ELISA的原理与应用455
ELISA的原理与应用很详细
ELISA的原理与应用很详细ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的敏感、特异的免疫测定方法。
它基于酶标记抗原或抗体与待测分子发生特异性反应的原理，通过检测酶的活性来间接或直接测定待测的分子。
以下是对ELISA的原理及其应用进行详细介绍。
1.原理：-间接ELISA：将待测物（抗原或抗体）先与包被在酶标板表面的一定浓度的抗原或抗体结合。
然后，通过与待测物特异性结合的酶标记二抗或酶标记抗体，形成特异性免疫复合物。
最后，通过酶的底物添加产生酶的活性，测定酶标记物的活性，以间接检测待测物的存在量。
-竞争ELISA：将标准物与待测样品中的待测物竞争与固相抗体或抗原结合，对固相抗体或抗原进行夹心处理。
标准品与所测标本中的待测物竞争与固相抗体或抗原结合，生成夹心体，再加入特异性抗体来与夹心体结合，形成固有的标记酶活性，以检测待测物的浓度。
-直接ELISA：待测物直接与固相抗体或抗原特异性结合，通过酶标记的二抗直接与待测物结合。
最后，通过酶的底物添加，生成酶的活性，以直接检测待测物的浓度。
-间接竞争ELISA：与竞争ELISA类似，但在固定和分析步骤中均使用酶标记的抗体。
该方法适用于定量测定低浓度抗体的方法。
通过以上不同类型的ELISA实验，可以根据不同的需求和实验目的，灵活地选择适合的实验方案。
2.应用：-临床诊断：ELISA广泛应用于疾病的早期筛查和诊断。
例如，血清ELISA检测抗体或抗原可以用于病毒感染（例如HIV、乙肝病毒、HPV等）的检测；抗体ELISA检测可以用于自身免疫疾病、肿瘤标记物等疾病的诊断。
-药物研发：ELISA技术在药物研发中用于药物的筛选、监测以及血药浓度的测定。
通过ELISA可以快速、准确地测定药物在体内的浓度和代谢产物的含量，进而评估药物的吸收、分布、代谢和排泄。
-免疫学研究：ELISA技术用于研究免疫学的基本原理、细胞因子的分泌及一些特定免疫分子的定量检测。
ELISA的原理与应用解读
ELISA的原理与应用解读ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学实验技术。
它使用酶标记的抗体或抗原与被测物相结合，并通过测量酶催化产生的颜色变化或荧光强度来定量检测目标物。
ELISA是一种灵敏、专一、经济且相对简单的实验方法，在许多领域中都得到广泛应用。
ELISA的原理是建立在免疫学原理的基础上。
ELISA通常通过将样品（如血清、细胞上清等）与涂有特定抗原或抗体的微孔板高度特异性地结合。
然后，通过给予酶标记的二抗或底物特异结合于该反应体系，并产生可定量测量的信号。
常见的ELISA有直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接捕获ELISA。
直接ELISA是通过将标记有酶的一抗直接与靶抗原相结合来进行检测。
这种方法对目标抗原具有高度特异性，并具有较高的灵敏性和检测限制。
间接ELISA则使用非标记的靶抗原与目标抗体相结合，然后再使用标记有酶的二抗与目标抗体结合。
该方法对目标抗体更加敏感，并可以用于定量抗体的浓度。
竞争ELISA利用标记抗原和未标记抗原竞争与抗体结合，从而定量样品中抗原或抗体的浓度。
间接捕获ELISA使用两个特异性抗体来捕获目标抗原，并通过标记有酶的第三抗体来定量检测。
这种方法对于检测低浓度的目标抗原非常敏感。
在生物医学研究中，ELISA被用于检测特定抗原或抗体的存在，并用于疾病诊断、疫苗开发、药物筛选和基因工程等领域。
例如，通过ELISA可以检测感染的病原体、肿瘤标志物、免疫球蛋白等。
ELISA还可以用于测定生物样品中特定蛋白质的浓度，如血清蛋白、细胞因子、激素等。
在临床诊断中，ELISA是常用的实验技术之一、利用ELISA可以检测并诊断多种疾病，如艾滋病、疟疾和癌症等。
这些检测通常基于特定抗体与疾病相关蛋白质之间的相互作用。
例如，艾滋病的诊断可以通过检测患者血液中是否存在HIV抗体来进行。
此外，ELISA还被广泛用于食品安全检测、环境污染监测和生物技术产业中。
简述ELISA的原理及应用
简述ELISA的原理及应用1. ELISA的基本原理ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶联免疫吸附试验）是一种基于抗原-抗体相互作用的免疫分析方法。
其基本原理如下：1.试样处理：将待测样品加入含有抗原的微孔板中，并进行适当的处理，例如稀释、加入试剂等。
2.抗原结合：抗原与待测样品中的特定抗体发生特异性结合。
3.酶标记：将与抗体结合的酶（常用的有辣根过氧化物酶-HRP）加入，使其与抗原-抗体复合物结合。
4.底物反应：加入与酶结合产生颜色反应的底物，使酶催化底物发生显色反应。
5.检测与测量：使用酶标仪测量底物的颜色反应强度，通过光密度的变化来判断待测样品中抗原的含量。
2. ELISA的应用领域ELISA作为一种高灵敏度、高特异性、简单易行、经济实用的免疫学检测技术，具有广泛的应用领域，包括：2.1 医学诊断ELISA可以用于检测各种疾病相关的标志物，例如病毒、细菌或癌细胞表面抗原、抗体、药物等，用于疾病的早期诊断、病情监测和治疗效果评估。
例如，用于HIV、乙肝、丙肝、白血病、甲亢、风湿性关节炎等疾病的诊断。
2.2 食品安全ELISA可以检测食品中的有害物质、致病菌、残留农药等，用于食品质量安全的监测和评估。
例如，检测食品中的重金属、农药残留、抗生素残留等。
2.3 环境监测ELISA可以用于检测环境中的有害物质、污染物、微生物等，用于环境质量的监测和评估。
例如，检测水中的重金属、有机污染物、细菌、病毒等。
2.4 兽医诊断ELISA可以用于动物疾病的诊断，包括畜禽的传染病、寄生虫感染等。
例如，检测畜禽血清中的病毒抗体、寄生虫抗原等。
2.5 生物学研究ELISA可以用于研究生物分子的相互作用、测定分子浓度、分析分子结构等。
例如，测定蛋白质、核酸、多肽等的含量、活性和相互作用。
3. ELISA的优势和局限性ELISA作为一种常用的免疫分析方法，具有一些明显的优势，也存在一些局限性。
elisa的基本原理方法类型及应用
elisa的基本原理方法类型及应用ELISA（也称为ELISA或免疫酶标记应答，即可变光子诱导免疫应答）是一种常用的分析化学技术，它可用于检测抗原、抗体、激素等的存在或缺失。
它是一种实验室分析技术，用于检测有毒物质或辅助诊断和疾病监测，是各种基础实验室检测方法之一。
虽然ELISA技术最初用于定量测定血清抗体，但现在已被广泛应用于医学、生物技术、农业、食品安全等领域。
ELISA的基本原理ELISA分析技术是基于抗原-抗体反应（Ag-Ab反应）的特异性反应原理，它可精确地测定抗原或抗体的存在量。
典型的ELISA实验包括设置反应体系、抗原配制、抗体添加、反应体系条件调整、抗体夹酶共价反应和检测反应等步骤。
