；反应后酶会混在产
物中，可能影响产品质量.
固定化酶
酶既能与反应物接一种酶只能催化一种化学反触，又能与产物分应，而在生产实践中，很多离，同时，固定在产物的形成都通过一系列的载体上的酶还可以酶促反应才能得到的被反复利用
• 实验原理：用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成.
淀粉 α-淀粉酶糊精 β淀粉酶麦芽糖糖化淀粉酶葡萄糖

α-淀粉酶

根据淀粉酶对淀粉的水解方式不同，可将其分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和异淀粉酶等。

其中，α-淀粉酶（α-1，4-葡聚糖-4-葡聚糖苷酶)多是胞外酶，其作用于淀粉时可从分子内部随机地切开淀粉链的α-1，4糖苷键，而生成糊精和还原糖，产物的末端残基碳原子构型为α-构型，故称α-淀粉酶。

α-淀粉酶来源广泛，主要存在发芽谷物的糊粉细胞中，当然，从微生物到高等动、植物均可分离到，是一种重要的淀粉水解酶，也是工业生产中应用最为广泛的酶制剂之一。

它可以由微生物发酵制备，也可以从动植物中提取。

不同来源的α-淀粉酶的性质有一定的区别，工业中主要应用的是真菌和细菌α-淀粉酶。

目前，α-淀粉酶已广泛应用于变性淀粉及淀粉糖、焙烤工业、啤酒酿造、酒精工业、发酵以及纺织等许多行业，是一种重要工业用酶。

如在淀粉加工业中，微生物α-淀粉酶已成功取代了化学降解法；在酒精工业中能显著提高出酒率。

其应用于各种工业中对缩短生产周期，提高产品得率和原料的利用率，提高产品质量和节约粮食资源，都有着极其重要的作用。

相对地，关于α-淀粉酶抑制剂国内外也有很多研究报道，α-淀粉酶抑制剂是糖苷水解酶的一种。

它能有效地抑制肠道内唾液及胰淀粉酶的活性，阻碍食物中碳水化合物的水解和消化，降低人体糖份吸收、降低血糖和血脂的含量，减少脂肪合成，减轻体重。

有报道表明，α-淀粉酶可以帮助改善糖尿病患者的耐糖量。

α-淀粉酶是淀粉及以淀粉为材料的工业生产中最重要的一种水解酶，其最早的商业化应用在1984年，作为治疗消化紊乱的药物辅助剂。

现在，α-淀粉酶已广泛应用于食品、清洁剂、啤酒酿造、酒精工业和造纸工业。

在焙烤工业中的应用：α-淀粉酶用于面包加工中可以使面包体积增大，纹理疏松；提高面团的发酵速度；改善面包心的组织结构，增加内部组织的柔软度；产生良好而稳定的面包外表色泽；提高入炉的急胀性；抗老化，改善面包心的弹性和口感；延长面包心储存过程中的保鲜期在啤酒酿造中的应用：啤洒是最早用酶的酿造产品之一，在啤洒酿造中添加α-淀粉酶使其较快液化以取代一部分麦芽，使辅料增加，成本降低，特别在麦芽糖化力低，辅助原料使用比例较大的场合，使用α-淀粉酶和β-淀粉酶协同麦芽糖化，可以弥补麦芽酶系不足，增加可发酵糖含量，提高麦汁率，麦汁色泽降低，过滤速度加快，提高了浸出物得率，同时又缩短了整体糊化时间。

