色谱柱的使用和维护
色谱柱的使用注意事项及维护 色谱柱如何操作
色谱柱的使用注意事项及维护色谱柱如何操作在日常分别分析工作中，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过在日常分别分析工作中，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
（1）柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必需防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
（2）假如仪器用来做仪器分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
（3）避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
（4）应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然。
（5）如使用柱温掌控装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
（6）一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
（7）选择使用适合的流动相，以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解。
（8）避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
（9）常常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50—75mL。
（10）保存色谱柱时应将柱内充分乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
色谱柱的使用和维护
色谱柱的使用和维护色谱柱是一种用于分离混合物的重要工具，广泛应用于化学分析、环境检测、药物研发等领域。
为了保证色谱柱的正常使用和延长其寿命，以下将介绍色谱柱的使用和维护方法。
一、色谱柱的使用1.色谱柱的激活新购买的色谱柱通常需要进行激活处理，以去除柱内杂质和保证柱的稳定性。
常见的激活方法包括使用最终使用的溶剂/流动相进行洗脱或者使用强极性溶液进行反向激活。
激活后，需用洗脱溶剂或流动相进行平衡。
2.样品的前处理样品的前处理对色谱柱的使用和维护至关重要。
首先，要确保样品的纯度和浓度，以避免对色谱柱产生污染。
其次，对于有机溶剂溶解的样品，最好使用过滤器进行过滤，以防止固体颗粒和杂质进入色谱柱。
3.流动相的选择正确选择和配置流动相对于色谱柱的使用非常重要。
根据需要分离的组分特性，选择合适的流动相性质和组成，并根据需要进行酸碱调节、添加缓冲剂等。
此外，注意保持流动相的流速稳定，并定期更换或再生。
4.检测器的设置根据需要检测的组分，选择合适的检测器并进行适当的设置。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-Vis）、荧光检测器、质谱仪等。
在使用检测器前，要确保其正常工作并进行校准。
5.流量控制使用色谱仪时，应保持流量的稳定性。
定期检查和校准流量控制器，并调整至适当的设置，以确保色谱柱正常运行。
6.色谱条件的优化根据分析需要，在保证分离效果的前提下，进行色谱条件的优化。
包括优化流速、温度、柱渗透性、梯度洗脱程序等，以提高分离效果和保护色谱柱。
二、色谱柱的维护1.洗脱和平衡每次使用完色谱柱后，应进行洗脱以去除残留的样品和杂质，并用适当的溶剂进行平衡。
洗脱和平衡步骤的操作要轻柔，避免使用高压流动相进行冲洗。
对于一些特殊样品，如蛋白质和多肽，可以使用具有较强亲和性的溶剂进行洗脱和平衡。
2.色谱柱的储存条件当色谱柱暂时不使用或需要长期储存时，应注意以下几点：首先，将色谱柱从设备上拆卸下来，用纯净溶剂充分洗脱并平衡，保证柱内干净；其次，封闭柱两端，避免进入灰尘和空气，可以使用柱塞或盖子进行封闭；最后，将柱放置在干燥、阴凉的地方存放，避免受到阳光直射和高温。
【色谱柱】色谱柱的维护方法 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱的维护方法色谱柱维护和修理保养色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最紧要的是与日常的维护紧密相关。
色谱柱的使用寿命紧要是柱效和柱压两个指标来衡量，假如一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。
因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，除去引起柱效下降和柱压上升的因素。
以下是色谱柱的维护方法：一、流动相的PH应在使用的范围内流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。
由于流动相的PH掌控不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必需认真对待，严格掌控流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的上升，而且也会引起柱效下降，由于筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。
因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0、45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全除去固体颗粒物质，由于泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压上升、柱效下降。
