第14章 临床免疫检验的自动化分析
自动化分析 (免疫比浊)
溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm)
溶液中形成的复合物分子要足够多
控制抗原抗体反应的温度和时间 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间
应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量
将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A) 为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标
概括：免疫比浊测定原理，以及影响免疫 比浊的因素。
原理：免疫当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例
合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原 抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪 器对浊度进行测定从而检测抗原含量。
影响因素：抗原抗体的比例，反应体系中保持抗体过量； 抗体的质量，要选择特异性强、效价高、亲和
临床免疫学检验
吉林医药学院检验学院
免疫检验自动化分析仪
免疫比浊分析的临床应用பைடு நூலகம்
血浆、体液中特种蛋白
如免疫球蛋白IgG、IgA、IgM
检 范 围 测
、；补体C3、C4； 血浆蛋白AAT、TRF、A1M、 CER、HPT、PAB、ALB； 炎性反应蛋白 SAA、CRP； 载脂蛋白 APO、ABI； 尿蛋白系列 小分子治疗药物
即当抗体量恒定时，形成的抗原抗体复合物的反应与散射 信号响应值的上升呈正比。同时，散射信号随抗原抗体 反应时间增加而曲线上升。 当抗原量与响应值上升到一极限时，再增加抗原量， 使散射响应值迅速下降
散射比浊测定时，一定要保证抗体过量。
二、定时散射比浊分析
（一）基本原理
1.是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，“在抗原抗体反 应几秒钟后开始测定峰值信号”。 2.目的是排除抗原抗体反应的不稳定性，降低检测误差。 3.采用抗体过量，以获得颗粒产生的最强的散射光信号。
自动化分析-(免疫比浊)
自动化免疫比浊
➢免疫比浊分析技术发展
两测定Biblioteka 原抗体形成后的阶段 个 测定抗原抗体结合的峰值
散射(终点)比浊
阶
段
速率散射比浊
散射比浊法:
当一束光
在光源的光路方向（50-960）
免 疫 比 浊
线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个
角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
法
因素的影
➢对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
三、速率散射比浊分析
三、速率散射比浊分析 （一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。
平光线
散射光θ
透射光
检测器 检测器
光源 透镜 滤光片
散射比浊、透射比浊光路图
实验要求（了解）
❖ 溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) ❖ 溶液中形成的复合物分子要足够多 ❖ 控制抗原抗体反应的温度和时间 ❖ 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 ❖ 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 ❖ 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量 呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反 比。
在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积， 减小入射光的波长，扩大散射光夹角等因素， 均可增加检测的敏感度。
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线
临床免疫检验的自动化发展探微
临床免疫检验的自动化发展探微目的分析探讨临床免疫检验自动化发展现状及未来发展规划。
方法归纳总结免疫检验自动化发展历程，并对未来发展进行初探。
结果随着临床免疫检验技术不断更新进步，免疫检验自动化已逐步取代传统手工操作，且具有更高的准确性及灵敏度。
结论临床免疫检验自动化发展迅速，且优势明显，值得临床推广。
标签：临床免疫；免疫检验；自动化；发展与规划随着电子信息技术的不断进步，临床检验亦在不断更新，成为当今医学领域进步最快的学科之一，其中临床免疫检验的推陈出新更是佼佼者。
免疫检验已由全手动操作，逐步过度至班自动化操作，目前我国部分经济发达地区先进医院已优先步入全自动化阶段。
本文就免疫检验自动化的概念、目前发展现状、以及未来发展规划作一简单总结。
1免疫检验自动化的概念“自动化”，顾名思义为计算机操作取代人工手动操作。
而免疫自动化，即运用计算机技术参与免疫检验操作、调定的技术。
