咖啡碱与茶多酚组合对小鼠肝脏脂肪代谢酶活性的影响_杨丽聪

腹腔脂肪系数 （%）=（腹腔脂肪质量/小鼠体 重）×100%
肝脏系数（%）=（肝脏质量/小鼠体重）×100% 1.2.3 肝脏脂肪代谢酶测定 肝脏匀浆：-80 ℃保 存肝脏， 按其质量与匀浆缓冲液体积 3∶20（g/mL） 的比例加入匀浆缓冲液 （3 mmol/L Tris/HCl， pH 7.2；1 mmol/L EDTA，1 mmol/L 二 硫 苏 糖 醇 ，25 μmol/L ALLN，100 μmol/L AEBSF，100 μmol/L 亮 抑酶肽；0.25 mol/L 蔗糖），在冰上进行低温匀浆。
酶液的分离：采用 Bradford[13]方法测定肝脏匀 浆液蛋白质浓度。 用匀浆缓冲液将匀浆液稀释到 蛋白质量浓度为 10 mg/mL，然后用于肉毒碱脂酰 转移酶活性的测定。 将稀释后的匀浆液 500 g 离 心 15 min，取上清液用于酰基辅酶 A 氧化酶活性 的测定；将上述上清液 9 000 g 离 心 10 min，取 上 清液用于脂肪酸合成酶活性的测定。
脂 肪 酸 合 成 酶 活 性 ： 采 用 Kelley 等 人 [14]和 Nepokroeff 等人 [15] 的部分方法测定。 取 500 μL 0.2 mol/L 磷 酸 钾 缓 冲 液 （pH 7.0），20 μL 0.5 mmol/L 乙 酰 CoA，30 μL 10 mmol/L NADPH，20 μL 10 mmol/L EDTA，100 μL 10 mmol/L DTT， 260 μL 蒸 馏 水 ，20 μL 2 mmol/L 丙 二 酰 CoA，混 匀， 最后加入 50 μL 酶液启动反应。 在波长 340 nm 处，用分光光度计连续监测 6 min，计算吸光值 变化。
西医学院实验动物研究所。 粉末饲料，购自江西医 学院实验动物研究所；茶多酚（纯度 90%），购自江 西海富生物工程有限公司；咖啡碱（纯度 99%），购 自美国 Johnson Matthey 公司。
饲料配制：茶Leabharlann 酚、咖啡碱以不同浓度与粉末 饲料进行混合。
主要试剂： ALLN、AEBSF、l-肉毒碱、 丙二酰 CoA、FAD、东 莨 菪 内 酯 （Scoplectin）、辅 酶 A、软 酯 酰 辅 酶 A、DTNB、乙 酰 CoA、过 氧 化 物 酶 、考 马 斯 亮 兰 G -250， 美 国 Sigma 公 司 ； 二 硫 苏 糖 醇 （Dithiothreitol），德国 Merck 公 司 ；亮 抑 酶 肽 （Leupeptin）、Triton-X 100，美国 Amresco 公司；NADPH、 牛 血 清 白 蛋 白 、NAD，瑞 士 Roche 公 司 ；其 它 试 剂
第 11 卷 第 3 期 2011 年6月
中国食品学报
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
Vol． 11 No． 3 Jun． 2 0 1 1
咖啡碱与茶多酚组合对小鼠肝脏脂肪代谢酶活性的影响
杨丽聪 郑国栋 * 蒋 艳 尹忠平 徐明生 （江西农业大学食品科学与工程学院 江西省高等学校天然产物研究与开发重点实验室 南昌 330045）
摘要 目的：研究绿茶功能性成分— ——咖啡碱与茶多酚组合用于减肥的代谢机制。 方法：将 50 只雌性昆明小鼠 随机分成 5 组，即：对照组、0.03%咖啡碱+0.3%茶多酚、0.03%咖啡碱+0.6%茶多酚、0.06%咖啡碱+0.3%茶多酚及 0.06%咖啡碱+0.6%茶多酚。 投喂 12 周后解剖，摘取小鼠的肝及腹腔脂肪（IPAT）并称重。 测定小鼠肝脏肉毒碱 脂酰转移酶（CAT）、酰基辅酶 A 氧化酶（ACO）及脂肪酸合成酶（FAS）活性。 结果：0.06%咖啡碱+0.6%茶多酚组 小鼠的体重及体重增加与对照组相比显著降低。 绿茶成分组合的腹腔脂肪系数明显低于对照组，CAT 活性与对 照组相比均显著提高。 0.03%咖啡碱+0.6%茶多酚及 0.06%咖啡碱+0.6%茶多酚组 FAS 活性显著降低。 0.06%咖 啡碱+0.6%茶多酚组的 ACO 活性与对照组相比显著提高。 结论：绿茶功能性成分可通过抑制小鼠肝脏内脂肪酸 合成，提高脂肪氧化，减少脂肪在体内沉积，达到减肥效果。
脂肪酸合成酶活性〔mmol/（mg·min）〕=（△Abs/ △t）/6220
式 中 ，△Abs— ——测 定 时 间 内 340 nm 处 吸 光 度的变化值；△t— ——测定时间（min）。
肉毒碱脂酰转移酶活性采用 Bieber 等人[16]和 Markwell 等人[17]的部分方法测定。在 500 μL 缓冲 液 （116 mmol/L Tris/HCl pH 8.0，2.5 mmol/L EDTA，0.2% Triton X-100），420 μL 蒸 馏 水 ，20 μL 0.4 mmol/L 软酯酰 CoA，10 μL 25 mmol/L l-肉毒 碱的反应体系中加入 50 μL 酶液启动反应。 在波 长 412 nm 处，用分光光度计连续监测 6 min，计算 吸光值变化。
