吲哚乙酸氧化酶活性的测定25页PPT
吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定
吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定一、原理1、吲哚乙酸产品概述:吲哚乙酸可占植物体内吲哚乙酸的50-90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。
吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂;吲哚乙酸刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长;促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。
吲哚乙酸在器官和整株水平上，吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。
吲哚乙酸控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制;当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性;当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性;吲哚乙酸造成顶端优势;延缓叶片衰老;施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落;吲哚乙酸促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。
2、试验原理:吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。
植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。
酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。
吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
二、准备仪器及药品T6新悦型分光光度计离心机恒温水浴锅天平研钵试管移液管烧杯20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0(见附表2)。
1mmol/L2，4—二氯酚:称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。
1mmol/L氯化锰:称取MnCl?4HO 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。
221mmol/L吲哚乙酸:称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。
吲哚乙酸试剂A或B(任备其中之一):试剂A:15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸(比重为1.84)，500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。
用时1ml样品中加入试剂4ml。
试剂B:10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。
酶活性测定方法
一、过氧化物酶（POD）活性的测定POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。
测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。
然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。
在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。
以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。
△470 ×V TPOD活性=0.01×t×Vs×W式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）t----反应的时间（min）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）W----样品鲜重（g）二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。
酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成浆，4℃条件下12000r/min离心15min后上清液即为粗酶液。
PPO活性测定：反应试管中分别加入0.1 mL酶液+3.9 mL磷酸缓冲液+ 1 mL 1m mol／L的邻苯二酚。
混匀后于30℃保温10 min，迅速加入2 mL质量分数为20％的三氯乙酸终止反应，立即于525nm下测定其吸光度值，计算酶活。
PPO活性= O D×V T0.01×t×0.5g×V s= O D×V T0.005OD——反应时间内吸光值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）T———反应时间(min)；三、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性的测定参照张志良等(1990)人的方法并稍作改动。
植物生理学实验指导.ppt
二、植物生理学实验的目录
实验九 小筐子法(广口瓶法)测定植物呼吸速率---------3学时 附: 微量定容测压法测定种子的呼吸速率(示范)
实验十 过氧化物酶活性的测定-----------------------------3学时 实验十一 吲哚乙酸氧化酶活性的测定--------------------3学时 实验十二 植物种子生活力的快速测定--------------------3学时 实验十三 谷类种子萌发时淀粉酶活性的测定-----------3学时 实验十四 种子萌发过程中淀粉、脂肪、蛋白质的转化3学时 实验十五 植物激素对愈伤组织的形成和分化的影响---6学时 实验十六 植物抗逆性的鉴定（电导仪法）---------------3学时
[目的要求]
１、了解测定光合速率的几种方法，并比较其优缺点； ２、掌握半叶法测定光合强度的原理及其要点； ３、了解光合强度测定在选育良种、合理施肥、抗性品 种筛选等方面的现实意义。
[实验方法] 改良半叶法
[实验仪器]
电子天平、刀片、烘干箱、锡铂纸、塑料牌、模片等。
实验八 改良半叶法测定植物叶片光合速率
（比色法）（3学时）
[实验操作方法] 1、粗酶液的提取； 2、酶活性的测定； 3、计算酶活性的大小。
[实验要点] 根据酶活性大小可测定0-3min或0-5min
的OD值，取平均值计算。
实验十一 吲哚乙酸氧化酶活性的测定
（3学时）
[目的要求] 1、掌握吲哚乙酸氧化酶活力大小测定的原理； ２、学会测定不同组织中吲哚乙酸氧化酶的活
1、装样时螺旋套不要拧得太紧，以免压伤植物组织； 2、加压速度不能太快，接近叶片水势时加压速度要放慢，否则会 影响测量精度。
3、注意安全，加压时不要使脸部处于钢筒顶盖正上方。 4、 高压钢瓶有危险人，搬运或使用时要注意。
植物吲哚乙酸(IAA)酶联免疫分析(ELISA)
植物吲哚乙酸（IAA）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中吲哚乙酸（IAA）含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。
用纯化的植物吲哚乙酸（IAA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸（IAA），再与HRP标记的植物吲哚乙酸（IAA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物吲哚乙酸（IAA）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：3600pmol/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存标本要求：1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
酶活性的测定PPT课件
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.SOD活性测定：
将样液加入到Tris缓冲溶液中，其余步骤同自 氧化速率测定方法。 活力单位定义：将一定条 件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量 定义为一个单位（u）。
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感谢您的观看！
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失活。只要AsA能够再生，APX就能充分进行
催化反应，从而保护叶绿体维持正常的光合能
力。
第15页/共3碎，加入适量的石英砂、PVPP和7.5mL酶提取液 ，在冰浴中充分研磨，离心（10000g、4℃、20min）取上层清夜1mL，分装 于小离心管中置于4℃备用或-20℃保存。
10mmol/LHCl 配制成 6mmol/L溶液存放于冰
箱备用。
2.仪器: 紫外分光光度计，酸度计，恒温
水浴锅
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实验步骤：
（1）.邻苯三酚自氧化速率测定：
在试管中加入4.5ml 50mmol/LTris缓冲溶液 ，于25℃保温20min,加入10～20ul 30mmol/L 邻苯三酚，立即计时并摇匀，倾于比色杯内， 于325nm下，每隔1min测吸光值一次，空白以 10mmol/L HCl代替邻苯三酚，要求自氧化速 率控制在0.070 OD/min左右。
• 式中 • • • •
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数； VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）; W—样品鲜重（g）；
