培养基配制标准操作规程
培养基配制及适用性检查标准操作规程
目的：建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。
范围：适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。
依据：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部职责：1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。
2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。
内容1 培养基的申购根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。
申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。
2 培养基的验收2.1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。
验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。
2.2 验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。
3 培养基的贮藏3.1未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。
已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。
3.2灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。
灭菌后培养基储存期为7天。
4 培养基的配制4.1培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。
4.2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。
配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。
（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01）4.3培养基配制方法4.3.1 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。
实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。
微生物实验操作规范
细菌实验操作部分㈠培养基的配置操作步骤1.称量：按培养基配方比例依次准确称量放入烧杯中（用称量勺，称量纸和电子天平）。
2.在烧杯中先加入少量所需蒸馏水，用玻璃棒搅匀，然后再石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底。
3.调pH：在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基pH值，如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用pH试纸测，反之用1mol/L HCL。
4.分装：（1）液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
（2）固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
（3）半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
5.加塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞或硅胶塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。
6.包扎：加赛后，将全部试管用皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸（报纸即可），以防止灭菌时冷凝水润湿。
用记号笔注明日期名称。
7.灭菌：将上述培养基放入121摄氏度，20分钟高压蒸汽灭菌。
8.搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷至50°C左右，将试管塞端搁在玻璃帮上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
9.无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24至48小时，以检查灭菌是否彻底。