首先，将抗原固定在玻璃板或微孔板的孔内，然后将抗体添加到试剂盒，使之与抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
接下来，将夹带酶标记的第二种抗体（通常使用可见光发射体）添加到反应体系中，使之与第一种抗体与抗原结合的复合物结合，这就形成了三聚体结构，从而使酶标记的第二抗体与抗原紧密结合。
最后，通过计量光度，计算夹带酶的特异性活性，从而得出抗原的浓度。
ELISA的方法类型根据抗体与抗原之间的结合特性，ELISA可分为4种不同类型：酶联免疫吸附测定（ELISA-EIA）、酶联免疫发射测定（ELISA-EIT）、夹带酶表面免疫吸附测定（ELISA-SEI）和夹带酶表面免疫发射测定（ELISA-SEIT）。
ELISA-EIA是一种特异性免疫分析方法，它利用免疫结合反应将抗体与抗原结合在一起，然后用酶类检测最终的反应产物的特异性活性，以评估抗原的浓度。
ELISA-EIT使用一种酶被特定的抗体夹带，然后将抗体与抗原结合在一起，形成三聚体结构，最后再使用特定酶去检测特定抗原的存在，从而判断抗原的浓度。
ELISA-SEI是一种特异性免疫分析方法，它使用特定抗体夹带特定抗原，当抗原存在时，特定抗体会与它结合在一起，这可以通过检测特定抗体的特异性活性来评估抗原的浓度。
elisa的基本原理方法类型及应用
Elisa的基本原理、方法类型及应用概述Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用于生物化学和生物医学研究领域的实验技术。
它利用酶标记的抗原或抗体与待测物相互作用并生成可读出的信号，从而达到检测和定量分析的目的。
本文将介绍Elisa的基本原理、方法类型及应用。
基本原理Elisa的基本原理是通过特异性抗原与抗体间的结合反应来检测和定量分析待测物。
其基本步骤如下：1.固定：将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板、膜等）上，形成固定相；2.实验样本加入：加入待测物样本到固相载体中，使待测物与固定的抗体或抗原发生特异性结合；3.洗涤：通过洗涤步骤去除非特异性结合的物质；4.酶标记的抗体或抗原结合：加入酶标记的抗体或抗原，使其与待测物发生反应；5.洗涤：再次洗涤以去除未结合的酶标记的抗体或抗原；6.底物添加：加入底物，通过酶催化反应生成可检测的信号；7.信号检测：利用光度计、荧光计等仪器测量所产生的信号。
方法类型Elisa通常可以分为以下几种类型：1.间接Elisa：该方法是最常用的Elisa类型之一。
它通过在固相载体上固定抗原，然后加入待测物和酶标记的抗体，最后通过添加底物产生颜色反应来测定待测物的浓度。
2.直接Elisa：该方法直接在固相载体上固定酶标记的抗原，待测物与固定的抗原发生反应后，通过添加底物测定待测物的浓度。
与间接Elisa相比，直接Elisa节省了一个环节，因此更简单和快速。
3.竞争性Elisa：该方法适用于待测物是小分子的情况。
竞争性Elisa将待测物与酶标记的抗原竞争与固定抗原结合，通过测定底物的酶活性来测定待测物的浓度。
4.逆转Elisa：该方法常用于检测体内特定抗体的浓度。
逆转Elisa是将固定抗体或抗原加入实验样本中，之后加入酶标记的待测物，最后通过添加底物的酶活性来测定抗体的浓度。
应用Elisa在医学、生物学和生化学研究中广泛应用。
以下是Elisa的几个主要应用领域：1.临床诊断：Elisa可以用于检测和诊断人体内的疾病和感染。
ELISA的原理及应用
ELISA的原理及应用一、ELISA的概述ELISA是一种常用的实验技术，用于检测和测量特定抗体或抗原的存在。
ELISA是酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的缩写，它结合了免疫学和酶学的原理。
二、ELISA的原理ELISA的基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性反应来检测目标物质的存在。
ELISA分为直接ELISA、间接ELISA、间接竞争ELISA、夹心ELISA四种类型。
1. 直接ELISA直接ELISA是通过在试验板上直接固定抗原，然后将标记有酶的抗体与目标抗原结合来检测特定抗原或抗体的存在。
2. 间接ELISA间接ELISA是在试验板上固定抗原，然后加入待测样品，样品中的抗原或抗体与固定的抗原结合。
接着加入标记有酶的第二抗体来识别该特定抗原或抗体的存在。
3. 间接竞争ELISA间接竞争ELISA是将已知浓度的抗原或抗体与样本一起加入试验板上预先固定的抗原。
随后加入酶标记的第二抗体，其与样本中的抗原或抗体竞争与固定抗原结合。
通过测量酶标记抗体的活性，可以推断样本中目标分子的浓度。
4. 夹心ELISA夹心ELISA是用于检测与固定抗原或抗体同时结合的另一个抗原或抗体。
夹心ELISA是通过在试验板上先固定第一抗体，然后加入待测样品，样品中的目标抗原与固定的抗体结合。
最后，加入标记有酶的第二抗体来检测形成的夹心复合物。
三、ELISA的应用ELISA在医学、农业、环境保护等领域有广泛的应用，以下列举了一些具体的应用场景：1. 医学应用•ELISA常用于检测特定病原体的抗体或抗原，如HIV、乙肝病毒等。
•ELISA用于检测某些疾病的生物标志物，如心肌梗死的心肌肌钙蛋白和肿瘤标志物。
2. 农业应用•ELISA可用于检测农作物中的有害农药残留，以确保食品的安全性。
•ELISA也可用于饲料和动物产品中抗生素残留的检测，以保证动物饲养的安全和质量。
3. 环境保护•ELISA可以用于监测水体和土壤中的污染物，如重金属、有机化合物等。
ELISA技术在生物医学研究中的应用
ELISA技术在生物医学研究中的应用ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种灵敏、特异性强的免疫学实验技术，被广泛应用于生物医学研究中。
本文将从ELISA技术的基本原理、优势和应用实例三个方面探讨其在生物医学研究中的应用。
一、ELISA技术的基本原理ELISA技术是利用酶和抗原、抗体之间的特异性反应，通过酶的催化作用来检测分析样品中的特定抗原或抗体的一种实验技术。
该技术的基本原理包括以下几个步骤：1.样品预处理：将需要检测的样品与试剂反应前进行必要的处理，如稀释、去除干扰物等。
2.抗原或抗体的固定：将固定抗原或抗体的标板孔，分别加入待测样品以及控制样品（阳性、阴性对照）。
3.特异性结合：加入检测抗体，与待测样品中需要检测的抗原结合，在标板孔内形成复合物。
4.可视化检测：加入酶标记二级抗体，形成复合物，然后加入催化酶底物，使得酶底物转化为有色物质，最后记录检测结果。
二、ELISA技术的优势ELISA技术在生物医学研究中具有以下优势：1.高灵敏度和特异性：ELISA技术采用抗原和抗体的特异性结合，使其检测结果具有高灵敏度和特异性。