保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻拦固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。
由于柱压上升在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
假如色谱柱柱压上升是由于进样端筛板被堵引起的，可选择以下方式进行补救：1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min、2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。
四、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻拦了基质上键合的碳链自由伸展，使色谱柱的保留本领下降，柱效降低。
相色谱柱的保养与维护
相色谱柱的保养与维护
相色谱柱是高精度仪器，需要进行专业的保养与维护，以保证其正常使用和延长使用寿命。
以下是相色谱柱的保养与维护方法：
1.保持干燥：相色谱柱应该存放在干燥、阴凉、通风的地方。
2.避免受力：安装相色谱柱时，应该根据操作手册准确安装，不强行扭曲、移动或者碰撞柱子。
以免影响柱内填料的均匀性。
3.避免受污物：在使用相色谱柱之前，需要清洁检查进样口，以保证样品的干净度。
另外，避免塞入颗粒物质。
4.定期清洁：使用过程中的一些尘垢，会附着在柱外表面。
可以用专用清洗剂或者乙醇进行清洗。
不可使用有机溶剂。
5.恰当使用：相色谱柱在使用过程中，需要根据操作手册进行良好的操作，避免流速过快、被串染、被污染等影响柱子使用寿命的问题。
6.正确仓储：在不使用相色谱柱时，应当拆下接头，用压板杆和塞子封闭固定孔、流出口，避免灰尘、水分等杂质污染柱子。
总之，保养相色谱柱的关键是要注意细节、方法科学，以保证柱子完好可用、长寿。
色谱柱使用注意事项及维护和修理保养
色谱柱使用注意事项及维护和修理保养色谱作为一种分别技术与方法，自本世纪初起已经有100多年的历史了，现在已经成为分析化学学科中的一个紧要的分支。
随着科技的进展，生产生活的需要，使得色谱技术也得到进一步的进展。
将来不断有新的联用的技术得到应用。
色谱柱的维护与保养的紧要性概括为9点：1.柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或猛烈震动；2.当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路确定要清洗干净；3.要注意流动相的脱气；4.避开使用高粘度的溶剂作为流动相；5. 进样样品要提纯；6.严格掌控进样量；7.每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8.每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9.若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。
色谱柱的保养色谱柱是装填有固定相用以分别混合组分的柱管。
多为金属或玻璃制作。
有直管形、盘管形、U形管等形状。
色谱作为一种分别技术与方法，自本世纪初起已经有100多年的历史了，现在已经成为分析化学学科中的一个紧要的分支。
在人类进入新时代之际，人们面临着在信息科学、生命科学、材料科学、环境科学等领域的快速进展的挑战，在这些领域人才的需求成为国家高度进展的至关紧要的因素。
色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是依照色谱柱出厂报告中的条件进行，只有这样，测得的结果才有可比性。
我们在对色谱柱使用前进行测试以后，我们要依据不同的情况对色谱柱进行保养：①反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
②长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
色谱柱的使用及如何进行日常维护
色谱柱的使用及如何进行日常维护
色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。
2、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
4、选择使用适宜的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶”饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
色谱柱的维护和使用指南
色谱柱的维护和使用指南色谱柱的维护和使用指南一：概述色谱柱是色谱分析仪器中的核心部件，对于保证分析结果的准确性和稳定性具有重要作用。
本文档旨在提供色谱柱的维护和使用指南，帮助用户正确使用和保养色谱柱。
二：色谱柱的分类1. 按填充物类型分类- 固定相柱：使用固定液态或固态填充物作为柱内固定相，适用于常规分析。
- 液体萃取柱：采用液体萃取法进行分离，适用于提取固体、液体或气体样品中的有机化合物。
- 气相色谱柱：填充物为多孔层状材料，适用于气相色谱分析。
2. 按柱内直径分类- 毛细管柱：内径一般小于0.4mm，用于微量分析和高效分离。
- 常规柱：内径一般为2-4.6mm，适用于一般分析。
三：色谱柱的存储和保养1. 存储条件- 温度控制：色谱柱应存放在恒定的温度环境中，避免温度波动引起填充物收缩或膨胀。
