植物的茎尖培养
茎尖培养脱毒的原理
茎尖培养脱毒的原理茎尖培养是将植物茎尖作为外植体在无菌条件下进行培养的技术。
这种技术可以用于脱毒、繁殖、遗传改良等方面。
在进行茎尖培养时，需要采用无菌的培养基，包括营养盐和植物生长因子，以支持植物的生长和分化。
虽然茎尖培养可以提高植物繁殖率，促进遗传改良，但植物在自然环境中存在各种病毒和微生物的感染，如果不加以处理，这些感染会对植物生长产生不良影响。
因此，为了保证繁殖的品质和数量，需要进行脱毒处理。
茎尖培养脱毒的原理是通过对植物进行体细胞培养和细胞选择，帮助植物去除体内的病毒和微生物。
茎尖培养可以分为四个步骤：外植物质的选择、外植物的消毒、外植物体的消化和茎尖的培养。
第一步是外植体的选择。
首先需要选择健康的植物组织作为外植体进行培养，最好是从没有感染过病毒和微生物的植株中选取。
要选择完整、无损伤、新生的芽或茎尖，以保证外植体的健康和完整性。
第二步是外植体的消毒。
在消毒前需要将外植体剪成适当大小并于无菌实验室中进行操作。
将外植体浸泡于含有消毒剂的溶液中，如70%酒精、0.1%汞溴素、0.1%过氧化氢等，在消毒前也需要去除外植体的表层污垢。
消毒的目的是避免残留的病毒和微生物在培养培养过程中再次感染植株，从而保证培养过程的无菌。
第三步是外植体的消化。
在消毒后，外植体的细胞壁依然存在，需要进行消化，使得细胞易于分离和重新生长。
可采用不同的消化酶，如植物生长调节剂，酶解作用可以促进外植体的细胞分离。
这种操作可以改变细胞壁的结构，使得外植体的细胞容易分离和重新生长。
消化过程中要慎重，避免过度消化。
第四步是茎尖的培养。
在消化完成后，取出外植体中的营养组织或茎尖，置于培养基上进行培养和分化。
在培养的过程中要注意维护培养基的无菌和营养条件，以支持茎尖生长和分化。
茎尖要发生新的细胞分化，从而产生更多的细胞，从而最终保证植株生长健康。
总之，茎尖培养脱毒是一种重要的技术。
它可以将健康的植物组织进行体细胞培养和细胞选择，清除体内的病毒和微生物。
第7章 茎尖培养和脱毒、快繁技术
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
③ 试管苗的壮苗与生根：
• 一般要分成单苗 ， 转移到盐浓度较低 、 不含细 一般要分成单苗， 转移到盐浓度较低、 胞分裂素， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基， 胞分裂素 ， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基 ， 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 • 问题：不易生根 （ 延长时间、 继代 ） ；易生根： 问题：不易生根（ 延长时间 、 继代） 壮苗阶段不加生长素， 壮苗阶段不加生长素 ， 试管外生根可减少费用； • 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
4. 提高试管苗繁殖速度的措施：
① 选择合适的繁殖途径 ② 改良培养基： 激素 （腋芽 、 不定芽 、 胚状体 ） 等； 激素（ 腋芽、 不定芽、 胚状体） ③ 改良培养条件 ： 温 、光 、 湿度、 气体（有利气体、 湿度 、 气体 （ 有利气体、
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 培养方法：固体培养、液体纸 桥培养（易愈伤化时）
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 对培养基和培养条件的要求： • 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不 用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制 愈伤等有一定的效果。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
3. 茎尖培养技术： • 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植 株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理； 在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶 片，进行常规的表面灭菌；
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌 培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或 解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的 解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下 来，直接接种到培养基上；
