医学-实验五土壤中细菌纯种分离和培养
土壤微生物的分离和纯化实验
实验八土壤微生物的分离和纯化一、目的1.了解从土壤中分离与纯化微生物的基本原理及方法。
2.掌握几种常用的分离的基本操作技术。
二、原理在自然界中,土壤是微生物生活中的最适宜的环境,土壤中存在大量的微生物,但土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体,因此,为了研究某一微生物的特性,或者要大量地培养和利用某种微生物,必须把它们从这些混杂的微生物群中分离出来。
从而获得某一菌株的纯培养。
这种获得纯培养的方法称之为微生物的分离和纯化三、器材1.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏l号培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基。
2.盛有100毫升无菌水的三角瓶,9毫升无菌水的试管,无菌吸管,无菌玻璃涂抹棒,10%的酚液,25%的乳酸,土样,接种环,标签。
四、方法(一)涂抹平板分离法1.制备土壤稀释液称取土样10克,放入装有玻璃珠和100毫升无菌水的三角瓶中,振摇15—20分钟,使土与水充分混合,将菌分散,静止片刻,用吸管从中吸取1毫升土壤悬液注人盛有9毫升无菌水试管中,吹吸三次,并振摇使之充分混匀,然后再吸取1毫升注入另一支盛有9毫升无菌水的试管中,以此类推制成10-1、10-2、l0-3、10-4、l0-5……的各种稀释度的土壤悬液。
2.倒平板将牛肉膏蛋白胨培养基,高氏1号培养基,马铃薯蔗糖培养基溶化。
待冷至50—60℃时,在高氏l号培养基中加入10%酚2滴,在马铃薯蔗糖培养基中加入25%乳酸2滴,然后分别倒平板,每支培养基倒一皿(用右手持盛培养基的试管,左手拨出棉花塞,试管口在火焰上灭菌,然后左手将培养皿在火焰附近打开少许,迅速注入培养基,加盖后轻轻摇动培养皿使培养基均匀分布,平放在桌面上,待凝后即成平板。
(见图18)。
3.涂抹将上述每种培养基平板标上10-3、10-4、10-5稀释度,然后用无菌吸管分别从10-5、10-4、10-3稀释度的试管中吸取土壤悬液,每一平板注入0.2毫升,再用灭菌玻璃涂抹刮棒在培养基表面轻轻地涂布均匀,静止5分钟。
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定实验报告
从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定实验报告林淑丽（漳州师范学院生物系食品科学与工程10级101304116）【摘要】熟练分离纯化微生物的基本操作技术，并对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据菌落形态观察及一系列的生理生化结果，对照种属特征初步鉴定分离纯化的微生物所属的类群。
【关键词】细菌、霉菌、放线菌、培养基配制、高压蒸汽灭菌、平板划线、斜面接种ISOLATED FROM SOIL MICROBIAL AND PURE TRAININGPRELIMINARY OBSERVATION APPRAISAL EXPERIMENTREPORTLin Shuli(Food science and engineering 10 levels in biosystem department,zhangzhounormal university 101304116)【abstract】skilled purification microbial the basic operation of the technology, and the soil of the microbial separation and purification, according to the colony morphology observation and a series of physiological and biochemical results, the comparison species features of separation and purification preliminary identification of microbial subordinate groups.【Key Words】bacteria，mould，Actinomyces，Culture medium preparation，High-pressure steam sterilization，Flatcrossed，Cant vaccination培养基各成分的作用：①牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐，其中琼脂起凝固剂的作用。
