(完整版)色谱柱的使用及维护
色谱柱的使用和维护
色谱柱的使用和维护色谱柱是一种用于分离混合物的重要工具，广泛应用于化学分析、环境检测、药物研发等领域。
为了保证色谱柱的正常使用和延长其寿命，以下将介绍色谱柱的使用和维护方法。
一、色谱柱的使用1.色谱柱的激活新购买的色谱柱通常需要进行激活处理，以去除柱内杂质和保证柱的稳定性。
常见的激活方法包括使用最终使用的溶剂/流动相进行洗脱或者使用强极性溶液进行反向激活。
激活后，需用洗脱溶剂或流动相进行平衡。
2.样品的前处理样品的前处理对色谱柱的使用和维护至关重要。
首先，要确保样品的纯度和浓度，以避免对色谱柱产生污染。
其次，对于有机溶剂溶解的样品，最好使用过滤器进行过滤，以防止固体颗粒和杂质进入色谱柱。
3.流动相的选择正确选择和配置流动相对于色谱柱的使用非常重要。
根据需要分离的组分特性，选择合适的流动相性质和组成，并根据需要进行酸碱调节、添加缓冲剂等。
此外，注意保持流动相的流速稳定，并定期更换或再生。
4.检测器的设置根据需要检测的组分，选择合适的检测器并进行适当的设置。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-Vis）、荧光检测器、质谱仪等。
在使用检测器前，要确保其正常工作并进行校准。
5.流量控制使用色谱仪时，应保持流量的稳定性。
定期检查和校准流量控制器，并调整至适当的设置，以确保色谱柱正常运行。
6.色谱条件的优化根据分析需要，在保证分离效果的前提下，进行色谱条件的优化。
包括优化流速、温度、柱渗透性、梯度洗脱程序等，以提高分离效果和保护色谱柱。
二、色谱柱的维护1.洗脱和平衡每次使用完色谱柱后，应进行洗脱以去除残留的样品和杂质，并用适当的溶剂进行平衡。
洗脱和平衡步骤的操作要轻柔，避免使用高压流动相进行冲洗。
对于一些特殊样品，如蛋白质和多肽，可以使用具有较强亲和性的溶剂进行洗脱和平衡。
2.色谱柱的储存条件当色谱柱暂时不使用或需要长期储存时，应注意以下几点：首先，将色谱柱从设备上拆卸下来，用纯净溶剂充分洗脱并平衡，保证柱内干净；其次，封闭柱两端，避免进入灰尘和空气，可以使用柱塞或盖子进行封闭；最后，将柱放置在干燥、阴凉的地方存放，避免受到阳光直射和高温。
【色谱柱】色谱柱的维护方法 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱的维护方法色谱柱维护和修理保养色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最紧要的是与日常的维护紧密相关。
色谱柱的使用寿命紧要是柱效和柱压两个指标来衡量，假如一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。
因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，除去引起柱效下降和柱压上升的因素。
以下是色谱柱的维护方法：一、流动相的PH应在使用的范围内流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。
由于流动相的PH掌控不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必需认真对待，严格掌控流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的上升，而且也会引起柱效下降，由于筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。
因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0、45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全除去固体颗粒物质，由于泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压上升、柱效下降。
保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻拦固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。
由于柱压上升在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
假如色谱柱柱压上升是由于进样端筛板被堵引起的，可选择以下方式进行补救：1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min、2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。
四、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻拦了基质上键合的碳链自由伸展，使色谱柱的保留本领下降，柱效降低。
【色谱柱】色谱柱使用维护 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱使用维护色谱柱维护和修理保养1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水可以是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为 2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，全部的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存：（1）反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
3、色谱柱的再生：由于色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的加添，会显现色谱峰高降低，峰宽加大或显现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
色谱柱的正确使用以及维护
色谱柱的使用以及维护-中亚试剂网好的使用习惯是维护色谱柱的前提。
中亚试剂工作人员在日常的工作中整理了以下使用和维护方法：一：色谱柱的正确的安装1.从色谱柱架上松开柱两端，以便与进样口和检测器相连接。