植物组织培养实验教案
一、实验背景植物组织培养技术是一种在无菌条件下，将植物的茎尖、茎段或叶片等切成小块，通过人工方法在特制的培养基上进行培养，使其逐渐发育成完整植物体的技术。
本实验旨在让学生了解植物组织培养的基本原理，掌握实验操作技能，培养学生的创新意识和实践能力。
二、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理及应用。
2. 掌握植物组织培养实验的操作步骤。
3. 培养学生的创新意识和实践能力。
三、实验材料与仪器1. 材料：植物茎段、叶片、茎尖等；培养基；植物激素；消毒剂等。
2. 仪器：无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、移液器、解剖刀、镊子、滤纸等。
四、实验步骤1. 准备实验材料：选取健康的植物茎段、叶片或茎尖，去除杂质，清洗干净。
2. 消毒：将实验材料用70%酒精浸泡30秒，再用无菌水清洗，用消毒剂处理1-2分钟。
3. 切割材料：用解剖刀将消毒后的实验材料切割成适当大小的小块。
5. 培养：将接种后的培养皿放入培养箱中，控制温度、光照等条件，进行培养。
6. 观察与记录：定期观察植物组织的生长状况，记录实验现象。
五、实验注意事项1. 实验过程中需严格无菌操作，避免污染。
2. 切割材料时要注意刀片的消毒和更换。
3. 培养过程中要定期观察，调整培养条件。
4. 实验结果可能存在差异，要注重数据分析与讨论。
教案编写仅供参考，具体实验操作请根据实际情况进行调整。
祝实验成功！六、实验拓展1. 探索不同植物激素对植物组织培养的影响。
2. 尝试用植物组织培养技术繁殖难生根或珍贵植物。
3. 研究植物组织培养在基因工程中的应用。
七、实验报告要求1. 描述实验材料、仪器和实验步骤。
2. 记录实验现象和结果。
3. 分析实验结果，探讨可能的原因。
4. 提出实验中存在的问题及改进措施。
八、实验评价1. 评价学生对植物组织培养原理的理解。
2. 评价学生对实验操作的熟练程度。
3. 评价学生对实验现象的观察与分析能力。
4. 评价学生在实验过程中的团队合作精神。
实验三-茎尖培养技术
4. 酒精灯、培养皿、灭菌滤纸、镊子、解剖刀等。
三、实验原理：
以茎尖为外植体经表面灭菌处理后，接种于诱导培养基 上，促进茎尖萌发成苗，获得无菌系，并可在适当浓度的 植物激素和生长调节剂的作用下进一步增殖和生根，获得 完整植株。 茎尖培养包括起始培养、增殖培养和生根培养及驯化移 栽等阶段，不同培养阶段要求不同的植物激素和生长调节 剂条件。 茎尖培养主要用于优质种苗和脱毒种苗的繁殖。
2.超净工作台使用前用75%的乙醇擦拭，打开鼓风机20分 钟左右； 3.接种前用品摆放合理； 4.接种过程中工具应充分灼烧，镊子、解剖刀及瓶口要在 酒精灯上灼烧； 5. 接种前用75%乙醇擦拭手和手臂，以减少污染。
六、思考题：
1. 以种苗快繁为目的的茎尖培养包括哪些阶段，各个 阶段对培养基条件有哪些要求，外植体选取要注意哪 些问题？ 2. 无菌操作过程中需注意哪些问题？
四、实验步骤：
1. 外植体的准备：去除老化叶片，保留1-2片幼叶，洗净 后在流水中冲洗10-20分钟； 注意选取幼嫩茎尖，大小要适当；选取生长旺盛的茎尖。
2. 表面灭菌：将茎尖材料放到灭国菌的罐头瓶内，加入 75%的乙醇处理30秒，然后倒出，加入1%的次氯酸钠 灭菌10分钟（大蒜处理20min），处理后用无菌水冲 洗4-5次；
以茎尖为外植体经表面灭菌处理后接种于诱导培养基上促进茎尖萌发成苗获得无菌系并可在适当浓度的植物激素和生长调节剂的作用下进一步增殖和生根获得完整植株
实验三 植物茎尖培养技术
一、实验目的：
1. 学习并掌握植物茎尖离体培养的原理和方法；
2. 学习并掌握无菌操作技术。
二、实验材料：
1.大蒜、小白菜；
2. 培养基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 3%+ 琼脂7.0g/L。 3. 75%的乙醇，1%次氯酸钠。
植物茎尖培养脱毒技术
茎尖培养脱毒的操作流程
剥取茎尖
8-40倍的解剖镜
剥去小叶片
接种到培养基
切下带1-2个叶原基的分生组织
茎尖培养脱毒的操作流程
培养与鉴定
生长点长出幼芽
2-3cm高的无根苗
生根培养
快速繁殖与驯化移植
病毒鉴定
指示植物法 抗血清鉴定法 电镜检测法 分子检测法
菊花脱毒苗
茎尖培养脱毒的操作流程
关键技术环节
运移动 速度慢
病毒在植物体内的移动
长距离转运 速度快
近看维管束
顶端分生组织
病毒
病毒在植物体内的分布特点
生长点（约0.1-1.0 mm 区域）或者无
毒，或者只携有浓度很低的病毒
病
毒
随
生长点
着