土壤分离微生物实验步骤
土壤分离微生物实验步骤一、实验目的从土壤中分离和培养微生物，了解土壤微生物的多样性和生态功能，掌握微生物分离和培养的基本技术和方法。
二、实验原理土壤是微生物的天然栖息地，其中包含了各种类型的微生物，如细菌、放线菌、真菌等。
通过选择合适的培养基和培养条件，可以将不同类型的微生物从土壤中分离出来，并进行培养和鉴定。
三、实验材料和设备1、土壤样品：从不同地点采集的新鲜土壤。
2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）、高氏一号培养基（用于放线菌培养）、马丁氏培养基（用于真菌培养）。
3、无菌水、无菌移液管、无菌培养皿、无菌三角瓶、无菌玻璃棒、无菌涂布棒、无菌镊子、无菌滤纸条、酒精灯、接种环、显微镜等。
4、恒温培养箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅等。
四、实验步骤1、制备培养基（1）按照培养基配方准确称取各种药品，放入三角瓶中，加入适量蒸馏水，加热溶解。
（2）调整 pH 值至所需范围（例如，牛肉膏蛋白胨培养基的 pH 为72-74，高氏一号培养基的 pH 为 74-76，马丁氏培养基的 pH 为 55-60）。
（3）将培养基分装到三角瓶或培养皿中，包扎好，进行高压蒸汽灭菌（121℃，20-30 分钟）。
2、土壤样品的采集（1）选择具有代表性的地点，去除表层的枯枝落叶和杂质。
（2）用无菌铲子或采样器采集深层土壤（5-20 厘米），放入无菌塑料袋中，密封保存。
3、土壤悬液的制备（1）称取 10 克土壤样品放入装有 90 毫升无菌水的三角瓶中，充分振荡，使土壤颗粒均匀分散在水中，制成 10⁻¹浓度的土壤悬液。
（2）用无菌移液管吸取 1 毫升 10⁻¹浓度的土壤悬液，加入装有 9 毫升无菌水的试管中，充分混匀，制成 10⁻²浓度的土壤悬液。
以此类推，制备 10⁻³、10⁻⁴、10⁻⁵等不同浓度的土壤悬液。
4、涂布平板法分离微生物（1）分别吸取不同浓度的土壤悬液 01 毫升，滴加在相应的培养基平板上。
土壤细菌的分离与纯化
土壤细菌的分离与纯化土壤细菌是一种普遍存在于土壤中的微生物，它们在土壤生态系统中发挥着重要的角色。
分离和纯化土壤细菌，不仅可以研究其基本特性、生物学功能和代谢途径等，还可以开发其潜在的应用价值，比如生物农药和生物化学制品的生产等。
本文将介绍土壤细菌的分离和纯化过程，以及影响土壤细菌分离的因素和纯化方法。
土壤细菌的分离是指从土壤中分离得到单个细菌菌落的过程。
一般分离方法有以下几种：（一）稀释涂布法该方法是将土壤分别用不同浓度的生理盐水进行稀释，然后将不同浓度的土壤悬液制成平板培养基并涂布在培养基上。
菌落形成后，可再次从菌落上接种单个细菌。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（二）膜过滤法该方法是将土壤和生理盐水混合后通过孔径为0.22μm的滤膜过滤出微生物体，然后将此滤膜放置于适宜的培养基上进行培养。
该方法适用于分离数量较多的细菌。
（四）毛细管沉淀法该方法是利用毛细管的吸力将土壤中的细菌沉淀到毛细管中，然后将毛细管插入含有适宜培养基的瓷片中，放置在恒温箱中进行分离和培养。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（五）选择性富集法该方法是通过添加选择性富集剂使特定种类的细菌生长，不同种类的细菌生长受到不同富集剂的影响。
该方法适用于富集数量稀少的特定种类细菌。
（一）单菌落分离法该方法是将分离得到的细菌菌落在新的培养基上进行二次分离和培养，直至获得单一的细菌菌落。
该方法适用于分离数量较多并且形态较为相似的细菌。
（三）挑选法该方法是利用显微镜观察细菌形态和形状，手工用铂丝挑选出单个细菌菌落。
该方法适用于菌落数量较少且形态差异较大的细菌。
该方法是利用滤纸将细菌菌液过筛，分离得到单个细菌颗粒。
该方法适用于分离数量较少的细菌。
土壤细菌的分离受到多种因素的影响，如土壤环境因素、培养基种类和培养方式等。
（一）土壤环境因素土壤的物理化学因素，如土壤温度、pH值、土壤含水量等对土壤细菌的生长有很大影响。
不同种类的土壤中细菌种群差异很大，所以适当选择适宜的土壤样品可以更好的分离得到目标细菌群落。
