T淋巴细胞亚群检测操作程序
细胞亚群检测实验报告
1. 了解淋巴细胞亚群检测的基本原理和方法。
2. 掌握流式细胞术在淋巴细胞亚群检测中的应用。
3. 分析实验结果，了解淋巴细胞亚群在免疫调节中的作用。
二、实验原理淋巴细胞亚群检测是利用流式细胞术对淋巴细胞进行分类、计数和功能分析的一种技术。
通过特异性抗体标记，检测淋巴细胞表面标志物，实现对不同亚群的识别。
本实验主要检测T细胞、B细胞和NK细胞亚群。
三、实验材料1. 实验试剂：抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD19、抗CD16、抗CD56单克隆抗体。
2. 实验仪器：流式细胞仪、细胞培养箱、离心机、移液器等。
3. 实验样本：新鲜血液。
四、实验步骤1. 样本采集：采集受试者新鲜血液，分离外周血单个核细胞（PBMCs）。
2. 抗体标记：将分离的PBMCs与抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD19、抗CD16、抗CD56单克隆抗体混合，室温孵育30分钟。
3. 洗涤：将标记好的细胞用磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）洗涤两次。
4. 流式细胞术检测：将洗涤后的细胞上流式细胞仪，进行检测和分析。
5. 数据分析：使用流式细胞术分析软件对实验数据进行处理，计算各亚群细胞比例。
五、实验结果1. T细胞亚群：CD3+T细胞占外周血淋巴细胞的50-70%，其中CD4+T细胞占CD3+T 细胞的30-45%，CD8+T细胞占CD3+T细胞的30-45%。
2. B细胞亚群：CD19+B细胞占外周血淋巴细胞的10-20%。
3. NK细胞亚群：CD16+/CD56+细胞占外周血淋巴细胞的5-15%。
1. 实验结果表明，本实验成功检测了T细胞、B细胞和NK细胞亚群，验证了流式细胞术在淋巴细胞亚群检测中的应用价值。
2. 淋巴细胞亚群在免疫调节中发挥重要作用。
CD4+T细胞具有辅助功能，参与细胞免疫和体液免疫；CD8+T细胞具有杀伤功能，直接杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞；B细胞产生抗体，参与体液免疫；NK细胞具有天然杀伤功能，对病毒感染细胞和肿瘤细胞具有杀伤作用。
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程
流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程一、编号：JS0604二、标题：流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程三、关键词：流式细胞术淋巴细胞操作规程四、目的：规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的实验操作五、背景知识：T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。
在感染性疾病中，因为CD4+ T细胞是辅助、诱导T细胞的标志，CD4+ T 细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。
而CD4+ T细胞长期低于正常水平，常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。
CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中，CD8+ T细胞常升高。
CD4+／CD8+细胞比值下降，除肿瘤等疾病外，常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。
六、原理：利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。
待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号，利用这些信号，可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量，从而得出各细胞群的相对比值。
七、仪器设备和材料：肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。
八、操作步骤1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。
2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。
3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。
九、注意事项1、为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。
2、每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照，以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（
小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆，组织液及相关液体样本中T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）水平。
用纯化的小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8），再与HRP标记的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠T淋巴细胞亚群（CD3,CD4,CD8）浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程英文回答：Lymphocyte Subset Absolute Count Protocol.Principle:Lymphocyte subset absolute count is a quantitative analysis of lymphocyte subpopulations, such as CD3+, CD4+, CD8+, and CD19+ cells, in a blood sample. This procedure is used to assess the immune system's composition and function, particularly in conditions involving immune dysregulationor infection.Materials:Blood sample.Flow cytometry analyzer.Fluorochrome-conjugated antibodies specific for lymphocyte subpopulations.Lysis buffer.Wash