其中包括样本调控、试剂掌控等免疫检验基本操作过程；检验结果与数据自动处理，以及故障自动报警系统与自救系统等。
2当前免疫检验自动化发展现状免疫检验技术的不断进步是适应我国当前医疗环境的自我完善。
众所周知，医少患多不仅仅是临川科室的突出问题，在检验科，检验医师与待检样本比例严重失调是大多数医院检验科面临的一大难题，故如何提高检验效率是迫切需要解决的问题。
免疫检验自动化具有高效、高灵敏度等优点，其在检验科的应用价值已逐渐凸显，虽然该技术在我国起步较晚，但其发展及其迅速。
我国免疫检验自动化系统起步于上世纪70年代，至今40余年间逐步成熟。
多年的临床经验证实，免疫检验自动化技术具有高灵敏度、特异度，且对于干扰因素的分析和排除能力强于手动操作，能有效避免误差的发生[1]。
3免疫自动化技术进展3.1免疫标记测定自动化系统的进展免疫标记是运用抗原抗体反应的原理，对目标AG/AB或介导AG/AB进行标记，从而根据对待测目标进行追逐、测定的技术，常用的标记手段有荧光素、放射性同位素、酶等，并可根据标记手段的差异分为免疫荧光技术、放射免疫测定技术以及酶标技术等等。
临床分析中的免疫分析技术
临床分析中的免疫分析技术免疫分析技术在临床分析中的应用随着医学研究的不断深入和发展，免疫分析技术在临床分析中扮演着重要的角色。
它以其快速、敏感、准确的特点，成为了检测和诊断疾病的首选方法。
本文将从免疫分析技术的原理、类型、应用等方面进行分析与探讨。
一、免疫分析技术的原理免疫分析技术是一种利用抗原与抗体之间特异性相互作用的方法。
该原理基于人体免疫系统通过产生抗体来抵御感染。
在免疫分析中，我们利用抗原与抗体之间的结合反应，来检测和测定抗原或抗体的存在和浓度。
免疫分析技术可分为免疫层析、免疫电泳、免疫放射法、免疫染色法等。
二、常见的免疫分析技术1. 免疫层析法免疫层析法是一种便捷且应用广泛的免疫分析技术。
它基于在试纸或膜上，通过抗原与抗体的结合反应，在样本中快速检测出目标物质的存在与否。
免疫层析法在妇产科、感染病等领域有着重要的应用。
2. 免疫电泳法免疫电泳法是一种将样品中的抗原或抗体进行电泳分离和检测的方法。
其原理是根据抗原与抗体的电泳迁移速度和特定的电泳条件，来实现对抗原或抗体的分离和定量。
这种技术在肿瘤标志物检测、自身免疫性疾病诊断等方面具有重要应用。
3. 免疫放射法免疫放射法利用放射性同位素标记的抗体来检测样本中的抗原或抗体。
该方法具有高度的敏感性和准确性，能够对微量物质进行测定。
免疫放射法在临床检验中常用于激素测定、临床药物监测等方面。
4. 免疫染色法免疫染色法是一种利用抗体与标记物质相结合来检测样本中目标抗原的方法。
它通过特定的检测试剂和染色方法，将抗原与标记物质染色，然后观察和分析染色的程度和区域，以确定抗原的存在和分布。
免疫染色法在病理学、免疫组化等领域有着广泛的应用。
三、免疫分析技术的临床应用1. 疾病的早期诊断免疫分析技术在疾病的早期诊断中起着至关重要的作用。
通过检测血清中的特定抗体或抗原，可以帮助医生尽早发现疾病的存在，并采取相应的治疗措施。
例如，在乳腺癌筛查中，通过测定血清中的肿瘤标志物CA15-3，可以帮助医生尽早发现患者的异常情况。
(精品)直接化学发光免疫分析用吖啶酯直接标记抗体抗原
化学发光剂
在化学发光反应中参与能量转移并最终以 发射光子的形式释放能量的化合物，称为化 学发光剂或发光底物。
㈠直接化学发光剂
直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化 学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记 抗原或抗体。
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
定时散射比浊法测定原理示意图
(二)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定 法。连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散 射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法， 每项检测仅1～2min即可完成。
三、免疫散射比浊法
原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光 线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散 射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒 的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等 因素密切相关，其公式如下：
Iθ＝ I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ4
免疫自动化仪器分析技术
第一节 免疫浊度测定的自动化分析 第二节 发光免疫测定的自动化分析 第三节 荧光免疫测定的自动化分析 第四节 酶联免疫测定的自动化分析
第一节免疫浊度测定的自动化分析