几种常用培养基成分1．LB Medium (LB 培养基)Yeast extact (酵母膏) 5g Peptone (蛋白胨) 10gNaCl 10g Agar (琼脂) 1-2%Distilled water (蒸馏水) 1000ml pH 7.0适用范围：大肠埃希氏菌（大肠杆菌）2.Trypton Soy Agar胰蛋白胨17.0g 大豆胨 3.0g葡萄糖2.5g 琼脂20.0gNaCl 5.0g K2HPO4 2.5g蒸馏水1000ml3.Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.24.RSL-盐酸鸟氨酸6.5g 氯化钠5.0gL-盐酸赖氨酸5.0g 脱氧胆酸钠1.0gL-盐酸半胱氨酸0.3g 酵母提取物3.0g麦芽糖 3.5g 溴麝香草酚蓝0.03g硫代硫酸钠6.8g 新生毒素0.005g枸橼酸铁铵0.8g 琼脂12.5g蒸馏水1000mL5.麦康凯蛋白胨20.0g 乳糖10.0g牛胆盐5.0g 氯化钠5.0g中性红0.03g 琼脂14.0gpH 6.9-7.3㈡几种试剂的制备波恩试剂：75% 饱和苦味酸25%福尔马林5%冰乙酸㈢细菌的分离1．待检材料的处理无菌采集的病料不经处理可直接用于分离；污染较严重的病料，接种前必须处理后方可进行分离培养。
培养基配制标准操作规程
范围：培养基职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.培养基的制备1.1需气菌、厌气菌培养基（硫乙醇酸盐液体培养基）酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g葡萄糖 5g 新鲜配制的0.1%刃天青溶液 1.0mlL—胱氨酸 0.5g (或新鲜配制的0.2%亚甲蓝溶液 0.5ml)硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.5～0.7g(或硫乙醇酸 0.3ml) 水 1000ml酵母浸出粉 5g——除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，按量加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。
——在无菌检查接种前，培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5。
否则，须经水浴煮沸加热，只限加热一次。
1.2霉菌培养基胨 5g 磷酸氢二钾（K2HPO4） 1g酵母浸出粉 2g 硫酸镁（MgSO4·7H2O） 0.5g葡萄糖 20g 蒸馏水 1000ml——除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH值约为6.8,煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，115℃灭菌20分钟。
1.3选择性培养基1.3.1对氨基苯甲酸培养基(用于磺胺类药物的无菌检查) 照上述需气菌、厌气菌培养基及霉菌培养基的处方制法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后摇匀，分装，115o C灭菌30分钟。
1.3.2吐温培养基（用于油剂药品的无菌检查）照上述需气菌、厌气菌培养基及霉菌培养基的处方及制法，各加10ml的吐温80，摇匀后，分装，115℃灭菌30分钟。
1.4营养肉汤培养基1.4.2处方胨 10g 肉浸液 1000ml氯化钠 5g——取胨与氯化钠，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。
1.4.2肉浸液制备法——取新鲜牛肉，除去肌腱及脂肪，切细，绞碎后，每1000g加水3000ml,充分拌匀，在2～10℃浸泡20～24小时，煮沸1小时，滤过，压干肉渣，补足液量，分装，121℃灭菌30分钟,置冷暗处备用。
TSB培养基的配制操作规程
目的Purpose建立TSB培养基配制操作规程，使操作规范化、科学化。
适用范围与通则Scope and general rule在1#生产车间进行TSB培养基配制操作。
责任人Responsibility在1#生产车间进行TSB培养基配制操作的所有人员要遵循本规程。
本文件起草人、班组负责人与生产主管负责本规程的适用性。
程序Procedure目录Contents1.按十万级更衣程序进入配液室,洗手、消毒手臂。
2.配液前物料准备。
2.1根据所配制的体积量，准备需要的容器（洁净的Carboy瓶）、玻璃棒、天平等。
2.2 检查注射用水的电导率是否符合要求。
3.配制：3.1根据所配制的体积量，按照使用说明称取胰蛋白胨大豆肉汤干粉。
以1L为例：量取1L注射水，加入30g胰蛋白胨大豆肉汤，进行加热煮沸溶解，待其充分煮沸溶解后，进行分装，待高压或过滤除菌。
3.2过滤除菌：配制结束后通知万级洁净区班组人员进行过滤除菌。
发文号issued No:____________________复印号Controlled Copy No:______________________3.3高压灭菌：按照高压灭菌柜的操作规程进行溶液121℃，15分钟高压灭菌。
4.清场:将用过的Carboy瓶转出配液间，用洁净消毒抹布、拖布对配液间台面、地面、仪器设备进行清洁消毒，确保无污迹。
垃圾分类后由专用通道转出洁净区。
清洁用具清洗后放指定位置备用。
班组负责人检查合格后挂“已清场”。
5.填写记录。
相关文件Related Documentation。
培养基的配制过程