2.简单易操作：ELISA技术需要简单的操作步骤、易于标准化，使其在各种实验室中广为应用。
3.多样化应用：ELISA技术不仅可以检测抗体和抗原之间的结合情况，也可以检测其他生物大分子和小分子的相互作用，如蛋白质酶等。
4.大批量高通量：ELISA技术可以同时检测多个标本，可用于高通量的分析，包括大规模生物样本的筛查。
三、ELISA技术在生物医学研究中的应用实例1.检测疾病标志物ELISA技术可以检测人体内的不同标志物，如肿瘤标志物、生物分子等，以便于疾病的早期诊断和治疗。
2.检测病原体ELISA技术可以检测各种细菌、病毒、真菌等病原体的抗体，可用于感染性疾病的诊断和治疗。
3.酶活性分析ELISA技术可以分析不同酶的活性和酶底物的结合情况，可用于研究酶功能、酶动力学等问题。
elisa优点及用途
elisa优点及用途Elisa是一种常用的免疫学实验方法，它可以检测样本中特定抗原或抗体的存在。
Elisa具有许多优点，包括高灵敏度、高特异性、简单易操作、快速结果等。
因此，Elisa被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
一、Elisa的基本原理1.1 免疫反应Elisa是一种免疫学实验方法，其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合来检测样品中特定抗原或抗体的存在。
在免疫反应中，抗原与相应的抗体结合后形成不溶性复合物，这种复合物可以通过各种方式进行检测。
1.2 酶标记技术为了增强检测信号，常采用酶标记技术。
在酶标记技术中，将酶与抗体或抗原结合，并通过加入底物使其产生可检测的信号。
例如，在ELISA中常使用辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）作为标记酶。
二、Elisa的优点2.1 高灵敏度Elisa具有高灵敏度，可以检测到非常低浓度的抗原或抗体。
这使得Elisa成为许多疾病的早期诊断工具，例如艾滋病、乙肝和结核病等。
2.2 高特异性Elisa具有高特异性，可以区分不同种类的抗原或抗体。
这使得Elisa 成为一种非常可靠的检测方法，可以避免假阳性或假阴性结果。
2.3 简单易操作Elisa操作简单易学，不需要复杂的仪器和技术。
因此，即使是没有专业实验室背景的人也可以进行该实验，并获得准确可靠的结果。
2.4 快速结果Elisa通常可以在几小时内完成，并且可以同时处理多个样品。
这使得它成为一种快速而高效的检测方法。
三、Elisa的应用领域3.1 生物医学研究在生物医学研究中，Elisa被广泛应用于检测各种生物分子，如蛋白质、激素、细胞因子和药物等。
通过使用不同的抗体或抗原对进行标记，可以定量分析这些生物分子的含量，以及它们在不同疾病状态下的变化。
3.2 临床诊断Elisa被广泛应用于临床诊断中，例如检测传染病、肿瘤标志物、自身免疫性疾病等。
通过检测血液、尿液或其他体液中的特定抗原或抗体，可以帮助医生诊断和治疗各种疾病。
ELISA技术的原理及应用
ELISA技术的原理及应用1. 介绍ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），中文名为酶联免疫吸附测定法，是一种常用的生物化学分析方法，用于检测样品中特定物质的存在与否。
ELISA技术结合酶的底物变色反应和特异性抗原抗体反应原理，具有高灵敏度、高专一性和高通量的特点，被广泛应用于医药、生物科学研究、食品安全等领域。
2. 原理ELISA技术的原理基于抗原与抗体的特异性结合。
通常，ELISA实验分为间接ELISA、竞争ELISA、直接ELISA和夹心ELISA四种类型。
•间接ELISA：首先将含有目标抗原的样品加入固相酶标板中，使之吸附在板上。
然后加入与目标抗原特异性识别的抗体，形成抗原-抗体复合物。
再加入酶标记的辅助抗体（抗IgG），其结合于目标抗体上的抗原-抗体复合物，形成酶-抗体-抗原复合物。
通过加入底物，可以测定酶的活性，通过测定活性的程度来间接检测目标抗原的存在与否。
•竞争ELISA：目标抗原与酶标记的抗原竞争与固相抗体结合，通过测定酶标记的抗原的浓度变化来推断目标抗原的浓度。
•直接ELISA：固相抗体直接与目标抗原结合，不需要通过酶标记的辅助抗体进行信号放大。
•夹心ELISA：在介质与底物之间，夹入待测物质，通过底物反应和信号放大来检测待测物质的存在与否。
3. 应用ELISA技术在许多领域中被广泛应用。
以下是一些常见的应用领域：3.1 医学诊断ELISA技术可以用于检测和诊断各种疾病和感染。
例如，ELISA可以用于检测HIV、乙肝病毒、结核杆菌等病原体的存在。
3.2 药物研发ELISA技术可以用于药物研发过程中的药效评估和药物浓度测定。
例如，ELISA可以用来测定药物在体内的浓度、药物与受体的结合等。
3.3 生物学研究ELISA技术可以用于生物学研究中的蛋白质或抗原的定量测定。
例如，ELISA可以用于检测细胞培养液中特定蛋白质的含量，以及研究细胞因子的产生和释放。
elisa的实验原理和技术应用
Elisa的实验原理和技术应用1. 引言酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay 或 ELISA）是一种常用于生物医学研究中的免疫测定方法。
ELISA可以高度特异性地检测出某个特定抗原或抗体，广泛应用于免疫学、分子生物学、临床诊断等领域。
本文将介绍ELISA的实验原理和技术应用。
2. ELISA的原理ELISA基于抗原与抗体之间的特异性反应，通过将抗原或抗体固定在试验板上，然后与相应的酶标记抗体或酶标记抗原结合，最后通过添加底物来检测酶的活性。
ELISA可分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等不同类型，下面将分别介绍这些类型的原理。
2.1 直接ELISA直接ELISA是最简单的ELISA类型，适用于检测抗原。
原理如下： 1. 在试验板上涂布抗体。
2. 加入样品，其中含有待测抗原。
3. 洗涤试验板，去除未结合的物质。
4. 加入酶标记的第二抗体，该抗体与待测抗原结合。
5. 再次洗涤试验板，去除未结合的物质。
6. 加入底物，使酶反应生成可检测的颜色。
2.2 间接ELISA间接ELISA适用于检测抗体。
原理如下： 1. 在试验板上涂布抗原，例如蛋白质。
2. 加入样品，其中含有待测抗体。
3. 洗涤试验板，去除未结合的物质。
4. 加入酶标记的第二抗体，该抗体与待测抗体结合。
5. 再次洗涤试验板，去除未结合的物质。
6. 加入底物，使酶反应生成可检测的颜色。
2.3 竞争ELISA竞争ELISA适用于检测抗原或抗体。
原理如下： 1. 在试验板上涂布抗原。
2.加入样品，其中含有待测抗原或抗体。
3. 洗涤试验板，去除未结合的物质。
4. 加入酶标记的第二抗体或酶标记的第一抗体，该抗体或抗原与待测物竞争结合。
5.再次洗涤试验板，去除未结合的物质。
