革兰氏染色操作规程
革兰氏染色法操作规程
革兰氏染色法操作规程革兰氏染色法操作规程1目的建立革兰氏染色法操作规程，确保革兰氏染色法操作规范化、科学化。
2范围适用于用革兰氏染色法对细菌进行分类和鉴定。
3职责3.1检验员：负责按本规程进行革兰氏染色操作。
3.2 QC主管、质量部经理：负责监督。
4内容4.1仪器与用具酒精灯、洁净的盖玻片、接种环、滴管、生物显微镜。
4.2材料4.2.1试剂结晶紫、番红、碘化钾、碘、95%乙醇、草酸铵、香柏油。
4.2.2试液及配制方法4.2.2.1 结晶紫染色液：称取结晶紫2g，溶于20ml 95%乙醇中；称取草酸铵0.8g，溶于80ml水中；将两种溶液混合，静置48h后使用。
4.2.2.2碘染色液：称取碘化钾2g，加5～10ml水使充分溶解，加碘1g，待完全溶解后，加水至300ml。
4.2.2.3 番红复染液：称取番红0.25g溶于10ml 95%乙醇中，然后加水100ml。
4.3操作步骤4.3.1 样品固片取一干净的载玻片，用接种环挑取一环无菌水于载玻片中，挑取少量菌于生理盐水中涂片或直接滴一滴待检菌在盖玻片中央，自然干燥固定。
4.3.2 初染滴加结晶紫染液于已固定的涂片上，染1min，用水冲洗、甩干。
4.3.3 媒染滴加碘染色液，液作用1min，用水冲洗、甩干。
4.3.4 脱色滴加95%乙醇脱色，置白色背景下，侧动盖玻片，直至无紫色脱落为止（约为20-30秒），立即用水冲洗、甩干。
4.3.5 复染滴加番红复染液，染1-2 min，用水冲洗、甩干。
4.3.6 镜检置油镜下观察。
先用低倍镜找准目标，于涂有样品处滴加香柏油一滴，用油镜观察。
4.3.7 结果判定革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常呈假阳性。
4.4 注意事项4.4.1 待检菌菌龄应为18～24h。
一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较稳定，不易受菌龄长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24h可变为阴性。
细菌革兰氏染色步骤
细菌革兰氏染色步骤
革兰氏染色是一种常用的细菌分类鉴定方法。
步骤如下：
1.准备细胞液片：将待染菌液滴在干净玻璃片上，并用火炉或灯火加热使其干燥。
2.固定菌液：用无定形火烧的镊子将玻璃片持在火炉/灯火上，烧过3-4次，让菌液固定在玻璃片上。
3.染色：将玻璃片浸入染色剂——紫晶染液中，静置1分钟。
4.漂洗：立即用水把紫晶染剂冲洗掉。
5.涂酒精：用乙醇涂抹菌液，使不产生色素复合物的细胞膜变性。
6.漂洗：用水把酒精冲洗掉。
7.染色：将玻璃片浸入染色剂——碘化钾液中，静置1分钟。
8.漂洗：用水把碘酸盐冲洗掉。
9.溶解：滴一两滴乙醚或丙酮，使不固定的染色剂冲出来，然后用热空气烘干涂片。
10.观察镜检：在显微镜下观察细胞的颜色和形态，区分不同的细菌群体。
革兰氏染色后，属于革兰氏阴性细菌的菌落呈现出红色或粉红色，而属于革兰氏阳性细菌的菌落呈现出蓝紫色或崩溃的黑色。
革兰氏染色法的步骤
革兰氏染色法的步骤革兰氏染色法的步骤革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法。
它根据细菌细胞壁的结构和化学成分，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
下面将详细介绍革兰氏染色法的步骤。
一、准备工作1.1 器材准备首先要准备好必要的器材，包括显微镜、无菌玻璃片、无菌钢笔、灯笼或 Bunsen 灯、草酸洗涤液、碘酒、脱色剂（95% 乙醇）、甲苯或二甲苯等。
1.2 样品准备样品可以是从患者体内采集的分泌物或组织样本，也可以是实验室中培养出来的纯种菌株。
无论哪种样品，都需要进行处理以获得高质量的染片。
二、染色操作2.1 制备涂片将无菌玻璃片取出并标记，然后用无菌钢笔在玻璃片上滴上一滴水或生理盐水。
取一小部分样品，用钢笔或无菌棉签将其涂抹在涂片上，制成薄而均匀的染片。
2.2 固定细胞将涂片用灯笼或 Bunsen 灯加热，使其完全干燥。
然后将涂片固定，可以使用草酸洗涤液或甲醛等固定剂进行固定。
2.3 染色操作（1）革兰阳性菌的染色操作① 将碘酒滴在涂片上，静置 1 分钟。
② 用脱色剂（95% 乙醇）冲洗涂片，直到洗出的颜色不再变深。
③ 用甲苯或二甲苯清洗干净，并在空气中晾干。
（2）革兰阴性菌的染色操作① 将甲基红溶液滴在涂片上，静置 1 分钟。
② 用脱色剂（95% 乙醇）冲洗涂片，直到洗出的颜色不再变深。
③ 将碘酒滴在涂片上，静置 1 分钟。
④ 用脱色剂（95% 乙醇）冲洗涂片，直到洗出的颜色不再变深。