buffer.Absolute counting beads.Procedure:1. Sample Preparation:Collect a blood sample into a tube containing an anticoagulant.Centrifuge the blood sample at 300 x g for 10 minutes.Remove the plasma and wash the cells with PBS.Lyse the red blood cells with lysis buffer.Centrifuge the cells and resuspend them in wash buffer.2. Antibody Staining:Aliquot the cells into tubes.Add fluorochrome-conjugated antibodies specificfor each lymphocyte subpopulation.Incubate the cells at room temperature in the dark for 15-30 minutes.3. Washing:Wash the cells twice with wash buffer.Centrifuge the cells and resuspend them in wash buffer.4. Absolute Count:Add absolute counting beads to the cell suspension.Acquire a flow cytometry data file.Gate on the lymphocyte population using forwardand side scatter.Use the absolute counting beads to calculate the absolute count of each lymphocyte subpopulation.Calculation:The absolute count of each lymphocyte subpopulation is calculated using the following formula:Absolute Count = (Event Count / Number of Beads) x (Bead Concentration)。
T细胞亚群的检测 —免疫荧光法
T细胞亚群的检测—免疫荧光法【申请单】请完成申请单所要求项目×××市人民医院检验申请单姓名性别年龄门诊号住院号诊断或症状检验标本检验目的送检科室医师送检日期年月日【方法选择】表1-1 T细胞亚群的检测方法方法流式细胞术免疫荧光法AP-AAP桥联酶免疫法√本次检查选择【材料准备】1.抗CD McaB、兔抗鼠IgG荧光抗体。
2.受检者肝素（或EDTA）抗凝静脉血。
3.含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液。
4.细胞分离液。
5.细胞计数板。
6.离心机、落射荧光显微镜。
【操作方法】1.取肝素抗凝血1.5ml，与等量生理盐水混匀，轻轻叠加在3ml细胞分离液上，转速2000r/min离心，离心时间20min。
吸取单个核细胞层（PBMC），用RPMI1640培养液洗涤，1000r/min离心2次，每次10min.弃上清，加入RPMI1640培养液，配成5×106/ml细胞悬液。
2.按厂家说明稀释抗CD McaB至工作浓度，取0.1ml，加等量步骤1制好的细胞悬液，混匀后，4℃下静置45min。
离心弃上清，再用洗2次，弃上清；3.配制合适浓度兔抗鼠IgG荧光抗体，取0.1ml加入步骤2制好的沉淀细胞中混匀，4℃下静置30min，用RPMI 1640培养液洗涤，800r/min离心3min，共洗3次。
吸弃大部分上清液，混匀沉淀细胞，滴于细胞计数板后荧光显微镜下观察。
【观察结果】在落射荧光显微镜下进行观察，计数200细胞，以荧光强度≥2为阳性，计算阳性细胞百分比率。
【注意事项】1.严格按厂家说明书配置工作浓度试剂。
2.注意控制实验环境温度。
3.按顺序加入试剂，按操作规程进行操作，避免造成误差。
4.检测完毕后应仔细核对、记录、避免笔误。
5.不同的检测方法结果参考值有区别，参考区间为：CD3+细胞：（71.5±6.2）％或65-80％，CD3+CD4+细胞：45.7±5.3％，CD3+CD8+细胞：27.9±5.0％，CD4+/CD8+:1.66±0.33。
实用McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群实验操作步骤量化控制研究
实用McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群实验操作步骤量化控制研究姚伯程;庞洁;王芳;田彩平;李永辉;魏敏;毛爱红;包晓玲【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2015(036)002【摘要】目的对单克隆抗体SPA红细胞花环法(McAb-A-E)直接法试验操作步骤进行量化控制,从而对原方法进行改良.方法采用改良法与原方法对23例患者外周血中的淋巴细胞表面抗原CD3+、CD4+、CD8+进行检测,并用配对t检验对两种方法的结果进行对比.改良法的量化控制主要是用一定容积的移液器混匀替代“轻轻摇匀”,以定量细胞悬液制作一定面积涂片,规范涂片细胞计数区域.结果改良法与原方法检测的CD3+、CD4+、CD8+及CD4+与CD8+的比值(CD4+/CD8+)结果比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论改良后的实用McAb-A-E直接法对细胞悬液混匀方法、细胞涂片制作和细胞计数区域进行了量化控制,可将试验操作误差降到最低.【总页数】2页(P157-158)【作者】姚伯程;庞洁;王芳;田彩平;李永辉;魏敏;毛爱红;包晓玲【作者单位】甘肃省医学科学研究院分子生物学研究中心,甘肃兰州730050;甘肃省肿瘤医院检验科,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院分子生物学研究中心,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院分子生物学研究中心,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院转化医学中心,甘肃兰州730050;甘肃省肿瘤医院内镜中心,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院分子生物学研究中心,甘肃兰州730050;甘肃省肿瘤医院内科,甘肃兰州730050【正文语种】中文【相关文献】1.T淋巴细胞亚群检验血标本在18～28℃温室或4℃冰箱过夜与当日标本检验结果对比研究 [J], 姚伯程;王芳;田彩平;包晓玲;李永辉;庞洁2.实用McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群细胞计数误差研究 [J], 姚伯程3.EDTA抗凝剂在实用McAb-A-E直接法中的应用研究 [J], 郗爱华;田文斌;姚伯程4.实用McAb-A-E直接法检验T淋巴细胞亚群PBMC细胞自然形态保存研究 [J], 姚伯程;田彩平;赵晓玲;马佰菁;时海英5.实用McAb-A-E直接法在诊断血液性疾病细胞免疫功能中的应用 [J], 王红洲;姚伯程因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