6. 加入底物，使酶反应生成可检测的颜色。
3. ELISA的技术应用ELISA在医学和生物科学研究中有广泛的应用。
elisa的原理与应用
Elisa的原理与应用1. Elisa是什么？Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(酶联免疫吸附测定法，简称ELISA)是一种常用的生物技术方法，通过检测抗原和抗体的特异性结合来定量或定性测定目标物质。
ELISA在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域有广泛的应用。
本文将介绍ELISA的工作原理和应用。
2. ELISA的工作原理ELISA的工作原理可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等不同变种。
以下是直接ELISA的基本原理：1.将待测抗原溶液加入已经涂覆有特异性抗体的酶标板孔中，并充分孵育，使得抗原与抗体发生特异性结合。
2.清洗孔中的非特异性物质，以去除未结合的杂散抗原。
3.加入与待测抗原特异性结合的二抗-酶标记抗体溶液，并充分孵育。
4.再次清洗孔中的非特异性物质，以去除未结合的二抗。
5.加入底物溶液，触发酶标记物反应，生成可测量的信号。
6.使用光谱仪或比色计等设备测量反应产物的信号强度，根据标准曲线确定抗原浓度。
3. ELISA的应用ELISA在医学和生物科学领域有广泛的应用，以下是ELISA的主要应用领域：3.1 医学诊断ELISA可以用于检测患者体内的特定抗原或抗体，从而进行疾病的早期诊断和治疗监测。
例如，ELISA可以用于乙肝病毒和艾滋病病毒的检测，以及检测心肌梗塞和癌症等疾病相关的生物标志物。
3.2 生物学研究ELISA在生物学研究中被广泛用于定量和定性测定特定分子的含量。
例如，科学家可以使用ELISA测定细胞因子、酶和激素等蛋白质的浓度，从而研究其在生物过程中的功能和调控机制。
3.3 药物开发ELISA可以用于药物的筛选和药效评估。
科学家可以使用ELISA测定药物对特定抗原或抗体的结合能力，从而评估药物的效果和选择最佳药物治疗方案。
3.4 环境监测ELISA还可以应用于环境监测领域，例如检测水体中污染物的含量，包括重金属和农药等。
ELISA的原理和应用
ELISA的原理和应用1. ELISA的概述Enzyme Linked Immunosorbent Assay（酶联免疫吸附测定法），简称ELISA，是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的实验技术。
ELISA基于抗原-抗体的特异性相互作用原理，通过酶标记的二抗或适配物与抗原或抗体结合形成复合物，并通过酶的催化作用产生可测量的信号。
2. ELISA的原理ELISA基于酶标记的二抗或适配物的与抗原-抗体复合物的形成进行检测。
主要包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA等。
2.1 直接ELISA•将待检样品加入包被抗原的微孔板，待抗原吸附。
•增加与待检样品中抗原特异性结合的酶标记的一抗，与包被抗原形成复合物。
•加入底物，并通过酶的催化作用产生可测量的信号。
2.2 间接ELISA•将待检样品加入包被抗原的微孔板，待抗原吸附。
•加入与待检样品中抗体特异性结合的二抗，与抗体形成复合物。
•加入与二抗结合的酶标记的三抗，与二抗形成复合物。
•加入底物，并通过酶的催化作用产生可测量的信号。
2.3 竞争ELISA•将待检抗原加入包被抗体的微孔板，待抗原吸附。
•加入待检样品，竞争性结合包被抗体。
•加入酶标记的二抗，与包被抗体结合形成复合物。
•加入底物，并通过酶的催化作用产生可测量的信号。
2.4 夹心ELISA•将待检样品加入包被抗原的微孔板，待抗原吸附。
•加入酶标记的一抗，与待检样品的目标分子结合形成复合物。
•加入包被抗体，与酶标记的一抗结合形成夹心复合物。
•加入底物，并通过酶的催化作用产生可测量的信号。
3. ELISA的应用ELISA技术广泛应用于科学研究和临床诊断中，其主要应用包括：3.1 生物学研究•检测蛋白质、抗原、抗体、细菌等生物分子或微生物的存在和含量。
•研究免疫反应、病毒感染等生物学过程。
•研究细胞信号传导、蛋白质相互作用、药物筛选等生物学机制。
3.2 临床诊断•检测疾病标志物，如肿瘤标志物、心肌标志物、肝炎病毒抗体等。
elisa的原理和其应用
Elisa的原理和其应用1. Elisa的原理简介ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay），即酶联免疫吸附测定法，是一种常用于检测特定蛋白质、抗原或抗体的实验方法。
它基于免疫学原理，通过酶标记的抗体或抗原与待测物相互作用，再经过特定的酶促反应，最终通过颜色变化的测量来定量或定性目标物质。
1.1. Elisa的基本步骤ELISA实验通常包括以下几个步骤：1.涂布（Coating）：将待测物（例如抗原）固定在微孔板上的底部。
通常使用高结合力的表面来保证待测物的吸附。
2.阻断（Blocking）：将未被固定的孔位用非特异蛋白质（如牛血清蛋白、鱼胶）进行封闭，以防止非特异结合的干扰。
3.探针结合（Probing）：在固相的抗原或抗体上加入特异性的酶标记抗体或抗原，与待测物发生特异性结合。
4.反应（Reaction）：将孔位中非特异性结合的抗体或抗原洗掉，通过适当的酶促反应体系，如辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase）或碱性磷酸酶（alkaline phosphatase），产生显色反应。
5.检测（Detection）：通过加入合适的底物，使酶催化反应可见，测量反应产物的吸光度或荧光强度。
1.2. Elisa的特点和优势•高灵敏度：ELISA的灵敏度在ng/mL的量级，可以检测低浓度蛋白质、抗原或抗体。
•高选择性：通过特异性抗体的结合，可以准确检测目标物质。
•高通量：ELISA可以同时检测多个样品，适用于大规模实验。
•简单易行：ELISA实验步骤相对简单，操作方便。
•广泛应用：ELISA广泛应用于医学、生物学、食品安全等领域，用于诊断、监测和研究目标物质。
2. Elisa的应用场景2.1. 医学领域•临床诊断：ELISA在临床诊断中常用于检测病原微生物、肿瘤标志物、激素以及各种抗体和免疫相关的蛋白质。
•药物研发：ELISA用于药物研发中的生物样品分析，例如药物代谢产物的检测和药物浓度监测。
Elisa原理及应用
Elisa原理及应用Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种重要的生化分析技术，在医学、生物学、农业等领域得到广泛应用。
它基于免疫反应原理，利用特定抗体与抗原之间的结合作用，检测样品中的靶分子。
本文将简要介绍Elisa的原理和应用。