- 防潮保湿：保持储存区域干燥，柱体避免与水接触。
- 避光：柱体应放置在避光的位置，避免阳光直射。
2. 保养方法- 清洗：使用纯净溶剂或特定清洗剂进行柱内液相和固相的清洗，以去除残留物。
- 平衡：在柱使用前，需要将柱内固定相与溶剂平衡，以确保分离效果稳定。
- 封口：当柱不使用时，应使用柱塞或封口器封闭柱口，避免污染和固相脱落。
- 替换：当柱性能达到一定程度的退化，应及时更换色谱柱以保证分析结果的准确性。
四：色谱柱的使用技巧1. 样品制备及进样- 样品制备：要确保样品完全溶解在进样溶剂中，避免产生杂质或析出物。
- 进样量控制：根据分析需求和色谱仪参数要求，控制好每次的进样量。
2. 柱温控制- 温度选择：根据分析目的和样品特性，选择适当的柱温，以获得最佳的分离效果。
- 温度稳定：在柱使用过程中，要保持柱温的稳定性，避免温度波动影响分离效果。
3. 流速和压力控制- 流速选择：根据柱类型和分析要求，选择适当的流速，过高的流速容易导致色谱柱压力过高。
- 压力监控：需要定期监控色谱柱的压力，避免超过柱的最大承受压力。
色谱柱的使用管理方法
色谱柱的使用管理方法色谱柱是色谱技术中的关键组成部分，用于分离混合物中的化合物。
为了确保色谱柱的有效使用和延长其寿命，需要采取一些管理方法。
以下是色谱柱使用管理的一些建议：1.适当的操作和维护：操作人员应该接受专业的培训，了解正确的色谱柱使用方法。
保持色谱系统的良好维护，包括定期检查和清洁。
2.样品预处理：在进样之前，对样品进行适当的预处理，如过滤、稀释或提取，以防止样品中的杂质损害色谱柱。
3.使用适当的溶剂和流动相：选择与分析目标相适应的溶剂和流动相，以减少对色谱柱的影响。
使用纯度高的溶剂，并在必要时进行去离子水处理。
4.避免过高的流速：避免使用过高的流速，以减少色谱柱的磨损和提高分辨率。
请参考制造商的建议，确定适当的流速范围。
5.避免过高的温度：控制色谱柱的温度，避免过高的温度，以防止柱内物质的蒸发和减缓柱寿命。
6.使用保护柱：在进样前使用保护柱，以保护主色谱柱，延长其使用寿命。
保护柱通常易于更换和成本相对较低。
7.正常使用和保管：避免碰撞和振动，确保色谱柱处于垂直位置。
当不使用时，将色谱柱存储在适当的条件下，以防止污染。
8.定期性能评估：定期对色谱柱进行性能评估，例如使用标准物质进行系统透明度和分辨率的测试。
根据性能评估的结果，可以及时调整操作条件或更换色谱柱。
9.记录使用历史：记录每次使用的详细信息，包括溶剂、流速、温度等条件。
这有助于分析柱的使用历史，及时发现问题并采取纠正措施。
10.定期更换：尽管色谱柱的使用寿命取决于多种因素，但定期更换柱是确保分析结果准确性和重复性的关键步骤。
根据制造商的建议和实际使用情况，制定定期更换计划。
通过遵循这些管理方法，可以最大限度地提高色谱柱的使用寿命，确保色谱分析的准确性和可靠性。
气相相色谱柱使用及 维护保养
气相相色谱柱使用及维护保养
气相相色谱柱是一种常用的分析仪器，用于分离和测定复杂混合物中的化合物。
以下是气相相色谱柱的使用和维护保养的一些建议：
1. 使用前准备：
- 检查色谱柱的完整性和连接件的密封性，确保没有破损或
泄漏。
- 确保色谱柱与色谱仪的连接正确并牢固。
- 根据样品的性质和分析目的选择适当的色谱柱类型和尺寸。
2. 柱的调节和条件设置：
- 在使用新柱或长时间未使用的柱之前，进行柱的调节步骤。
柱调节可以提高分离效果并确保分析结果的准确性。
- 根据分析所需的温度、流速、进样量等条件调整色谱仪，
以获得最佳的分辨率和分离效果。
3. 样品进样：
- 样品进样前必要时进行预处理，如样品制备、溶解、过滤等。
- 样品进样应注意避免超量进样或进样带入杂质，以免对柱
产生堵塞或污染。
4. 定期清洗和保养：
- 定期进行柱的清洗和保养，以保证柱的寿命和分离性能。
- 清洗时可以使用合适的溶剂（如甲醇、乙醇等）进行反向
和正向冲洗，以去除残留的样品和杂质。
- 清洗后应彻底干燥柱，避免水分残留。
5. 储存和保管：
- 当柱不使用时，应用适当的保护盖盖上色谱柱，以防止灰尘和杂质的进入。
- 存放时建议选择干燥、避光和温度稳定的环境。
总的来说，正确的使用和定期的维护保养可以延长气相相色谱柱的寿命，并保持良好的分离效果和分析结果的准确性。
如果遇到柱效退化或出现异常，建议及时更换或联系厂家技术人员寻求解决方案。
高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养
高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养高效液相色谱仪色谱柱的正确操作色谱柱是高效液相色谱仪最紧要的部件，被测物质能否被很好的分别和测定，色谱柱的性能起着决议性的作用。
因此，在日常工作中，应特别注意色谱柱的正确使用和维护和修理保养，以延长色谱柱的使用寿命。
1、使用预柱和保护柱预柱（pre—column）安装于泵和进样器之间，它给色谱柱中的流动相供应了完全的平衡，并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。
保护柱（guardcolumn）可以阻拦能够坚固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱，保护柱应与色谱柱的填料相同。
预柱和保护柱可以常常更换，而不需要常常更换色谱柱，这就延长了色谱柱的使用寿命。
2、防止气体进入有些色谱柱（如凝胶柱）是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。
因此，为了防止气泡进入色谱柱，确定要使用经过脱气的流动相，并且要严格依照下列步骤来安装色谱柱。