2.将色谱柱安装在柱箱中，然后挂在挂架上。
3.使用完好的密封垫和柱螺帽和4.在色谱柱两端安装柱螺帽和密封垫。
5. 不要直接用手弯折色谱柱，用专用的切割器从色谱柱两端截去3~5cm，。
6.保证切割断面整洁，用放大镜仔细检查切割处。
7.在进样口处安装色谱柱。
核对GC厂家的仪器说明保证正确的插入距离，色谱柱端接触金属壁不要超过3次，否则会损坏色谱柱末端从而导致影响样品的进入。
8.为避免改变色谱柱的插入长度，拧紧柱螺帽的同时要固定色谱柱末端，然后用扳手再拧紧1/4到1/2圈，螺帽不要拧的太紧以免挤碎色谱柱。
用手轻微的拉动色谱柱以检查色谱柱是否被固定，拉不动，则表明螺帽固定好。
确保色谱柱端插入的长度在GC厂商建议的范围内。
9.连接色谱柱另一端到检测器，核查仪器厂家的手册，确保色谱柱插入正确的深度。
（备注：上述内容是中亚试剂工作人员在实践中的操作，适用于各类型通用色谱柱10.将色谱柱挂到柱温箱的挂架上，色谱柱的两端不要松开太多，否则热循环时色谱柱易折断，多余的色谱柱缠到柱架上。
11.使用泄漏检测器，必须用的时候可以使用。
二、中亚试剂的技术人员同时建议正确的储存也是必要的维护■放置在GC柱温箱中使柱温箱保持在一定的温度下，如：100~150℃，并保证有载气通过，否则将会损坏柱子的加热部分。
■放置在GC柱温箱外用隔垫密封色谱柱的两端并放置在色谱柱盒中，避免水蒸气和化学气体污染。
一旦要重新安装色谱柱,则需要从柱头截去2-4cm以确保隔垫碎屑不会堵塞柱子。
三、柱污染的预防及恢复中亚试剂技术人员指出柱污染是毛细柱GC 常见的问题,被污染的柱子通常没有被损坏,但已经失效.一般存在两类污染:非挥发性污染和半挥发性污染。
(1)非挥发性污染物不能流出色谱柱,而是积聚在柱子里,容易涂敷在固定相上;而且有可能与样品中的活性物质相互作用,产生峰吸附问题。
色谱柱的使用和维护方法及操作规程
色谱柱的使用和维护方法及操作规程色谱是一种分别分析手段，分别是核心，因此担负分别作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
当然，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
1、避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
2、应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然，流动相使用前必需经脱气和过滤处理。
3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
4、选择使用适合的流动相（尤其是pH），以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解，压力上升是需要更换预柱的信号。
5、避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
6、常常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50～75ml。
7、避开使用高粘度的溶剂作为流动相；假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在试验完毕柱子冲洗干净。
8、进样样品要提纯。
9、严格掌控进样量，不要超载。
10、每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱，好用洗脱本领强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。
当接受盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。
(完整版)色谱柱使用维护保养操作规程
目的：建立色谱柱使用维护保养操作规程，规范色谱柱的使用、维护行为。
范围：适用于色谱柱的使用、维护和保养。
依据：责任：药分部内容:1.操作规程一般要求是一根柱子用于同一个系列的产品，稳定性试验用专用柱。
1.1.新色谱柱在使用之前，首先应查看说明书，检查柱子的pH值范围是否与待验产品的要求相一致，确认柱子和仪器的接头以及管路是否相匹配，并注意柱子上标示的流向箭头，一切确认无误后，编上编号，在《色谱柱启用、报废台帐》上登记开始使用时间、生产厂家、型号规格等。
1.2.使用时，应按各色谱柱的要求进行色谱柱的维护保养，并在色谱柱使用登记表中登记使用日期、所测产品的名称及批次、使用前后维护保养的具体内容；1.3使用后，及时填写《色谱柱使用台帐》。
2.维护规程2.1.液相色谱柱的维护2.1.1. 色谱柱使用时，确认柱子的编号、型号规格与待验产品的要求相一致，流动相的pH值应与柱子说明书上规定的pH值相适应，然后旋开两端的封头，接到高效液相色谱仪上，使色谱柱的箭头指向与流动相流向一致。
2.1.2.流动相应经过0.45um滤膜过滤并脱气后使用，柱压不要超过300bar（3000psig），最高操作温度不得超过60℃。
2.1.3.流动相如果是非盐类的，用流动相冲洗约30min，按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作，然后进行样品的检验。
如果是盐类的，用有机相：水=10：90的溶液冲洗约10min，再换上相对应的流动相，按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作，然后进行样品的检验。
2.1.4.检验完毕，如流动相中含有盐类物质，应先用有机相：水=10：90的溶液以1ml/min的流速冲洗约40min，然后用HPLC级的乙腈或甲醇以1ml/min的流速冲洗约30min，关闭液相色谱仪，取下色谱柱，在柱两端旋上封头，以防止柱内的有机溶剂流失而使柱内填料发干变松，柱效下降。
不用的色谱柱放入液相色谱分析室的专用贮存柜中。
2.1.5.拿用时要轻拿轻放，避免剧烈震动。
色谱柱的维护和使用指南
色谱柱的维护和使用指南色谱柱的维护和使用指南一：概述色谱柱是色谱分析仪器中的核心部件，对于保证分析结果的准确性和稳定性具有重要作用。
本文档旨在提供色谱柱的维护和使用指南，帮助用户正确使用和保养色谱柱。
二：色谱柱的分类1. 按填充物类型分类- 固定相柱：使用固定液态或固态填充物作为柱内固定相，适用于常规分析。
- 液体萃取柱：采用液体萃取法进行分离，适用于提取固体、液体或气体样品中的有机化合物。