淋巴细胞亚群检测操作程序
一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证淋巴细胞亚群检测的标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：外周血中淋巴细胞亚群检测。
四、溯源：MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)。
五、实验原理：人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为三大类：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK自然杀伤细胞。
T淋巴细胞表达CD3；B淋巴细胞表达CD19；NK自然杀伤细胞表达CD56或CD16，并且不表达CD3。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，即可以把淋巴细胞区分为各种亚型。
进面得到各亚群的比例。
六、主要试剂：MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)，其中包括：1、CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC2、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC3、FACSLysing Solution七、实验操作：抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K22、染色和固定细胞：（1）标本管编号A，取两只流式专用管A1、A2。
（2） A1管加入CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC 20uL；A2管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC 20Ul。
（3） A1、A2管中分别再加入全血100Ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
t淋巴细胞斑点试验操作流程
t淋巴细胞斑点试验操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测是通过流式细胞术来进行的。
下面是其操作方法的一般步骤：
1. 预处理样本：收集新鲜的全血样本，并将其分成多个试管。
每个试管中的样本应含有适当的抗凝剂（例如EDTA），以防止血液凝固。
2. 样本染色：将每个试管中的全血样本分成不同的管中，每个管中加入不同的单克隆抗体染色。
根据实验需要，可以选择染色CD3、CD4、CD8、CD19等表面标记物来区分不同的淋巴细胞亚群。
染色时间和温度根据抗体厂商的建议进行。
3. 洗涤：将染色后的细胞悬液用PBS或其他适当的缓冲液洗涤，以去除未结合的抗体。
每个管中的细胞可用700 rpm离心3-5分钟，将上清液倒掉。
4. 固定：将细胞悬液溶入适当量的荧光素（如二甲亚基绿），用PBS稀释至适当浓度，静置固定30分钟。
固定之后，可以继续离心去除上清液。
5. 流式细胞术：将固定的细胞悬液在流式细胞仪中进行检测。
根据实验需要，设置适当的流速和激发波长来检测不同染色的细胞。
通过检测细胞表面荧光素的强度，可以确定不同淋巴细胞亚群的百分比和数量。
需要注意的是，以上是一般的操作方法，具体的步骤可能会因实验目的、试剂和仪器的不同而有所变化。
因此，在进行实验之前，最好参考实验方案和相关的文献资料，以确保操作的准确性和可靠性。
淋巴细胞亚群检测操作方法
淋巴细胞亚群检测操作方法淋巴细胞是免疫系统中一种重要的细胞类型，负责识别和清除体内的病原体。
淋巴细胞可以分为不同的亚群，包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等。
淋巴细胞亚群检测可以帮助了解患者的免疫系统状态，判断免疫功能的异常情况，临床应用广泛。
1.检测前的准备工作：a.检测设备：流式细胞仪b.试剂：荧光标记的单克隆抗体c.样本：外周血（或其它体液）2.样本的预处理：a.收集外周血样本b.加入抗凝剂（如EDTA）稀释血液c.转移稀释后的血液到离心管中d.进行离心，使细胞沉淀在离心管底部e.弃去上清液，保留沉淀细胞3.细胞的染色：a.加入洗涤缓冲液洗涤沉淀细胞b.弃去洗涤缓冲液，在室温下重悬细胞4.荧光标记的抗体的加入：a.根据需要检测的细胞亚群选择相应的抗体b.添加荧光标记的抗体到细胞悬液中c.充分混匀细胞和抗体的混合物d.增加透明覆膜，避免光照射5.细胞的分析：a.打开流式细胞仪，设置相应的参数和通道b.将细胞悬液转移至流式细胞仪的样品管中c.启动细胞仪的运行d.分析获得的数据6.数据的解读：a.根据荧光标记抗体的特异性，将细胞亚群进行分类和计数b.根据不同细胞亚群的含量比例，判断免疫功能状态需要注意的是，淋巴细胞亚群检测需要流式细胞仪等高级设备，且操作需要一定的专业知识和技能。
在实际应用中，建议由有经验的专业人员进行操作和解读结果。
另外，不同的抗体组合可以用于检测不同的细胞亚群，应根据具体需要选择适当的抗体。
总结起来，淋巴细胞亚群检测操作方法主要包括样本的收集和预处理、细胞的染色、荧光标记抗体的加入、细胞的分析和数据的解读等步骤。
这些步骤需要严格操作和准确的仪器设备来保证数据的准确性和可靠性。
通过淋巴细胞亚群的检测，可以了解患者的免疫系统情况，为临床诊断和治疗提供重要的信息。
T淋巴细胞亚群检测操作程序
一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。
四、实验原理：人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。
六、主要试剂：CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)，七、实验操作：抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
1、标本采集：使用EDTA-K22、染色和固定细胞：（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。
（2） A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。
（3） A1管中再加入全血100ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