a、拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝，察看是否有溶剂渗出；b、如有溶剂渗出，即可将色谱柱接到管路上，以避开气泡的进入；c、如无溶剂渗出时，表明色谱柱的此端已经进去空气了，此时，可将色谱柱的出口端接到进样阀上，以流动相来反方向冲洗色谱柱，以便将柱内的空气排出。
建议以0、2ml/min的小流量来冲色谱柱，假如溶剂的流速太快或者是压力蓦地的上升都将会导致柱性能的降低；d、假如流出的溶剂里不含有气泡，说明柱内的气体已经被排出了，再将色谱柱以正确的方向接好，这样气泡就进不到色谱柱里面了。
3、清洗为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应适时地清洗色谱柱。
首先要用对被测样品洗脱本领强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。
色谱柱的维护和使用指南(一)2024
色谱柱的维护和使用指南（一）引言概述：色谱柱是色谱分析领域中至关重要的工具，它的维护和正确使用对于保证分析结果的准确性和重复性至关重要。
本文将从色谱柱的贮存、装配、使用、保养和维修等方面，给出一系列关键的指导方法和技巧。
正文：一、色谱柱的贮存1. 为避免柱内填充物受潮、污染和老化，柱在未使用时应密封保存；2. 长时间不使用时，应将柱内填充物取出，用洗涤液洗净并储存于干燥的环境中；3. 柱外表面应保持干净，防止灰尘和污垢对柱的质量造成影响；4. 避免将柱存放在高温或低温环境中，以免影响填充物的稳定性；5. 定期检查柱的阀门、接头和连接件，确保其正常运作和密封性。
二、色谱柱的装配1. 柱的装配应在洁净无尘的环境中进行，避免异物进入柱内；2. 使用合适的工具装配柱体和连接件，避免过度紧固导致损坏；3. 注意不同类型柱的装配顺序和注意事项，确保正确安装；4. 检查柱连接处的密封性，避免漏气或漏液的情况；5. 建议使用柱头盖保护柱口，防止污染和损坏。
三、色谱柱的使用1. 在使用前用适当的流体进行平衡，以保持柱内压力的稳定；2. 操作前确认柱的运行条件和方法，确保按照要求进行；3. 控制进样量和流速，避免超过柱的容量和承受能力；4. 避免使用不合适的溶剂和试剂，以免对柱和填充物造成损害；5. 及时清洗柱，避免堵塞和交叉污染的问题。
四、色谱柱的保养1. 每次使用后，应彻底清洗柱，避免残留物污染下次分析；2. 定期进行柱的回收和再填充，保证填充物的质量和性能；3. 避免柱暴露在强光、高温或化学腐蚀环境中，以免影响使用寿命；4. 使用前检查柱的状态，确保柱体没有磕碰、损坏和变形；5. 常规检查涂层是否完整，避免涂层剥落影响分析结果。
五、色谱柱的维修1. 出现柱内压力异常、流速不均匀等问题时，应及时检查柱的连接和阀门；2. 检查柱的阀门和连接件是否松动或损坏，进行紧固或更换；3. 遇到柱寿命结束、填充物老化或损坏等情况时，需进行柱的更换；4. 遇到柱头堵塞或堵塞的预警，应进行柱的清洗和维护；5. 建议定期请专业技术人员进行柱的维修和检测。
【色谱柱】气相色谱柱维护及保养 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】气相色谱柱维护及保养色谱柱维护和修理保养在试验过程中常常碰到的情况：新的色谱柱，直接上分析条件来分析样品，发觉分别情况不稳定。
新的色谱柱，使用中发觉压力蓦地上升。
新的色谱柱，发觉分别度、保留时间发生了变化。
色谱柱使用不频繁，一开始分析样品效果比较好，但是，在使用过程中发觉柱效下降快、峰形异常的情况。
色谱峰形异常，基线不稳。
当发生以上情况，请认真检查，是否有某个操作疏忽了？1）测试柱性能通常情况下，我们建议用户在拿到色谱柱后，第一件事情就是在一台性能完好的仪器系统上，依照厂家说明书对色谱柱进行柱效测试。
其实，对于一个合格的色谱分析工来说，拿到一根新色谱柱，要开始一个课题之前，都会这样做，目的有二：一、了解色谱柱之前的情况并判定色谱柱是否正常。
二、将检测结果当心保存，当试验过程中发觉异常时，在检测柱效进行对比，来进一步排查原因。
2）当反相使用高浓度缓冲盐时，注意过渡在使用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂时，确定要注意应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，造成系统堵塞。
另外，在发觉系统压力上升异常时，要认真检查，段段排出包括保护柱、混合器、管路或者流通池等。
色谱柱的维护和保养3）当更换色谱柱时，原来的试验情况发生变化首先，假如之前开发方法时色谱柱已经做过别的样品，那么之前的样品或使用的流动相对这个样品分析可能有干扰，只能重新找条件。
建议：开发方法时使用新的色谱柱。
（其次，假如是更换了品牌发生这样的情况，可能是由于不同品牌的键合技术不同，造成了选择性的细小差异，需要调整条件，并再次确定出峰次序（有些样品的洗脱次序会更改）。
再次，假如是更换了同品牌型号的新的色谱柱发生这种情况，请检查之前分别时目标与杂质的分别度是否符合要求（Rs大于1.5），假如一开始只是尽力分开（Rs小于1.5），那只能说明方法没有优化好，需要再次进行优化。
色谱柱的维护和保养4）样品及前处理样品要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
色谱柱的安装,设置,老化和维护
色谱柱的安装,设置,老化和维护液相色谱柱的使用方法：1、色谱柱的使用说明：（1）、色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）、流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）、样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）、反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）、长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