与
茎
尖
距
离
的
缩
短
而
减
少
病毒分布 不均匀
茎尖分生组织区域内维管束不健全 病毒赶不上分生细胞不断分裂和 活跃的生长速度
量和品质均明显下降，怀疑是病毒引起的。请你设计 一个该草莓品种的脱毒技术方案。
谢谢
植物茎尖培养脱毒技术
植物病毒的危害
终生带毒 难用药物治愈 反复感染病毒
植物病毒的危害
黄化 坏死
严重降低农 作物的产量
与品质
枯斑 畸形
植物病毒的危害
植物病毒 1000多种
经济损失 400亿美元
培育无病毒苗
植物病毒的传播途径
菟丝子
营养 繁殖
花粉
昆虫
传染 途径
螨类
病叶 汁液
种子
线虫
病毒在植物体内的移动
剥取适当大小的茎尖。通常培养茎尖越小，产生 幼苗的无毒率越高，而成活率越低。
S6实验六 植物茎尖的培养(理论)
实验六植物茎尖培养（理论）病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。
潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。
国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病毒苗，实施农作物无病毒化栽培。
所谓“无病毒苗”，是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。
因此，培育无病毒母株，是获得无病毒苗的根本途径。
一、病毒在植物体内的分布及危害1、病毒在植物体内的分布病毒侵染植物叶片后即增殖并向附近细胞转移，尽管速度很慢，但经过一段时间，叶片内病毒浓度达到一定量而到达韧皮部。
1943年，White首先发现已感染的烟草植株生长点附近烟草花叶病毒浓度很低，甚至没有。
1948—1949年，Holmes和Masset等证实了病毒的分布随植株不同部位和年龄而异。
★老叶和成熟的组织中病毒含量高★幼嫩和未成熟的组织及器官中病毒含量较低★根尖、茎尖点约0.1~1mm区域中几乎不含病毒病毒的传播：筛管组织、胞间连丝、营养体及刀具、土壤茎尖分生组织无分化，没有维管组织。
2、病毒的危害已发现的植物病毒超过500种，草莓病毒曾使日本草莓的产量严重下降，品质退化。
★病毒危害极大★不能通过化学杀菌和抗生素进行防治和消除★研究脱毒方法意义重大二、植物脱毒的意义1、能够有效地保持优良品种的特性任何一种优良品种均需要有一个忠实地保存其遗传性状的繁殖方法。
离体无性繁殖：不会造成性状分离、不会产生退化、避免病虫害的侵染2、快速繁殖品种，使优良品种迅速应用离体繁殖周期短（1~3个月）、不受季节限制、繁殖系数高3、生产无病毒种苗，防止品种退化目前受病毒危害严重影响生产的有：大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、箩卜果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉花卉：香石竹、各种菊花、天竺葵、紫罗兰4、节约耕地，提高农产品的商品率块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物，每年产品用留作种的比例：大蒜：留种量占产量的五到八分之一；马铃薯：留种量占产量的十分之一；贝母：留种量占产量的三分之一。
茎尖培养实验报告
实验名称：茎尖培养实验课程名称：植物组织培养学学院：生命科学学院专业班级：植物科学专业姓名：[你的姓名]小组成员：[小组成员姓名]日期：[实验日期]指导老师：[指导老师姓名]一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术的基本原理和方法。
2. 熟悉无菌操作技术，提高实验操作技能。
3. 观察茎尖在培养基上的生长和分化过程，了解植物细胞全能性及再生机制。
4. 分析影响茎尖培养的因素，为植物繁殖和育种提供理论依据。
二、实验原理1. 植物组织培养技术：通过在无菌条件下，将植物器官、组织或细胞等在人工培养基上进行培养，使其再生出完整植株的过程。
2. 茎尖培养：利用茎尖细胞的全能性，将其接种到含有植物激素的培养基上，诱导其分化成完整植株。
3. 植物激素：植物激素在植物生长和发育过程中起着重要作用，如生长素、细胞分裂素等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物茎尖、无菌水、70%酒精、无菌滤纸、无菌手术刀、镊子、培养皿、培养箱、显微镜等。
2. 试剂：MS培养基、生长素、细胞分裂素、琼脂、葡萄糖等。
四、实验步骤1. 材料准备：选取新鲜植物茎尖，用70%酒精消毒后，用无菌滤纸吸干水分。
2. 茎尖接种：将消毒后的茎尖用无菌手术刀切成约0.5cm长的小段，接种到含有生长素和细胞分裂素的MS培养基中。
3. 培养条件：将接种后的培养基放入培养箱中，保持温度25℃、光照12小时/天。