3、上机检测；分析结果；打印实验报告。
八、参考值：总T细胞（CD3+）： 59.4-84.6辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3Th/Ts: 0.9-3.6九、临床意义：T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程
淋巴细胞亚群绝对计数操作流程英文回答：Lymphocyte subset absolute count is a laboratory test that measures the number of different types of lymphocytes in the blood. Lymphocytes are a type of white blood cells that play a crucial role in the immune system. They help the body fight off infections and diseases.The process of obtaining lymphocyte subset absolute count involves several steps. Here is a general outline of the procedure:1. Patient preparation: The patient may be asked to fast for a certain period before the test, usually overnight. This is to ensure accurate results.2. Blood sample collection: A healthcare professional will collect a blood sample from the patient. The most common method is venipuncture, where a needle is insertedinto a vein, usually in the arm, and blood is drawn into a collection tube.3. Sample processing: The blood sample is then sent to the laboratory for processing. The sample is centrifuged to separate the different components of blood, including the lymphocytes.4. Lymphocyte subset analysis: The separated lymphocytes are then analyzed using flow cytometry, a technique that uses fluorescently labeled antibodies to identify and quantify different lymphocyte subsets. Commonly measured subsets include CD4+ T cells, CD8+ T cells, B cells, and natural killer (NK) cells.5. Absolute count calculation: The flow cytometry data is used to calculate the absolute count of each lymphocyte subset. This is done by multiplying the percentage of each subset by the total lymphocyte count obtained from a complete blood count (CBC) test.6. Result interpretation: The calculated absolutecounts are then reported to the healthcare provider. The results are typically given in cells per microliter(cells/μL) of blood.Lymphocyte subset absolute count is an important testin diagnosing and monitoring various medical conditions, including immune disorders, infections, and certain typesof cancer. It provides valuable information about thestatus and function of the immune system.中文回答：淋巴细胞亚群绝对计数是一种实验室检测方法，用于测量血液中不同类型淋巴细胞的数量。
如何运用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群分析
如何运用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群分析流式细胞技术(FCM)是70年代发展起来得一种快速对单细胞定量分析的新技术,它借鉴了荧光显微镜技术,同时利用与荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,将荧光显微镜的激发光源改为激光,使之具有更好的单色性与激发效率,因而大大提高了检测灵敏度,同时将固定的标本台改为流动的单细胞悬液,用计算机进行数据处理,因而大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段.目前,该技术已经广泛用于基础研究与临床应用,在免疫学,遗传学,血液学,肿瘤学等领域内发挥前重要的作用.本文着重介绍流式细胞仪基本原理及其在临床上的应用.基本原理：流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FACS的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。
当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。
根据测得的散射光（scattered light ）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度(fluorescence emissions)则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。
T、B淋巴细胞增殖能力测定、NK细胞活性测定及T淋巴细胞亚群测定的方法