免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶液 中反应，形成小分子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、 NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反 应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫 复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大， 即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
《临床免疫学检验》教学大纲
《临床免疫学检验》教学大纲课程类别：专业核心课程课程性质：必修英文名称：Clinical immunology examinations总学时：96 讲授学时：48 实验学时：48学分：4.5先修课程：仪器分析、人体解剖学、组织学与胚胎学、生理学、细胞生物学、病理学、病理生理学、药理学、生物化学、医学免疫学、病原生物学、医学遗传学、分子生物学、临床生物化学检验。
适用专业：医学检验技术开课单位：医学院一、课程简介临床免疫学检验是研究免疫系统功能异常与相应疾病发病机制及其诊断和防治措施的科学。
通过学习本课程，使学生获得免疫功能异常所致的病理过程及其机制以及免疫学理论和技术在疾病预防、诊断和治疗中的应用等方面的基本知识。
同时结合教学实践，培养学生分析问题和解决问题的能力以及严谨的科学作风。
二、教学内容及基本要求第一章临床免疫学与检验概论（1学时）教学内容：1.1 免疫学技术概论1.2 临床免疫性疾病及检验概论教学要求：1.了解免疫学技术在医学中地位和应用；了解免疫学技术的发展简史。
2.了解临床免疫学及其检验在医学中的作用。
授课方式：讲授第二章抗原抗体反应（1学时）教学内容：2.1 抗原抗体反应的原理2.2 抗原抗体反应的特点2.3 影响抗原抗体反应的因素2.4 免疫学检测技术的类型教学要求：1.掌握抗原抗体反应的原理。
2.掌握抗原抗体反应的特点。
3.掌握影响抗原抗体反应的因素。
4.掌握免疫学检测技术的类型。
授课方式：讲授第三章免疫原和抗体的制备（2学时）教学内容：3.1 免疫原的制备3.2 免疫血清的制备3.3 单克隆抗体的制备3.4 基因工程抗体的制备教学要求：1.掌握颗粒性抗原的制备和半抗原的制备；了解可溶性抗原的制备。
2.掌握免疫血清的制备。
3.掌握单克隆抗体的概念；掌握B细胞杂交瘤技术的基本原理。
4.掌握基因工程抗体的概念；了解基因工程抗体的制备。
授课方式：讲授第四章凝集反应（2学时）教学内容：4.1直接凝集反应4.2间接凝集反应4.3抗球蛋白试验教学要求：1.掌握直接凝集反应的原理和应用。
自动临床生物化学检验技术分析技术
自动临床生物化学检验技术分析技术自动临床生物化学检验技术——分析技术的应用与发展概述自动临床生物化学检验技术是现代医学中非常重要的一个分支领域。
它通过自动化仪器设备对血液、尿液和其他体液中的生化指标进行检测分析，为医生提供关键的诊断和治疗决策依据。
本文将探讨自动临床生物化学检验技术的分析技术应用和发展。
一、技术原理和仪器设备自动临床生物化学检验技术主要基于光学、电化学和免疫学等原理，通过测定生物样本中的物理、化学或生物学性质来获得相关的生化指标数据。
自动化仪器设备主要包括光度计、电化学分析仪、酶标仪、电泳仪等，在样本处理、试剂加入、反应和检测等环节实现了全自动化的操作。
二、应用领域1. 临床诊断自动临床生物化学检验技术在临床诊断中起着至关重要的作用。
它可以帮助医生快速准确地判断患者的生理和病理状态，以及排除和诊断各种疾病。
通过检测血糖、血脂、肝功能、肾功能等指标，可以早期发现并追踪糖尿病、心血管疾病、肝病、肾病等疾病的变化。
同时，自动临床生物化学检验技术还可以用于监测药物治疗的效果，指导和调整患者的治疗方案。
2. 体检和健康管理随着人们对健康的关注和健康管理的普及，自动临床生物化学检验技术在体检和健康管理领域的应用也越来越广泛。
通过检测血常规、肝功能、血脂、血糖等指标，可以了解个体的健康状况，及早预防和控制慢性疾病的发生。
同时，自动化设备的高效性和精确性，使得体检结果更加可靠和准确。
3. 科学研究自动临床生物化学检验技术在科学研究中也发挥着重要作用。
它可以帮助科研人员快速获取大量的生化数据，以开展生物医学研究和临床试验。
通过对患者样本的检测和分析，可以挖掘出潜在的疾病标志物，为新药研发和治疗策略的制定提供科学依据。
三、技术发展趋势1. 高通量检测随着临床需求的不断增加，自动临床生物化学检验技术正向高通量检测的方向发展。
通过提高设备的检测速度和精度，可以更快地处理更多的样本，从而提高诊断效率。
2. 多参数检测为了满足不同医疗需求和病情复杂性，自动检测设备正朝着同时检测多个参数的方向发展。
胶体金免疫层析试验.ppt
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同
免疫检测的自动化及标准化
免疫检测的自动化及标准化引言在流行病学研究、临床诊断和治疗过程中，免疫检测是一项非常重要的技术。
免疫检测可以用于检测病原体感染、自身免疫性疾病、恶性肿瘤等多种疾病。
然而，传统的免疫检测方法存在许多问题，包括操作复杂、人为误差大、耗时长、结果不稳定等。
因此，实现免疫检测的自动化和标准化是当前研究的热点之一。
自动化免疫检测的优势自动化免疫检测是指利用现代仪器设备和自动化技术，实现免疫检测过程的自动化。
相比传统手工操作，自动化免疫检测具有以下几个优势：1.高效性：自动化设备可以实现高通量、连续运行，大大提高检测效率。
2.准确性：自动化仪器可以减少人为操作误差，提高检测结果的准确性和稳定性。
3.标准化：自动化设备可实现标准样品的制备和检测过程的标准化，提高数据的可比性和重复性。