Elisa是一种间接法，也称为“夹心酶标试验”。
它主要包含以下步骤：1. 抗原固定将抗原分子固定在微孔板上，通常有两种方法，一种是吸附法，将抗原分子吸附在微孔板表面，另一种是化学偶联法，利用交联反应将抗原分子共价结合到微孔板表面。
2. 样品加入将待测样品加入微孔板孔道中，样品中的靶分子与抗原结合。
3. 特异抗体加入加入特异抗体，即能与靶分子结合在一起的抗体。
这些抗体通常被标记有酶或者其他检测试剂，方便检测。
通过免疫反应，抗体与样品中的靶分子相互结合。
4. 洗涤将微孔板孔道中的非特异性物质清除。
加入已酶标记的特异抗体。
酶作为酶标记的抗体通常是辅酶，能够与底物反应，产生可检测信号。
7. 底物加入加入底物，酶能够催化底物形成可检测信号，如光学吸收、自发辐射等。
8. 读板读取微孔板的信号，通过比较不同孔道的信号能够确定样品中靶分子的浓度。
1. 医学应用Elisa在医学领域得到了广泛应用，能够进行针对某些疾病的诊断和治疗。
例如，通过检测HIV、乙肝病毒、丙肝病毒等病原体的抗原或抗体能够判断病人是否感染这些病毒；检测抗心磷脂抗体、抗核抗体和抗双链DNA抗体等自身抗体则能够诊断系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫疾病。
2. 生物学研究Elisa在生物学领域的应用非常广泛。
例如，利用Elisa技术检测细胞外分泌物、细胞表面标记、荷尔蒙水平等能够帮助研究人员探究生物学过程，例如信号转导、荷尔蒙调节等。
3. 农业应用Elisa应用于农业产业，例如检测牛奶中的抗生素残留、检测农产品中的残留农药等，能够保证食品的安全和质量。
ELISA 原理及应用
酶联免疫吸附剂测定酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。
酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验，本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。
这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果间接法间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原。
(优选)ELISA的原理技术及其在药物分析领域的应用
3.1.6 封闭
封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液 再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些 空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。 常用封闭剂：0.05%-0.5%的BSA; 10%的小牛血清或1% 明胶;脱脂奶粉,比较价廉，可以高浓度使用（5%）。 所有的ELISA固相均需封闭
加入的量应与试剂的敏感度相称； 在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较，可以估计标本物 质的量。
阴性性对照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是阴性。
参考标准品
定量测定（如TNF-alpha，IL-6，cAMP等）应含有制作 标准曲线用的参考标准品，应包括覆盖可检测范围的4-5个 浓度，一般均配入含蛋白保护剂及防腐剂的缓冲液中.
基本操作注意事项
加样:
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物 ，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避 免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
2.2.3 间接法测抗体
传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用 同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
2.2.4 竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化 抗原时，可用此法检测特异性抗体。
2.2.5 竞争法测抗原（cAMP、cGMP、PGE2等）
小分子抗原或半抗原缺乏可作夹心法的两个以上的位点， 因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式 。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相 抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标 抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA 测定多用此法。
3.5 酶反应终止液
常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度 按加量及比色液的最终体积而异，在板式 ELISA中一般采用2mol/L。
elisa的方法及原理
elisa的方法及原理Elisa（酶联免疫吸附测定）是一种常用于检测特定蛋白质、抗体或抗原的分析方法。
它具有高度的敏感性和特异性，被广泛应用于医学、生物学和生物技术领域。
本文将介绍Elisa的原理、步骤和应用。
一、Elisa的原理Elisa基于免疫学原理和酶学反应，通过特异性抗原-抗体反应来检测目标物质的存在与否。
Elisa通常包括以下几个关键步骤：1. 固定抗原：将目标抗原固定在盘或膜上，以便后续的抗体结合反应。
2. 试样添加：将待测样品加入固定抗原的孔中，允许样品中的抗原与已固定的抗原发生结合。
3. 抗原结合：加入特异性的抗体，并使其与待测样品中的抗原结合。
4. 洗涤：通过洗涤剂去除未结合的物质，以减少非特异性反应。
5. 酶标记抗体结合：加入酶标记的抗体，它与待测样品中的抗原结合。
6. 信号发生：加入染色底物，使酶标记的抗体产生一个可测量的信号（如颜色变化）。
7. 信号检测：使用光度计或其他测量仪器测量信号的强度，与标准曲线相比较，确定待测样品中目标物质的浓度。
二、Elisa的步骤Elisa的步骤十分关键，需要严格按照以下程序进行：1. 准备工作：准备所需的试剂和设备，保持实验区域的洁净。
2. 抗原包被：将具有特异性的抗原添加到固相载体（如96孔板或膜）上，制备固定抗原。
3. 样品添加：将待测样品和标准品加入孔中，与固定抗原发生结合。
4. 增强体添加：加入特异性的酶标记抗体，允许其与结合的抗原发生结合。
5. 洗涤：通过洗涤液去除未结合的物质，减少背景干扰。