4. 观察记录：定期观察茎尖的生长和分化情况，记录生长速度、叶片颜色、根系发育等。
5. 数据分析：对实验数据进行统计分析，分析不同处理对茎尖培养的影响。
五、实验结果与分析1. 茎尖生长：接种后3-5天，茎尖开始生长，出现明显的芽点；接种后7-10天，芽点逐渐增多，茎尖高度达到1-2cm。
2. 茎尖分化：接种后10-15天，茎尖分化出叶片，叶片颜色逐渐变绿；接种后20-25天，茎尖分化出根系，根系发达。
3. 影响因素分析：生长素和细胞分裂素浓度对茎尖培养有显著影响。
植物脱毒方法
植物脱毒方法
1、茎尖培养脱毒:病毒在植物体内的分布并不均匀,越靠近茎端的病毒的感染深度越低,生长点则几乎不含或含病毒很少。
2、愈伤组织培养脱毒法:通过植物的器官和组织的培养,脱分化诱导产生愈伤组织,然后从愈伤组织再分化产生芽,长成小植株,可以得到无病毒苗。
3、珠心胚培养脱毒:病毒一般不通过种子传播,由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的,并具有与母本相同的遗传特性。
4、茎尖微体嫁接:将实生苗砧木在人工培养基上种植培育,再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖,在砧木上进行试管微体嫁接,以获得无病毒幼苗。
5、花药培养脱毒。
6、热处理脱毒:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40°C),即钝化失活。
7、化学处理:抑制或杀死病毒。
利用茎尖培养脱毒苗的原理
利用茎尖培养脱毒苗的原理
利用茎尖培养脱毒苗的原理是通过在无菌环境中培养植物的茎尖，去除植物体内的病毒和细菌，最终得到健康的植株。
这项技术在植物繁殖、育种和保护植物健康方面有着广泛的应用。
这一过程主要包括以下几个步骤：
1.选择健康的母株：选择生长健康、没有病害和病毒感染的母株作为培养材料。
这是确保后续培养的脱毒苗质量的重要一步。
2.表面消毒：采用适当的消毒剂对所采集的茎尖进行表面消毒，以去除表面的微生物污染。
通常使用含氯或含醇的消毒液，例如漂白水或酒精。
3.茎尖切割：在无菌条件下，使用无菌工具对茎尖进行切割。
茎尖是植物生长点的组织，含有高度分化的细胞，有助于培养成新植株。
4.培养基的准备：准备无菌培养基，包括植物生长所需的营养元素、植物激素等。
培养基要保持无菌状态，通常在高温高压条件下灭菌。
5.茎尖培养：将消毒过的茎尖放置在培养基上，利用培养基中的营养物质和植物激素促使茎尖分化和生长。
这个阶段需要严格的无菌操作，以防止外界微生物的污染。
6.分化和生长：在培养基上，茎尖逐渐分化为新的组织，形成新的植株。
这个过程可能需要一段时间，具体取决于植物的种类和培养条件。
7.脱毒：通过检测新植株是否含有病毒和细菌，筛选出脱毒的植株。
通常采用生物学检测或分子生物学方法，例如酶联免疫吸附测定（ELISA）等。
8.移栽：将脱毒的植株从培养基中移植到土壤中，使其继续生长并发育为正常植株。
植物茎尖脱毒的原理
1.植物茎尖脱毒的原理是什么？
答：茎尖培养脱毒的原理即“植物体内病毒梯度分布学说”：病毒在植物体内的分布是不均匀的，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近顶端分生区域的病毒感染浓度越低，生长点（越0.7-1.0mm）则几乎不含或含病毒很少（由于病毒运转速度慢，加上茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少或无）。
因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒。
应注意问题：由于茎尖越小其带毒率越低，脱毒效果越好，但是操作难度越大，培养成活率及形成完整植株的能力越弱；茎尖越大，其操作越容易，茎尖培养成活率及形成完整植株的能力越强，但茎尖的带毒率越高，其脱毒效果就越小，所以在剥离茎尖时，要兼顾脱毒率、成活率及茎尖发育成完整植株的能力。
茎尖培养脱毒法
茎尖培养脱毒法概述茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗，其方法是在解剖镜下，用锋利的解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离，因为茎尖分生组织基本不带病毒，利用植物茎尖分生组织进行离体培养，再结合病毒检测，就可以获得无病毒的植株。
茎尖培养中最主要的影响因素就是切取茎尖的大小，一般要求茎尖长度小于1mm。
技术上通常切取茎尖越小，脱毒效果越好，但是茎尖培养成活率变低。
曹为玉等研究发现葡萄茎尖长度与存活率成正相关，与脱毒率成反相关。
当切取茎尖长度为0.2~0.3mm时，存活率为21%~38%，脱毒率为91.4%~97%；当切取0.5mm以上时，存活率为75%~83%，脱毒率仅为70.6%~76.5%。