4.节约成本：尽管自动化设备和耗材的购买成本较高，但由于节省了人力资源和减少了人为误差带来的重复测试，整体上能够降低检测成本。
自动化免疫检测的关键技术实现免疫检测的自动化离不开一系列关键技术的支持。
以下是几个重要的关键技术：1. 自动进样系统自动进样系统是自动化免疫检测中最基础的技术之一。
它能够实现样品的自动进样、稀释和混匀等操作，有效地减少了操作的复杂性和人为误差。
2. 自动反应系统自动反应系统是自动化免疫检测中的核心技术之一。
它包括各种自动化仪器设备，如自动洗板机、自动孵育仪等，能够自动完成免疫试剂的加样、孵育、洗涤等操作。
3. 数据分析与管理系统自动化免疫检测需要大量的数据处理和管理。
数据分析与管理系统可以对检测结果进行分析、报告生成和存档管理等操作，提高数据的可视化和可追溯性。
4. 标准物质与质控品标准物质和质控品是保证自动化免疫检测结果准确性和可靠性的关键。
标准物质是一种具有确定浓度、稳定性和可追踪性的物质，用于校准仪器和验证方法的准确性。
质控品是用于评估检测过程和结果的稳定性和重复性。
自动化免疫检测的应用自动化免疫检测广泛应用于医疗诊断、药物研发和生物学研究等领域。
临床免疫学检测的自动化技术
临床免疫学检测的自动化技术近年来，随着科技的不断发展，临床诊断技术也在不断进步。
其中，自动化技术在临床免疫学检测方面的应用逐渐成为研究热点。
本文将探讨临床免疫学检测的自动化技术及其在医学领域中的意义。
1. 自动化技术在临床免疫学检测中的应用自动化技术在临床免疫学检测中具有广泛的应用。
通过自动化设备，可以将繁琐的检测过程转化为快速、高效的操作。
例如，自动化技术可以用于血清学试验，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）和免疫荧光分析法（IFA）。
这些自动化的实验室设备能够准确地定量检测血清中的特定抗体或抗原，为医生提供重要的诊断和治疗依据。
此外，自动化技术还可用于流式细胞仪。
流式细胞仪能够对许多细胞参数进行迅速准确的检测和分析，对于免疫学疾病的诊断起着重要作用。
自动化流式细胞仪通过光学和电子的技术手段，能够对大量样本进行高通量的检测和分析，提高工作效率，减少人工操作的差异性。
2. 自动化技术在医学领域中的意义自动化技术的应用不仅提高了临床免疫学检测的效率和精确性，还具有许多其他的优势，有力地推动了医学领域的发展。
首先，自动化技术可以减少人工操作的错误和差异性，提高诊断的准确性。
许多临床免疫学检测需要进行大量的反复实验，手工操作容易出现误差。
而自动化设备通过标准化和精确的程序，可以保证检测结果的一致性和可靠性，为医生提供准确的诊断和治疗建议。
其次，自动化技术节省了时间和人力成本。
相对于手工检测，自动化技术能够显著提高工作效率，减少人力投入。
医院和实验室可以通过自动化设备，同时进行多个样本的检测，大大缩短了检测时间，为患者提供更快速和便捷的服务。
此外，自动化技术还有助于实现信息化管理和数据分析。
自动化设备可以将检测数据直接上传至电脑数据库，实现结果的数字化存储和管理。
医生可以通过电子平台随时查看、分析和比较数据，为临床决策提供科学依据。
3. 未来展望随着科技的不断进步，自动化技术在临床免疫学检测中的应用将会进一步扩大。
第14章 临床免疫检验的自动化分析
第14章临床免疫检验的自动化分析第14章临床免疫检验的自动化分析本章将详细介绍临床免疫检验的自动化分析。
自动化分析在临床免疫学中起着重要的作用，能够提高检验效率和准确性，减少人为误差，并且可以进行高通量的检测。
14.1 自动化免疫检验的原理在本节中，将介绍自动化免疫检验的基本原理。
包括自动化仪器的工作原理，自动化免疫检验的流程，以及常见的自动化免疫检验方法。
1①自动化仪器的工作原理自动化免疫检验仪器根据不同的原理进行工作，常见的包括酶免疫分析法（EIA）、放射免疫分析法（RIA）、荧光免疫分析法（FIA）等。
本节将详细介绍这些原理及其在自动化仪器中的应用。
1②自动化免疫检验的流程自动化免疫检验通常包括样本处理、试剂添加、反应与检测等步骤。
本节将详细介绍每个步骤的操作方法和注意事项。
1③常见的自动化免疫检验方法自动化免疫检验方法种类繁多，常用的包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光检测法（IF）、化学发光免疫分析法（CLIA）等。
本节将详细介绍这些方法的原理、操作步骤和应用领域。
14.2 自动化免疫检验的优势与挑战本节将概述自动化免疫检验的优势和挑战。
自动化免疫检验相比传统的手工检验具有许多优势，例如高通量、高准确性和可靠性等。
然而，自动化免疫检验也面临一些挑战，如设备维护和数据的解释等。
14.3 自动化免疫检验在疾病诊断中的应用自动化免疫检验在疾病的诊断与监测中具有广泛的应用。
本节将介绍自动化免疫检验在各种疾病中的应用，包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤标志物等。
14.4 自动化免疫检验的未来发展趋势随着科技的发展，自动化免疫检验也在不断发展。
本节将展望自动化免疫检验的未来发展趋势，包括新型仪器的应用、更高灵敏度和更快速的分析方法的研究等。
附件:●相关文献资料●仪器操作手册法律名词及注释:1.《医疗器械管理条例》：中华人民共和国卫生部颁布，规定了医疗器械的生产、流通、使用管理。
该法规保障了医疗器械的安全性和有效性。
《临床免疫学检验》教学大纲
《临床免疫学检验》教学大纲一、前言本大纲教材为《临床免疫学与检验》（王兰兰主编，人民卫生出版社，第5版），适用于医学检验专业。