培养基的配制过程计算用量:200ml固体培养基10g/L 蛋白胨. 3g/L 牛肉膏.5g/L NaCl .2% 琼脂粉 称量：托盘天平溶解：自来水调pH：自然pH灭菌：一般培养基，121 0C, 15-30min：20min；含糖培养基：112 0C, 15-30min；易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合倒平板灭菌待灭菌物品的包装锅、加加盖（对角线均匀拧旋升温、排气（放大气5min横温121℃、20min切断电源、冷开锅取倒平板◆融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)平板划线的基本程序灭菌接种（杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标）沾取菌接灭菌接种（杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境）平板涂布的基本程灭菌过的移液吸取菌液0.1ml滴在培养皿中用灭菌的涂布棒均匀涂布：将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。
三角铁扒具体操作步骤：⏹（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。
⏹（2）放入需要灭菌的东西。
注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。
⏹（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）⏹（4）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后5分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到121℃），控制热源维持所需时间（20分钟），然后停止加热，让其自然冷却。
注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。
（5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。
注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。
太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。
在糖化过程中，应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。
pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。
细菌培养系统常用液体配制标准SOP操作规程样本
细菌培养系统常用液体配制标准SOP操作规程样本1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
将细菌置于0℃，低渗CaCl2 溶液中时，菌细胞壁和膜的通透性增强，菌体膨胀成球型。
外源DNA与Ca2+形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面，在经42℃短暂的热冲击处理（一般热休克90s）后能促进细胞吸收外源DNA 复合物。
2）仪器、材料与试剂：①超净工作台、低温离心机、摇床、-80℃冰箱，装液氮的泡沫盒及液氮、50ml的离心管2个，50ml的注射器及0.22um小过滤器各1个。
简述培养基配制的一般程序
简述培养基配制的一般程序简述配制培养基的具体操作步骤: 1、根据配方要求,用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量,放入同一烧杯中,并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
2、将称好的琼脂加蒸馏水300~400毫升,加热并不断搅拌,直至煮沸溶解呈透明状,再停止加热。
3、将所取的各种物质(包括蔗糖),加入煮好的琼脂中,再加水至1000毫升,搅拌均匀,配成培养基。
4、用1N的氢氧化钠或盐酸,滴入的培养基里,每次只滴几滴,滴后搅拌均匀,并用pH试纸测其pH 值,直到将培养基的pH值调到5.8。
5、将配好的培养基,分装到培养瓶中,并盖紧瓶口,瓶壁写上号码。
瓶中培养基的量约为容量的1/3或1/4。
简述配制培养基的步骤
简述配制培养基的步骤
一、配制培养基的步骤：
1、准备培养基原料：根据科研实验要求，准备正确的培养基原料（如琼脂，碳源，氮源，营养素，细胞毒）；
2、检验培养基原料：检查培养基原料（如结晶，味道，颜色），确认未受污染，质量合格；
3、称量：按科学比例称量培养基原料，批次相同，才能制备出与同一培养基组成比例完全一致的培养基；
4、清洗：清洗所有的培养基原料，将不合格的原料扔掉，以确保所配制培养基的质量；
5、添加：将称好的培养基原料添加到容器中，按照一定的比例将培养基原料充分混合；
6、煮沸：将混合好的培养基仔细地放入烧杯或容器中，放入微波炉或加热器内加热，并调节温度，保持恒温；
7、杀菌：将温度调节好的培养基置入抗菌灭菌器中进行灭菌，然后在室温下孵育15-30min；
8、过滤：将杀菌后的培养基进行滤过以去除杂质；
9、储存：将完全配制好的培养基放入密封瓶或烧杯中，存放于-20℃冰箱中进行保存。
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培养基的配置操作流程
培养基的配置操作流程
一、准备培养基材料
1.确认所需培养基种类
（1）根据植物种类选择合适培养基
