海藻玉壶汤中加减高剂量甘草与不同品种海藻的毒性表征及机制探讨

海藻玉壶汤中加减高剂量甘草与不同品种海藻的毒性表征及机

制探讨

研究背景:海藻与甘草属于反药组合,文献中多有记载反药组合不可配伍使用,现代临床也有少部分关于其不良反应的报道,但古今临床上仍有医家将其配伍应用且不乏取得良好疗效者,含海藻甘草反药组合的海藻玉壶汤更是临床治疗多种疾病的常用方。随着人们对药物安全性意识的不断增高,关于海藻甘草反药组合的问题也引起了诸多思考和争议,也进行了诸多的实验研究。海藻甘草二者本属无毒中药,其配伍禁忌的本质究竟如何。

总结之前的实验研究我们可以发现,关于海藻、甘草单味药和反药药对的研究较多,关于临床常用方海藻玉壶汤的研究较少,而临床多使用复方辨证加减方取得较好疗效;在生理状态下进行的研究较多,而临床应用海藻甘草基本都在病理条件下;海蒿子和羊栖菜都可以作为入药品种,现代药理实验也表明二者的化学成分和药理活性不尽相同,但研究中少提及海藻的品种问题,缺少不同品种的对比研究。因此本课题组前期在甲状腺肿大病理模型下,针对海藻的不同品种(海蒿子/羊栖菜)与甘草在海藻玉壶汤中进行量-毒-效关系及机制的研究,本研究在前期研究基础上继续进行海藻不同品种与甘草以2015版《中华人民共和国药典·一部》(以下简称《中国药典》)规定剂量高限的5倍在海藻玉壶汤中加减应用对甲状腺肿大大鼠的毒性表征及机制的探讨。研究目的:在前期研究基础上,探讨海藻不同品种与甘草以《中国药典》规定剂量高限的5倍在海藻玉壶汤中加减应用,对甲状腺肿大大鼠心脏、肝脏、肾脏、血液系统及血清氧化抗氧化系统的毒性表征及机制的影响,从而进一步探讨其发生作用是否与不同品种的海藻有关,是否与海藻甘草反药组合在复方中的加减应用有关,从而更好的发掘完善中

药配伍禁忌理论的本质,为临床组方应用的合理性、安全性、科学性提供一定的依据。

研究方法:1毒性表征:在课题组前期研究的基础上,海藻(海蒿子/羊栖菜)

与甘草的剂量选用《中国药典》规定剂量高限的5倍,将大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、含海蒿子的海藻玉壶汤去甘草组(以下简称海蒿子去甘草组)、含羊栖菜的海藻玉壶汤去甘草组(以下简称羊栖菜去甘草组)、海藻玉壶汤去海藻组(以下简称去海藻组)、含海蒿子的海藻玉壶汤全方组(以下简称海蒿子全方组)、含羊栖菜的海藻玉壶汤全方组(以下简称羊栖菜全方组)、海藻玉壶汤去海藻甘草组(以下简称去海藻甘草组),除空白组外其余各组均灌服丙硫氧嘧啶(PTU)复制

甲状腺肿大模型,以优甲乐作为阳性对照药。检测血清肝功能、肾功能、心功能、血清氧化抗氧化相关指标、血细胞参数及心、肝、肾组织病理形态变化,观察海藻不同品种与甘草以《中国药典》规定剂量高限的5倍条件下在海藻玉壶汤中加减应用,对甲状腺肿大大鼠心、肝、肾、血液及氧化抗氧化系统毒性表征的影响。

2机制探讨:检测肝组织CYP2E1、CYP3A1mRNA及CYP2E1蛋白的表达,探讨肝药酶的活性对药物代谢的影响;检测肝组织Nrf2、HO-1mRNA的表达,探讨氧化应激对肝组织产生作用的机制;检测肾脏PGC-1α mRNA及蛋白的表达,探讨线粒体功能障碍对肾脏组织的作用机制。

研究结果:1含高剂量海藻不同品种与甘草反药组合在海藻玉壶汤中加减应

用对甲状腺肿大大鼠毒性表征的影响1.1肝脏:与空白组比较,模型组肝脏系数,血清ALT、AST、TP、ALB、GLB未见明显变化,光镜下观察,肝脏组织结构正常;

羊栖菜去甘草组、去海藻组、羊栖菜全方组、去海藻甘草组ALT、AST、TP、ALB、GLB升高,肝脏细胞偶见脂肪空泡;海蒿子去甘草组与海蒿子全方组ALT、AST、TP、