本门课的教学基本要求是要求学生掌握免疫学技术和临床免疫学理论。
教学基本要求1.通过免疫检验学的学习，掌握各项免疫学检验技术的原理，试剂组成，基本操作，注意事项，影响因素及临床应用。
2.通过临床免疫学及免疫病理的学习，掌握免疫学疾病的概念，发病机理及其检验。
3.了解临床免疫学与免疫检验的最新进展。
4.本教学大纲的教学内容分三级：详细介绍，重点介绍，一般介绍。
本课程面授学时数为38学时。
教学内容及学时分配二、教学内容第一章概论（一）详细介绍：免疫、免疫学、免疫应答反应、免疫细胞、免疫分子的概念。
（二）重点介绍：免疫应答反应、免疫组织与器官、免疫细胞的分类、表面标志；淋巴细胞再循环与归巢；免疫球蛋白结构与分类。
（三）一般介绍：临床免疫学、免疫检验以及临床应用第二章抗原抗体反应（一）详细介绍：抗原抗体反应的原理和特点以及影响因素。
（二）一般介绍：抗原抗体反应主要类型和临床应用。
第三章免疫原和抗血清的制备（一）详细介绍：抗血清制备，抗血清的鉴定和保存。
免疫佐剂的概念和种类以及作用机制。
（二）重点介绍：抗血清中抗体的纯化。
（三）一般介绍：免疫原的制备。
第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备技术（一）详细介绍：单克隆抗体的概念，杂交瘤技术的基本原理。
（二）重点介绍：制备单克隆抗体的基本技术。
（三）一般介绍：基因工程抗体技术，主要在噬菌体抗体库技术---基本原理和程序；特点。
第五章凝集反应和沉淀反应（一）详细介绍：凝集反应的特点，抗球蛋白参与的血凝试验（二）重点介绍：直接凝集反应，间接凝集反应、沉淀反应的概念和特点、凝胶内沉淀反应。
（三）一般介绍：自身红细胞凝集试验、絮状沉淀试验、沉淀反应的应用。
第六章放射免疫技术（一）详细介绍：常用放射性核素、125I标记抗体（抗原）的制备和鉴定、放射免疫技术中常用的分离方法，放射免疫技术的方法学评价。
免疫检验自动化仪器分析
定时散射比浊法测定原理示意图
1. 仪器测定技术要点
(1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段 (3) 信号检测
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定 法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免 疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测 定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联 系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅 1～2min即可完成。
仪器测定技术要点
• 抗原抗体结合 • 电化学发光反应 • 光信号检测 • 检测完毕
电化学发光免疫测定示意图
电化学发光免疫测定工作示意图
AMPPD特性
碱性PH环境下，非酶解性的水解很低 热稳定性好 PH9时酶解速度最快，PH9.5时信噪比 最低 发光为持续型，15min达到高峰， 60min内强度维持不变
AMPPD发光反应原理示意图
仪器测定技术要点
• 抗原抗体结合 • 洗涤、分离 • 加入AMPPD发光剂 • 信号检测
碱性磷酸酶标记的化学发光免疫测定示意图
Access全自动酶标记化学发光免疫分析仪
UniCel™DxI 800
IMMULITE 2000型全自动酶标记化学发光免疫分析系统
（三）碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪
鲁米诺是一种还原剂，在碱性溶液中被H2O2氧化产生鲁米诺衍生物 （激发态）。它以光量子辐射形式返回基态时，发出微绿色可见光。
鲁米诺增强化学发光的原理
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫测定示意图
临床医学检验技术(士)：免疫检验自动化仪器分析必看考点真题一
临床医学检验技术(士)：免疫检验自动化仪器分析必看考点真题一1、单选直接参与发光反应的标记物是（）A.吖啶酯B.碱性磷酸酶C.三联吡啶钌D.邻苯二胺E.磷酸酯正确答案：A参考解析：化学发光免疫分析中直接参与发光反应（江南博哥）的有吖啶酯类标记物；以催化反应或能量传递参与发光反应的有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶标记物；以能量传递参与氧化反应的非酶标记物有三联吡啶钌。
邻苯二胺和磷酸酯是酶底物。
2、单选最早应用于临床的自动化免疫分析技术为（）A.免疫散射比浊分析B.时间分辨荧光免疫分析C.速率散射比浊分析D.免疫透射比浊分析E.化学发光免疫分析正确答案：A参考解析：免疫散射比浊法是最早应用于临床的自动化免疫分析技术；速率散射比浊分析是以沉淀反应为基础，最早应用于检测抗原抗体反应第一阶段的自动化免疫分析技术；化学发光免疫分析是测定内分泌激素、肿瘤标志物和治疗性药物浓度方面应用最广泛的新技术。
3、单选在速率散射比浊法中，加入PEG的目的是（）A.减少伪浊度的形成B.增强抗原抗体复合物的稳定性C.降低抗原抗体复合物的稳定性D.加速抗原抗体复合物的形成E.减缓抗原抗体复合物的形成正确答案：D参考解析：促聚剂聚乙二醇(PEG)可加速抗原抗体复合物的形成，缩短反应和检测的时间。