6. 底物加入：加入染色底物，与酶标记的抗体发生酶学反应。
7. 反应终止：加入终止液，停止酶学反应，保持结果稳定。
8. 信号测量：使用光度计测量发色底物的吸光度，与标准曲线或对照样品进行比较。
三、Elisa的应用Elisa具有广泛的应用领域，以下是一些常见的应用示例：1. 医学诊断：Elisa可用于检测疾病标记物、肿瘤标志物和病原体抗体，用于早期诊断和治疗监测。
elisa检测方法的原理和应用
elisa检测方法的原理和应用概述酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA)是一种广泛应用于生物医学研究和临床检测中的重要技术。
ELISA方法基于特异性的抗原和抗体相互作用，可以快速、灵敏地检测出目标物质的存在。
本文将介绍ELISA方法的原理和应用。
原理ELISA方法的原理是将目标物质（抗原或抗体）固定在特定的固相载体上，然后用特异性的酶标记抗体或抗原与目标物质发生特异性结合，最后通过酶的催化作用，使用合适的底物将酶活性转化为可测量的颜色、荧光或发光信号。
ELISA常见的几种类型包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA。
直接ELISA直接ELISA方法是将目标物质与酶标记的抗体或抗原直接结合，经过洗涤后，使用适当的底物进行检测。
这种方法操作简单，但对于抗原含量较低的样本，灵敏度较低。
间接ELISA间接ELISA方法是在目标物质固定的固相载体上，首先加入特异性的未标记的抗体，然后再加入酶标记的抗体与未标记的抗体发生结合。
这种方法可以提高灵敏度，因为酶标记抗体一般比未标记的抗体多。
竞争ELISA竞争ELISA方法是利用标记的抗原与固定在载体上的抗原竞争与抗体结合。
这种方法适用于检测含有相同抗原的样品。
夹心ELISA夹心ELISA方法是在固相载体上固定抗体，在抗原添加后，再加入酶标记的抗体对抗原进行结合。
这种方法可以用于检测多种抗体或抗原。
应用ELISA方法在许多领域中被广泛应用，特别是在生物医学研究和临床诊断中。
生物医学研究ELISA方法可以用于检测和定量细胞因子、酶、抗体、肿瘤标记物以及其他生物分子的存在。
这种方法可以帮助研究者了解疾病机制、药物疗效评估、生物标志物的发现等。
临床诊断ELISA方法在临床诊断中也有广泛的应用，可以用于检测传染病、自身免疫性疾病、肿瘤标记物和药物浓度等。
ELISA方法可以提供快速、敏感、特异性的检测结果，有助于早期诊断和治疗的选择。
ELISA原理及应用
显微镜领域里，成图一般用xyz三个轴来标注3D空间。 xy就是和显微镜平台平行的平面，样品的平台 z则是把这个平台上下移动的那个轴。 所以中间那张图是显示xy截面，而上边和右边的图分别是xz和yz的截面。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
4. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越 深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测O· D值：在ELISA检 测仪上，以空白对照孔调零后测各孔O· D值，若大于规定的阴性对照OD 值的2.1倍，即为阳性。
应用
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应 用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病 等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的 定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、 特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适 用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至 上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅 可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原， 所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物 医学各领域的应用范围日益扩大， 可概括四个方面： 1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 2、研究抗酶抗体的合成。 3、显现微量的免疫沉淀反应。 4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
酶联免疫吸附测定 （ELRSA）
定义 酶免疫技术是以酶标记抗原或酶标记抗 体为主要试剂，通过复合物中的酶催化底物 呈色而对被测物进行定性或定量的标记免疫 技术。 基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物 与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应， 用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可 以是抗原。
根据检测目的和操作步骤不同，有以下三种类型 的常用方法： 1. 间接法 此法是测定抗体最常用的方法。将已 知抗原吸附于固相载体。加入待检标本(含相应抗 体)与之结合。洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体 (酶标抗抗体)和底物进行测定。
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结果
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原理
类型 试剂 准备
对照 标本 结果
不易吸附的非蛋白质抗原可用间接包被的抗原经固相抗体的亲 和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质 较多的抗原也可采用捕获包被法。
亲和素生物素 即用亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA ，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定 量测定。 脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇 ）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干， 待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。