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7 土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
土壤中微生物的分离与鉴定实验报告
Sdu微生物大实验土壤微生物的分离纯化与鉴定【实验目的】1、从各地区土壤中筛选含几丁质酶的真菌及含果胶酶的菌株；2、通过从土壤中分离纯化菌株，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分离纯化方法和无菌操作技术。
3、复习以前学过的各种染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。
4、掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。
【实验原理】1、微生物的分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
此次实验采取平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：a.选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。
b.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。
微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。
前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。
2、霉菌：霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本实验采用载玻片培养观察法。
3、果胶酶筛选培养基：配制以果胶为唯一碳源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用果胶的菌株才能够生长，依此来从土壤中筛选出能够产果胶酶的菌株。
刚果红（Congo Red,简称CR）是一种染料，它可与果胶形成红色复合物，但并不和果胶水解后的产物发生这种显色反应，在含有果胶的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的果胶形成红色复合物。
实验六_土壤中真菌纯化、分离和培养
将1瓶土壤菌液（称取土样10g放入盛90 mL无菌水）和4管9mL的无菌水排列好， 按10-1、10-2、10-3、10-4及10-5依次编号。 在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管吸 取lmL10-1浓度的菌液于一管9mL无菌水 中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓 度菌液。同样方法，依次稀释到10-5。 注意：在土壤稀释过程中，吸取不同梯 度的菌液需换用不同的吸管。
三、仪器和材料
样品：新鲜土壤 培养基：加有 2ml 链霉素的 PDA 培养基或 孟加拉红培养基。 无菌水：装有9mL无菌水的试管4支。 其它： 无菌培养皿 4 皿、无菌吸管、酒精 灯、培养箱等 。
四、真菌纯种分离的操作方法
1、土壤稀释液的制备
用“稀释平板计数法”中的方法 进行，将土样稀释至10－5。
土壤稀释液的制备和稀释液的取样
2、分离方法 采用稀释平板分离法。
混 菌 法
涂 抹 法
3、培养
将上述接种土壤悬液的平板 倒置于28℃培养3-5d。
4、挑菌纯化 5、计数
6、菌种保存
将分离到的真菌转接到PDA斜面上培 养，待长好后，置于冰籍中保存，必要时 进行深入研究。
六、注意事项
1、混菌法接种时温度不能过高，应低于45℃， 如不用温度计，则以不烫脸、手为宜。
2、涂布法接种时一定要涂抹均匀，否则就会无 法记数。
3、接种后的培养皿应静置15分钟以上，然后倒 置培养。
七、作业 题
1． 在分离真菌时为什么需加链霉素（庆 大霉素或氯霉素），而不加青霉素？ 2 ．用一根无菌移液管接种几种浓度的水 样时，应从哪个浓度开始？为什么？
实验六
土壤中真菌分离、纯化和培养
一、目的要求
掌握从土壤中初步分离培养真菌的方法， 从而获得真菌纯培养技能；了解基本接 种技术。
土壤细菌实验报告
一、实验目的1. 了解土壤细菌的种类和分布；2. 掌握土壤细菌分离和纯化的方法；3. 学习细菌的形态和培养特征观察；4. 探讨土壤细菌在生态系统中的作用。
二、实验原理土壤是微生物的天然栖息地，其中含有丰富的细菌资源。
细菌在土壤生态系统中扮演着重要的角色，如参与土壤肥力循环、生物降解、病原菌抑制等。