- 气相色谱柱：填充物为多孔层状材料，适用于气相色谱分析。
2. 按柱内直径分类- 毛细管柱：内径一般小于0.4mm，用于微量分析和高效分离。
- 常规柱：内径一般为2-4.6mm，适用于一般分析。
三：色谱柱的存储和保养1. 存储条件- 温度控制：色谱柱应存放在恒定的温度环境中，避免温度波动引起填充物收缩或膨胀。
- 防潮保湿：保持储存区域干燥，柱体避免与水接触。
- 避光：柱体应放置在避光的位置，避免阳光直射。
2. 保养方法- 清洗：使用纯净溶剂或特定清洗剂进行柱内液相和固相的清洗，以去除残留物。
- 平衡：在柱使用前，需要将柱内固定相与溶剂平衡，以确保分离效果稳定。
- 封口：当柱不使用时，应使用柱塞或封口器封闭柱口，避免污染和固相脱落。
- 替换：当柱性能达到一定程度的退化，应及时更换色谱柱以保证分析结果的准确性。
四：色谱柱的使用技巧1. 样品制备及进样- 样品制备：要确保样品完全溶解在进样溶剂中，避免产生杂质或析出物。
- 进样量控制：根据分析需求和色谱仪参数要求，控制好每次的进样量。
2. 柱温控制- 温度选择：根据分析目的和样品特性，选择适当的柱温，以获得最佳的分离效果。
- 温度稳定：在柱使用过程中，要保持柱温的稳定性，避免温度波动影响分离效果。
3. 流速和压力控制- 流速选择：根据柱类型和分析要求，选择适当的流速，过高的流速容易导致色谱柱压力过高。
- 压力监控：需要定期监控色谱柱的压力，避免超过柱的最大承受压力。
色谱柱使用及维护
色谱小知识
常用的缓冲盐溶液有哪些？ 色谱柱参数ID=4.6um, ø =3,5um的意义？ 为什么色谱柱再生时都选用异丙醇？
一般来说，5um与3um的微粒分别用2um与0.5um孔 径的不锈钢滤片
发生不良反应的可能比色谱柱内壁大得多
峰型不好与样品回收率低可能预示滤片出现问题
压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱 帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定 筛板
密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四 氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封
解决方案： 降低进样量 加入扫尾剂（酸---1%乙酸；碱----10mmol/ml三乙胺，
三乙胺无效，可改为EDTA） 尽量采用色谱级试剂 增加缓冲盐的浓度
产生次保留效应的因素--离子交换效应
离子交换效应：质子化的碱性分子与离子化的硅羟 基发生离子交换产生次级保留效应
产生次保留效应的因素—痕量金属离子
金属离子所产生的强吸附位比硅羟基强50倍！！ 更易引起碱性物质的拖尾Βιβλιοθήκη 严重拖尾-----强保留组分
严重拖尾峰的出现往往是强保 留污染物在柱头进口处聚集的 信号！！！
峰分叉
可能原因： 柱填料坍塌 柱过载 色谱柱中存在“空穴”（使用中避免撞击）
解决方案： 更换色谱柱 降低进样量
柱填料：色谱柱担体，常用的填料为硅胶、多孔聚 合物、氧化铝等
硅胶填料的特性
优点
优良的物理特性 可控的成熟工艺 理想的表面活性 优良的溶剂兼容性（不存在不溶胀）
缺点
在高pH条件下，硅胶溶解
良好的色谱柱使用习惯
使用前的准备工作
阅读使用说明书（特别注意使用事项、pH范围、保 存条件）→按要求活化色谱柱→测定柱效，记录色 谱柱参数信息→流动相平衡色谱柱进样
(完整版)色谱柱的使用及维护
前言液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以固定相中流出而得到分离。
因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。
柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。
但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。
色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。
引起这些问题的内在原因有:(1) 硅羟基的死吸附。
色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。
任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。
被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。
当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。
(2) 重金属。
色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。
例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。
(3) 碳流失。
固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。
(4) 缓冲液中盐的析出。
在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。
分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
(5) 色谱柱变干。
如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。
2 色谱柱的使用新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。
色谱柱的正确使用与维护
很多情况下,高效液相色谱系统 出现故障的根本原因在于色谱柱 出现故障的根本原因在于色谱柱 出现不正常的现象,而与仪器本 身无关!
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打开新色谱柱的包装
打开包装,首先用"运输试剂"冲洗色谱柱1~2 打开包装,首先用"运输试剂"冲洗色谱柱1~2
色谱柱堵塞的原因(1 色谱柱堵塞的原因(1)
溶剂中的不溶物
应使用色谱纯溶剂,膜过滤(孔径不超过0.45m)
样品中的不溶物
应对样品进行膜过滤(孔径不超过0.45m)