⑤ 用甲苯或二甲苯清洗干净，并在空气中晾干。
三、观察和解释结果使用显微镜观察染色后的涂片。
革兰阳性菌会呈现紫色或暗紫色，而革兰阴性菌则会呈现红色或粉红色。
根据细菌的染色结果，可以推断出其细胞壁的结构和化学成分，进而进行分类和鉴定。
总结革兰氏染色法是一种简单而可靠的细菌分类和鉴定方法。
其步骤包括制备涂片、固定细胞、染色操作以及观察和解释结果。
通过这种方法，可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，并推断出其细胞壁的结构和化学成分，为临床诊断和治疗提供重要参考依据。
革兰氏染色步骤6则
革兰氏染色步骤6则以下是网友分享的关于革兰氏染色步骤的资料6篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
革兰氏染色步骤（1）革兰氏染色步骤步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1、涂片固定。
2、草酸铵结晶紫染1分钟。
3、自来水冲洗。
4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5、水洗，用吸水纸吸去水分。
6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7、蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
染色后，革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。
细菌分类：革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
革兰氏染色法的步骤（2）详细阐叙革兰氏染色法的步骤浏览次数：174次悬赏分：0 | 解决时间：2011-5-25 17:44 |提问者：肖箫2011shaw最佳答案革兰氏染色一、目的：在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
二、原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色标准操作规程 sop文件
微生物室SOP文件-革兰氏染色标准操作规程原理本染色是最基本的染色法，染色结果将细菌分为革兰阳性（紫色）和革兰阴性（红色）两类，可用于标本涂片或菌落涂片。
标本采集与处理选择正确生理部位和采集合适的标本及其正确运送等环节至关重要。
而所有与标本质量有关的检验工作者必须要了解在整个实验过程中保证标本质量的重要性和必要性。
标本的选择与采集：采集送检标本前，标本选择的种类和采集部位必须反映有效病程。
一个没有有效病原体的标本是没有临床诊断价值的。
要避免常居菌群随时可能造成的污染，以确保取得反映感染过程的典型标本。
标本的送检:所有标本都必须立即送往实验室，最好在2小时内。
如不能及时送检，细菌病原体待检标本应按规定条件下存放，通常用于细菌学检验的标本的存放不要超过２４小时。
临床标本或传染性材料从一个实验室到另一个实验室的送检，不论距离长短，都要求严格注意标本的包装和标签说明。
所要运送的材料必须贴上适当的标签，包装得当。
送检期间要予以安全防护。
试剂制备：结晶紫溶液:A液：结晶紫2.0g95%乙醇20mlB液：草酸铵0.8g蒸馏水80ml用前24h将A、B液混合，过滤后装入试剂瓶备用。
碘液碘1.0g碘化钾2.0g蒸馏水300ml将碘与碘化钾混合研磨，加少许水至完全溶解。
最后补足水量。
脱色液（丙酮酒精）95％酒精97ml丙酮3ml稀释复红石碳酸复红10ml蒸馏水90ml染色方法涂片经火焰固定，加结晶紫液染1分钟，清水冲洗。
加碘液染1分钟，清水冲洗。
加丙酮酒精脱色，不时摇动约15-25秒，至无紫色脱落为止，清水冲洗。
加稀释复红染15-25秒，清水冲洗。
干后镜检。
注意事项染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。
体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。
提高责任心，做到全片检查。
临床意义将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两大类，有助于进一步鉴定。
还可为临床选择用药提供参考，帮助临床制订有针对性的治疗方案。
革兰氏染色法步骤及注意事项
1. 准备细菌涂片：将待染菌株取一小滴放在玻璃片上，用铅笔头部画成细 线，形成细菌涂片。
2. 固定：将细菌涂片在火焰上反面向上加热，使细菌附着在玻璃片上。 3. 染色： a. 涂上紫晶液：将细菌涂片浸入紫晶液中，静置 1 分钟。 b. 冲