本实验通过分离和纯化土壤中的细菌，观察其形态和培养特征，了解其在生态系统中的作用。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜土壤、牛肉膏蛋白胨培养基、生理盐水、无菌水、酒精、火焰等；2. 仪器：显微镜、恒温培养箱、无菌操作台、接种环、培养皿、吸管等。
四、实验步骤1. 土壤样品采集：取适量新鲜土壤，用无菌操作台上的无菌容器盛装，并迅速密封，防止样品污染；2. 土壤样品处理：将土壤样品与生理盐水按1:10的比例混合，充分振荡后，用无菌吸管吸取上清液；3. 稀释涂布：将上清液依次稀释10倍、100倍、1000倍，取适量稀释液涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上；4. 培养与观察：将涂布好的培养基放入恒温培养箱中，培养24-48小时，观察菌落生长情况；5. 分离纯化：挑选单菌落，用接种环挑取菌落，接种于新的牛肉膏蛋白胨培养基上，重复培养和观察，直至获得纯培养；6. 形态观察：将纯培养的细菌制片，用显微镜观察其形态；7. 培养特征观察：将纯培养的细菌接种于不同类型的培养基上，观察其在液体、半固体、固体培养基上的生长情况。
五、实验结果与分析1. 土壤样品中分离出的细菌种类丰富，包括杆菌、球菌、螺旋菌等；2. 分离纯化得到的细菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，形成典型的菌落；3. 通过显微镜观察，细菌的形态各异，如杆状、球状、螺旋状等；4. 细菌在不同类型的培养基上表现出不同的生长特征，如液体培养基中呈均匀浑浊，固体培养基上形成菌落。
六、结论1. 土壤是微生物的天然栖息地，其中含有丰富的细菌资源；2. 通过分离和纯化土壤中的细菌，可以了解其种类和分布；3. 细菌在土壤生态系统中扮演着重要的角色，如参与土壤肥力循环、生物降解、病原菌抑制等；4. 本实验通过观察细菌的形态和培养特征，为进一步研究细菌在生态系统中的作用奠定了基础。
实验六_土壤中真菌纯化、分离和培养概述
土壤稀释液的制备和稀释液的取样
2、分离方法 采用稀释平板分离法。又可分为两种 方法。
混菌法和涂抹法。
混 菌 法
涂 抹 法
3、培养
将上述接种土壤悬液的平板 倒置于28℃培养3-5d。
4、挑菌纯化 5、计数
6、菌种保存
将分离到的真菌转接到PDA斜面上培 养，待长好后，置于冰籍中保存，必要时 进行深入研究。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
六、注意事项
1、混菌法接种时温度不能过高，应低于45℃， 如不用温度计，则以不烫脸、手为宜。
2、涂布法接种时一定要涂抹均匀，否则就会无 法记数。
3、接种后的培养皿应静置15分钟以上，然后倒 置培养。
七、作业 题
1． 在分离真菌时为什么需加链霉素（庆 大霉素或氯霉素），而不加青霉素？ 2 ．用一根无菌移液管接种几种浓度的水 样时，应从哪个浓度开始？为什么？
将1瓶土壤菌液（称取土样10g放入盛90 mL无菌水）和4管9mL的无菌水排列好， 按10-1、10-2、10-3、10-4及10-5依次编号。 在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管吸 取lmL10-1浓度的菌液于一管9mL无菌水 中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓 度菌液。同样方法，依次稀释到10-5。 注意：在土壤稀释过程中，吸取不同梯 度的菌液需换用不同的吸管。
三、仪器和材料
样品：新鲜土壤 培养基：加有 2ml 链霉素的 PDA 培养基或 孟加拉红培养基。 无菌水：装有9mL无菌水的试管4支。 其它： 无菌培养皿 4 皿、无菌吸管、酒精 灯、培养箱等 。
四、真菌纯种分离的操作方法
1、土壤稀释液的制备
用“稀释平板计数法”中的方法 进行，将土样稀释至10－5。
实验六
环境微生物学-实验四(五) 细菌的纯培养、分离
实验四（五）环境中微生物分离与培养一、实验目的1、掌握从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾堆肥等）中分离培养细菌的方法，获得若干种细菌纯种培养技能。
2、掌握几种接种技术。
3、了解菌种的保藏方法。
二、实验仪器和材料恒温箱、涂布器、细铁丝、接种环、酒精灯、吸耳球、棉花、记号笔；无菌培养皿（直径90毫米）、无菌移液管（1毫升和10毫升）；肉汤蛋白胨培养基、高氏１号培养基、马铃薯培养基；活性污泥或土壤10克、无菌水90毫升、9毫升无菌水（试管中）；酵母、大肠杆菌。