4、单选Rayleigh散射是指（）A.当颗粒直径大于入射光波长的1/10时，散射光强度在各个方向的分布均匀一致B.当颗粒直径小于入射光波长的1/10时，散射光强度在各个方向的分布均匀一致C. 当颗粒直径大于入射光波长的1/10到接近入射光波长时，随着颗粒直径增大，向前散射光强于向后散射光D.当颗粒直径小于入射光波长的1/10到接近入射光波长时，随着颗粒直径增大，向前散射光强于向后散射光E.当颗粒直径大于或等于入射光波长时，随着颗粒直径增大，向前散射光远远大于向后散射光正确答案：B参考解析：当颗粒直径小于入射光波长的1/10时，散射光强度在各个方向的分布均匀一致，称为Ray-leigh散射；当颗粒直径大于入射光波长的1/10到接近入射光波长时，随着颗粒直径增大，向前散射光强于向后散射光，称为Debye 散射；当颗粒直径大于或等于入射光波长时，随着颗粒直径增大，向前散射光远远大于向后散射光，称为Mile散射。
临床免疫学检验技术
三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked
immunosorbent assay,ELISA）
• 3.竞争法 用于检测待检样本中未知抗原或抗 体。以测定抗体的竞争法为例, 将已知抗体吸 附于固相载体, 洗涤除去未结合抗体, ；加特 异性抗原与包被抗体形成固相抗原抗体复合 物, 洗涤除去游离抗原, 加标本和酶标抗体, 标 本中的抗体与酶标抗体竞争结合固相复合物 中的抗原。标本中的抗体越多, 其竞争力越强, 与固相抗原结合的酶标抗体越少, 加酶底物显 色, 有色产物的多少与酶标抗体量成正比, 与 被测抗体量成反比。如乙型肝炎总抗HBc的 检测、抗HBe的检测。。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 洗涤除去未结合的特异性抗原；加入针对特 异性抗原的酶标抗体, 此酶标抗体只与固相 上的特异性抗原结合。洗涤除去未结合酶标 抗体, 加酶底物反应, 色的多少与标本中特异 性IgM的量成正比。如甲肝(抗HAV-IgM)检 测、抗HBc-IgM的检测。
三、酶联免疫吸附试验（enzyme-
linked immunosorbent assay,ELISA）
• 根椐方法和步骤不同可分为以下几种基本反应模式。
• 1.间接法 是检测样本中特异性抗体最常用的方法。将已知特 异性抗原包被于固相载体上, 加待检样本, 若其中含特异性抗 体则与固相抗原结合形成抗原—抗体复合物；洗弃未反应的 成分, 加酶标记抗抗体（一般为酶标记抗人IgG或葡萄球菌A 蛋白）, 使在固相载体上形成抗原—待检抗体—标记抗体 （或SPA）复合物；洗弃未反应的成分, 加酶底物, 终止反应 后, 在一定波长下用酶标仪测吸光度（A）值判定待测抗体的 有无或含量。间接法的优点是制备 一种酶标记抗抗体（或 SPA）, 只需更换不同的固相抗原, 便可检测多种抗体。如 HCV-IgG抗体的检测
临床免疫检验自动化进展
临床免疫检验自动化进展卓蔡连【摘要】目的:由于免疫分析技术的高准确性和高特异性,其越来越多地用于临床检验,临床免疫检验自动化的进展十分迅速.方法:通过阐述临床免疫检验自动化的发展历程,归纳临床检验中免疫检验自动化的进展.结果:免疫检验随着临床免疫检验新技术新方法的不断问世,已从传统的手工操作的免疫学试验发展到了半自动化直到实现完全自动化.结论:临床免疫检验自动化技术不断发展,成为21世纪最主要的临床检验方法之一,更多地受到了重视和发展.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2011(008)002【总页数】3页(P57-59)【关键词】免疫检验自动化;进展【作者】卓蔡连【作者单位】广东省雷州市人民医院检验科,雷州,524200【正文语种】中文【中图分类】R446.1临床检验在临床需求的推动下，是应用电子、信息生物等学科的最新研究技术最多，发展最快的医学临床学科之一。
常规应用的大多数检验项目实现了自动化，项目测定的灵敏度、特异性大幅提高。
基础医学研究发现的新的或重新认识的生物标记物，不断地用于临床诊断，增加着临床检测项目。
由于免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，而且随着抗体和抗原制备技术的成熟及标记技术的发展和完善，免疫分析技术用于疾病诊断已成为临床检验应用的基本手段，检测水平从微量进入超微量。
1 免疫检验自动化的概念和现状1.1 免疫检验的自动化概念免疫检验自动化指用计算机代替人来控制仪器进行免疫分析。
这一概念包括3个方面的内容：①加样、试剂分配、洗涤以及测定过程的自动化。
②数据处理的自动化。
③能够及时向操作者提示仪器故障及初步的排除办法[1]。
1.2 免疫检验自动化的现状由于临床检验工作量不断增加，疾病传染性对工作人员构成的危险因素加大，同时对工作效率要求越来越高，因此对检验自动化要求越迫切。
七十年代起自动生化分析仪开始出现在临床实验室，到了九十年代免疫分析技术越来越成熟，其中化学发光技术、时间分辨荧光测定技术、荧光偏振免疫测定技术等分析技术不断引入免疫分析系统，这些免疫分析技术不但有较高灵敏度，而且特异性也较好，具有一定的抗干扰能力。
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选择原则
1.资质要求： 《企业法人营业执照》、《医疗器械 注册证》和《医疗器械生产/经营企业许可证》
2.性能要求： 性能指标（正确度、精密度、最低检 测限、线性范围和临床可报告区间、分析干扰等）；还应 考虑检验科内部仪器所组成检测系统的一致性和测定结果 的可比性。