原理 2.2.4 竞争法测抗体
类型
试剂 准备
对照
标本 结果
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化 抗原时，可用此法检测特异性抗体。
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原理 2.2.5 竞争法测抗原
类型 试剂 准备
对照 标本
小分子抗原或半抗原缺乏可作夹心法的两个以上的位点， 因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式 。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相 抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标 抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA 测定多用此法。
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3.1.6 封闭
原理
类型 试剂 准备
对照 标本
封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液 再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些 空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。 常用封闭剂：0.05%-0.5%的BSA; 10%的小牛血清或1% 明胶;脱脂奶粉,比较价廉，可以高浓度使用（5%）。 所有的ELISA固相均需封闭？
Ag+Ab→Ag·Ab
对照 标本 结果
抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示： K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关。 高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上 非常适合，两者结合牢固，不易解离。解离后的抗原或抗 体均能保持原有的结构和活性。
结果
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原理
类型 试剂 准备
对照 标本 结果
3.4 洗涤液
在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20 磷酸盐缓冲液。
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原理 ELISA的试剂准备B
类型
试剂 准备
3.2 结合物
即酶标记的抗体（或抗原）是ELISA中关键的试剂 1 酶的催化活性
对照 标本 结果
③酶作用的底物（显色剂）
对照 标本 结果
①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）
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原理
ELISA基本的实验过程
类型 包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固 相载体表面，使抗原或抗体固相化
试剂 抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合 准备 物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而
被结合固定 对照 酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物， 标本 使发生酶促反应而显色
优点：试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳 。抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100。
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原理
包被用抗原：
类型 天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。
试剂 合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片 准备 段。一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但
的成分
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原理 2.2.6 捕获包被法测抗体
类型
试剂 准备
对照 标本 结果
IgM的检测常用于传染病的诊断。用抗人IgM抗体包被固 相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异 性IgM抗体和非特异性的IgM）。此法常用于病毒性感染 的早期诊断。
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原理 2.2.7 ABS-ELISA法
结果 ，可取得更好的效果。
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原理 3.1.5 包被的条件
类型
pH9.6碳酸盐缓冲液 pH7.2的磷酸盐缓冲液
试剂 准备
pH7-8的Tris-HCL缓冲液。 加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜，37℃中保温2
对照 标本 结果
小时。包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每 批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质 的包被浓度为10ng/ml-20ug/ml。
类型 试ELISA的原理 2. ELISA的类型 3. 试剂准备：免疫吸附剂
结合物 酶底物的准备 4. 对照设定 5. 标本的采取和保存 6. 结果判断
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原理 酶免疫测定类型
类型
试剂 准备
酶免疫组化
酶免疫技术
均相酶免疫测定
酶免疫测定
非均相酶免疫测定
固相酶免疫测定
的复合物
洗涤除去其他 未结合的物质
加底物进行 酶催化反应
根据颜色反应的 程度进行该抗原 的定性或定量测定