ALB、GLB未见明显变化,光镜下观察,肝脏组织结构正常;海蒿子、羊栖菜分别与甘草配伍对肝脏显示出了不同的趋向作用,但二者之间无明显差异。1.2肾脏:与空白组比较,模型组肾脏系数,血清BUN、Cr、UA、Na+、K+、尿β2-微球蛋白、尿EGF、尿LDH无显著差异,光镜下,肾皮质、髓质未见明显异常;而羊栖菜去甘草组、羊栖菜全方组、去海藻甘草组血清BUN、Cr升高,光镜下可偶见肾小管上皮细胞肿胀空泡变性、肾小球囊缩小,去海藻甘草组K+、β2-微球蛋白、尿EGF 升高,余下各给药组未见明显异常。1.3心脏:与空白组、模型组、阳性药组比较,各给药组心脏系数均降低;与空白组比较,去海藻组和羊栖菜全方组CK值升高、LDH无明显变化,余下各给药组CK、LDH均无显著变化;光镜下观察各给药组心脏组织未见明显损伤。

1.4血细胞参数:与空白组比较,模型组及各给药组RBC、HGB、HCT、WBC、PLT 无显著差异,海蒿子全方组与羊栖菜全方MCV、MCH、MCHC均正常,而海蒿子去甘草组、羊栖菜去甘草组、去海藻组、去海藻甘草组的MCV、MCH均降低。1.5血清氧化抗氧化系统:与空白组比较,各给药组SOD未见明显变化,模型组GSH-Px、XOD、H202无明显差异,羊栖菜全方组GSH-Px、XOD、H2O2均升高,羊栖菜去甘草组GSH-Px、H202升高,PTU导致了模型组MDA的升高,除海蒿子去甘草组MDA恢复正常外,余下各给药组MDA含量与模型组无差异。2含高剂量海藻不同品种与甘草反药组合在海藻玉壶汤中加减应用对甲状腺肿大大鼠毒性表征的相关机制探讨

2.1对肝脏CYP450酶的影响:与空白组比较,PTU显著诱导了模型组

CYP2E1mRNA的表达,各给药组均纠正了CYP2E1mRNA的过高表达,各给药组对CYP3A1mRNA和CYP2E1蛋白的表达无明显影响。

2.2对肝脏Nrf2/HO-1通路影响:与空白组比较,PTU显著抑制了模型组

Nrf2mRNA的表达,海蒿子去甘草组和海蒿子全方组Nrf2mRNA表达恢复正常,余下各组与模型组无差异;PTU对HO-1mRNA的表达无影响,海蒿子去甘草组、海蒿子

全方组明显诱导了HO-1mRNA的表达,余下各组未见明显差异。2.3对肾脏PGC-1α基因及蛋白表达的影响:各给药组对PGC-1α mRNA的表达无显著差异,其中海蒿子去甘草组有诱导肾脏PGC-1αmRNA的表达的趋势,余下各给药组PGC-1 αmRNA的表达均有降低的趋势;各给药组对PGC-1α蛋白的表达无显著影响。研究结论:1海藻不同品种与甘草反药组合以《中国药典》规定剂量高限的5倍在海

藻玉壶汤中加减应用,羊栖菜去甘草组、去海藻组、羊栖菜全方组、去海藻甘草组肝脏功能受到一定影响,并反应性促进了肝脏蛋白合成功能,余下各组未见明

显异常;PTU诱导了MDA的产生,羊栖菜全方组和羊栖菜去甘草组氧化抗氧化功能失调Nrf2/HO-1通路激活障碍,而海蒿子全方组及海蒿子去甘草组通过促进Nrf2、HO-1mRNA的表达增加了抗氧化能力一定程度上可以保护肝脏组织免受过氧化物

的损害,海藻不同品种在海藻玉壶汤中加减应用对肝脏组织体现出了不同的趋向作用,但品种之间未见明显差异。

2海藻不同品种与甘草反药组合以《中国药典》规定剂量高限的5倍在海藻玉壶汤中加减应用,各给药组均纠正了PTU诱导的CYP2E1mRNA的过高表达,但各给药组之间无明显差异,各给药组对CYP2E1蛋白和CYP3A1mRNA的表达无明显影响,可能与CYP2E1不同亚型基因表达的多种调节方式和功能差异导致其基因表

达和蛋白表达存在差异性,海藻不同品种与甘草配伍可能不通过调节CYP3A1基

因的表达来产生致毒增毒或减效的作用,后期尚需结合CYP2E1与CYP3A1各自的酶活性与基因、蛋白表达进一步讨论。3海藻不同品种与甘草反药组合以《中国药典》规定剂量高限的5倍在海藻玉壶汤中加减应用,羊栖菜去甘草组、羊栖菜