3.仪器放置地的设施和环境条件 4.实验室项目检测速度要求和设备配置 5.信息要求 6.实验室检测项目的经济效益因素
酶联免疫测定的自动化分析是将酶联免疫吸附试验（ ELISA）各种操作步骤（加样—温育—洗涤—加酶结合物— 温育—洗涤—加底物—温育—比色等）进行自动机器操作， 实现自动化分析的免疫检测系统。
根据自动化酶联免疫分析系统的处理模式不同，通常将 全自动酶免分析仪分成二类：分体机和连体机。
分体机是由“前处理系统”即全自动样本处理工作站和 “后处理系统”即全自动酶免分析仪两个独立的部分组成。
仪器组成和性能
加样
仪器组成和性能
洗板
仪器评价
全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理工作站和 全自动酶免分析仪联合起来，工作速度快，自动化程度高 ，适合大批量样本的处理，如血站系统。
分体机，由于它有一个独立的全自动样本处理站，加 样速度快，适合试验项目变化多、样本批量不等的临床实 验室。
第五节 临床免疫检验自动化分析的选择与应用
时间分辨荧光免疫分析仪
auto DELFIA全自动时间分辨荧光免疫检测系统
荧光偏振免疫分析仪
是采用均相荧光免疫测 定原理设计的一台荧光免疫 分析仪。该仪器利用荧光物 质在溶液中被单一平面的偏 振光（波长485nm）照射后， 可吸收光能而产生另一单一 平面的偏振发射荧光（波长 525nm）。该荧光强度与荧光 标记物质在溶液中旋转的速 度与分子大小呈反比。常采 用抗原抗体竞争反应原理， 适用于小分子半抗原（如药 物浓度）的检测。
抗原抗体反应速率的动态变化
速率散射比浊法（rate nephelometry）
仪器测定技术要点： 开启机器，进行校准 反应阶段 抗原过量检测
免疫散射比浊仪
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
IMMAGE全自动特定蛋白分析仪
方法评价
散射比有快速、灵敏、准确、精密等优 点。
连体机是由多个模块组成，使用一台计算机、一套操作 系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂 、再孵育、洗涤、读数和结果打印的全自动过程。
仪器组成和性能
1.条形码识别系统 2.样本架和加样系统 3.试剂架 4.温育系统 5.液路系统 6.洗板系统 7.酶标板读数仪 8.自动装载传递系统 9.计算机管理和信息系统
顺磁性微粒示意图
Y
磁微粒标记抗体
磁微粒在
电磁场中分离
仪器测定技术要点
双抗体夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带丫啶 酯标记
物抗体
（1） 加入酸性H2O2 （pH<10）
（2） 加入碱 （pH>10）
冲洗后
发光
吖啶酯标记化学发光免疫分析仪
ACS：180 SE
ACS∶CENTAUR
i2000sr
ci8200
定时散射比浊法（fixed time nephelometry）
仪器测定技术要点： 1.抗原抗体预反应阶段 2.反应阶段 3.信号检测 4.抗原过剩检测 (1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限 定
速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗 体结合反应的动力学测定法。 所谓速率是指抗原抗体反应在 单位时间内形成免疫复合物的 量（不是免疫复合物累积的量 ），连续测定各时间复合物形 成的速率与其产生的散射光信 号联系在一起，形成动态的速 率散射比浊法，每项检测仅 1min～2min即可完成。
式I θ中为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入射光的波长和强度；
dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；
c为浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散射光与入射光
的夹角（散射夹角）。
定时散射比浊法（fixed time nephelometry）
第一章 血液标本采集与处理
临床免疫学检验技术
第十四章临床免疫检验的自动化 分析
陶志华
目录
第一节 免疫浊度测定的自动化分析 一、免疫散射比浊测定的自动化分析 二、免疫散射比浊测定的影响因素 第二节 发光免疫测定的自动化分析 一、吖啶酯标记化学发光测定的自动化分析 二、酶联发光免疫测定的自动化分析 三、电化学发光免疫测定的自动化分析 四、发光氧通道免疫测定的自动化分析
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析仪
该仪器采用辣根 过氧化物酶（HRP） 标记抗原或抗体、以 塑料锥形小管为固相 载体，鲁米诺为化学 发光剂，还利用增强 剂使化学发光强度增 加、时间延长。
鲁米诺是一种还原剂，在碱性溶液中被 H2O2氧化产生鲁米诺衍生物（激发态）。 它以光量子辐射形式返回基态时，发出 微绿色可见光。