色谱柱的维护和使用指南
ACQUITY UPLC TM BEH色谱柱的维护和使用指南感谢您选择Waters公司的ACQUITY UPLC TM BEH色谱柱，它是专门为了配合Waters的ACQUITY UPLC色谱系统设计的。
它采用超纯试剂在满足GMP要求并获得ISO9001认证的条件下生产。
ACQUITY UPLC TM BEH的每批填料都会用酸性、碱性和中性化合物的色谱分离进行检验，并且填料的指标控制非常严苛，以保证色谱柱卓越的重现性。
每一根ACQUITY UPLC TM BEH色谱柱都是单独检测，色谱柱的性能图谱和填料的批次检验证书一起存储在eCord TM芯片上。
请注意：我们不建议将ACQUITY UPLC TM BEH色谱柱用于普通的HPLC仪器。
内容：第一节开始A/ 色谱柱的连接B/ 色谱柱安装C/ 色谱柱平衡D/ eCord TM安装E/ 新色谱柱柱效测试第二节色谱柱的使用A/ 样品的准备B/ pH范围C/ 溶剂D/ 压力E/ 温度第三节 色谱柱的清洗、再生和保存A/ 清洗和再生B/ 保存第四节 eCord TM智能芯片技术介绍A/ 简介B/ 安装C/ 生产信息D/ 色谱柱使用信息其它补充信息A/ 延长ACQUITY UPLC TM BEH色谱柱使用寿命的小秘诀B/ ACQUITY UPLC BEH色谱柱的建议流速和压力C/ 开始使用ACQUITY UPLC TM BEH HILIC色谱柱第一节开始每一根ACQUITY UPLC TM BEH色谱柱的eCord TM智能芯片上都有针对填料的分析报告和针对色谱柱的性能报告：分析报告是针对填料的批次测试报告，其中包括填料的批号、非键合颗粒以及键合颗粒的分析、测试图谱和测试的色谱条件；性能测试报告是针对每根色谱柱的测试报告，包括以下信息：填料批号、色谱柱序列号、塔板数、拖尾因子、容量因子以及测试的色谱条件。
用户应该储存这些信息用于将来的参考。
A. 色谱柱的连接ACQUITY UPLC TM系统是使用经过专门设计的可耐受高压并且有最小柱外体积的管路和接头，最优化的色谱柱进口管路（订货号430001084）是随仪器配置的，进样阀末端的管路清晰地用蓝色收缩性标记标示出来，将这根管路的另一端插入UPLC色谱柱的入口端并用5/16英寸的扳手拧紧。
色谱柱的维护和使用规范
色谱柱的维护和使用规范
色谱柱的维护
1、使用保护柱
2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用
3、避免流动相组成及极性有剧烈变化
4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净
6、压力升高时更换保护柱
HPLC色谱柱的良好使用规范
1.每次使用前,用0.45um/0.22um的膜过滤流动相
2.运输中或长期保存过程中变干的色谱柱需要用甲醇/乙腈完全润湿
3.样品分离时一定要考虑溶剂对样品的溶解性及分离的影响
4.对样品要依据性质进行预处理
5.处理好PH,温度,等因素对柱子的影响
6.尽可能的使用现配的流动相,注意防止流动相长菌等不良现象发生
7.定期的用合适溶剂,合适程序对柱子进行再生
8.储存色谱柱时，应将缓冲盐置换干净，并用高比例的有机溶剂饱和色谱柱（乙腈/甲醇）
9、避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或强力震动。
常用液相色谱柱使用与维护保养
常用液相色谱柱使用与维护保养液相色谱柱是一种重要的分析仪器，在化学、药物研发、环境科学等领域广泛应用。
正确的使用和维护保养可以延长色谱柱的寿命，提高色谱分离的效果。
一、使用液相色谱柱的注意事项1.选择合适的柱使用液相色谱柱前，需要根据分析目标和样品性质选择适合的柱型和填料。
常用的柱型有反相柱、离子交换柱、正相柱等。
不同的柱具有不同的分离机理和性能，选择合适的柱可以提高分离效果。
2.准备好适当的溶剂系统液相色谱的溶剂系统通常由溶剂A和溶剂B构成。
在使用液相色谱柱之前，需要准备好适当的溶剂系统，并将溶剂通过泵送到色谱柱中。
溶剂的选择应根据柱和样品性质来确定，通常要尽量避免对柱产生腐蚀或损害的溶剂。
3.校准柱的流速在使用液相色谱柱之前，需要对柱进行流速校准。
根据柱的规格和品牌，确定适当的流速范围。
过高或过低的流速都会影响分离效果和柱的寿命。
通常，可以通过控制泵的流速和封堵时间来调整柱的流速。
4.准备样品在使用液相色谱柱进行分析之前，需要准备好样品。
样品可以是纯净物质，也可以是复杂的混合物。
样品的准备和预处理会影响分离效果和柱的寿命。
合适的样品准备方法包括稀释、过滤、目标成分的预处理等。
5.正确设置色谱仪的条件在使用液相色谱柱之前，需要根据柱的特性和样品的性质，正确设置色谱仪的条件。
包括流速、柱温、检测器、梯度和等时并行等。
设置合适的条件可以提高柱的寿命和分离效果。
二、液相色谱柱维护保养1.定期保养色谱柱为了保证液相色谱柱的寿命和分离效果，需要定期进行柱的保养。
在每次使用完柱后，需要冲洗柱，将样品和残留物彻底清除。
冲洗柱时可以使用适当的溶剂或清洗液，根据需要选择正向或反向洗涤。
一般推荐用高纯度的有机溶剂冲洗柱。
2.避免柱的过载和超压过载和超压是液相色谱柱常见的问题。
过高的样品浓度或过高的流速都可能导致浓度过载，产生色谱峰畸变或柱堵塞。
超压则会导致柱的损坏或泄漏。
需要根据柱的规格和样品的性质，控制样品浓度和流速，避免过载和超压。
色谱柱的使用注意事项及维护
色谱柱的使用注意事项及维护色谱柱是色谱分析中最重要的部分之一、它起着分离和保留样品成分的作用，对于保证色谱分离效果和分析结果具有决定性的影响。