泵,进样器等中的不溶物
在泵和进样器之间,进样器和柱子之间安装在线过滤器
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色谱柱堵塞的原因(2 色谱柱堵塞的原因(2)
由于溶剂的不互溶而产生的柱内不溶物沉淀
用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱
在不互溶溶剂中由于进样而产生的柱内不溶物沉淀
检查样品溶液和流动相是否互溶
由于温度的改变或固定相的干涸而产生的柱内不溶物沉淀
将色谱柱密封紧,并保持室温恒定
由于固定相对某些样品的强烈吸附而在柱头形成沉淀
使用相近填料的预柱(保护柱),并定期更换
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色谱柱堵塞的修复(2 色谱柱堵塞的修复(2)
若经过步骤1 和步骤2 后,压力仍没下降,进行步骤3
步骤3:断开检测器,将色谱柱反方向放置,
然后检查柱压
(1) 若压力稳定下降,进行步骤4 (2) 若压力不下降,进行步骤5
步骤4:保持色谱柱反方向连接,用低于0.5
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气相相色谱柱使用及 维护保养
气相相色谱柱使用及维护保养
气相相色谱柱是一种常用的分析仪器，用于分离和测定复杂混合物中的化合物。
以下是气相相色谱柱的使用和维护保养的一些建议：
1. 使用前准备：
- 检查色谱柱的完整性和连接件的密封性，确保没有破损或
泄漏。
- 确保色谱柱与色谱仪的连接正确并牢固。
- 根据样品的性质和分析目的选择适当的色谱柱类型和尺寸。
2. 柱的调节和条件设置：
- 在使用新柱或长时间未使用的柱之前，进行柱的调节步骤。
柱调节可以提高分离效果并确保分析结果的准确性。
- 根据分析所需的温度、流速、进样量等条件调整色谱仪，
以获得最佳的分辨率和分离效果。
3. 样品进样：
- 样品进样前必要时进行预处理，如样品制备、溶解、过滤等。
- 样品进样应注意避免超量进样或进样带入杂质，以免对柱
产生堵塞或污染。
4. 定期清洗和保养：
- 定期进行柱的清洗和保养，以保证柱的寿命和分离性能。
- 清洗时可以使用合适的溶剂（如甲醇、乙醇等）进行反向
和正向冲洗，以去除残留的样品和杂质。
- 清洗后应彻底干燥柱，避免水分残留。
5. 储存和保管：
- 当柱不使用时，应用适当的保护盖盖上色谱柱，以防止灰尘和杂质的进入。
- 存放时建议选择干燥、避光和温度稳定的环境。
总的来说，正确的使用和定期的维护保养可以延长气相相色谱柱的寿命，并保持良好的分离效果和分析结果的准确性。
如果遇到柱效退化或出现异常，建议及时更换或联系厂家技术人员寻求解决方案。
色谱柱的维护和使用规范 色谱柱解决方案
色谱柱的维护和使用规范色谱柱解决方案色谱柱的维护 1、使用保护柱 2、大多数柱的PH稳定范围是2—7.5，尽可能在此范围内使用 3、避开流动相构成及极性有猛烈变化 4、流动相使用前必需经脱气和过滤处理 5、假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在试验完毕将柱子冲洗干净 6、压力上升时更换保护柱HPLC色谱柱的良好使用规范 1.每次使用前,用0.45um/0.22um 的膜过滤流动相 2.运输中或长期保存过程中变干的色谱柱需要用甲醇/乙腈完全润湿 3.样品分别时确定要考虑溶剂对样品的溶解性及分别的影响 4.对样品要依据性质进行预处理 5.处理好PH,温度,等因素对柱子的影响 6.尽可能的使用现配的流动相,注意防止流动相长菌等不良现象发生7.定期的用合适溶剂,合适程序对柱子进行再生8.储存色谱柱时，应将缓冲盐置换干净，并用高比例的有机溶剂饱和色谱柱（乙腈/甲醇）9、避开外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或强力震动色谱柱的柱效能是评价色谱性能的一项紧要指标，混合物能否在色谱柱中得到分别，除取决于选择合适的固定相外，还与色谱操作条件及色谱柱的装填情形等因素有关。
那么，如何有效地提高色谱柱的柱效呢？在确定的色谱操作条件下，色谱柱的柱效可用理论塔板数或理论塔板高度来衡量。
一般说来塔板数愈多，或塔板高度愈小，色谱柱的分别效能愈好。
如何提高HPLC柱效？要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。
以下介绍了几种国际上流行的测量和计算柱效值的方法。
1、提高液相色谱柱柱效的方法要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。
（1）降低移动相的流速,但会使分析时间延长。
（2）削减固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。
（3）减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。
（4）选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。
（5）适当提高柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分别度也随之降低。
（6）尽量减小停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。
高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养
高效液相色谱仪色谱柱的正确操作及维护和修理保养高效液相色谱仪色谱柱的正确操作色谱柱是高效液相色谱仪最紧要的部件，被测物质能否被很好的分别和测定，色谱柱的性能起着决议性的作用。
因此，在日常工作中，应特别注意色谱柱的正确使用和维护和修理保养，以延长色谱柱的使用寿命。
1、使用预柱和保护柱预柱（pre—column）安装于泵和进样器之间，它给色谱柱中的流动相供应了完全的平衡，并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。
保护柱（guardcolumn）可以阻拦能够坚固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱，保护柱应与色谱柱的填料相同。
预柱和保护柱可以常常更换，而不需要常常更换色谱柱，这就延长了色谱柱的使用寿命。