（2）确定所需培养基数量
2.准备培养基原料
（1）购买或准备培养基原料
（2）确保培养基原料质量
二、配置培养基
1.计量原料
（1）确定配方比例
（2）按配方比例称量原料
2.混合原料
（1）将原料放入容器中
（2）均匀混合原料
3.调节湿度
（1）根据需要加入适量水分
（2）混合至适当湿度
三、消毒处理
1.确定消毒方式
（1）选择合适的消毒方法
（2）确定消毒时间和温度
2.进行消毒
（1）将培养基置于消毒设备中
（2）进行消毒处理
四、包装存储
1.包装培养基
（1）将处理好的培养基放入包装袋中（2）封口包装袋
2.存储培养基
（1）将包装好的培养基存放在阴凉干燥处（2）避免阳光直射和潮湿环境。
培养基配制201603-2
实验一：培养基母液配置（8、9）1.清洗器皿（初次使用注意事项）并晾干。
2.配置N6培养基等母液（每种母液体积100ml）3.培养皿（每组10个）清洗、晾干、报纸包裹、线绳捆扎、灭菌烘干4.蒸馏水灭菌天平的用法：水平调节；称重时需要关好天平所有玻璃窗。
药品内部的塑料盖，记得盖上，如果不明，擦拭干净再盖上。
定容：先称2/3体积水，然后顺序加试剂，前一试剂溶解后，加另一试剂，最后用滴定瓶定容。
值日：清洁桌面、地面；所有物品使用后归位（天平盖上罩子）；座椅归位；不迟到早退，需要的克数=（0.166g/147g）*165g摩尔浓度=0.166/147=x/1651）N6培养基母液（实际使用为20x）：本次实验做100ml 10xKNO3 2.830gCaCl2·2H2O 0.166gMgSO4·7H2O 0.135gKH2PO40.400g(NH4)2SO40.463g注：配制时按表中所列顺序逐一添加，每种成分溶解后再溶解另外一种成分。
2）B5微量母液：本次实验做：1000ml (100倍)含KI 0.0750gH3BO30.3000gMnSO4·H2O 1.0000gZnSO4·7H2O 0. 2000gNa2MoO4·2H2O 0.0250gCuSO4·5H2O 0.0025gCoCl2·6H2O 0.0025g注：本次实验各试剂用量过少，精确度不够，可全班3个组先做1000X，再平均分成3份给每个组。
天平用万分之一天平。
3）B5有机母液：烟酸（Nicotinic acid）1mg/ml盐酸吡哆醇(VB6)1mg/ml盐酸硫胺素(VB1)10 mg/ml肌醇(myo-Inositol) 10 mg/ml4)铁盐：本次实验做：100ml (100倍)FeSO4·7H2O 0.278gNa2EDTA·2H2O 0.373g注：配制顺序如下1.称取0.278g FeSO4·7H2O溶解于20ml去离子水中（A）。
62-培养基配制标准操作规程文档
废弃处理等。
范围：本规程适用于微生物实验室检验用的所有培养基职责：QC检验员对本标准的实施负责。
内容:1．操作依据：《中国药典》2010年版二部2、培养基（Media）是指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。
通常指干粉培养基（Dehydrated Medium）和配制好的琼脂（Agar）、肉汤（Broths）、稀释液（Diluents）等等。
3.程序3.1.购买3.1.1.质量控制部提出采购计划，并填写《采购计划》，注明培养基名称、数量、质量要求、生产厂家等，由相关人员审核，交采购部采购。
3.1.2.培养基买回后，由使用部门填写领料单，由物流部发出。
3.1.3.领回后的干粉培养基，开瓶后应贴上《开启标签》，注明开口日期、有效期至、开口人、贮存条件，并且不得把原标签覆盖。
使用时填写《干粉培养基使用记录》。
3.1.4.检验人员必须依据培养基生产厂家的操作说明进行配制，并填写《培养基配制使用记录》，配制记录上注明所用培养基的批号；盛装配制好的培养基的容器外应贴《培养基标签》，标签应注明：名称、批号、配制人、配制日期、有效期至等信息。
批号定义为：同一批灭菌的培养基为一批，批号编号方式为年XX，月XX，日XX，流水号XX，例如：2010-05-01配制的培养基第一批灭菌的培养基批号为：10050101。
3.1.5.配制好的培养基应在一定时间内，按说明书规定时间进行灭菌，避免微生物滋生。
3.1.6.必要时，灭菌后的培养基在配制后必须进行pH值的测定以确保符合药典及生产厂家的规定。
3.2.培养基质量控制3.2.1.为了保证微生物检验的质量，在使用前，每批配制好的培养基在灭菌后用于供试品检验之前都应进行培养基质量控制检查。
3.2.2.无菌检查用培养基的适用性检查，包括无菌性检查和灵敏度检查；微生物限度检查用培养基的适用性检查指计数培养基适用性检查；控制菌检查用培养基的适用性检查包括促生长能力检查、抑制能力检查和指示能力检查。
培养基的配制标准操作规程
培养基的配制标准操作规程1.目的选取天然或纯化的营养物质及其相应的渗透压、酸碱度等理化条件，经过加工，制成不同的营养基质，藉以在人工条件下培养供检验用的微生物。
2.适用范围适用于培养基的配制操作。
3.责任者操作员。
4.仪器硅胶塞、试管、平皿、吸管、漏斗、高压锅、三角瓶、天平。
5. 内容5.1 准备5.1.1 玻璃器皿洗涤5.1.1.1 制备培养基所用吸管、试管，三角瓶和平皿等新玻璃器皿，因有灰尘和游离碱性物质，先用水冲洗干净。
然后置3％的盐酸中浸泡约12H。
取出后，用清水冲洗干净，再用纯化水冲洗1～2次，晾干后备用。
5.1.1.2 凡各种装量大而又不宜高压的含糖培养基，所用的玻璃器皿应事先灭菌，以免因一次性低压灭菌不彻底而染菌。
