二轮复习选修一 专题五蛋白质知识点梳理导学案填空 答案

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血红蛋白的提取和分离导学案

一、基础

1、蛋白质提取与分离的依据:1.分子的大小2.电荷性质和多少3.溶解度4.吸附性质5.对其他分子亲和力

2、血红蛋白由四条肽链组成，包括2个a－肽链和2个β一肽链；（4个亚铁红素基团）；血红蛋白因含血红素而成红色；血红蛋白作用：运输氧气和二氧化碳

2、分离蛋白质的方法：凝胶色谱法也叫分配色谱法：根据被分离物质的相对分子质量的大小来分离蛋白质凝胶①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的通道；

②化学本质：多糖类化合物化合物，如葡聚糖、琼脂糖

原理：相对分子质量的较大的蛋白质无法进入凝胶颗粒内部，路程较短，移动速度较快，先流出，相对分子质量的较小的蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部，路程较长，移动速度较慢，后流出。

3、透析法：透析袋又称玻璃纸；一般用硝酸纤维素制成。利用透析袋小分子自由通过，大分子留下。

4、电泳法：利用分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身大小，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。

两种常用电泳法琼脂糖凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法；

测定蛋白质分子量即鉴定方法：常用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

SDS能消除净电荷对迁移速率的影响，原因：SDS使蛋白质变成单链，SDS所带负电荷大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因此掩盖了不同种类蛋白质的电荷的差别，使电泳迁移速率完全取决于分子大小。

二、蛋白质提取与分离四步

1、样品处理（1）红细胞的洗涤：目的：去除杂蛋白，洗涤次数过少，无法除净；

洗涤干净的标志：上清液不在呈现黄色；洗涤用生理盐水

低速短时离心，防止白细胞和淋巴细胞沉淀

加入柠檬酸钠，防止血液凝固

缓慢搅拌的目的，防止防止红细胞破裂

（2）血红蛋白的释放：加蒸馏水和40%体积甲苯。

蒸馏水的作用：使红细胞大量吸水胀裂；甲苯的作用溶解红细胞的细胞膜（3）分离血红蛋白第1层（最上层）：无色透明甲苯层

离心第2层白色薄层固体，脂溶性物质的沉淀层，

第3层：红色透明，血红蛋白的水溶液层

第4层：其它杂质的暗红色，沉淀层

滤纸的作用：过滤除去脂质和细胞破碎物

分液漏斗的作用是：分离血红蛋白和有机溶剂

2、粗分离—透析血红蛋白目的除去样品中分子量较小的杂质。将透析袋放入磷酸缓冲溶液中，透析12h 缓冲溶液的作用：模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能。。

3、纯化—凝胶色谱法①胶色谱柱的制作②凝胶色谱柱的装填. ③.样品的加入和洗脱

观察到红色区域均匀移动，说明色谱柱制作成功

注意：凝胶装填时尽量紧密，均匀，以低凝胶颗粒之间的空隙；

加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热目的：不但节约时间，还能除去凝胶中可能带有的微生物和排除凝胶内的空气。

装填凝胶柱时不能有气泡存在。（气泡和空隙会扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果不能发生洗脱液洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。

4、纯度鉴定常用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

1.判断常考语句，澄清易混易错

(1)纯化主要是根据蛋白质以及蛋白质与其他物质之间的理化性质的差异进行的()

(2)透析法可去除小分子化合物杂质，原理是不同分子所携带净电荷不同()

(3)通过控制离心速率，可使分子大小、密度不同的蛋白质沉降分层，从而分离不同的蛋白质()

(4)不同的物质在同一电场中的泳动速度不同，因此可用电泳法分离蛋白质()

(5)影响泳动速度的因素包括带电颗粒的性质、电场强度、溶液的pH等()

(1)√(2) ×(3) √(4) √(5) √

2.分析命题热图，明确答题要点

下图是用凝胶色谱法分离a、b两种蛋白质的示意图，请分析：

(1)先从层析柱中洗脱出来的是哪种蛋白质？a蛋白质先洗脱出来。为什么？，因为a的相对

分子质量较大，被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过

(2)d是什么？有什么特点？d是多孔板，蛋白质可以通过，凝胶颗粒不能通过。

(3)层析柱装填时不能有气泡的原因是什么？气泡会扰乱蛋白质的洗脱次序，干扰实验结果。

4.如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题：

(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，它在红细胞中的作用体现

了蛋白质具有______功能

(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是_____________；乙装置中，C溶液的作用

是______________。

(3)甲装置用于___________ ，目的是_______________________________。用乙装置

分离蛋白质的方法叫__________，是根据____________分离蛋白质的有效方法。

(4)用乙装置分离血红蛋白时，待____________________________时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。

答案(1)运输(2)磷酸缓冲溶液洗脱血红蛋白(3)透析(粗分离)去除样品中相对分子质量较小的杂质凝胶色谱法相对分子质量的大小(4)红色的蛋白质接近色谱柱的底端

10.血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答下列问题：

(1)将实验流程补充完整：A为______________，B为_________________。凝胶色谱法是根据_________________________而分离蛋白质的有效方法

(2)洗涤红细胞的目的是去除____________________；离心速度过高和时间过长会使__________一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是________________________。释放血红蛋白的过程中起作用的是______________。

(3)某同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的______________、分子的大小、形状等。而另一位同学则利用凝胶过滤分离蛋白质。待蛋白质接近凝胶色谱柱底端时，用试管连续收集流出液。先收集到的蛋白质与后收集到的蛋白质的区别是____________________________________

答案(1)血红蛋白的释放样品的加入和洗脱蛋白质相对分子质量的大小(2)杂质蛋白(血浆蛋白)白细胞等离心后