因此，在使用色谱柱时，需要注意以下几个方面的问题：选择合适的柱、正确操作和维护柱。
选择合适的柱选择合适的柱是保证色谱分离效果和分析结果准确的首要步骤。
需要根据分析目的、样品特性和分离要求等因素，选择合适类型和规格的柱。
1.根据分析目的选择柱类型：常见的色谱柱包括气相色谱柱、液相色谱柱和离子色谱柱等。
根据需要进行样品分析的特性，选择合适类型的柱，如分离挥发性物质可选择气相色谱柱，分离非挥发性物质可选择液相色谱柱。
2.根据样品特性选择柱材质：色谱柱的柱材质会对分离效果产生影响，如亲水性样品可选择C18柱，疏水性样品可选择SiO2柱等。
3.根据分离要求选择柱规格：柱的长度、内径和填料颗粒大小等参数会对分离效果产生影响，一般情况下，柱越长、内径越小和填料颗粒越细，分离效果越好，但分析时间会相应延长。
正确操作柱正确操作色谱柱是保证色谱分析结果准确的重要保障。
以下是一些常见的操作注意事项：1.小心安装柱：柱的安装需要小心，避免损坏柱螺母和柱连接口。
同时，注意柱的方向，确保样品进入和流出的方向正确。
2.注意样品预处理：在进样前，需要对样品进行适当的预处理，如样品的提取、浓缩、稀释等。
避免进入样品中的杂质和残留物影响分离效果。
3.合适的流速：根据柱的规格和样品特性，选择适当的流速和进样量。
流速过高会导致分析结果不准确，流速过低则分析时间过长。
4.清洗柱：使用前后需要对柱进行适当的清洗。
首次使用柱时，需要进行季戊四醇样品的预柱包，以去除树脂中残留的离子。
使用结束后，需要用适当溶剂或移液器进行冲洗，清除样品和杂质。
维护柱良好的柱维护是保证色谱柱使用寿命和分析效果的关键。
以下是一些常见的柱维护注意事项：1.避免样品残留：在每次使用完毕后，需要充分清洗柱，避免样品残留导致柱堵塞和污染。
色谱柱使用及维护
色谱柱使用及维护色谱柱是色谱分析中非常重要的部分，它用于分离和纯化样品中的化合物。
正确的使用和维护色谱柱可以延长其寿命，提高分离效果和分析结果的准确性。
本文将详细介绍色谱柱的使用和维护方法。
色谱柱的使用方法：1.准备工作：在使用色谱柱之前，需要先进行准备工作。
首先，检查柱的状态，确保没有损坏或污染。
然后，根据分析的需要，选择合适的色谱柱和填料。
2.连接色谱柱：将色谱柱与色谱系统连接起来。
通常，色谱柱的两端都有接头，可以使用连接器将其与色谱系统连接起来。
确保连接紧密，避免泄漏。
3.样品预处理：在进样之前，需要对样品进行预处理。
这包括样品的制备和提取，以及可能的前处理步骤，如样品的净化和浓缩。
4.进样：将预处理好的样品通过进样口注入到色谱柱中。
确保进样量适当，避免柱内压力过高或过低。
5.运行分离：启动色谱系统，开始运行分离。
根据实验要求和柱的性能，选择合适的流速和梯度条件。
监控色谱图谱，记录分离的结果。
6.分析结果：根据分离的结果，进行数据分析和解释。
根据需要，可以进行进一步的纯化和结构表征。
色谱柱的维护方法：1.储存条件：在使用完色谱柱后，应将其储存在适当的条件下。
通常，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和高温。
柱子应储存在立式位置，以避免填料颗粒的沉积和失效。
2.清洗柱子：在使用一段时间后，色谱柱可能会出现柱效降低的情况。
这时，可以尝试进行柱子的清洗。
清洗柱子的方法包括反向冲洗、前冲洗和碱洗等。
选择合适的清洗方法，根据填料的耐受性和污染类型进行清洗。
3.柱效测试：定期对色谱柱进行柱效测试，以评估柱子的性能。
柱效测试可以通过运行标准样品或参考物质来进行。
根据测试结果，可以判断柱子是否需要更换或维修。
4.替换柱端接头：色谱柱的端接头是容易磨损和泄漏的地方。
定期检查柱端接头，如果发现磨损或泄漏现象，及时更换新的接头。
5.避免过高压力：在使用色谱柱时，要注意避免过高的压力。
过高的压力会损坏填料和柱子，降低柱效。
常用液相色谱柱使用与维护保养
常用液相色谱柱使用与维护保养液相色谱柱是分离和分析中常用的仪器配件之一，它的使用和维护保养对于实验结果的准确性和可靠性有着至关重要的作用。
本文将介绍常用液相色谱柱的使用和维护保养方法。
一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用前，需要对液相色谱柱进行准备工作。
首先，检查柱的外观是否完好无损，如果发现任何损坏或污染，应立即更换。
其次，检查柱装置是否牢固，连接是否紧密。
最后，将固定相和移动相装入柱中，确保固定相充分均匀地填充在柱内。
2.柱的条件调节：根据实验需要，调节液相色谱柱的柱温、流速和柱压等参数。
在调节柱温时，应注意避免温度过高或过低对柱的损害。
调节流速时，应根据样品性质和分离效果选择合适的流速。
控制柱压时，要确保柱内压力稳定在可接受范围内，避免超过柱的承压能力。
3.样品进样：将待测样品注入进样口或进样器中，注意避免空气进入柱，避免对柱的污染。
可以选择外部进样或直接进样的方法，具体方法根据实验要求和样品性质进行选择。
4.运行柱：在启动液相色谱仪前，先将柱进行预冲洗。
预洗液可以选择与移动相相同的溶剂。
启动液相色谱仪后，根据实验要求设定好运行条件，开始进行实验。
在实验过程中，要及时观察色谱图的变化，根据实验需要调节柱温、流速等参数。
5.柱的保存：在柱使用完毕后，将固定相充分冲洗干净，保证柱内固定相的干燥和保存。
然后，将柱装入保护柱架中，避免碰撞和损坏。
柱的保管环境要保持清洁、干燥、避光和稳定的温度。
二、液相色谱柱的维护保养方法1.柱的清洗：在使用液相色谱柱之前，需要先清洗柱以去除可能存在的污染物。
清洗方法包括预洗和后洗。
预洗可以选择与移动相相同的溶剂，将溶剂通过柱时，将固定相表面的杂质冲洗掉。
后洗可以选择与前一个样品不同的溶剂，将固定相和样品残留物进行清洗。
2.避免柱的干燥：柱在使用过程中，应尽量避免柱的干燥，因为柱的干燥会对固定相造成损害。
在柱停用时，应及时用溶剂进行冲洗并封存起来，以保持柱内的湿润状态。