1. 操作环境应保持干净，并采取无菌操作，以避免外界细菌污染。 2. 手套、眼镜和实验室外套是必需的个人防护装备。
3. 严格遵守安全操作规程，如避免将染料接触到皮肤或进入口鼻。
4. 使用优质的试剂和试验器材，以确保结果的准确性。
5. 注意控制染Βιβλιοθήκη 时间和冲洗时间，过长或过短都可能影响染色效果。
6. 在观察细菌涂片时，使用适当的显微镜镜头和光源，以获得清晰的图 像。
洗：用蒸馏水或脱离水轻轻冲洗玻璃片，以去除多余的紫晶液。 c. 酒 精洗涤：滴加酒精洗涤玻璃片，使其被酒精覆盖，持续洗涤 15-30 秒。 d. 再次冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除酒精。 e. 涂上碘液： 滴加碘液覆盖细菌涂片，静置 1 分钟。 f. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片，以去除多余的碘液。 g. 酒精洗涤：滴加酒精洗涤玻璃片，使其被 酒精覆盖，持续洗涤 15-30 秒。 h. 再次冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃 片，以去除酒精。 i. 涂上脱色剂：滴加脱色剂覆盖细菌涂片，持续涂覆 15-30 秒。 j. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除脱色剂。 4. 染色：将细菌涂片滴上红色染料（如苏丹三染料）覆盖细菌，静置 1 分 钟。 5. 冲洗：用蒸馏水轻轻冲洗玻璃片，以去除多余的染料。 6. 干燥：将细菌涂片放在通风处晾干，或用吹风机低温吹干。 7. 观察：将干燥的细菌涂片放在显微镜下观察，细菌将呈现出紫色或蓝色 的革兰氏阳性颜色，而其他微生物将呈现出红色的革兰氏阴性颜色。 注意事项：
革兰氏染色标准操作规程
革兰氏染色标准操作规程1、目的
确保染色结果清晰可靠。
2、范围
球菌、杆菌和弧菌染色
3、职责
临床微生物实验室当班工作人员认真按程序文件操作。
5、试剂
5.1结晶紫溶液
A液：结晶紫2g
95%乙醇20ml
Β液：草酸铵0.8g
蒸馏水80ml
使用前24小时将A液Β液混合后，过虑后装入试剂瓶内备用。
5.2碘液
碘1g
碘化钾2g
蒸馏水300ml
5.3脱色液：95%乙醇
5.4复染液
储存液：沙黄2.5g
95%乙醇100ml
应用液：储存液10ml
蒸馏水90ml
6、工作程序
6.1待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥后用火焰固定。
6.2加结晶紫液染1分钟，清水冲去染液。
6.3加碘液染1分钟，清水冲去染液。
6.4加95%乙醇脱色液，不时摇动约10-30秒钟，至紫色已脱落为至，水冲洗。
6.5加复染液（伊红），染30秒钟，水冲洗。
6.6待涂片自然干燥后，油镜镜检。
7、质量控制
金黄色葡萄球菌为革兰氏染色阳性,大肠埃希菌为革兰氏染色阴性。
8.参考文献
中国人民共和国卫生部医政司编.《全国临床检验操作规程》（第三版）.2006, 第六篇P725。
简述革兰染色法的操作步骤
简述革兰染色法的操作步骤革兰氏染色法：也称革兰氏阴性染色法。
属于活细胞染色法，也是初中阶段接触的细菌学基本技术之一。
此法特别适合观察病毒的形态，故常作为临床微生物实验中重要的染色方法。
简述革兰氏染色法的操作步骤一般方法如下：(1)检查试管，将所需的培养基配制好并检查是否均匀。
(2)液体试剂的制备：取无菌的结晶紫注射液0。
5ml，精氨酸0。
5ml， 0。
01%升汞液2。
5ml，蒸馏水150ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(3)固体试剂的制备：取无菌的结晶紫指示液0。
5ml，精氨酸0。
5ml，蒸馏水50ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。
(4)稀释：在试管内分别加入精氨酸0。
5ml，无菌水20ml，再加蒸馏水至9ml，摇匀，用结晶紫指示液染色20分钟，并随时注意结晶紫是否变蓝，必要时可轻轻摇动或加热。
(5)加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
(6)加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
(1)检查试管，吸出液体试剂，吸干，检查。
(2)准确量取需用量(或先倒在烧杯中，再用量筒量)，检查药液浓度。
(3)用酒精灯火焰点燃试管内的培养基，分别在每管中加入1。