检测原理： 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下， 加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一 阶段，溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取 的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射 比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射 光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专 门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误 差降到最低。
仪器测定技术要点
碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪
AXSYM全自动酶标记荧光免疫分析仪
电化学发光免疫分析仪
电化学发光免疫分析（ ECLIA）是一种在电极表面由电 化学引发的特异性化学发光反 应，它包括电化学和化学发光 两个过程。电化学发光免疫分 析仪是采用电化学发光技术， 生物素放大技术，以顺磁性微 粒为固相载体，用三联吡啶钌 标记抗原或抗体，三丙胺(TPA) 为电子供体，而设计的一种自 动化分析仪器。电化学发光稳 定、持续时间长，易于控制并 可根据待测分子的大小设计成 多种反应模式如夹心法、竞争 法等。
目录
第三节 荧光免疫测定的自动化分析 一、时间分辨荧光免疫测定的自动化分析 二、荧光偏振免疫测定的自动化分析 第四节 酶联免疫测定的自动化分析 第五节 临床免疫检验自动化分析的选择与应用 一、临床免疫检验自动化分析的选择原则 二、临床免疫检验自动化分析的临床应用
重点提示
临床免疫检验的自动化分析(automation of immunoassays)
仪器测定技术要点
抗原抗体结合 电化学发光反应 光信号检测 检测完毕
全自动电化学发光免疫分析仪
Modular Analytics E 模块170型
发光氧通道免疫分析仪
发光氧通道免疫分析 仪是一种整合了高分子纳 米微粒、免疫化学、CPM单 光子计数技术的新型的均 相化学发光免疫分析仪， 所采用的均相化学发光技 术具有快速、均相（免冲 洗）、高灵敏和操作简单 的特点。
有些免疫检验如免疫透射比浊则可采用全自动生化分 析仪进行检测，有些则整合在其它一些自动化分析系统中 ，如自动化血凝分析仪。
重点提示
通过本章学习，学生将全面掌握临床上 常用的全自动免疫分析仪的类型、仪器检测技 术要点和影响因素。
通过本章学习，学生还将了解临床实验 室选择选择原则和临床应用。
第一节 免疫浊度测定的自动化分析
仪器测定技术要点
以双抗体夹心法为例 1. 抗原抗体结合 将抗体包被感光微粒、抗体包被发光 微粒和待测标本加入反应杯中，经温育后，形成抗体包被感 光微粒-抗原-抗体包被发光微粒复合物。 2. 信号检测 用光子计数器计数得到相对光量子单位 (RLU)值，光的强度与待测抗原的浓度成正比，通过校准曲线 计算抗原浓度。
是将免疫学检验过程中的取样、加试剂、混合、温 育、固相载体分离、信号检测、数据处理、结果报告和检 测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，仪器自动完成整个 免疫检验过程。
重点提示
各种自动化免疫分析仪都使用一种或两种免疫分析技 术，如酶联免疫分析技术、生物素-亲合素技术、化学发 光分析技术、荧光偏振免疫测定技术、时间分辨荧光免疫 测定技术、电化学发光免疫分析技术等。
免疫散射比浊仪
粒子对光线的散射作用是溶液中 的微粒子受到光线照射后，微粒子对 光线产生反射和折射而形成散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度 与微粒的大小、数量、入射光的波长 和强度、测量角度等因素密切相关， 其公式如下：
Iθ＝ I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ4
免疫浊度分析的基本原理
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免 疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG等）的作用下，迅速 形成免疫复合物微粒（>19S），使反应液出现浊度。
在抗体稍微过量且 固定的情况下，形成的 免疫复合物量随抗原量 的增加而增加，反应液 的浊度亦随之增大，即 待测抗原量与反应溶液 的浊度呈正相关。
仪器测定技术要点
1. 抗原抗体反应 2.偏振荧光强度测定
注意事项
1.FPIA的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、 激发态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量和复合 物的特性等因素。
2.为提高FPIA灵敏度，可用除蛋白剂对标本进 行预处理，除去干扰成分。
第四节 酶联免疫测定的自动化分析
酶联免疫测定的自动化分析
酶联发光免疫分析仪
酶联发光免疫分析仪是用参与催化某一化学发光或 荧光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应后， 加入底物(发光剂)，由酶催化和分解底物发光，通过光 信号的强弱来进行被测物的定量。
常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷 酸酶(ALP)，常用的发光底物有鲁米诺、AMPPD和4-MUP 等。
鲁米诺增强化学发光的原理
仪器测定技术要点
全自动增强化学发光酶免分析仪