2、防止气体进入有些色谱柱（如凝胶柱）是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。
因此，为了防止气泡进入色谱柱，确定要使用经过脱气的流动相，并且要严格依照下列步骤来安装色谱柱。
a、拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝，察看是否有溶剂渗出；b、如有溶剂渗出，即可将色谱柱接到管路上，以避开气泡的进入；c、如无溶剂渗出时，表明色谱柱的此端已经进去空气了，此时，可将色谱柱的出口端接到进样阀上，以流动相来反方向冲洗色谱柱，以便将柱内的空气排出。
建议以0、2ml/min的小流量来冲色谱柱，假如溶剂的流速太快或者是压力蓦地的上升都将会导致柱性能的降低；d、假如流出的溶剂里不含有气泡，说明柱内的气体已经被排出了，再将色谱柱以正确的方向接好，这样气泡就进不到色谱柱里面了。
3、清洗为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应适时地清洗色谱柱。
首先要用对被测样品洗脱本领强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。
色谱柱的使用、保存及管理
色谱柱的使用、保存及管理
培训人：*** 2012.12.12
2 一、色谱柱的使用 1.新色谱柱的使用 购进新色谱柱，要按照出厂性能实验方法进行色谱柱性能考察验收，验收合 格后按公司要求进行编号，粘贴标签，建立档案，出厂图谱与验收图谱一并留档。 柱性能考察实验的结果,应给出柱的死时间、保留时间、理论塔板数、峰对称 性（或对称因子）、分离度和柱压等性能指标。 2.日常色谱柱的使用 选择对应的检验品种的色谱柱，正确连接，拧紧两端管线接头，先用10%甲醇 溶液或相应溶液低流速冲洗30min,再切换到流动相，逐步提高流速，平衡色谱柱 30min左右。 待样品分析结束后，先用10%甲醇溶液或相应溶液低流速0.5ml/min冲洗
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30min后，再用纯甲醇溶液0.5ml/min饱和以上，取下色谱柱，接上堵头，拧紧，
按色谱柱的类型分类放置保管。
3 二、色谱柱的使用注意事项 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动，要轻拿轻放； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气；
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色谱柱的管理： 每启用一根色谱柱，在色谱柱上贴上标签，注明启用日期。
每根柱子每两个月保养一次，特别是对于一些使用频率少的柱子，因为放置时
间 长，容易干柱，每一次做好保养记录。
对于确已失效的柱子，做好停用记录，不能随意丢弃，专门存放。
Hale Waihona Puke 6色谱柱使用总结 提高柱温可增加柱效（提高灵敏度）； 减小柱径可增加柱效（提高灵敏度）； 缩短检测器响应时间可增加柱效（提高灵敏度）； 使用高纯硅胶，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变流动相pH，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变有机相比例，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变键合相，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变有机添加剂，可增加柱效（提高灵敏度）； 改变流动相配比方式，可增加柱效（提高灵敏度）。
色谱柱的维护和使用指南(一)2024
色谱柱的维护和使用指南（一）引言概述：色谱柱是色谱分析领域中至关重要的工具，它的维护和正确使用对于保证分析结果的准确性和重复性至关重要。
本文将从色谱柱的贮存、装配、使用、保养和维修等方面，给出一系列关键的指导方法和技巧。
正文：一、色谱柱的贮存1. 为避免柱内填充物受潮、污染和老化，柱在未使用时应密封保存；2. 长时间不使用时，应将柱内填充物取出，用洗涤液洗净并储存于干燥的环境中；3. 柱外表面应保持干净，防止灰尘和污垢对柱的质量造成影响；4. 避免将柱存放在高温或低温环境中，以免影响填充物的稳定性；5. 定期检查柱的阀门、接头和连接件，确保其正常运作和密封性。
二、色谱柱的装配1. 柱的装配应在洁净无尘的环境中进行，避免异物进入柱内；2. 使用合适的工具装配柱体和连接件，避免过度紧固导致损坏；3. 注意不同类型柱的装配顺序和注意事项，确保正确安装；4. 检查柱连接处的密封性，避免漏气或漏液的情况；5. 建议使用柱头盖保护柱口，防止污染和损坏。
三、色谱柱的使用1. 在使用前用适当的流体进行平衡，以保持柱内压力的稳定；2. 操作前确认柱的运行条件和方法，确保按照要求进行；3. 控制进样量和流速，避免超过柱的容量和承受能力；4. 避免使用不合适的溶剂和试剂，以免对柱和填充物造成损害；5. 及时清洗柱，避免堵塞和交叉污染的问题。
四、色谱柱的保养1. 每次使用后，应彻底清洗柱，避免残留物污染下次分析；2. 定期进行柱的回收和再填充，保证填充物的质量和性能；3. 避免柱暴露在强光、高温或化学腐蚀环境中，以免影响使用寿命；4. 使用前检查柱的状态，确保柱体没有磕碰、损坏和变形；5. 常规检查涂层是否完整，避免涂层剥落影响分析结果。
五、色谱柱的维修1. 出现柱内压力异常、流速不均匀等问题时，应及时检查柱的连接和阀门；2. 检查柱的阀门和连接件是否松动或损坏，进行紧固或更换；3. 遇到柱寿命结束、填充物老化或损坏等情况时，需进行柱的更换；4. 遇到柱头堵塞或堵塞的预警，应进行柱的清洗和维护；5. 建议定期请专业技术人员进行柱的维修和检测。
色谱柱的安装,设置,老化和维护
色谱柱的安装,设置,老化和维护液相色谱柱的使用方法：1、色谱柱的使用说明：（1）、色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）、流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）、样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）、反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）、长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