茎尖培养脱毒法脱毒率高，脱毒速度快，能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料，但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。
为了克服这一缺点，现在经常是将茎尖培养与热处理相结合来使用。
茎尖培养与热处理相结合之所以能够提高脱毒效果，是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大，有利于切取较大的茎尖（在1mm左右），从而能够提高培养或嫁接的成活率。
如大樱桃置于45℃的恒温培养室内，培养35天，再切取0.2~0.4mm的茎尖培养，平均脱毒率为98%。
原理茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动，分生组织中没有维管束存在，病毒只靠胞间连丝移动，速度很慢，难以追上生长活跃的分生组织，所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。
Shoot tip culture of virus-free method OverviewShoot tip culture of virus-free is to take tip meristem in vitro culture methods to obtain virus-free in vitro, and its approach is endoscopic anatomy, with a sharp scalpel to the tip to divest quickly and accurately as meristem tip basic non-virus, use of plant shoot tip meristem culture in vitro, combined with virus detection, it can be virus-free plants.Shoot tip culture in the most important factor is the impact of the cut tip size, tip length is less than the general requirements of 1mm. Technical tip is usually the smaller the cut, the effect of virus-free as possible, but low survival rate of shoot tip culture. Yu Cao, such as for the study found that grape shoot tip length was positively correlated with survival, and virus-free rate as the anti-related. When the cut tip length of 0.2 ~ 0.3mm, the survival rate was 21% ~ 38%, virus-free rate was 91.4% ~ 97%; when cut more than 0.5mm, the survival rate was 75% ~ 83%, virus-free rate only 70.6% ~ 76.5%.Shoot tip culture of the high rate of virus-free method of virus-free, virus-free high speed in a short period of time most of the original species of breeding material,but the existence of the shortcomings of this approach is the low survival rate of plants. In order to overcome this shortcoming, the tip is now often a combination of training and heat treatment to use. Shoot tip culture with a combination of heat treatment have been able to increase the detoxification effect of plant growth as a result of heat treatment can have their own area of the top of the expansion of immunization and