0ml培养基，将试管放回37 ℃温箱中培养。
(4)观察并记录细菌生长情况。
第一，培养时间应足够，以获得足够的细菌数量；第二，以提高对细菌生长曲线的观察能力；第三，缩短细菌培养时间有利于分离、纯化细菌。
(5)取出试管，观察染色的结果。
如果菌落周围染色较浅，表明染料被细菌分泌物包绕，菌体呈现模糊状态；反之，菌落周围染色较深，则表明细菌染色质集中，结构明显。
①加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。
②加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。
革兰氏染色的正确步骤
革兰氏染色的正确步骤
革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。
这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系，后推广为鉴别细菌种类的重要特性之一，对由细菌感染引起的疾病的临床诊断及治疗有着广泛用途。
步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）蒸馏水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）番红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。
干燥，镜检。
革兰氏染色操作规程
1 目的
建立微生物实验室细菌形态和主要构造检验方法，以鉴定菌种。
2 范围
本规程适用于我司革兰氏染色测试实验。
3 职责
质量部微生物实验员负责按此规程进行革兰氏染色测试。
4 染液的配制
4.1 0.5%结晶紫染色液
称取1g结晶紫，放入250ml试剂瓶中，加95%乙醇2ml,溶解后加入200ml蒸馏水摇匀即可。
4.2 革兰氏碘液
分别称取碘 1g和碘化钾2g放入蒸馏水300ml中，溶解摇匀即可。
4.3 脱色剂
95%乙醇
4.4 复染液（番红染液）
称取番红0.25g，加入10ml 95%乙醇内，然后用90ml蒸馏水稀释，摇匀即可。
5 革兰氏染色程序
5.1 涂片
用纱布擦净载玻片，以无菌接种环取一小滴无菌生理盐水，然后用无菌接种环挑取少数菌苔（菌落）或液体培养物（不必加生理盐水），在玻璃片中央涂成一薄膜。
5.2 干燥
涂片后放室温中自然干燥。
5.3 固定
将载玻片迅速通过火焰三次（其目的是杀死细菌），使菌体与载玻片粘附牢固，以及改变对染料的通透性。
5.4 初染
滴加结晶紫染液于已固定的载玻片上，染1min，水洗。
革兰氏染色法操作规程
革兰氏染色法操作规程一、实验准备1.工作台、培养瓶、试管、移液器等必需设备材料的清洁和消毒。
2.需要的培养基、试剂和染色剂的准备。
3.微生物实验室内的操作区域消毒。
4.需要检测的细菌样本，应是新鲜培养的活菌。
二、实验步骤1.将培养的细菌接种物涂布于平板培养基上，培养时间一般为16小时到24小时，以获得足够数量的活菌。
2.取一到两个细菌菌落，用无菌吸铬钢线将菌落挑取，加入到新鲜制备的无菌蒸馏水中制备细菌悬浮液。
3.将细菌悬浮液分装到无菌试管中，并对其进行标记以便辨别。
4. 将试管放入无菌离心机进行离心处理，离心速度一般为3000rpm，离心时间约为5分钟。
5.取出离心后的试管，将离心液倾倒掉，保留细菌沉淀。
6.用无菌注射器吸取一定量的蒸馏水，在细菌沉淀中做三次洗涤，每次洗涤后进行离心处理。
7.吸尽洗涤液后，用吸水纸吸去残余水分，使细菌沉淀尽量干燥。
8.用火焰消毒的铅笔划定干净试验玻片两侧的带标记区域。
9.取少量细菌沉淀用铅笔将其在试验玻片上涂成条状。
10.将涂有菌液的玻片放置在火焰中加热烘干，将菌液固定在玻片上。
11.将固定好的玻片依次进行以下操作：(1)滴加革兰氏碘液，静置1分钟。
(2)用蒸馏水清洗草绿色的碘液，盖过玻片的边缘。
(3)滴加酒精洗涤剂(80%)，使玻片浸泡在酒精中，30秒内亮紫色的溢出。
(4)用蒸馏水冲洗玻片，直至玻片溢出无色为止。
(5)滴加索式葡萄染料，使玻片完全覆盖，静置30秒。
(6)用蒸馏水冲洗玻片，直至落出少量菌落。
12.用吸水纸将玻片表面水分吸干，然后放置在通风处晾干。
13.晾干后的玻片放到显微镜下，用油镜检测。
14.观察和记录细菌的形态特征，包括革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的结构差异。
三、实验注意事项1.所有的试剂和设备都要经过严格消毒处理，防止外部污染。
2.操作过程中要注意无菌操作，避免细菌受到污染。
3.离心过程中要注意离心机的平衡，以免产生震动。
4.细菌沉淀尽量干燥，以便于后续染色步骤。