色谱柱的维护和使用规范
色谱柱的维护和使用规范
色谱柱的维护
1、使用保护柱
2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用
3、避免流动相组成及极性有剧烈变化
4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净
6、压力升高时更换保护柱
HPLC色谱柱的良好使用规范
1.每次使用前,用0.45um/0.22um的膜过滤流动相
2.运输中或长期保存过程中变干的色谱柱需要用甲醇/乙腈完全润湿
3.样品分离时一定要考虑溶剂对样品的溶解性及分离的影响
4.对样品要依据性质进行预处理
5.处理好PH,温度,等因素对柱子的影响
6.尽可能的使用现配的流动相,注意防止流动相长菌等不良现象发生
7.定期的用合适溶剂,合适程序对柱子进行再生
8.储存色谱柱时，应将缓冲盐置换干净，并用高比例的有机溶剂饱和色谱柱（乙腈/甲醇）
9、避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或强力震动。
色谱柱使用及维护
色谱柱使用及维护色谱柱是色谱分析中非常重要的部分，它用于分离和纯化样品中的化合物。
正确的使用和维护色谱柱可以延长其寿命，提高分离效果和分析结果的准确性。
本文将详细介绍色谱柱的使用和维护方法。
色谱柱的使用方法：1.准备工作：在使用色谱柱之前，需要先进行准备工作。
首先，检查柱的状态，确保没有损坏或污染。
然后，根据分析的需要，选择合适的色谱柱和填料。
2.连接色谱柱：将色谱柱与色谱系统连接起来。
通常，色谱柱的两端都有接头，可以使用连接器将其与色谱系统连接起来。
确保连接紧密，避免泄漏。
3.样品预处理：在进样之前，需要对样品进行预处理。
这包括样品的制备和提取，以及可能的前处理步骤，如样品的净化和浓缩。
4.进样：将预处理好的样品通过进样口注入到色谱柱中。
确保进样量适当，避免柱内压力过高或过低。
5.运行分离：启动色谱系统，开始运行分离。
根据实验要求和柱的性能，选择合适的流速和梯度条件。
监控色谱图谱，记录分离的结果。
6.分析结果：根据分离的结果，进行数据分析和解释。
根据需要，可以进行进一步的纯化和结构表征。
色谱柱的维护方法：1.储存条件：在使用完色谱柱后，应将其储存在适当的条件下。
通常，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和高温。
柱子应储存在立式位置，以避免填料颗粒的沉积和失效。
2.清洗柱子：在使用一段时间后，色谱柱可能会出现柱效降低的情况。
这时，可以尝试进行柱子的清洗。
清洗柱子的方法包括反向冲洗、前冲洗和碱洗等。
选择合适的清洗方法，根据填料的耐受性和污染类型进行清洗。
3.柱效测试：定期对色谱柱进行柱效测试，以评估柱子的性能。
柱效测试可以通过运行标准样品或参考物质来进行。
根据测试结果，可以判断柱子是否需要更换或维修。
4.替换柱端接头：色谱柱的端接头是容易磨损和泄漏的地方。
定期检查柱端接头，如果发现磨损或泄漏现象，及时更换新的接头。
5.避免过高压力：在使用色谱柱时，要注意避免过高的压力。
过高的压力会损坏填料和柱子，降低柱效。
常用液相色谱柱使用与维护保养
常用液相色谱柱使用与维护保养液相色谱柱是分离和分析中常用的仪器配件之一，它的使用和维护保养对于实验结果的准确性和可靠性有着至关重要的作用。
本文将介绍常用液相色谱柱的使用和维护保养方法。
一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用前，需要对液相色谱柱进行准备工作。
首先，检查柱的外观是否完好无损，如果发现任何损坏或污染，应立即更换。
其次，检查柱装置是否牢固，连接是否紧密。
最后，将固定相和移动相装入柱中，确保固定相充分均匀地填充在柱内。
2.柱的条件调节：根据实验需要，调节液相色谱柱的柱温、流速和柱压等参数。
在调节柱温时，应注意避免温度过高或过低对柱的损害。
调节流速时，应根据样品性质和分离效果选择合适的流速。
控制柱压时，要确保柱内压力稳定在可接受范围内，避免超过柱的承压能力。
3.样品进样：将待测样品注入进样口或进样器中，注意避免空气进入柱，避免对柱的污染。
可以选择外部进样或直接进样的方法，具体方法根据实验要求和样品性质进行选择。
4.运行柱：在启动液相色谱仪前，先将柱进行预冲洗。
预洗液可以选择与移动相相同的溶剂。
启动液相色谱仪后，根据实验要求设定好运行条件，开始进行实验。
在实验过程中，要及时观察色谱图的变化，根据实验需要调节柱温、流速等参数。
5.柱的保存：在柱使用完毕后，将固定相充分冲洗干净，保证柱内固定相的干燥和保存。
然后，将柱装入保护柱架中，避免碰撞和损坏。
柱的保管环境要保持清洁、干燥、避光和稳定的温度。
二、液相色谱柱的维护保养方法1.柱的清洗：在使用液相色谱柱之前，需要先清洗柱以去除可能存在的污染物。
清洗方法包括预洗和后洗。
预洗可以选择与移动相相同的溶剂，将溶剂通过柱时，将固定相表面的杂质冲洗掉。
后洗可以选择与前一个样品不同的溶剂，将固定相和样品残留物进行清洗。
2.避免柱的干燥：柱在使用过程中，应尽量避免柱的干燥，因为柱的干燥会对固定相造成损害。
在柱停用时，应及时用溶剂进行冲洗并封存起来，以保持柱内的湿润状态。
色谱柱的使用及保养
色谱柱的保养（四）-保护柱
• 可避免化学污染。多数保护柱影响到整个色谱柱的柱效， 特别是在用微柱时 – Guard-Pak预装保护柱 • 有各种填料的预装柱供选择，使用方便。填料容积 较小，也引起柱效降低
第十二章 色谱柱的使用及保养
主要内容：
良好的色谱实验习惯 色谱柱的使用及操作 色谱柱的保养 样品方面 流动相方面 在线的保护装置 保护柱 色谱柱的清洗 色谱柱的存放 色谱柱常见毛病问题
良好的色谱实验习惯
• 拿到一根新色谱柱时，先测柱效 • 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录 条件 • 定期检测柱效 • 定期检测仪器的谱带展宽
色谱柱以外的因素（二）
• 柱压过高问题，不一定是色谱柱问题！ – 系统反压问题 进样器堵塞 管路或连接口堵塞 在线过滤器不干净 保护柱 – 压力传感器不准确 – 流速是否错误?
