马铃薯植物组培

马铃薯的块茎组织培养的研究

生命科学学院生物工程132班组长：林伟平组员：温楚婷凌琦雯刘钰荧

一,实验目的

(1)以马铃薯的块茎为材料，研究经过器官分化或愈伤组织增殖与再分化途径，获得较多的试管苗，掌握植物快速繁殖的基本方法和过程。

(2)观察和分析不同糖类对外植体愈伤组织诱导，增殖和器官分化的影响。

二,实验原理

在植物组织培养体系中，从外植体形成再生植株有不同的再分化途径，会受到培养基中不同浓度的糖的影响。植物的快速无性繁殖是指以合适的外植体为起始材料，在无菌条件下，通过合适的培养技术，在有限的空间，短时间内快速生产大量植株的技术。

三,实验材料，试剂与器具

(1)实验材料：马铃薯块茎

(2)试剂：实验十一配制的各种培养基母液，蔗糖，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，1mol/LHCl,1mol/LNaOH,HgCl或次氯酸钠，吐温20，75%乙醇或20g/L新洁尔灭，无菌水等。

(3)器具：高压灭菌锅，分析天平，酸度计，光照培养箱，微波炉，冰箱，培养架，果酱瓶，烧杯（1000mL,500mL,100mL,50mL）,移液管，量筒，不锈钢镊子，剪刀，解剖刀，脱脂棉，培养皿，称量纸，记号笔，标签纸，药匙，玻璃棒，洗耳球，洗瓶，电炉，酒精灯

四,实验内容

1,确定培养基配方，MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+8g/L琼脂+不同浓度的葡萄糖/不同浓度的蔗糖（分别为1%，2%，3%，4%的葡萄糖或蔗糖）

3,移液与溶化：将所需的各储存母液按顺序摆放好，将洁净的量筒，烧杯，移液管，玻璃棒，漏斗等放在指定的位置，准备好蒸馏水及瓶盖，包装纸等，取100mL小烧杯一只，用50mL 量筒量取大量元素，用各母液专用移液管分别吸取微量元素母液，铁盐母液，有机附加物母液，2，4-D母液，6-BA母液。取1000ml烧杯一只，先用量筒取1000mL蒸馏水倒入烧杯中，用记号笔画好液位线，将蒸馏水倒出一半，准确称取8g琼脂倒入烧杯中，置于电炉煮沸，待琼脂完全溶化后，加入10g葡萄糖，充分溶解后，将准备好的含大量元素，微量元素，铁盐，有机附加物和植物生长调节物质的母液混合物倒入烧杯中，用蒸馏水将盛过母液混合物的小烧杯洗三次，一并倒入1000mL烧杯中，加热至沸腾，将烧杯远离火源，并加蒸馏水定容至设定的液位线。

4,调节pH：用酸度计测定培养基的pH，用1mol/LHCl或1mol/LNaOH溶液将培养基的pH调整至5.8到6.0。调整时，应用玻璃棒不断搅拌。

5,分装：将溶化的培养基趁热均匀的分装于果酱瓶，每瓶30mL培养基，分装3瓶，随即封

口。

6,重复步骤3到步骤5，步骤3中分别加入20g葡萄糖，30g葡萄糖，40g葡萄糖，10g蔗糖，20g蔗糖，30g蔗糖，40g蔗糖。

7,含有每个浓度的糖的培养基分装三个果酱瓶。一共24个果酱瓶。

8,将分装好的培养基及用报纸包扎好的剪刀，镊子，解剖刀，含有滤纸的培养皿和果酱瓶装蒸馏水等，置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力为1.1Kg/cm2,灭菌时间20min。

9,对外植体进行消毒，接种：（1）准备工作，接种前，用75%乙醇棉球擦拭超净工作台台面，将培养基，无菌水及接种用具，废液杯等放入超净工作台台面适当的位置，打开超净工作台紫外灯，照射30min后关闭，然后打开风机，10min后，再打开日光灯进行无菌操作。（2）外植体表面消毒与整理，将马铃薯块茎在自来水下冲洗干净，用小刀切取块茎芽眼部位，置于50mL烧杯中，用75%乙醇浸泡30s后，立刻除去乙醇，在超净工作台上，在烧杯中加入含有1到2滴吐温20的0.1%氯化汞溶液，浸泡10min，倒去消毒液，用无菌水洗三次，将马铃薯块茎置于经灭菌处理过的垫有无菌滤纸的培养皿中，使用镊子和解剖刀将马铃薯切成小块。（3）接种，在酒精灯上方，左手握住果酱瓶，右手打开瓶盖，将瓶盖朝上置于台面，右手用镊子将马铃薯块茎平放于培养基表面。（4）培养与观察，将接种后的培养瓶置于组织培养室内，有光培养。

五，实验结果统计分析

蔗糖和葡萄糖的浓度各四个，分别为1%,2%,3%,4%,每个浓度做三个，一共二十四个果酱瓶，每四天观察一次。

愈伤组织诱导结果

器官分化与植株再生结果

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