is conducive to a larger cut of the tip (in 1mm or so) in order to improve the training or graft survival rate. Such as Cherry thermostat at 45 ℃for indoor training, training for 35 days, and then cut 0.2 ~ 0.4mm of shoot tip culture, with an average rate of 98% virus-free.PrincipleShoot tip culture is the principle of detoxification plant vascular system by mobile viruses, sub-vascular Health Organization does not exist, the virus only plasmodesma moving very slow, it is difficult to catch up with the growth of active meristematic tissue, so strong root growth, shoot tip is generally little or no virus, the virus distribution.。
植物茎尖培养脱毒的基本流程
植物茎尖培养脱毒的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!植物茎尖培养脱毒是一项重要的生物技术，其基本流程如下：1. 原材料的选择和采集：首先，选择具有良好生长状态、无病虫害的植物作为原材料。
植物的茎尖培养脱毒技术
植物的茎尖培养脱毒技术优缺点：
• 茎尖生长点的培养成了去除植物病毒，使植物复 壮的重要方法。茎尖培养还可以去除其他病原体， 如细菌、真菌等。 • 茎尖越小，去病毒机会越大，脱毒效果就越好， 但同时因为其含营养及水量太低，故培养时对培 养基的要求就越高，对剥离技术要求也越高。
植物的茎尖培养脱毒技术应用
酒精擦拭手
外植体消毒
浸泡5-7min
器械消毒
酒精灯灼烧
酒精擦拭培养皿
酒精擦拭
旋转灼烧
显微镜下 获取茎尖
接种
盖好瓶塞
几种方法的配合使用是提高植物脱毒效果：
• (1) 高温热处理与微茎尖脱毒培养技术
• (2) 高温热处理与微（体）茎尖嫁接培养技术
• (3) 化学处理与茎尖脱毒培养技术
香石竹脱毒的具体操作过和如下：
植物的茎尖培养脱毒技术
植物茎尖脱毒技术利用植物茎尖组织培养， 结合血清病毒检测技术，在防蚜传毒条件下，将影 响植物正常生长的植物病毒脱除的高新农业生物技 术。茎尖脱毒主要包括表面灭菌、茎尖剥离、茎尖 培养等步骤。
原理及依据
•植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织 中不存在维管系统。病毒在细胞间移动只能通过胞间连丝，速度 很慢，难以赶上活跃生长的茎尖； • 在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制； • 在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增殖。
主要方法步骤
• （1）茎尖的剥离：此步是技术关键，一般在解剖镜下操作。2-3cm的 茎段，剥去大叶，水冲洗1h左右，酒精快速消毒，无菌条件下5%漂白 粉溶液（或其他消毒剂）消毒7-10min，无菌水清洗，解剖镜下剥取茎 尖。 • （2）切取茎尖的大小虽然切取茎尖越小，带有病毒的可能性就越小， 但组织培养中，切取的茎尖太小，则不易成活。不同种类的植物和不同 病毒，切取的最适茎尖大小也不同。 • （3）组织培养常用基本培养基是MS培养基，它有较高浓度的无机盐， 对促进组织分化和愈伤组织生长有利；植物生长调节的种类和配比依培 养种类和生长时期来调整。
茎尖培养脱毒
茎尖培养脱毒
茎尖培养脱毒是一种植物组织培养技术，用于去除植物中的病毒，以获得无病毒的健康植株。
该技术的基本原理是利用植物茎尖生长点的分生组织具有较高的分裂能力和较低的病毒感染率的特点，将茎尖组织切下并进行培养，使其分化成新的植株。
在培养过程中，病毒无法复制，从而达到脱毒的目的。
茎尖培养脱毒的具体步骤如下：
1. 选择健康的植株：选择生长健康、无病虫害的植株作为培养材料。
2. 消毒处理：将植株进行消毒处理，以避免外部病菌的污染。
3. 切取茎尖：用解剖刀或显微镜下的微切割工具切取植株的茎尖生长点。
4. 培养茎尖：将切取的茎尖组织放在适宜的培养基上进行培养，提供适当的营养和环境条件，促使其分化成新的植株。
5. 鉴定和筛选：对培养出的植株进行病毒检测，筛选出无病毒的健康植株。