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正相、反相和极性胶联柱使用手册更多资料请访问：Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
1 简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2 色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
C．对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。
如果这些溶剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。
3 洗脱液注意第节和第2节。
一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液，这是由于它们会改变固定相的性质。
极性键合柱最好使用在3到5 之间。
在使用以前，洗脱液要进行脱气，以及使用0.5微米的滤膜过滤，以免发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长，否则你的柱子会堵塞，柱压会升高到无法接受的水平。
4 流量和压力增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子，，要降低流量至0，等待洗脱液完全流出柱子为止（2分钟）。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱（见第6节）会防止污染物沉积在分析柱上。
5 样品准备保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱，不管是来自流动相还是样品。
特别地，要禁止导入颗粒杂质。
这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
6 保护柱一定要使用保护柱，因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。
对于ChromSep 柱我们建议使用正确型号的ChromSep 保护柱。
这个柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。
当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。
对于常用不锈钢柱，我们建议使用相同型号的Chromguard High Efficiency（高效）柱(10X3.0mm) 或High Capacity（高容量）柱(50X3.0mm)。
7 进样量和浓度柱子的最大载样量取决于：柱子的型号，使用的条件和样品的类型。
很难给出一个一般的指示。
对于进样体积的建议则比较容易（见表中的典型值）。
注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合。
8 温度HPLC柱最好在柱温箱中使用。
重复性取决于温度控制。
最佳的温度与特定的应用有关。
温度影响洗脱液流动的线速度。
在使用ChromSep玻璃柱的时候，一定要调节流速使压力保持在3000psi以下。
9 贮存一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。
贮存溶剂应当含有至少20%的有机溶剂，以防止有细菌的生长。
10 柱效损失的可能原因--额外的峰展宽。
当使用小直径或者长度较短的柱子时，峰展宽的情况可能比较明显。
要保证管路的长度和内径都保持最小。
检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。
洗脱的平衡时间不够。
不正确柱温。
不正确的修正浓度。
床压缩。
使用了过大的洗脱流速。
将柱子反向，使用低流速。
--柱效丧失和/或高背压颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上（它们都会使背压增高）。
如果柱压增高了，将柱子与进样器断开，运行泵，以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染（样品、洗脱液和系统）。
倒转柱子，以反向的流动来冲洗柱子。
如果这样不能解决问题，更换进口过滤器或者筛板。
微生物在洗脱液中生长。
倒转柱子，尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子。
更换进口过滤器或者筛板。
有蛋白质脂肪，油脂污染或者极性化合物等污染。
再生柱子（见第12节）。
11 再生首先倒转柱子。
以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。
柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗脱液可以混溶。
首先倒转柱子。
以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥的异辛烷（或己烷）进行。
柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
取决于使用的条件，可以使用反相的条件，也可以使用硅胶柱的条件。
注意：绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱，因为可能与固定相发生反应。
四氢呋喃作为替代可以使用。
