电子显微镜样品制备与观察电子显微镜样品制备[1]

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电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]
（四）实验方法
1 修快
（1）用样品夹头夹住环氧树脂包埋块的 2/3左右，夹紧，或用手拿住样品块；
（2）用小钢锉或单面刀片修快使达到下面 要求：切面光滑平整，尽可能是要观察 的材料，切面大小0.5*0.5mm2；3～4个 斜面的坡度以45度为宜。
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二、样品的渗透与包埋
（一）实验目的 掌握超薄切片样品渗透与包埋的方法 （二）实验原理 见理论部分 （三）实验材料 上次保存的材料
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（四）实验方法
1 脱水 85％乙醇→ 95％乙醇→ 100％乙醇 → 100％乙醇，每步5~10min；
2 置换 丙酮→丙酮，每步5~10min ； 3 渗透 1/2丙酮+1/2环氧树脂1~4h；
4 包埋 先将包埋模块加满环氧树脂，再将 渗透过 的材料用牙签挑到包埋模块尖端 部分，并在其中渗透3~4h；
5 聚合 加热37℃ → 45℃ → 60℃，各12h。
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2 放入样品：按程序放入样品。 3 加高压：有下列几档可选 40KV、60KV、
80KV 、100KV，若需高压应先加低压。选择 加速电压原则：电压越高，分辨率越高，反差 越小；反之，电压越低分辨率越低，反差越大。
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4 加灯丝电源：顺时针旋转至限位处（加灯丝电 源必须有高压存在），此时应看到图象，若不 能看到图象，请与专职人员联系，切勿随意调 整各旋钮。 5 观察:调整放大倍数、亮度、样品 XY平移、焦距进行观察。
2 滴加染液 3 铀染 4 水洗 5 铅染 6 水洗 7 干燥
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六、电子显微镜的使用与样品 超微结构观察
（一）JEM-100SX透射电子显微镜的使用 1 启动：闭合电子显微镜稳压电源开关与冷却循
环水稳压电源开光，压下启动按钮。约30分钟 后仪器进入可工作状态。
电子显微镜样品制备与 观察-电子显微镜样品制
备
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2020/11/28
电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]
主要内容
® 样品的取材与固定 ® 样品的渗透与包埋 ® 修快与支持膜的制备 ® 玻璃刀的制作与超薄切片 ® 电子染色 ® 电子显微镜的使用与生物样品超微结构
观察
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（五）实验要求 1 所用器具、工具保持清洁干燥； 2 手上若沾有环氧树脂，用丙酮棉球擦去； 每人包埋2～3个样品块。
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三、修快与支持膜的制备
（一）实验目的 1 掌握超薄切片包埋块修快的方法； 2 掌握支持膜制备的方法。 （二）实验原理 见理论部分 （三）实验材料 上次实验包埋的材料
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电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]
一、样品的取材与固定
（一）实验目的 1 掌握电镜样品取材的方法与要求 2 掌握电镜样品的固定方法与要求 （二）实验原理 （见原理部分） （三）实验材料 小白鼠肝脏（等）
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（四）实验方法
2 每人修快2块，制膜2张，将修好的样品块用纸 包好写上组号姓名；
3 预习下次实验。
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四、玻璃刀的制作与超薄切片
（一）玻璃刀的制作 （二）超薄切片
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五、电子染色
1 蜡盘的制作 在培养皿中注入融化的石蜡，让 其逐渐凝固；
（3）在玻璃条四周用单面刀片将膜轻轻划开，然 后以与水面30度角缓慢插入放在日光灯正下方 的250ml烧杯的蒸馏水中，同时用眼观察(使眼 正好能看到水面反射的日光灯的光线)，使膜完 全脱离玻璃条而漂浮在水面上，膜应为均匀的灰 色（约15nm）；
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3rew
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
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2020/11/28
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6 照相：将要照相部位移至视野中心标记方框内， 过卷，调整焦距、亮度至自动曝光两个绿灯同 时亮，抬起荧光屏进行曝光。
7 关机：将放大倍数调至1000X，调整亮度正好 充满荧光屏，取出样品，灯丝旋钮调至最低， 高压调至OFF，压下关闭按钮，约5分钟后仪器 关闭，切断两个稳压电源开关。
8 记录：包括使用起至时间、观察内容、使用人 及所属单位及导师，仪器工作情况。
4 漂洗 0.1M磷酸缓冲液漂洗3次，每次 5～10min,0～4℃；
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5 后固定 1％鋨酸固定1～2h，0～4℃；
6 漂洗 0.1M磷酸缓冲液漂洗3次，每次 5～10min,0～4℃；
7 脱水 30％乙醇→ 50％乙醇→ 70％乙醇， 0～4℃，每步5～10min；
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2 支持膜的制备
（1）将玻璃条、250ml烧杯洗净，玻璃条先用纱 布擦干，然后再用绸布用力反复擦净，250ml烧 杯装满蒸馏水；
（2）将玻璃条放入0.2~0.3%聚乙烯醇缩甲醛的氯 仿溶液中2~4cm深，停留3~5s后提出，在空气 中自然干燥；
8 保存 70％乙醇0～4℃保存。
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（五）实验要求 1 用具干燥； 2 取材 快、准、小、轻； 3 鋨酸有毒，需在通风厨中进行，含鋨酸
的废液放入指定容器； 4 每人固定2～3块样品； 5 在固定的过程中要不断震动样品管。
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（4）将2～4片载网放在膜上，再用镊子轻压1～ 2下，使载网与膜紧贴；
（5）再用比膜稍大的滤纸放在膜的上方，轻压 下滤纸一角，在滤纸刚好全部湿润之际将滤纸 提起，载网与膜亦贴在滤纸上；
（6）将膜向上保存于培养皿中备用。
（五）实验要求
1 制膜所用的器具、蒸馏水、纱布、绸布必须干 净，用后洗净，制膜过程要防尘；
1 动物麻醉 将小白鼠放入烧杯，放入一蘸 有氯仿的脱脂棉球，用培养皿盖住烧杯 口，约3～5min后小白鼠被麻醉；
2 解剖分割 迅速解剖，取出肝脏，在硬纸 上用新单面刀片分割成0.5*0.5*0.5mm3 小块，迅速投入准备号的固定液；
3 前固定 2.5%戊二醛0~4℃固定1~2h（固 定液需提前准备号）；