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原理 2.2.2 双抗原夹心法测抗体
类型 试剂 准备
对照 标本
用特异性抗原进行包被和制备酶结合物。此法中受检标 本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间 接法。乙肝标志物中抗HBsAg的检测常采用本法。本法关 键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合 适的标记方法。
液相酶免疫测定
对照 标本 结果
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫 吸附剂测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay） ，简称ELISA。
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原理
类型 试剂 准备
1.1 抗原抗体反应
1.1.1 可逆性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态 平衡，其反应式为：
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原理获得待分析物的未标定抗体
将特异性抗体与固相 载体连接形成固相抗体
类型
加入封闭蛋白溶液以封闭载体 表面残留的蛋白结合位点
洗涤除去未结合的 抗体及杂质
试剂 准备洗涤并除去未结合的封闭蛋白
加受检标本（抗原）形成 固相抗体－抗原复合物
对照
标本
彻底洗涤
结果未酶结标合抗的体
加酶标抗体生成 抗体—待测抗原—酶标记抗体
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原理 3.1.2 包被的方式
类型
试剂 准备
将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。 蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的 是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团 间的作用。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量
对照 标本
、等电点、浓度等的影响。大分子蛋白质较小分子蛋白质通 常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。
第18页/共70页
原理 类型
包被固相载体: 用已知抗原包被
固相载体
加待检标本: 使相应抗体与固相抗原结合
洗涤，除去无关的物质
试剂 准备
对照 标本 结果
加底物 显色
根据颜色反应的程度进行 该抗原的定性或定量测定
加酶标抗抗体: 与固相载体上抗原抗体 复合物结合；洗涤，除去 未结合的酶标抗抗体
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2抗体（或抗原）的免疫活性 3含有或少含有游离的抗体（或抗原） 4结合物尚要有良好的稳定性。
第34页/共70页
原理 3.2.1 结合物用的抗原和抗体
类型
试剂 准备
制备结合物时所用纯度较高的IgG，以免在与酶 联结时其他杂蛋白的干扰。最好用层析纯化的抗体 ，这样全部酶结合物均具有特异的免疫活性，可以 在高稀释度进行反应，实验结果本底浅淡。
结果
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原理
类型 试剂 准备
对照 标本 结果
Hook Efect（钩状效应）：过量的抗原可
分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物 的形成，此现象称为钩状效应
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原理 2.2.3 间接法测抗体
类型
试剂 准备
对照
标本 结果
传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用 同一酶标抗抗体(二抗)建立检测相应抗体的方法。
原理 1. ELISA的原理
类型 试剂 准备
对照 标本
ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA） 。基础: 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应 的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本 中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。
结果
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原理
类型 试剂 准备
对照 标本 结果
ELISA的试剂准备A
固相载体 聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋 白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。
聚氯乙烯。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但 空白值也略高。
良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度 高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近 。
结果
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双位点一步法：
原理
在双抗夹心基础上，改为应用针对抗原分子上两 类型 个不同决定簇的两种单克隆抗体分别作为固相抗 试剂 体和酶标抗体。 准备 优点：测定时标本可与酶标抗体同时加入进行结
合反应，两种抗体互不干扰。省时简便。 对照 缺点：当待测抗原浓度过高时，可出现假阴性结 标本 果。
原理
类型 试剂 准备
1.4 免疫测定在临床检验中的应用
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制备 特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可
对照 检测标本中相应的抗原，因此免疫测定的应用范围极广。 标本
结果
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原理
ELISA原理图
类型