色谱柱以外的因素（三）
• 实验的重复性差 – 梯度实验时平衡时间不足 – 温度波动 – 流动相组成改变 – 样品溶剂不同 – 样品稳定性不好 – 方法的开发不好 缓冲液的pH值不合适 缓冲液的缓冲能力不足
色谱柱的使用及操作
• 流动相的转换 – 特别是GPC柱 • 流速(压力)的变化幅度 • 温度的变化幅度 • 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
色谱柱的保养（一）
• 样品方面
– 除去微粒及杂质 – 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解 度，防止其在流动相中析出 – 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用
•
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前言液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以固定相中流出而得到分离。
因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。
柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。
但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。
色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。
引起这些问题的内在原因有:(1) 硅羟基的死吸附。
色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。
任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。
被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。
当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。
(2) 重金属。
色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。
例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。
(3) 碳流失。
固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。
(4) 缓冲液中盐的析出。
在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。
分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
(5) 色谱柱变干。
如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。
2 色谱柱的使用新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。
认真阅读说明书及性能测试报告,了解新柱子的最佳性能指标,如某色谱条件下的柱压、柱效等。
有时分析用的流动相与柱子的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。
要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。
反相C18 柱通过出厂测试后多保存在乙腈中,可用10～20 倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。
流速要缓慢提高,如开始0. 3～0. 5mL/ min , 10～15min 后可慢慢加快。
硅胶柱和极性色谱柱通过出厂测试后一般保存在正庚烷中。
如果分析时需要使用含水的流动相,则使用前须用乙醇或异丙醇冲洗,流速0. 1～0. 3mL/ min ,将正庚烷冲洗干净后,再用流动相平衡。
实验过程中可以记录色谱柱的一些性能指标,如柱效、柱压等,供今后参考。
每次分析样品前,要用流动相对色谱柱进行平衡,待基线平稳后再进样分析。
梯度洗脱用初始流动相平衡。
一次样品分离完成后,要有足够的时间使系统恢复平衡,再进行下一次分析。
一般流动相平衡时间为30min ,若系统中有盐或水,平衡时间应延长。
3 色谱柱的清洗与保存色谱柱清洗是日常的重要维护工作。
如果样品分子残留在柱子、接头、流通池中,会污染系统,影响对其它样品的分析,降低柱效。
因此分析工作结束后,要用适当的溶剂清洗系统中残留的样品。
在反相系统中, 若流动相中无酸、碱、盐类物质, 可用90 %甲醇冲洗30～60min ,若含酸、碱、盐类物质,则要先用10 %甲醇或乙腈,或用与分析用流动相相同的比例把含酸、碱、盐溶液换成水,冲洗30～60min , 再用50～70 %甲醇或乙腈冲洗,最后用100 %甲醇或乙腈冲洗。
若有四元泵,可用梯度达到90 %的甲醇冲洗。
直接用纯甲醇或乙腈冲洗,会导致磷酸盐沉淀于柱子或检测池中。
最好也不要用100 %纯水冲洗柱子。
纯水极性很强,ODS 填料的硅烷键是非极性的,在纯水中各键合基团会因疏水而改变性能, 使柱效很快降低。
目前已有公司推出可以使用100 %纯水的柱子,原理是键合基团互相之间有排斥力,阻止了键合基团性能的改变。
能否用纯水冲洗要看柱子说明书的规定。
有机相(如甲醇、乙腈) - 水体系流动相能完成大部分析工作,但是有时分析弱酸或弱碱化合物时(如生物碱) ,为消除拖尾现象,需用离子对试剂。
常用的离子对试剂有庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠, 这时常采用p H3～5 的缓冲盐体系。
离子对色谱分离结束后,柱子应先用有机溶剂- 水体系冲洗,再用水冲洗,最后用有机溶剂冲洗。