反相HPLC柱子的清洁和再生反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最广泛的技术，主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。
大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的。
固定相上还有少数物质，如混合相（例如苯基－己基）、末端封闭、非末端封闭种类和极性嵌入相－也存在于这些键合硅胶上。
还有很多填料用于反相色谱，包括聚合物，聚合物表面涂上硅胶和氧化铝，无机－有机混合物，涂层氧化锆，和石墨化碳。
不同种类的固定相有他们自己的优点和缺点。
反相色谱柱利用各种流动相和添加物可以有很多的应用。
一些技术利用添加物可以改变或修饰填料的表面。
有时候这些添加物有可能会污染键合相表面。
硅胶表面因为有着疏水键合相而有一些别的化学性质。
残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中。
这些硅烷醇具有弱酸性，因此能与某些待分析物结合，特别是碱性成分。
因为硅烷醇的pKa值大约是4.5，离子化能在中性pH条件下发生因此与阳离子产生静电相互作用就有可能发生。
较老的A型硅胶能容纳高浓度金属离子（有时候100ppm或更多），而这能使硅胶表面的酸性更大甚至能发生金属鳌合现象或清除一些化合物。
残留硅烷醇在非末端封闭的硅胶和短链键合相如C2或C4上更让人烦恼。
使用者必须清楚他们所用的固定相表面特殊性质和可能的分析物－固定相表面的相互作用，这样当他们使用反相方法时才能考虑到可能的基质相互作用。
例如，非常疏水的样品基质如玉米油，高芳香物质，和蜡能粘住固定相装填表面并且改变他们的性质。
含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在装填表面。
尽管分析者想尽最大努力来保护HPLC柱子，某些分析物－基质污染能使固定相受到有害的影响。
当柱子被污染，它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同。
被污染的柱子能产生反压问题。
被污染的反相柱子必须清洗和再生才能恢复原来的操作条件。
这部分的"柱子观察"将讨论可行的方法使柱子回复原来的或差不多原来的状态。
因为键合硅胶柱子是最受欢迎的，我重点讲述这种柱子。
最后，我将讨论别的反相柱子的清洁步骤。
什么导致反相柱子污染产生？通常，样品中含有一些对分析者来说不感兴趣的东西。
盐、脂质、含脂物质、腐质酸、疏水蛋白质和其它一些生物物质是一些可能在使用时与HPLC柱发生相互作用的物质。
这些物质有比分析者的目标物或少或大的保留值。
那些保留值较小的物质如盐类一般来说在空体积时就被冲出色谱柱。
这些非目标产物的干扰能被检测器检测到而且能形成色谱峰，气泡，基线上移或者是负峰。
如果样品成分在柱子中有很强的保留而且流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来，多次上样后，这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头。
这些行为通常只有通过平行实验才能发现。
有着中等保留值的样品能被缓慢洗出而且表现为宽峰，基线扰动，或者基线漂移。
有时候这些被吸附的样品成分累积到一定程度足以使他们开始形成新的固定相。
分析物能与这些杂质作用形成一定的分离机理。
保留时间会波动，拖尾会出现。
如果足够的污染产生，柱子的反压能超过泵所能承受的最大压力，使柱子无法工作以及在堵塞处产生空体积。
清洗硅胶键合柱子再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。
如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的步骤来除去这些污染物往往能恢复其色谱行为。
有时候，经过多次操作以后的色谱柱用90～100％的溶剂B（双溶剂反相系统中较强的溶剂）冲洗20个体积可以清除污染物。
（表2列举了不同规格的HPLC柱子的空体积，因此读者能方便地确定相应柱子冲洗的体积。
）例如，柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢呋喃。
如果你使用的是缓冲液系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。
应该先用无缓冲流动相（即把缓冲液换成水）。
冲洗5～10个体积以后才更换强溶剂。
有时候，强溶剂也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。
那么更强的溶剂或者是一系列溶剂就有必要用来清洗柱子了，如果污染物是非生物物质，使用者可以跳过一个或多个另外的有机溶剂去除污染物。
溶剂与溶剂之间的组合有很多。
到柱子厂家的网页上能找到推荐的溶剂系统。
一般来说，所有的清洗方法都有类似的形式。
所用的溶剂都是随溶剂强度增加，经常最后一个溶剂是非常疏水的（如醋酸乙酯甚至是烃），可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。
我们必须保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互混。
清洗过程要结束时，必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。
例如，异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂，因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。
但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。