革兰氏染色镜检的操作规程
革兰氏染色镜检的操作规程革兰氏染色镜检的操作规程1.目的：鉴定G阳性菌.G阴性菌（球菌、杆菌、真菌）。
指导临床用药。
2.原理：革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gtam所创立的，此方法可将所有的细菌分G+和G-两大类，G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染性的颜色。
3.实验器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。
4.试剂：4.1试剂来源：购买，四川迈克。
4.2试剂合组成:R1结晶紫1χ10ml R2碳酸钠1χ10 mlR3碱性碘液1χ10ml R4丙酮酒精1χ20mlR5碱性复红1χ10ml5.标本采集与处理：5.1阴道,子宫等分泌物应由医生采集,收集于无菌试管内送检。
5.2载玻片的预处理:5.2.1载玻片用前以９５％乙醇擦拭脱脂，经干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片。
5.2.2在玻片背面一端的1/3处注明编号。
5.3涂片：5.3.1用棉签可直接在玻片上均匀涂抹.5.3.2菌液涂片时,用接种环沾取菌液,点在玻片上.,在盐水中涂布。
6.染色方法:6.1将标本均匀涂布于玻片上,自然干燥,火焰固定。
6.2冷却后加R1、R2各两滴初染30秒后水洗。
6.3用R3媒染30秒.水洗后用R4脱色至无兰色脱落为止(约有5-10秒),水洗。
5.4用R5复染5秒,水洗,待干,镜检。
7.镜检:7.1取已干燥的涂片,用低倍镜览片,再用高倍,最后用油镜观察,并在已干燥的涂片滴1-2滴香柏油,仔细观察.7.2判断菌体的革兰氏染色反应性,呈紫色为G+菌,呈红色为G-.8.报告方式:检出革兰氏阳性球菌,革兰氏阳性球菌.检出革兰氏阴性球菌，革兰氏阴性球菌。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。
该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。
本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。
一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。
1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。
待菌落完全干燥后，即可开始染色。
二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。
将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。
此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。
2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。
革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。
2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的碘液。
2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。
乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。
2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
这一步是为了去除多余的乙醇。
2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。
碱性紫的作用是染色细菌细胞。
2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。
2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。
确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。
三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。
革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。