三、细菌纯种分离的操作方法细菌纯种分离的方法有两种：稀释平板法和平板划线法。
（一）稀释平板分离的方法1、取样用无菌锥形瓶到现场取一定数量的活性污泥或土壤，迅速带回实验室。
2、稀释水样将1瓶90毫升和5管9毫升的无菌水排列好，按10-1、10-2、10-3、10- 4、10-5、10-6依次编号。
在无菌操作条件下，将样品（10克）置于第一瓶90毫升无菌水中，用手摇10分钟，将颗粒状样品打散，即为10-1浓度的菌液。
用1毫升无菌移液管吸取1毫升10-1浓度的菌液于一管9毫微升无菌水中，同样方法，依次稀释到10-6。
每次稀释时，需用不同的无菌移液管，或将同一移液管用无菌水洗三次。
3、平板的制作取10套无菌培养皿编号，10-4、10-5、10-6各3个，另1个为空气对照。
取1支1毫升无菌移液管从浓度小的10-6菌液开始，以10-6、10-5、10-4为序分别吸取0.5毫升菌液于相应编号的培养皿内（注：每次吸取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀），加热熔化培养基，当培养基冷至45℃左右时，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和逆时针来回转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于30℃恒温箱中培养48小时，然后观察结果。
取对照无菌培养皿，打开皿盖10分钟后盖上皿盖，倒置30℃恒温箱中培养48小时后，观察结果。
土壤细菌的分离、纯化及微生物作画展开
土壤细菌的分离、纯化及微生物作画展开
土壤细菌的分离、纯化以及微生物作图展开是微生物学研究中的重要步骤。
下面是这一过程的详细展开：
1. 样品采集：从土壤中采集样品，可以根据需要选择不同的采样点和深度，以获取不同类型的土壤细菌。
2. 稀释平板涂布法：将采集的土壤样品按照适当的比例进行稀释，并将稀释液均匀涂布在富养基平板上。
使细菌能够在平板上生长并形成菌落。
3. 菌落分离：根据菌落形态的差异和颜色特征，通过放大菌落直接进行分离。
如果菌落数目较多，可以使用无菌鉗子将不同菌落分离到不同的富养基平板上。
4. 单菌落的纯化：从菌落分离得到的单个细菌落上刺取一小部分，并在无菌条件下移植到新的富养基平板上进行培养。
重复此过程直到获得纯种菌落。
5. 结构观察：对已纯化的细菌进行形态和结构观察，包括使用显微镜观察细菌的形态、大小、颜色等特征。
6. 细菌培养：为了获取足够的细菌菌体用于后续实验，可将已纯化的细菌进行大规模培养。
常见的培养方法包括液体培养和固体培养。
7. 抗生素敏感性测试：可以通过纸片扩散法或微量稀释法测试细菌对不同抗生素的敏感性，以了解细菌的抗生素耐药性。
8. 微生物作图：通过对已纯化的细菌进行染色、染色观察和图像采集，制作出微生物作图。
常见的染色方法包括革兰氏染色和荧光染色等。
以上步骤可以帮助研究者分离和纯化土壤细菌，并对其进行形态观察和抗生素敏感性测试，最终制作出微生物作图。
这些步骤在微生物学研究和应用中具有重要的意义，可以帮助科学家更好地了解土壤中的微生物多样性和功能。
从土壤中分离纯培养微
从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定实验报告系别：班级：姓名：学号：【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，群落形态观察及一系列的生理生化试验的结果，对照种属特征初步鉴定分离纯化的微生物所属的类群。
【abstract】The separation and purification of microbial basic operation techniques on soil microorganism in the separation and purification, community morphology observation and a series of physiological and biochemical test results, the control species characteristics and preliminary identification of separation and purification of microorganisms belonging to the group【关键词】细菌放线菌霉菌划线分离培养基的配制高压蒸汽灭菌【Key Words】Bacteria Actinomyces Streptomyces lineation separation culture medium pressure steam sterilization前言：在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。