枯草杆菌生产α-淀粉酶的研究 -回复

枯草杆菌生产α-淀粉酶的研究-回复枯草杆菌生产α淀粉酶的研究引言：淀粉是一种由葡萄糖分子组成的多聚体，是植物细胞中最重要的储能物质。

为了有效地利用淀粉，许多微生物产生了淀粉酶。

淀粉酶能够水解淀粉成为可被微生物利用的单糖，其中α淀粉酶是将淀粉水解成麦芽糖或是葡萄糖的主要酶类之一。

而枯草杆菌是一种广泛存在于土壤中的细菌，在许多领域都具有潜在应用价值。

本文将探讨枯草杆菌生产α淀粉酶的研究目的、方法、结果和展望。

目的：本研究的目的是通过培养枯草杆菌，使其表达α淀粉酶，以探索其在产业应用上的潜力。

方法：1. 枯草杆菌菌种的筛选：从不同的土壤样本中筛选出具有较高淀粉酶产量的枯草杆菌菌株；2. 培养基的优化：对枯草杆菌菌株进行不同培养基的筛选和优化，以提高淀粉酶产量；3. 发酵条件的优化：调节发酵条件，包括温度、初始pH、培养时间和淀粉浓度，进一步提高淀粉酶活性；4. α淀粉酶的提取和纯化：通过离心、过滤、浓缩和柱层析等技术，将淀粉酶从菌体中分离提取，并进行纯化。

结果：通过以上的实验步骤和优化条件，我们成功获得了一株高产α淀粉酶的枯草杆菌菌株，并获得了较高的淀粉酶产量。

实验结果表明，枯草杆菌在适宜的发酵条件下能够表达和产生大量的α淀粉酶。

展望：虽然本研究已经取得了一定的成果，但仍然存在一些挑战和改进的空间。

首先，我们可以进一步优化发酵条件，以提高淀粉酶产量。

其次，可以通过基因工程手段改良枯草杆菌的基因组，提高其淀粉酶产量和活性。

此外，可以进一步研究α淀粉酶的性质和机制，以在其应用领域发挥更大的作用。

结论：本研究通过对枯草杆菌的研究，成功实现了α淀粉酶的生产。

这为淀粉酶的产业化应用提供了新的途径和可能性。

枯草杆菌生产α淀粉酶具有较高的生物安全性和可行性，且可以通过合理优化发酵条件和基因工程手段，进一步提高产量和活性。

通过深入研究淀粉酶的性质和机制，有望在食品加工、饲料行业和生物能源领域等方面发挥重要作用。

总结：枯草杆菌是一种潜在的产α淀粉酶的微生物菌株。

α-淀粉酶的分离提纯

α- 淀粉酶的分离方法的比较 α-淀粉酶在食品工业上有着广泛的用途。目前工淀粉酶在食品工业上有着广泛的用途。淀粉酶在食品工业上有着广泛的用途业上从发酵液中提取α淀粉酶的方法多淀粉酶的方法多。业上从发酵液中提取淀粉酶的方法多。主要有直接用硫酸铵沉淀和采用絮凝-超滤超滤-乙醇主要有直接用硫酸铵沉淀和采用絮凝超滤乙醇沉淀方法。种方法食品工业上不能使用。第一种方法食品工业上不能使用。第二种方法要求发酵液澄清度好，第二种方法要求发酵液澄清度好，否则超滤膜堵此外超滤法浓缩酶液是有限度的，塞，此外超滤法浓缩酶液是有限度的，沉淀仍消耗大量的乙醇同时酶的回收率也较低一般在55%左耗大量的乙醇同时酶的回收率也较低一般在左右。为了提高产品的活性,酶活性的回收和减少乙醇的为了提高产品的活性酶活性的回收和减少乙醇的用量已有相关报道用大孔吸附树脂吸附的方法分离纯化α- 淀粉酶。在此进一步改进了洗脱方式，离纯化在此进一步改进了洗脱方式，使其更便于工业化生产，使其更便于工业化生产，使用离子交换的方法进一步纯化α- 淀粉酶。淀粉酶。一步纯化
吸附树脂法发酵液cacl加水溶解加入絮凝剂搅拌压滤收集滤液滤液中加入吸附树脂过滤弃去滤液收集吸附树脂收集滤液40的乙醇过滤5乙醇成品收集沉淀沉淀无水乙醇洗脱ph为650005mollph为6502mollph为6505moll反复洗涤de32处理好的de32转入烧杯过夜制3cm4cm的层析柱2mlmin的流速平衡2h2mlmin洗脱酶液得洗脱峰1收集洗脱液测酶活性2mlmin洗脱酶液得洗脱峰2收集洗脱液测酶活性称取树脂吸附淀粉酶1g10ml注意
出峰图
注意！！！
–N,N’-亚甲双丙烯酰胺为神经毒性物质，可经皮肤直接吸收，使用时应避免其直接接触皮肤，必要时应戴手套。但其凝固后就变成无毒物质。沉淀α-淀粉酶过夜 α