通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。
需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。
细菌革兰氏染色法标准流程
细菌革兰氏染色法标准流程细菌革兰氏染色法是一种常用的鉴别染色法，它能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
下面是细菌革兰氏染色法的标准流程：
1.涂片固定：将细菌培养物均匀涂布在玻璃片上，并使其干燥。
2.火焰固定：用火焰将涂片上的细菌固定在玻璃片上。
3.草酸铵结晶紫染液染色：将涂片放入草酸铵结晶紫染液中，染1分钟。
4.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的染液。
5.碘液媒染：将涂片放入碘液中，媒染1分钟。
6.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的碘液。
7.脱色：将涂片放入95%酒精中，脱色20秒。
8.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的酒精。
9.蕃红染色液复染：将涂片放入蕃红染色液中，复染2分钟。
10.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的蕃红染色液。
11.干燥：将涂片干燥，以便于显微镜观察。
12.显微镜观察：将涂片放在显微镜下观察，根据细菌的革兰氏染色结果进行分
类鉴定。
需要注意的是，在进行革兰氏染色时，应按照规定的步骤进行操作，每一步的操作时间和温度也需要严格控制。
此外，为了提高革兰氏染色的准确性和可靠性，需要使用新鲜的染液和媒染液，并在使用前进行过滤处理。
同时，对于不同的细菌种类和不同的实验目的，可能需要调整染色时间和媒染时间等参数。
总之，细菌革兰氏染色法是一种重要的细菌鉴别方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于细菌的分类、鉴定和治疗具有重要的意义。
在进行革兰氏染色时，需要按照规定的流程进行操作，并注意控制实验条件和提高实验技巧，以提高革兰氏染色的准确性和可靠性。
革兰氏染色技术操作方法
革兰氏染色技术操作方法
1、将待染细胞涂片在室温下空气干燥；
2、固定：在干燥细胞涂片上加入固定液，室温下静置10分钟；
3、洗涤：用蒸馏水冲洗干燥细胞涂片；
4、染色：加入革兰氏染色剂液，室温下静置1分钟；
5、洗涤：用蒸馏水冲洗干燥细胞涂片；
6、脱色：滴加脱色液，室温下轻轻晃动，直至出现清晰的紫-蓝-紫三色带；
7、洗涤：用蒸馏水冲洗干燥细胞涂片；
8、除水：在空气中干燥细胞涂片。
注意事项：
1、固定液和脱色液均为有毒溶液，操作时必须戴手套，并注意通风保护；
2、染色时间和脱色时间不宜过长，否则会使细胞结构模糊或丢失；
3、洗涤和除水时要充分清洗，否则会影响染色质量；
4、在使用前要检查染色剂液的pH值，若过酸或过碱会影响染色效果。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法，是细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色法，其主要步骤如下：
（1）制片
取活跃生长期的菌种培养物常规涂片、干燥、固定。
涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。
（2）初染
滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，水洗。
（3）媒染
用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。
（4）脱色
用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，加入95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。
脱色时间一般为20-30s。
（5）复染：
用番红液复染约2min，水洗。
（6）镜检：
干燥后，用油镜观察。
菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色的操作流程及操作技术要点
革兰氏染色的操作流程及操作技术要点下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法的步骤包含涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥观察共11步，应注意把握涂片的薄厚、加热温度，脱色时间及各染液质量。