实验前24h将靶细胞YAC-1传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×105个/mL。无菌取脾，制备脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10 min（1000 r/min）。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水裂解红细胞，20 s后再加入0.5 mL 2倍Hanks液及8 mL Hanks液，离心10 min（1000r/min），用1mL含10 %小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1 %冰醋酸稀释后计数，调整细胞浓度为1×107个/ mL。将靶细胞加入96孔培养板，每孔100μL，试验孔加入100μL脾细胞（效靶比50：1），自然释放孔加入100μL培养液，最大释放孔加入100μL 2%NP40，37℃培养4 h，离心，取上清100μL置96孔酶标板中，加入LDH基质液100μL，反应8 min，以30μL1mol/L的HCl终止反应，在酶标仪492nm处测定OD值。
T、B淋巴细胞增殖能力测定、NK细胞活性测定及T淋巴细胞亚群测定的方法
一、T、B淋巴细胞增殖能力测定
无菌条件下取大鼠的脾脏，加适量Hank’s液研磨，以200目不锈钢网滤过，1500r/m离心5分钟，弃上清，加Hank’s液重复洗涤2次。收集脾细胞，加适量RPMI 1640培养液混悬，以0.4%台盼兰拒染法计数，活细胞数不小于95%，加RPMI 1640完全培养液稀释，并调整细胞浓度至1×107个/mL。于96孔微量板中，每孔加100L脾细胞悬液（1×107cell/mL）和等体积的ConA溶液（终浓度为5μg/mL）、LPS溶液（终浓度为10μg/mL）或RPMI1640培养液，重复3孔。另设空白对照组。37℃、5%CO2培养44h后，各孔加入50μL MTT溶液（2mg/mL），继续培养4h。1000r/min离心5分钟，弃去各孔上清，分别加150μL酸性DMSO溶液，振荡，于室温暗处放置15min，以酶标仪于波长578nm处测定OD值，并按下式计算刺激指数（SI）：SI（刺激指数）=加有丝分裂原培养物的OD值/不加有丝分裂原培养物的OD值。
t淋巴细胞亚群检测 标准
t淋巴细胞亚群检测标准一、样本采集1.采样时间：在早晨未接受任何其他处理之前，空腹状态下进行。
2.采样量：2-3ml外周血3.采样方式：静脉采血，使用EDTA抗凝管4.样本处理：采血后立即轻轻摇动抗凝管，使血液与抗凝剂充分混合，避免形成血块。
5.样本保存：采集后的样本应立即送检，或在4℃下冷藏保存，但不得超过48小时。
二、检测方法1.检测原理：采用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）进行T 淋巴细胞亚群的检测。
通过荧光标记的单克隆抗体特异性识别淋巴细胞表面的标志物，将T淋巴细胞分为CD4+和CD8+两个亚群。
2.检测流程：a)预处理样本：将EDTA抗凝的全血样本进行涡旋混合，使红细胞和白细胞充分裂解。
b)抗体标记：向预处理后的样本中加入荧光标记的单克隆抗体，孵育一定时间后洗涤并固定细胞。
c)流式细胞术检测：将标记好的样本通过流式细胞仪进行检测，获取每个淋巴细胞的荧光信号。
d)数据处理与分析：使用软件对获取的荧光信号进行数据处理和分析，得到CD4+和CD8+两个亚群的细胞比例。
三、正常参考值根据正常参考值数据库的数据，正常成年人外周血中T淋巴细胞亚群的正常参考值范围如下：CD4+T细胞：40%-65%CD8+T细胞：20%-40%四、T细胞亚群的识别和计数1.CD4+T细胞的识别：通过流式细胞术检测样本中表达CD4分子的T细胞，以识别CD4+T细胞。
2.CD8+T细胞的识别：通过流式细胞术检测样本中表达CD8分子的T细胞，以识别CD8+T细胞。
3.计数方法：采用绝对计数方法，计算每微升血液中CD4+和CD8+T细胞的个数。
每微升血液中含有多少个淋巴细胞，其中有多少个是CD4+或CD8+T细胞。
五、质量控制1.仪器校准：使用流式细胞仪前必须对仪器进行校准，确保数据的准确性和可重复性。
2.试剂质量控制：采用高质量的抗体试剂和荧光标准品，确保检测结果的可靠性。
同时，对抗体试剂进行质量检测和控制，以确保其特异性和灵敏度。
淋巴细胞亚群检测流程
淋巴细胞亚群检测流程英文回答：Lymphocyte subset testing is a laboratory procedure used to identify and quantify different types of lymphocytes in the blood. Lymphocytes are a type of white blood cell that play a crucial role in the immune system's response to infections and diseases. There are several different subtypes of lymphocytes, including T cells, B cells, and natural killer (NK) cells. Each subtype has a specific function and is involved in different aspects of the immune response.The process of lymphocyte subset testing involves several steps. First, a blood sample is collected from the patient. This can be done either through a venipuncture (drawing blood from a vein) or a fingerstick (using a small lancet to prick the finger). The blood sample is then sent to a laboratory for analysis.In the laboratory, the blood sample is processed to isolate the lymphocytes. This is typically done by using a technique called density gradient centrifugation, which separates the different components of the blood based on their density. Once the lymphocytes are isolated, they can be stained with fluorescent dyes that specifically bind to different lymphocyte subtypes.Flow cytometry is then used to analyze the stained cells. Flow