α淀粉酶的添加济代码

α淀粉酶的添加济代码α淀粉酶，又称淀粉酶A，是一种重要的酶类，在食品加工、饲料生产、生物燃料等领域具有广泛的应用。

本文将介绍α淀粉酶的添加济代码，以及其在食品加工中的应用。

一、α淀粉酶的添加济代码α淀粉酶的添加济代码通常由国际食品法典委员会（Codex Alimentarius Commission）制定和规范。

目前，国际上常见的α淀粉酶添加济代码包括：1. E1400：α淀粉酶（淀粉酶A）2. E1401：α淀粉酶（淀粉酶A）预浸膏3. E1402：α淀粉酶（淀粉酶A）发酵提取物4. E1403：α淀粉酶（淀粉酶A）酸水解提取物5. E1404：α淀粉酶（淀粉酶A）酶变性物6. E1405：α淀粉酶（淀粉酶A）酶解物这些代码是为了标识和区分不同类型的α淀粉酶及其衍生物，以便于食品生产者和消费者对产品进行正确识别和选择。

二、α淀粉酶在食品加工中的应用α淀粉酶在食品加工中具有多种应用，其中主要包括以下几个方面：1. 面包制作：α淀粉酶可以促进面团的发酵过程，提高面包的体积和口感，并延长面包的保鲜期。

2. 酿造业：在啤酒和白酒的生产过程中，α淀粉酶可以帮助淀粉的降解和糖化，提高酒精发酵率和酒的口感。

3. 乳制品加工：在乳制品加工中，α淀粉酶可以促进乳制品的加热稳定性，改善口感和质地。

4. 糖果制作：在糖果制作中，α淀粉酶可以降低糖果的粘性，提高糖果的口感和储存稳定性。

5. 精细化工：α淀粉酶还可以用于澄清果汁、提取果胶、制备食品添加剂等方面。

总结：通过对α淀粉酶的添加济代码和在食品加工中的应用进行介绍，我们可以看到α淀粉酶在食品工业中具有广泛的应用前景。

在今后的食品制造过程中，科学合理地应用α淀粉酶，将会为食品加工业带来更多的创新和发展机遇。

淀粉酶的提取-α-淀粉酶的提取、分离及测定

α-淀粉酶的提‎取、分离及测定‎（生化试验小‎组-2005.4）试验全程安‎排：试验一、色谱分离淀‎粉酶1.1 试剂及设备‎离子交换树‎脂-20℃冰箱样品管（5-10ml试‎管）1.5ml离心‎管紫外分光光‎度计α-淀粉酶样品‎秒表胶头吸管（进样用）平衡缓冲液‎（pH8.0，0.01M磷酸‎盐缓冲液）洗脱缓冲液‎（平衡缓冲液‎+0.1M，0.3M，0.5M，1.0M的氯化‎钠）试剂瓶1.2 离子交换色‎谱原理与方‎法色谱(chrom‎a togr‎a phy)是一种分离‎的技术,随着现代化‎学技术的发‎展应运而生‎。

20世纪初‎在俄国的波‎兰植物化学‎家茨维特(Twsee‎t)首先将植物‎提取物放入‎装有碳酸钙‎的玻璃管中‎，植物提取液‎由于在碳酸‎钙中的流速‎不同分布不‎同因此在玻‎璃管中呈现‎出不同的颜‎色，这样就可以‎对各种不同‎的植物提取‎液进行有效‎的成分分离‎。

到1907‎年茨维特的‎论文用俄文‎公开发表，他把这种方‎法命名为c‎hroma‎t ogra‎p hy, 即中文的色‎谱，这就是现代‎色谱这一名‎词的来源。

但由于茨维‎特当时没有‎知名度，而且能看懂‎俄文的人也‎不多，加之很快爆‎发了第一次‎世界大战，茨维特的分‎离方法一直‎被束之高阁‎。

20世纪2‎0年代，许多植物化‎学家开始采‎用色谱方法‎对植物提取‎物进行分离‎，色谱方法才‎被广泛地应‎用。

自20世纪‎40年代以‎来以Mar‎t in 为首‎的化学家建‎立了一整套‎色谱的基础‎理论使色谱‎分析方法从‎传统的经验‎方法总结归‎纳为一种理‎论方法，马丁等人还‎建立了气相‎色谱仪器使‎色谱技术从‎分离方法转‎化为分析方‎法。