5.1.2 用具包装与灭菌5.1.2.1 硅胶塞：应用水冲洗干净，再以纯化水冲洗1～2次，烘干备用。
5.1.2.2 试管：各种试管最好先配上合适的硅胶塞，待高压灭菌后再分装培养基，可防止污染。
5.1.2.3 平皿：取洗净晾干的平皿，每7 套作一个包装，121℃ 30分钟灭菌后烘干备用；也可用160℃ 2小时干热灭菌后备用。
5.1.2.4 吸管：供染菌限度检验用的吸管，应防止堵塞，故选用红刻度粗下口的。
用前洗净烘干，上口塞进少许普通棉花，松紧适度，以防污染。
然后按其容量大小，分别放在用双层牛皮纸做成的纸袋或者金属盒内，包严经121℃ 30分钟灭菌后烘干备用。
5.2 操作5.2.1 根据用途选择培养基，按其用法进行准确称量和加纯化水，并填写配制记录如名称、配制量、配比、配制日期、配制者。
5.2.2 培养基完全溶解后，进行过滤和分装，液体培养基一般应澄清无沉淀，否则影响观察细菌生长结果。
过滤时可用滤纸或脱脂棉。
5.3 分装5.3.1 各种液体培养基分装试管时，每支应按试管大小及用途不同定量分装，可用吸管或注射器分装，也可用漏斗分装。
一般漏斗下口连接一段橡胶管，管口插一小段玻璃管，再加上一个弹簧夹控制流量，分装时将漏斗放在支架上，内装培养基，然后将下口插入试管中即可按量将培养基逐管分装，注意，不同品种的培养基用过漏斗，应充分洗净后再用，以防两种培养基互相混淆，影响使用效果。
制作培养基的一般步骤
制作培养基的一般步骤
1、配料：在容器中加入少量水，按照配方称取各种药品，加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。
2、溶解：淀粉溶解：少量冷水调成糊状，加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3、调PH：用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
4、过滤：滤纸或棉花进行过滤。
5、分装：一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml培养基/250ml 的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml 培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度。
固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。
6、包扎：分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7、灭菌：按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。
如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
8、摆斜面：灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。
9、贮存：培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。
一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
配置培养基流程
配置培养基流程
配置培养基流程主要包括以下步骤：
1. 配方准备：根据所需微生物或细胞种类，查阅资料确定培养基配方，列出所需成分（如蛋白胨、酵母浸膏、无机盐、生长因子等）及浓度。
2. 称量溶解：在无菌条件下，精确称取各成分，加入蒸馏水或去离子水中，充分搅拌直至完全溶解。
3. 调节pH值：使用精密试纸或pH计测量溶液pH，如有必要，加入适量酸碱进行调节，使pH达到适宜范围。
4. 过滤灭菌：将配置好的液体培养基通过0.22μm滤膜过滤除菌，或者采用高压蒸汽灭菌法灭菌，确保无菌环境。
5. 冷却凝固：对于固体培养基，灭菌后待冷却至约50℃左右时，倒入无菌平皿中，待其自然冷却凝固形成培养平板。
6. 储存备用：已配置好的培养基应在适宜条件下储存（如4℃冰箱保存），并在有效期内使用。
以上流程确保了培养基能够提供微生物或细胞生长繁殖所需的营养条件，并确保实验不受污染。
培养基配制操作规程
1．目的：本规程规范了微生物实验室培养基的配制操作。
2．范围：适用于微生物检测使用的各类培养基配制。
3．职责：微生物检验员对本规程的实施负责。
质量部负责人负责监督。
4．内容4.1 培养基定义指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。
通常指干粉培养基和配制好的琼脂、肉汤、稀释液等。
4.2 培养基制备前准备工作4.2.1 准备配制培养基用的天平、三角瓶、量筒、称量纸、小勺、电阻炉和所需的纯化水等，新的玻璃器皿（首次使用）和再次使用的玻璃器皿分别按各自批准的规程洗涤、干燥。
4.2.2 按照所检项目微生物限度的种类，准备相应的培养基。
4.3 培养基的制备4.3.1溶解：根据培养基瓶上标签说明和所需配制量称取干燥培养基，置烧杯中，加入适量纯化水，放到电炉上加热，使溶解。
如有沉淀，应于溶化后趁热过滤。
4.3.2 校正酸碱度：根据培养基瓶上标签说明，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠调节pH值达到规定的要求。