茎尖培养脱毒技术已广泛应用于果树、蔬菜、花卉等植物的脱毒和育种工作中，是一种有效的植物病毒防治方法。
植物组织培养：第4章 外植体的选择、灭菌及培养
防细菌滤膜的网孔的直径为0.45μm以下，当溶液 通过滤膜后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直 径而被阻。
在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置； 液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤 膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射 器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出 的溶液就是无菌溶液。
由于在消毒后的环境里和物品上没有活着的微生物， 所以通过严格消毒灭菌的操作空间(接种室、超净台、 等)和使用的器皿，以及操作者的衣着和手都不带任何 活着的微生物。在这样的条件下进行的操作，就叫做无 菌操作。
一 常用的灭菌方法 物理方法
化学方法
湿热灭菌(常压或高压蒸煮) 干热灭菌(烘烧和灼烧) 射线处理(紫外线、超声波、微波) 过滤除菌 大量无菌水冲洗
3. 叶片：由于叶片的来源最有保证，因而许多植物的组 织培养以叶片为起始培养物，如，玫瑰、海棠、矮牵 牛和豆瓣绿等许多植物。
4.子叶或下胚轴：对一些培养较困难的植物，则往往可 以通过其子叶或下胚轴来建立其组织培养体系。 若有可能，最好对培养较困难的植物各部位的诱导及 分化能力进行比较，从中筛选出最佳外植体。
甲醛(福尔马林)
过氧化氢 高锰酸钾 来苏儿 漂白粉 次氯酸钠 升汞(氯化汞) 酒精
（一）物理方法灭菌
1.湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）—培养基灭菌
培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。高压灭菌 的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢， 压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度 也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。 在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐 热的芽孢。
第十讲茎尖分生组织培养
通气
提高通气性，利于培养物的脱分化、分裂及再分化 通气性差，则利于有害气体的积累，伤害培养物，且易 于出现玻璃化苗
四：脱毒苗的培育和病毒检测
脱毒苗的培育
病毒检测
1 脱毒苗的培育
定义及意义 脱毒苗培育的方法
热处理脱毒 茎尖培养脱毒 热处理结合茎尖培养脱毒 微体嫁接脱毒 抗病毒药剂脱毒
2）体细胞无性系变异的普遍性是指？
变异具有自发性 细胞、愈伤组织到再生植株都可能出现变异 物种、器官、组织都可以出现变异 变异引发的性状具有普遍性
3）影响体细胞无性系变异的因素有哪些？
基因型 外植体 培养基 继代培养时间 温度 组织原有倍数性
4）什么叫诱变？常用的诱变方法有？
该过程可以作为研究茎根系及芽的形态建成的体系1952年morel发现兰花茎尖可以培养形成原球茎状的扁平小球体可以不断切割形成无性繁殖系植物病毒已发现的超过500余种严重影响农业生产特别是以无性繁殖为主的农作物及经济植物等病毒引起的病害不同于真菌及细菌病害不能采用杀菌剂和抗生素防治生产上目前无法根治1952年morel和martin发现通过茎尖组织培养可以从感病的大丽花中获得无病毒植株茎尖组织培养可以严格控制营养激素成分及浓度温度及光照等培养条件是常规下无法生长和繁殖的植物材料顺利扩繁1960年morel最早以兰花茎尖繁育兰花克服了种子繁殖效率低及品种退化的问题掀起了兰花工业已经广泛应用于兰花菊花等名贵观赏植株的生产中几乎所有的植物均可以以茎尖组织培养进行快繁茎尖组织培养后植株遗传学稳定培养技术成熟因此可以用于常规繁育有困难的物种
光照
植物茎尖生长点
植物茎尖生长点
植物茎尖生长点
植物茎尖生长点是植物的生长控制中心，受到植物内外环境的影响，植物茎尖的生长方向会随之改变。
植物体内的激素分泌以及细胞的垂直分化都会受到植物茎尖生长点影响。
植物茎尖生长点的形成
植物的茎尖生长点形成主要是受到植物内外的环境条件作用以
及植物体内激素的分泌影响。
植物内植物细胞分化作用也是影响植物茎尖生长点形成的关键因素。
在重力作用下，植物体内的激素分泌会产生拔生作用，使植物茎尖生长点随之调整方向，使茎尖向重力方向的变化呈现一定的规律性。
另外，植物在外界光照的作用下，植物茎尖也会随之调整生长方向，完成最佳的光合作用。
植物茎尖生长点的作用