20世纪5‎0年代以后‎由于战后重‎建和经济发‎展的需要，化学工业特‎别是石油化‎工得到广泛‎的发展，亟需建立快‎速方便有效‎的石化成分‎分析。

而石化成分‎十分复杂，结构十分相‎似，且多数成分‎熔点又比较‎低，气相色谱正‎好吻合石化‎成分分析的‎要求，效果十分明‎显、有效。

α-淀粉酶的发酵、提取和

4
医学课件ppt
2. 在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲 (H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键（－CO －NH－），因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。此络合物在540nm吸收值在一定范围内与蛋白质的质量成正比.
先将固体硫酸铵研成细粉末，然后按37% （重量/体积比）的比例加入到经离心的发酵液中，混合均匀，静置30min。
具体操作:5ml发酵液,加1.87克硫酸铵细粉末,混匀, 静置30min.
两组配平,4000r.m.p离心10分钟, 离心去除上清液保留沉淀。测活前加入10ml去离子水溶解。(即稀释一倍)
5
医学课件ppt
3. 淀粉在碘液中会呈现紫色。α-淀粉酶作用于淀粉时，可从分子内部切开α-1， 4键而生成糊精和还原糖。而糊精和还原糖在碘液中不显色，故可通过预先盛有淀粉和比色稀碘液的试管中的颜色变化（由紫色变棕色）来辨别反应终点。
6
医学课件ppt
三、实验步骤
1. 硫酸铵沉淀法从发酵液中分离α-淀粉酶。
2. 取发酵液5ml +5ml去离子水(即稀释一倍)
3. 分别测定发酵液和提取液中的α-淀粉酶的酶活并计算它们各自的酶比活力
α-淀粉酶的酶活测定
（1）吸取1ml标准糊精溶液，置于盛有3ml标准稀碘液的试管中
（2）在试管中加入2%可溶性淀粉20ml,加缓冲液5ml,在60度水浴中平衡4-5分钟,加入0.5ml稀释酶液,立即记时,充分混匀,1分钟后取出1ml反应液于预先盛有3ml比色稀碘液的试管内(也需放在水浴中), 当颜色反应由紫色逐渐变成棕色,与标准比色管颜色相同时,记录时间为反应时间(发酵液和提取液每组各做2个重复)

α淀粉酶

α-淀粉酶是一种内切酶，其相对分子量约50000左右，

作用于淀粉时，可从淀粉分子内部随机切开α-1，4 糖苷键，不能切开α-1，6 糖苷键以及与α-1，6糖苷键相连的α-1，4糖苷键，但能越过支点切开内部的 α-1，4糖苷键。其水解产物中除含葡萄糖、麦芽糖外还含有具有α-1，6糖苷键的极限糊精和含α-1，6 糖苷键的具葡萄糖残基的低聚糖。

温度对酶活性有很大影响，温度升高，酶的反应速度就增加，一般每升高十摄氏度，反应速度可增加2~3倍,但是大多数酶都是蛋白质，温度过高则可导致蛋白质变质，从而使酶失活。在一定条件下，在某一温度时酶的反应速度最大。这使得反应速度是最适反应温度。
α-淀粉酶是一种金属酶，每分子酶含有一个 Ca² ﹢，Ca² ﹢可使酶分子保持相当稳定的构象，从而可以维持酶的最大活性及热稳定性。 Ca² ﹢对酶的结合度，按产生菌而言依次是霉菌＞细菌＞动物＞植物。除了Ca² ﹢其他金属离子也可以提高酶的热稳定性。

α-淀粉酶广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物。微生物的酶几乎都是分泌性的。此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子，既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地切断α－1，4-链。因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以麦芽糖为主，此外，还有麦芽三糖及少量葡萄糖。另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精。一般分解限度以葡萄糖为准是35-50％，但在细菌的淀粉酶中，亦有呈现高达70％分解限度的（最终游离出葡萄糖）；
1.PH值对酶活性的影响
2.温度对酶活性的影响
3.金属离子对酶活性的影响