群落是不同种类微物的混和体。
为了生产和科研的需要，人们往往需要从自然界混杂的微生物群体中分离出具有特殊功能的纯种微生物；或重新分离被其他微生物污染或因自发突变而丧失原有优良性状的菌株；或通过诱变及遗传改造后选出优良性状的突变株及重组株。
这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离纯化技术。
纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。
土壤细菌分离实验步骤
土壤细菌分离实验步骤咱来聊聊土壤细菌分离实验这档子事儿哈！你想想，那土壤里可藏着好多好多的小细菌呢，就像一个小小的细菌世界。
要把它们给找出来，分离开，那可得有点本事和窍门。
首先呢，得去弄点有代表性的土壤样本。
就好比去菜市场买菜，你得挑新鲜的、好的呀！找个干净的小铲子，在你觉得合适的地方挖那么一小坨土，放进无菌的袋子里。
这就像是给细菌们准备了一个特别的“家”。
然后呢，把这土带回实验室，开始准备培养基啦。
这培养基就像是细菌们的大餐，得让它们吃得开心，长得壮壮的。
把各种营养物质按比例调好，倒在培养皿里，等它凝固。
接下来，就该把土壤样本放进去啦。
可以用无菌水把土化开，轻轻地摇匀，再取一点涂在培养基上。
这就好像是给细菌们发了入场券，让它们能在这个特别的地方安居乐业。
之后呢，把培养皿放在合适的温度下培养。
这就像是给细菌们开了个温暖的派对，让它们能尽情地玩耍、生长。
过一段时间，你就会看到培养基上出现了各种各样的小点点、小圈圈，那可就是细菌们的菌落啦！就像一朵朵小花在培养基上开放。
这时候，你就得瞪大眼睛，仔细观察啦。
看看哪些菌落长得不一样，形态各异的。
然后用个小工具，小心翼翼地把它们挑出来，放到新的培养基上。
这就像是给它们单独分了个房间，让它们能独自成长。
哎呀，你说这是不是很有意思呀！就像在一个大宝藏里找宝贝一样，一点点地把那些可爱的小细菌给分离出来。
不过可别小瞧了这个过程哦，得细心，得有耐心。
要是不小心污染了，那可就前功尽弃啦！就好像你精心准备的一顿大餐，被人不小心撒了一把沙子进去，那多扫兴呀！而且哦，这个实验可不仅仅是好玩，它还有很大的用处呢！通过分离这些土壤细菌，我们可以了解它们的特性，可以研究它们对环境的影响，可以找到对我们有用的细菌。
说不定还能发现新的物种呢！所以呀，土壤细菌分离实验可真是个有趣又有意义的事情。
大家都可以去试试，感受一下那个小小的细菌世界的奇妙！。
土壤微生物的分离纯化 实验：微生物的分离、培养和菌种保藏
实验程序Ⅵ——四大类微生物菌落形态的比较和
识别
❖ 区分和识别各大类微生物通常包括菌落形态（群体形态） 和细胞形态（个体形态）两方面的观察。
❖ 菌落形态： 菌落表面湿润：细菌——薄而小，酵母菌——厚而大。 菌落表面干燥：放线菌——密而小，霉菌——松而大。
❖ 细胞形态： 细菌——小而分散 酵母菌——大而分散 放线菌——丝状细 霉菌——丝状粗
表 7-1 细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的菌落形态比较
结 果记录
❖ 1.你所做的涂布平板法和划线法是否较好地 得到了单菌落？如果不是，请分析原因。
❖ 2.在三种不同平板上你分离得到哪些类群的 微生物？简述它们的菌落特征。
❖ 凝固后，另取一支吸管吸取相应的土壤稀释液0.2mL放在平板上。 ❖ 用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于28～300C条件
下培养3～4d，观察放线菌菌落形态及计数菌落，并计算出每g土壤中 放线菌的数量（方法同上）。如果样品稀释适当的话，微生物能一一 分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 ❖ 挑取单个菌落，接种于相应的斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化， 至最后得到纯培养为止。
Exercise seven
土壤微生物的分离纯化
微生物的分离、培养和菌种保藏
❖ 目的要求 ❖ 实验材料 ❖ 试验程序 ❖ 思考题
目的要求