植物茎尖生长点在植物的生长控制中占有重要的地位，植物体内的激素分泌和细胞的垂直分化受到植物茎尖生长点的影响。
另外，植物茎尖生长点也是植物的营养吸收与输送的重要部位，植物的分枝、营养吸收、根系的向下扩张等过程都在植物茎尖生长点发生。
- 1 -。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物的茎尖培养
姓名: 李希东专业: 植物学学号: 200808201 日期: 2009.4.25 成绩:
一、实验目的：
1. 掌握茎尖培养的原理和方法；
2. 练习使用实体显微镜剥离茎尖；
二、实验原理：
植物细胞具有全能性，即每个植物细胞含能产生完整植株的全部遗传基因。
理论上讲，只要条件合适，含全部遗传基因的细胞都能分裂分化，产生完整植株。
在茎尖和根尖的分生组织中一般是无毒或仅含极低浓度的病毒粒子，而较老的组织中，病毒含量随离茎尖距离的增加而提高。
据此原理采用茎尖组织培养可获得无毒植株。
三、实验材料、器皿：
实验材料：冬青顶芽
实验器皿：高压蒸汽灭菌锅、电子天平、微波炉、三角瓶、培养皿、超净工作台、实体显微镜、酒精灯、烧杯、量筒、移液器、pH试纸、橡皮筋、解剖针、滤纸、剪刀、容量瓶、长柄镊子、酒精
四、实验步骤：
1.培养基配制
配制母液：（按照培养基配方，配置不同扩大倍数的培养基母液）
大量元素：母液扩大20倍；微量元素：母液扩大1000倍；CaCl2·2H2O：母液扩大100倍；铁盐：母液扩大200倍。
培养基配制方案：
1. MS
2. MS+BA 0.5 mg/L
3. MS+BA 0.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L
4. MS+BA 1.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L
5. MS+BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L
6. MS+BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L
按方案依次加入大量元素、微量元素、铁盐和有机物质，加入蔗糖30g/L，琼脂6.0g/L，肌醇50mg/L，水解乳清蛋白300 mg/L，和不同浓度的激素，定容到400ml，混合后微波炉加热溶解，再按配方加入各种激素，调节pH值为5.8-6.0，分装到锥形瓶中，每瓶20-25ml，用锡箔纸封口。
本实验选取1，4，6号培养基。
2. 灭菌：高压锅灭菌，121℃，保温20min，冷却，凝固，用于实验。
3. 接种（实体显微镜剥离茎尖－接种）
（1）材料表面消毒：
植物茎尖（顶芽或侧芽）用自来水水冲净，70％的酒精漂洗材料半分钟，然后放入0.1％的升汞中进行表面消毒8-10min，用无菌水冲洗材料3-5次。
（2）茎尖剥离：
表面消毒的茎尖和实体显微镜都置于超静工作台上。
茎芽置于实体显微镜下，用镊子将其按住，用解剖针和解剖刀将叶片和叶原基剥掉。
解剖针或解剖刀要常常浸入酒精，并用火焰灼烧，冷却。
当形似一个晶亮半圆球形的顶端分生组织充分露出来后，将其切下，一般0.1~1mm，接到选取的培养基上。
（3）接种：
每瓶中放置1-3个茎尖后，用一小块锡铂纸包好瓶口；并用线绳结成活头或橡皮绳缠两圈。
记录个人信息。
五、实验记录：
2009年5月20号，观察实验结果，结果如下：
MS培养基上外植体没有明显变化。
MS+BA 1.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L培养基上有不定芽形成。
MS+BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L培养基上形成愈伤组织。
六、实验结果计算或分析：
植物的生长发育受多种激素的影响，其中最主要的是生长素（auxin）和细胞分裂素（cytokinin）。
茎尖生长点的分化需要激素诱导，在组织培养中生长素的主要作用是促进细胞伸长，胚性的维持，诱导愈伤组织及根的生长发育，且存在浓度效应，高浓度生长素促进根的分化，浓度过高反而起抑制作用。
细胞分裂素，主要是促进细胞分裂，促进不定芽的生长分化。
在不添加任何激素的MS培养基上，外植体基本没有变化，分析原因可能是由于缺乏外源激素的诱导，生长处于停滞状态。
在MS+BA 1.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L培养基上，细胞分裂素浓度远远高于生长素，两种激素相互作用下，诱导不定芽的分化。
MS+BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L培养基中，生长素和细胞分裂素的浓度均在较高时水平，细胞分裂素水平要高于生长素，但差异不大，两种激素综合作用下生长点外植体诱导出愈伤组织。