α-淀粉酶

α淀粉酶的发酵生产及应用 21
保藏菌种
斜面活化
摇瓶种子培养
厚层通风发酵
种子罐扩大培养
粗制品沉淀收集滤液过滤
烘干抽提麸曲
离心
洗涤沉淀
风干
粉碎
精制品
α淀粉酶的发酵生产及应用
22
固体发酵缺点
限于低湿状态下生长的微生物，故可能的流程及产物较受限，一般较适合于真菌。在较致密的环境下发酵，其代谢热的移除常造成问题，尤其是大量生产时，常限制其大规模的产能。固态下各项参数不易侦测，尤其是液体发酵的各种探针
α淀粉酶的发酵生产及应用 20
深层发酵法生产α-淀粉酶 • 停止补料后6～8小时罐温不再上升，菌体衰老， 80％形成空泡，每2～3小时取样分析一次，当酶活不再升高，可结束发酵。而后向发酵液中添加 2%CaCl2，0.8%Na2HPO4，50～55℃加热处理 30分钟，以破坏共存的蛋白酶，促使胶体凝聚而易于过滤。冷却到35℃，加入硅藻土为助滤剂过滤。滤液加2.5倍水洗涤，洗涤同发酵液混合，真空浓缩数倍后，加（NH4）2SO4盐析，盐析物加硅藻土后压滤，滤饼于40℃烘干，磨粉而成。按此工艺，由酶液到粉状酶制剂的收率为70％。
α淀粉酶的发酵生产及应用
10
• 作用温度范围60~90℃，最适宜作用温度60~70，作用pH值范围为5.5~7.0，最适pH值为6.0。 Ca2+具有一定的激活、提高淀粉酶活力的能力，并且对其稳定性的提高也有一定效果。可催化水解a-1,4糖苷键，但只能催化水解直链淀粉，生成 a-麦芽糖和少量葡萄糖。 • 主要存在于人的唾液和胰脏中，也存在于麦芽、芽孢杆菌、枯草杆菌、黑曲霉和米曲霉中。可由米曲霉、嗜酸性普鲁士蓝杆菌、淀粉液化杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草杆菌分别经发酵、精制、干燥而得。 α淀粉酶的发酵生产及应用

[整理]淀粉酶的提取-α-淀粉酶的提取、分离及测定

α-淀粉酶的提取、分离及测定（生化试验小组-2005.4）试验全程安排：试验一、色谱分离淀粉酶1.1 试剂及设备离子交换树脂-20℃冰箱样品管（5-10ml试管）1.5ml离心管紫外分光光度计α-淀粉酶样品秒表胶头吸管（进样用）平衡缓冲液（pH8.0，0.01M磷酸盐缓冲液）洗脱缓冲液（平衡缓冲液+0.1M，0.3M，0.5M，1.0M的氯化钠）试剂瓶1.2 离子交换色谱原理与方法色谱(chromatography)是一种分离的技术,随着现代化学技术的发展应运而生。

20世纪初在俄国的波兰植物化学家茨维特(Twseet)首先将植物提取物放入装有碳酸钙的玻璃管中，植物提取液由于在碳酸钙中的流速不同分布不同因此在玻璃管中呈现出不同的颜色，这样就可以对各种不同的植物提取液进行有效的成分分离。

到1907年茨维特的论文用俄文公开发表，他把这种方法命名为chromatography, 即中文的色谱，这就是现代色谱这一名词的来源。

但由于茨维特当时没有知名度，而且能看懂俄文的人也不多，加之很快爆发了第一次世界大战，茨维特的分离方法一直被束之高阁。

20世纪20年代，许多植物化学家开始采用色谱方法对植物提取物进行分离，色谱方法才被广泛地应用。

自20世纪40年代以来以Martin为首的化学家建立了一整套色谱的基础理论使色谱分析方法从传统的经验方法总结归纳为一种理论方法，马丁等人还建立了气相色谱仪器使色谱技术从分离方法转化为分析方法。