实验数据采用 DPS 统计软件（Version. 6.55） 进行 T 检验分析，P<0.05 为差异显著，各项指标以 平均数±标准误表示。
2 结果
2.1 小鼠体重、腹腔脂肪系数及肝脏系数变化 咖啡碱与茶多酚组合对小鼠初始体重、 最终
体重、腹腔脂肪系数及肝脏系数的影响列于表 1。 小鼠分组饲养时各组体重未有差异，经 12 周的咖 啡碱与茶多酚饲喂，实验组小鼠体重、体重增加与 对照组相比呈下降趋势，其中投喂 0.06%咖啡碱+ 0.6% 茶 多 酚 的 小 鼠 体 重 及 体 重 增 加 显 著 减 少 ； 所 有组合投喂的小鼠腹腔脂肪系数与对照组相比差 异极显著。 这些结果说明咖啡碱与茶多酚组合可 显著降低腹腔内脂肪质量，从而减少小鼠体重增加。
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中国食品学报
2011 年第 3 期
表 1 咖啡碱与茶多酚组合对小鼠体重、肝和脂肪组织质量、腹腔脂肪及肝脏系数影响
Table 1 Effects of caffeine and catechins combination on body weight， intraperitoneal adipose tissues（IPAT） weight，
liver weight， IPAT coefficient and liver coefficientin in mice
测试项目
对照组
0.03%咖 啡 碱 + 0.3%茶 多 酚
0.03%咖 啡 碱 + 0.6%茶 多 酚
0.06%咖 啡 碱 + 0.3%茶 多 酚
0.06%咖 啡 碱 + 0.6%茶 多 酚
收稿日期： 2010-06-26 基金项目： 江 西 省 自 然 科 学 基 金 项 目 （No.2008GZN0024）；
教育部留学回国人员科研启动基金项目 （教外 司 留 [2009]1001 号 ）； 江 西 省 教 育 厅 项 目 （No. GJJ10425） 作者简介： 杨丽聪，女，1986 年出生，硕士生 通讯作者： 郑国栋
8.10 ± 0.84
7.95 ± 0.83
8.18 ± 1.02
6.70 ± 0.71**
腹 腔 脂 肪 系 数 /%
5.95 ± 0.35
3.09 ± 0.61**
2.97 ± 0.35**
3.83 ± 0.42**
3.43 ± 0.41**
肝 脏 系 数 /%
4.33 ± 0.18
4.56 ± 0.32
第 11 卷 第 3 期
咖啡碱与茶多酚组合对小鼠肝脏脂肪代谢酶活性的影响
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均为分析纯。 1.2 方法 1.2.1 动 物 分 组 及 饲 养 50 只 雌 性 昆 明 小 鼠 用 普通粉末饲料适应性喂养 1 周后， 随机分成对照 组 、0.03% 咖 啡 碱 +0.3% 茶 多 酚 、0.03% 咖 啡 碱 + 0.6% 茶 多 酚 、0.06% 咖 啡 碱 +0.3% 茶 多 酚 、0.06% 咖 啡碱+0.6%茶多酚 5 组，每组 10 只，自由采食和饮 水，每隔 1 天换 1 次饲料， 每周称 1 次体重，饲养 12 周。 饲养条件：室温（22±2）℃，光暗周期 12/12 （光照从 08：00-20：00）。 1.2.2 动 物 解 剖 投 喂 试 验 结 束 后 ， 小 鼠 禁 食 12 h 以上，照常饮水，用氯仿麻醉，摘取肝脏、腹腔 脂肪组织称重，计算腹腔脂肪系数与肝脏系数。 肝 脏在-80 ℃的超低温冰箱保存，备用。
关键词 咖啡碱与茶多酚组合； 体重； 腹腔脂肪； 脂肪代谢 文章编号 1009-7848（2011）03-0014-06
肥胖是一种多因素的慢性代谢性疾病， 是能 量失衡的一种表现， 主要表现为体内脂肪堆积过 多，体重增加[1]。 肥胖常常伴随一些并发症，如冠心 病、高血压、II 型糖尿病等。 近年来，由于我国人民 生活水平不断提高，饮食习惯日趋欧美化，肥胖症 发病率逐年上升， 所以肥胖的预防与治疗受到越 来越多人的关注。
茶叶是世界上饮用较广泛的饮料之一， 其中 绿茶具有很多生理生化功能，主要有抗氧化 、 [2-3] 降 血脂[4]、抗癌[5]、降血糖[6]等功能。 茶多酚是茶叶中具 有保健功能的主要成分之一。 近年来，一些研究表 明茶多酚有减少小鼠体重增加， 降低血液和肝脏 甘油三酯浓度， 对高脂血症大鼠总胆固醇及甘油 三酯的增加有抑制作用 ， [7-11] 因此茶多酚具有降血 脂、减肥功效。 茶叶中咖啡碱具有兴奋中枢神经、 强心、利尿、松弛平滑肌、刺激胃酸分泌、助消化和 促进代谢等功能[12]。 咖啡碱与茶多酚在减肥方面
肉毒碱脂酰 转 移 酶 活 性 〔mmol/（mg·min）〕= （△Abs/△t）/13600
式 中 ，△Abs— ——测 定 时 间 内 412 nm 处 的 吸 光度变化值；△t— ——测定时间（min）。