❖ 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化 微生物的基本操作计数。
❖ 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。
实验材料
❖ 样品：新鲜土壤。 ❖ 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
3.取已稀释成10－2的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取 0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次， 使之充分混匀，即成10－3土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 →10 － 5 → 10－6土壤稀释液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
③对 照 取“对照”的无菌培养皿，倒平板待
凝固后，打开皿盖10min后盖上皿盖。
2、平板划线分离法
（1）平板的制作
将融化并冷至约50℃的肉膏蛋白胨琼脂 培养基倒入无菌培养皿内，使凝固成平 板。
实验五
土壤中细菌分离、纯化和培养
一、目的要求
1、初步掌握从土壤中分离和纯化细菌的 基本方法。
2、练习微生物接种和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现 有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同 土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细 菌数量最多。用挑单孢法、稀释涂布平板法 或平板划线法获得一种或一株微生物。
（2）划线
用接种环挑取一环土壤悬液，左手拿培养 皿，中指、无名指和小指托住皿底，拇指 和食指夹住皿盖，将培养皿稍倾斜，左手 拇指和食指将皿盖掀半开，右手将接种环 伸入培养皿内，在平板上轻轻划线（每组 做三皿）。
注意：切勿划破培养基
划线的方式可取图中任何一种
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
1、稀释平板分离法
（1）取样 选择较肥沃的土壤，铲去表土层，挖5-20cm 深度的或特殊要求的地方土壤，装入灭过菌 的袋内，封好袋口，做好编号记录，携回实 验室供分离用。
（2）制备土壤稀释液
◆ 将1瓶90mL和7管9mL的无菌水排列好，按 10-2、10-3、10-4、10-5及10-6依次编号。
注意：在土壤稀释过程中，吸取不 同梯度的菌液需换用不同的吸管。
（3）平板的制作 ①吸取菌液：
用无菌移液管吸取菌 液于无菌培养皿内。
注意：在无菌培养皿底部注明稀释度。 注意：每次吸取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀。
②倒平板：
♫ 将 融 化 并 冷 至 约 50℃ 的牛肉膏蛋白胨琼脂 培养基倒入培养皿内。
注意无菌操作。 平板划线要注意染菌，同时注意划线深
度和密度。无菌移液管接种几种浓度的水
样时，应从哪个浓度开始？为什么？ 3．如何检验平板上某个单菌落是不是纯
培养？
Thank you
三、仪器和材料
样 品：新鲜土壤 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 无菌水：带有玻璃珠装有90mL无菌水三角
瓶、装有9mL无菌水的试管。 其 它：无菌培养皿(直径75毫米) 、无菌玻
璃移液管、酒精灯、培养箱等 。
四、操作步骤
（一）细菌纯种分离的操作方法
细菌纯种分离的方法有两种： 1、稀释平板法 2、平板划线法
◆ 称取土样10g放入盛90mL无菌水并带有玻 璃珠的三角瓶中，用手摇10min，使土样均 匀分散，制成（10-1）土壤悬液。
◆ 在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管吸取lmL 10-1浓度的菌液于另一管9mL无菌水中，将移液 管吹洗三次，摇匀即为10-2浓度菌液。
◆ 同样方法，依次稀释到10-6。
（二）培养
将前面制作的平板倒置于培养箱， 30℃培养24～48h，然后观察结果。
（三）挑菌纯化
在平板上选择分离较好的有代表性的单菌 落接种斜面，如果不纯，需进一步挑取此 菌落采取稀释平板法或划线分离法分离， 直至获得纯培养。
分离平板
五、注意事项
制备土壤稀释液时，要注意使土样均匀 分散在稀释液中。