20世纪50年代以后由于战后重建和经济发展的需要，化学工业特别是石油化工得到广泛的发展，亟需建立快速方便有效的石化成分分析。

而石化成分十分复杂，结构十分相似，且多数成分熔点又比较低，气相色谱正好吻合石化成分分析的要求，效果十分明显、有效。

同样，石化工业的发展也使色谱技术特别是气相色谱得到广泛的应用。

气相色谱的仪器也不断得到改进和完善，气相色谱逐渐成为一种工业分析必不可少的手段和工具。

20世纪80年代以后我国也大规模采用气相色谱和高效液相色谱。

小麦中的阿尔法淀粉酶的作用

小麦中的α-淀粉酶是一种酶，主要作用是分解淀粉为较小的糖类分子，如糊精和麦芽糖。

这种酶在小麦种子萌发过程中特别重要，因为它帮助种子开始生长。

在萌发过程中，α-淀粉酶将淀粉分解成可以被植物细胞吸收和利用的糖类，为种子提供能量和营养。

此外，α-淀粉酶也在面粉加工过程中发挥作用。

在制作面包、糕点等食品时，α-淀粉酶可以帮助面粉中的淀粉分子更好地与水混合，从而改善面团的质地和口感。

它还可以促进酵母的发酵过程，帮助食品膨胀变松软。

在医药、养殖业和其他工业领域，α-淀粉酶也有广泛的应用。

例如，在养殖业中，α-淀粉酶可以作为水产饲料的粘结剂，提高饲料颗粒的光滑度和鱼的食用喜好。

在医药工业中，α-淀粉酶作为药片粘合剂，有助于制成强度大、易于消化和溶解的药片。

此外，在铸造工业中，α-淀粉酶可用作型砂的胶粘剂，提高砂型的抗夹砂能力和表面强度。

α-淀粉酶的生产工艺

α-淀粉酶的发酵生产工艺摘要：α-淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物中，能水解淀粉产生糊精、麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等，是工业生产中应用最为广泛的酶制剂之一。

目前，α-淀粉酶已广泛应用于变性淀粉及淀粉糖、焙烤工业、啤酒酿造、酒精工业、发酵以及纺织等许多行业。

1.菌种的选育1. 1 细菌的分离与初步鉴定：将土壤系列稀释，把10-3 、10-4、10-5分别涂布到淀粉培养基上，27℃倒置培养2天，将长出的菌落接入斜面。

将细菌从斜面接种到淀粉培养基培养2天，用碘液染色，记录透明圈大小和菌落直径，计算D/d值。

保菌供下次实验用。

1．2 紫外线诱变育种：取活化后的菌种配成菌悬液、稀释；倒淀粉培养基平板，将菌悬液涂布其表面；用紫外线处理平板0、2min、4min、6min、8min、10min，每个处理2次重复；放到黑暗中倒置培养，37℃培养48h，分别计数诱变组和对照组平板上的菌落数，并计算致死率；加入碘液，分别测量诱变组和对照组菌落的透明圈直径和菌落直径，计算D/d值；将D/d值最大的菌种保存到斜面培养基上。

诱变方法以及变异菌株的筛选①诱变出发菌株在完全培养基中培养至对数生长期后期。

②以NTG为诱变剂，按一定处理剂量(μg/ml)，在一定pH值的缓冲液中30℃恒温振荡处理1~4 h。

③经高速离心分离，移植于液体完全培养基进行后培养。

④经稀释涂布在含有1%淀粉BY固体培养基上，经24 h培养形成小菌落。

⑤把单菌落分别移植于含2%淀粉BY液体培养基中，30℃培养36 h。

⑥用2#定性滤纸制成5 mm disc(小圆纸片)，并用2%琼脂BY培养基灭菌后加入较大剂量青霉素(抑菌)。

倒入200 mm×300mm长方形不锈钢玻璃培养皿中，冷却凝固。

然后把5 mm disc 纸顺序放在培养基表面。

⑦用微量注射器分别吸取培养液，移植到相应的disc上。

把disc培养皿经37℃，24h分别培养。

⑧把KI-I2液用喷雾器均匀分布在disc培养皿培养基的表面上，并挑出淀粉水解圈大的disc，用相对应的1 ml培养液接种摇瓶，进行发酵测定酶活力。