如与所需pH不符，可用酸或碱液加以校正，试剂规格应为化学纯以上。
4.3.3 培养基分装：培养基一般在高压灭菌前分装，将配制好的培养基分装到若干个三角形瓶或试管中，分装量不宜超过该容器的2/3，以免灭菌时外溢。
瓶口塞好塞子，盖上牛皮纸并用绳子捆扎好。
硫乙醇酸盐流体培养基，分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基的氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
4.3.4 培养基的灭菌：配制好的培养基依据说明书规定时间、方法进行灭菌，配制后宜在2小时内灭菌，避免微生物滋生避免细菌繁殖。
培养基应只能进行一次蒸汽灭菌处理。
4.3.5 培养基的使用尽量做到现配现用。
4.4 培养基的保存和使用。
4.4.1 灭菌后的培养基应保存在2～25℃（一般放入冰箱中保存），防止被污染，可在三周内用毕。
临用时，取出，用水浴加热使溶化。
已溶化的培养基应一次用完。
MH培养基配制标准操作规程
MH培养基配制标准操作规程1．目的规范M-H培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。
2．原理M-H培养基用Mueller-Hinton琼脂（水解酪蛋白琼脂）配制，淀粉为保护性胶体，能对抗细菌中的毒性物质，水解酪蛋白含多种氨基酸，牛肉浸膏能提供细菌氮源的主要营养物质。
药敏试验中，为保证结果重复性及抑菌环的大小、清晰，因此培养基不含对抗生素及磺胺药物的拮抗剂。
3．用途用于普通细菌的抗菌药物敏感试验。
4．配方成品OXOID M-H干粉38g、蒸馏水1000ml，pH7.1～7.5。
5.操作步骤将上述成分混合，校正pH。
121℃高压灭菌15分钟。
冷至50℃左右，无菌定量吸取25ml于直径9cm的无菌平板4mm. 内，凝固后冷藏备用。
琼脂层厚6.储存条件2～8℃冰箱。
7.有效期实验室自行规定，确保培养基质量。
8. 质量控制8.1 质控频度每次新配制时做质控8.2 质控方法及结果见表5-20.表5-18 配制M-H培养基质量控制方法及结果结果试验方法无细菌生长，>100块<100块抽检5%无菌试验CO235℃，随机取10块，小时培养24出现一个边缘清楚的质量检测培养基上涂布粪肠在M-H ≧应径，菌抑圈直，用甲氧ATCC29212球菌平行试验20mm 苄啶∕磺胺甲噁纸片进行小℃培养药敏试验，3524时做质控时，取新旧批号的培养基同时做9.注意事项9.1 倾注琼脂量为25ml，平板深度4mm。
若太薄，易产生假敏感。
若太厚，平皿中的抗生素往下扩散而使抑菌环变狭窄，产生假耐药性。
9.2 pH会影响某些抗生素的活性。
实验时不可将平板培养在CO2培养箱中，否则会在琼脂的潮湿表面产生碳酸而降低pH值，将影响各种抗生素的扩散速度、抑菌环大小。
参献文考上海：临床微生物学诊断与图解..第二版.周庭银编著[1] 2007上海科学技术出版社，.王钦升，周正明，高屹主编[2] .实用医学培养基手册1999北京：人民军医出版社，（周庭银）编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：。
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1.目的：
建立本规程旨在为培养基配制提供操作标准。
2.范围：
公司培养基配制
3.责任：
质量管理科、菌检员对实施本SOP负责。
4.检验依据：
《中国药典》2015年版四部。
5.内容：
5.1 营养琼脂
◆称本品34g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。
5.2 玫瑰红钠琼脂培养基
◆用于霉菌总数测定。
称本品30g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为6.4±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。
5.3 普通琼脂斜面培养基
◆称本品33g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为8.0～8.2），放入冰箱内保存、备用。
5.4 胆盐乳糖培养基
◆称本品36g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好后高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2～7.4），放入冰箱内保存、备用。
5.5 营养肉汤培养基
◆适用于一般细菌的培养。
称取本品19g，加纯化水1000ml，煮沸到完全溶解后分装，高压灭菌121℃
30分钟备用。
5.6 伊红美兰琼脂培养基
◆用于大肠杆菌及肠道致病菌的分离鉴别。
称取本品36g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，煮沸至完全溶解，高压灭菌115℃30分钟，冷至55℃左右，振摇培养基，倾注灭菌平皿备用。
5.7 室温菌种保存培养基
◆用于常用菌种的保存。
称取本品28g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，加热煮沸，高压灭菌121℃30分钟,备用。
6.文件变更历史：。