1.涂片：在灭菌后的载玻片中央滴一滴待检样品，用烧红冷却后的接种环将液体铺匀。
2.干燥：载玻片置于酒精灯上加热至水分蒸发。
3.固定：载玻片在酒精灯火焰上快速过2至3次，用2至3秒后待冷却。
4.初染：滴加1至2滴草酸氨结晶紫染液，染色时间约一分钟。
5.水洗：用小水流冲洗载玻片，冲洗至水呈无色。
6.媒染：滴适量革兰氏染液，染色时间约一分钟。
7.水洗：同步骤5。
8.脱色：在载玻片上滴加95％乙醇，至流下乙醇不呈紫色，大约用时半分钟后水洗。
9.复染：滴加1至2滴沙黄染液，染色时间约一分钟。
10.水洗：同步骤5。
11.干燥、观察：待标本片干燥后观察，紫色为革兰氏阳性菌，红色为革兰氏阴性菌。
环境微生物：革兰氏染色
球菌
肺炎链球菌
杆菌
炭疽杆菌
破伤风杆菌
肉毒芽孢杆菌
杆菌
变形杆菌
大肠杆菌
绿脓杆菌
螺菌
幽门螺杆菌
霍乱弧菌
钩端螺旋体
感谢观看，欢 迎批评指正源自菌体呈红色的为革兰氏阴性菌（G-）
一、革兰氏染色步骤
3.媒染— 碘-碘化钾 溶液浸湿
1min
4. 脱色—95%乙醇溶液 进行颜色洗脱30s
5.复染—红色
的藩红染液第
二次染色1min
细菌呈现第一次染色的效果紫色，
革兰氏阳性菌（紫阳G+）；
• 呈现第二次染色的效果红色；称
革兰氏阴性菌（红阴G -）
革兰氏染色
革兰氏染色步骤 革兰氏染色原理
革兰氏染色
革兰氏染色—由丹麦科学家 Gram在1884年建立，是细菌学上最 重要的鉴别染色法。通过革兰氏染 色法可将细菌分成革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌两大类。
革兰氏染色
1884年，丹麦医生C.Gram发明 程序： （1）初染（结晶紫1-2min） （2）媒染剂（碘液1min） （3）脱色（95%乙醇20~30S） （4）复染（蕃红1 ~ 2min） 结果判断：菌体呈紫色的为革兰氏阳性菌（G+）
二、革兰氏染色原理
为什么通过革兰氏染色G+呈兰色，G-呈红色？
①脱色剂----95%乙醇为脂溶剂破坏G﹣的外膜、肽聚 糖层和 细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的 复合物从细胞中渗漏出来，当再用藩红复染时，显 现红色。
②但在G+细胞中，乙醇使厚的肽聚糖层脱水，导致孔 隙变小， 由于结晶紫和碘的复合物分子较大，不能 通过细胞壁，保持紫色。
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革兰氏染色操作规程
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
1.原理
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色
2.步骤
（1）涂片：在一片干净的载玻片，滴上一滴蒸馏水。
用接种环挑取可疑菌落，均匀的涂在载玻片上。
（2）晾干：置通风处晾干。
（3）固定：将载玻片在酒精灯火焰上迅速的来回几次。
（4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟。
（5）水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。
（6）媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min。
（7）水洗：用水洗去碘液。
（8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。
（9）复染：滴加蕃红复染5min。
（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。
（11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。
（12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。
3.实验完毕后的处理：
①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。
b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。
c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。
注意擦镜头时向一个方向擦拭。
②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干。