cytometry is a technique that uses lasers to detect and measure the fluorescence emitted by the stained cells. By analyzing the fluorescence patterns, thedifferent lymphocyte subtypes can be identified and quantified. This information can be used to assess the patient's immune status and detect any abnormalities in the lymphocyte populations.After the analysis is complete, the results are reported to the healthcare provider. The report typically includes the percentages and absolute counts of each lymphocyte subtype. These values can be compared to reference ranges to determine if there are any deviationsfrom the normal range.Overall, lymphocyte subset testing is an important tool in the evaluation of immune function. It provides valuable information about the different types of lymphocytespresent in the blood and their relative proportions. This information can help in the diagnosis and monitoring of various immune disorders and diseases.中文回答：淋巴细胞亚群检测是一种实验室程序，用于鉴定和计量血液中不同类型的淋巴细胞。
医院检验中心淋巴细胞亚群测定操作规程
医院检验中心淋巴细胞亚群测定操作规程
(1)试剂
1)CD4 F / CD8 P Cat NO
0747
2)CD3 F / CD16+56 P Cat NO
2076
3)CD19 P Cat NO
1285
4)同型对照 F IgG1/IgG1 P Cat NO
1203
(2)方法
1)取试管各加上述单抗10ul于管底
2)加50ul EDTA K2抗凝血,混匀
3)室温暗处放置15分钟
4)Q-PREP仪上溶血、固定
5)FCMW仪上分析10000个以上细胞
(3)参考范围
CD3 60 — 85 % CD4 24.5 — 48.8 %
CD8 18.5 — 42.1 %
NK 8.0 — 20.0 %
CD19 7.0 — 23.0 %
D20、医院检验中心HLA B27 / HLA B7 测定操作规程(1)试剂
1.HLA B27 F/ HLA B7 P Cat NO 1502
2.同型对照 IgG 2a F / PIgG1 P Cat NO 1255
（2）方法
1.取试管各加上述单抗10ul于管底
2.加EDTA K2抗凝血50ul，混匀
3.室温暗放置15分钟
4.Q-PREP仪上溶血、固定
5.用PBS洗涤细胞2次
6.在FCM仪上数细胞10000个以上，设门在淋巴区域
7.记录阳性百分度及相应的平均荧光强度和荧光峰值（1）参考范围
阴性。
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一、目的：
保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。
二、修改程序：
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：
外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。
四、实验原理：
人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。
利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。
六、主要试剂：
CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)，
七、实验操作：
1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
2、染色和固定细胞：
（1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。
（2）A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。
（3）A1管中再加入全血100ul，混均。
（4）置室温，避光孵育15min。
（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6）300g离心5min，弃上清液。
（7）PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
3、上机检测；分析结果；打印实验报告。
八、参考值：
总T细胞（CD3+）：59.4-84.6
辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5
抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3
Th/Ts: 0.9-3.6
九、临床意义：
T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。
测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。
在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。
HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。
十、质量控制：
1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。
2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋
巴瘤可能有较大差异。
3、收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴细
胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。
4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的
干干扰。