假设流动相是甲醇- 0. 5 %庚烷磺酸钠(p H3. 3) (VnV = 50n50) ,应先用50 %的甲醇水冲洗,然后用水冲洗,最后用甲醇冲洗。
这是因为十二烷基硫酸钠和庚烷磺酸钠都是表面活性剂,可以洗掉脂肪油(如烷烃及其衍生物) 。
如果先用水冲洗,十二烷基硫酸钠和庚烷磺酸钠会将ODS 柱胶表面键合的长链烷烃洗脱下来,造成固定相的损失。
如果先用有机相- 水体系冲洗柱子, 由于表面活性剂在有机相中有一定的溶解度,并且流动相的量比较大,会命名表面活性剂逐渐溶解在流动相中被冲洗出来,从而减少表面活性剂对键合相的洗脱。
十二烷基硫酸钠和庚烷磺酸钠冲洗干净后,可以再用水冲洗,然后用有机相冲洗和保存。
不同型号色谱柱冲洗所用溶剂体积见表1 。
表1 色谱柱冲洗溶剂体积色谱柱尺寸(mm) 柱体积(mL) 溶剂体积(mL)125 ×4 1. 6 30250 ×4 3. 2 60250 ×10 20 400色谱柱一般用流动相中所含的有机溶剂来清洗与暂时保存,若长期不用,要用色谱柱说明书中推荐的溶剂保存。
如反相色谱柱可用纯甲醇或乙腈保存,正相柱用烃类溶剂保存,离子交换柱用水或甲醇/ 水保存。
色谱柱的再生若色谱柱柱效严重下降,分离效果变差,可以用10 %异丙醇甲醇冲洗色谱柱。
若柱效仍无改善,可以对色谱柱进行再生。
色谱柱再生时,最好使用廉价的泵,而不使用高效液相色谱仪上的泵。
再生的关键是了解污染物的性质,并找到合适的溶剂将其去除。
如果污染是因强保留物质的累积引起的,可以用流动相中较强的溶剂(90 %～100 %) 以相当于20 个柱体积的溶剂量清洗污染物。
残留的脂质能用非水溶剂如甲醇、乙腈、四氢呋喃清洗。
如果使用的是缓冲液系统,则要先用无缓冲流动相(即把缓冲液换成水) 以相当于5～10 个柱体积的量冲洗,再更换强溶剂继续冲洗。
但有时强溶剂也无法将残留在色谱柱上的污染物洗掉,需要使用更强的溶剂或者多种溶剂清洗柱子。
对于含蛋白质类的污染物,用0. 05mol/ L 稀硫酸冲洗非常有效,流速0. 5mL/ min 。
溶剂与溶剂之间的组合有很多,有时生产厂家会推荐溶剂系统。
清洗、再生所用的系列溶剂都是强度逐渐增加的,通常最后一个溶剂是疏水的(如醋酸乙酯甚至是烃) ,可以用来溶解非极性物质,如脂质和油类。
清洗过程中必须保证冲洗溶剂之间的互溶性,清洗过程结束时,必须借助中等强度能互溶的中间溶剂回到初始溶剂系统。
异丙醇是一种非常好的中间过渡溶剂,既能与正己烷或二氯甲烷互溶,又能与水相溶剂互溶。
但异丙醇粘度非常大,必须在较低的流速下使用,以免泵压过高。
一般情况下,极性固定相(如Si , NH2 , Diol 基色谱填料) 的再生可以依次使用20～30 倍色谱柱体积的正已烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇冲洗色谱柱(因异丙醇的粘度较大,冲洗过程中随时注意调整冲洗流速) , 然后再以相反的溶剂顺序冲洗色谱柱。
非极性固定相(如反相色谱填料C18 ,C18 ,CN 等) 的再生可依次用20～30 倍柱体积的甲醇:水= 10:90 (V/ V) 、乙腈、异丙醇冲洗色谱柱,然后再以相反顺序冲洗色谱柱。
键合型的离子交换柱可以用缓冲溶液、水、甲醇冲洗。
例如,典型的硅胶键合柱,在没有缓冲溶液的情况下,可以用甲醇、乙晴n 异丙醇= 75n25 (V/ V) 、异丙醇、二氯甲烷、正己烷依次冲洗。
用二氯甲烷或正己烷中洗后,考虑到溶剂相容性,柱子必须再用异丙醇冲洗后才能用原来的水相溶剂。
四氢呋喃是另外一种比较受欢迎的去除污染的溶剂。
如果柱子被严重污染,可以用二甲基亚砜(DMSO) 或者二甲基甲酰铵和水按50:50 的比例混合,用低于0. 5 mL/ min 的流速冲洗色谱柱。
对N H2 改性的色谱柱进行再生时,由于N H2 可能以铵根离子的形式存在,因此应该在用水冲洗后用0. 1mol/ L 的氨水冲洗,然后再用水冲洗,直至碱溶液完全流出。
另外,大多数强保留污染物都会累积在柱头上, 对柱子反冲可以缩短冲洗时间。
当然还要看所用色谱柱是否允许反冲。
无论正冲还是反冲,最好不要接检测器,以免污染物进入检测池。
污染物的过多累积会加大清洗难度,清洗柱子频率越高越容易清洗,所以有规律地清洗柱子,可以预防重大问题的发生。
污染严重的色谱柱冲洗无效时,需将柱内填料取出进行处理,或更换新填料。
还可以将柱头入口处被污染的填料取出,重新补装同类型的填料,然后再改变柱流向进行再生。
这种逆流再生方法,可以使大多数柱子性能得到恢复。
a#N b r5 色谱柱的维护色谱柱使用过程中不能碰撞、弯曲或强烈震动。
当柱子和色谱仪连结时,阀件或管路一定要清洗干净。
以下从流动相、样品、保护柱等方面提出色谱柱维护应注意的一些问题。
(1) 流动相: 流动相使用前必须经脱气和过滤处理。
即使仪器配有自动脱气机,也最好采用超声脱气或其它简便的脱气方法对流动相进行预脱气。
尽量避免使用高粘度溶剂(如异丙醇) 作为流动相, 避免流动相组成及极性的剧烈变化。
流动相应尽量使用色谱纯,减少流动相中杂质对色谱柱的污染和对检测器的影响。
水用超纯水, 流动相最好用0. 45μm或0. 22μm 的膜过滤。
大多数反相色谱柱的p H 稳定范围是2～7. 5 ,硅胶柱p H > 8 时会发生硅胶溶脱,键合型柱p H < 2 时会发生键合相断裂, 流动相尽量不超过色谱柱的p H 范围。
普通C18 柱尽量避免在40 ℃以上的温度下分析。
柱内不溶物容易引起色谱柱的堵塞,影响样品的分离。
不溶物产生的原因是有溶剂的不互溶、样品溶解液和流动相不互溶或者由于温度改变或固定相干涸而产生沉淀。
为避免上述问题,要注意溶剂之间的互溶性。
若两种溶剂不互溶,需经过中间溶剂慢慢过渡。
保存时应将色谱柱两端密封,并尽量保持室温恒定。
(2) 样品: 对内径5μm 的柱子, 样品需经0. 45μm的膜过滤,更细的柱子要0. 22μm 的膜过滤。
基体比较复杂的样品需经过一定的样品预处理,例如海洋沉积物、中药提取液、体液等,需要采用萃取等方法除去对柱子有损坏的较大杂质,例如色素、多糖、蛋白质等。
尽量减少进样量,避免过载。
(3) 保护柱:最好使用预柱作为保护柱,减少污染物对分析柱的损伤。