• 1.7mg
1.7—1ml H2O2。
0.1mol/L的KMnO4相当于
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• 紫外分光光度法:
• H氧根2O化据2在氢 测2，量40使吸nm反光波应率长溶的下液变有吸化强光速烈度度吸即(收A可24，0测)过随出氧反过化应氧氢时化酶间氢能而酶分降的解低活过。性 。
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相关症状： 类癌综合征、类癌面红。
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相关疾病：
食管类癌、胃类癌瘤、肝脏类癌、胆囊类 癌、类癌综合征、小肠类癌、结肠类癌、 阑尾类癌、十二指肠类癌、胰岛细胞类癌、 原发性卵巢类癌综合征、胸腺类癌、大肠 类癌、类癌。
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医学检验·各论：5-பைடு நூலகம்吲哚乙酸 >>>
简介：
5-HT约2/3在肝脏与硫酸或葡萄糖醛 酸结合后排出，或将吲哚断裂而分解;约 1/3风景单氨氧化酶作用氧化脱氨形成5HIAA后从尿排出。5-HIAA是5-羟色氨酸代 谢的最终产物，不具有生物活性。
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谢谢！
临床意义： 阳性(或升高)：类癌瘤综合征、食品
和药物(香蕉、西红柿、杏、核桃、茄子、 利血平、酚噻嗪衍生物、卢戈氏液)。
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正常值： 定性：(新鲜尿)阴性。 定量(尿)：
10.5～42.0μmol/24h(2～8mg/24h)。
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吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒（IAA比色法）
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒（IAA比色法）吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)简介：植物体内生长素的种类很多，其中吲哚乙酸(IAA)是植物体内普遍存在的一种生长素，植物体内IAA的含量，对于植物的生长、发育、衰老、脱落等均有重要意义。
植物体内存在吲哚乙酸氧化酶(Indoleacetic acid oxida-se)，该酶是植物体内一种氧化分解吲哚乙酸的酶，吲哚乙酸氧化酶能够氧化IAA使其失去活性，从而调节体内IAA的水平，影响植物的生长。
Leagene吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)检测原理是吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶作用下形成吲哚醛，使体系中吲哚乙酸含量减少，剩余的吲哚乙酸在无机酸存在下与FeCl3作用生成红色螯合物，吲哚乙酸氧化酶活性的大小可以用其破坏吲哚乙酸的速度表示。
通过比色法(分光光度计)测定吸光度，根据对照与待测样品中吲哚乙酸含量的差值，计算出吲哚乙酸氧化酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中吲哚乙酸氧化酶活性，尤其适用于定量测定植物样本吲哚乙酸氧化酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、恒温箱或水浴锅2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、浓硫酸6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TE051350TStorage试剂(A):IAA标准(200μg/ml)25ml4℃避光试剂(B):IAA Lysis buffer250ml RT试剂(C):IAA Assay buffer60ml4℃避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：将大豆或绿豆等种子置于30℃中避光萌发3-4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶和根，留下胚轴作为材料。
取胚轴，称重，按每100mg加入适量预冷的IAA Lysis buffer的比例，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
离心,留取上清液即为吲哚乙酸氧化酶粗提液。
短期4℃保存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，保存，用于吲哚乙酸氧化酶的检测。
酶活性测定方法
酶活性测定方法一、过氧化物酶（POD）活性的测定POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。
测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。
然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。
在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。
以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。
△470 ×V TPOD活性=0.01×t×Vs×W式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）t----反应的时间（min）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）W----样品鲜重（g）二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。
酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成浆，4℃条件下12000r/min离心15min后上清液即为粗酶液。
PPO活性测定：反应试管中分别加入0.1 mL酶液+3.9 mL磷酸缓冲液+ 1 mL 1m mol／L的邻苯二酚。
混匀后于30℃保温10 min，迅速加入2 mL质量分数为20％的三氯乙酸终止反应，立即于525nm 下测定其吸光度值，计算酶活。
PPO活性= O D×V T0.01×t×0.5g×V s= O D×V T0.005OD——反应时间内吸光值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）T———反应时间(min)；三、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性的测定参照张志良等(1990)人的方法并稍作改动。
植物吲哚乙酸IAA酶联免疫分析
植物吲哚乙酸（IAA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T2 pmol/L -48 pmol/L使用目的：本试剂盒用于测定植物相关样本中吲哚乙酸（IAA）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。
用纯化的植物吲哚乙酸（IAA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸（IAA），再与HRP 标记的吲哚乙酸（IAA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物吲哚乙酸（IAA）浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶789终止液6ml×1瓶2 酶标试剂标准品（96pmol/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂A液6 显色剂B液标准品稀释液 1.5ml×1瓶1份10 说明书11 封板膜12 密封袋2张1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
48pmol/L 24pmol/L 12pmol/L 6pg/ml 5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液3pg/ml2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)简介：植物体内生长素的种类很多，其中吲哚乙酸(IAA)是植物体内普遍存在的一种生长素，植物体内IAA的含量，对于植物的生长、发育、衰老、脱落等均有重要意义。
植物体内存在吲哚乙酸氧化酶(Indoleacetic acid oxida-se)，该酶是植物体内一种氧化分解吲哚乙酸的酶，吲哚乙酸氧化酶能够氧化IAA使其失去活性，从而调节体内IAA的水平，影响植物的生长。
Leagene吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)检测原理是吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶作用下形成吲哚醛，使体系中吲哚乙酸含量减少，剩余的吲哚乙酸在无机酸存在下与FeCl3作用生成红色螯合物，吲哚乙酸氧化酶活性的大小可以用其破坏吲哚乙酸的速度表示。
通过比色法(分光光度计)测定吸光度，根据对照与待测样品中吲哚乙酸含量的差值，计算出吲哚乙酸氧化酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中吲哚乙酸氧化酶活性，尤其适用于定量测定植物样本吲哚乙酸氧化酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、恒温箱或水浴锅2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、浓硫酸6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TE051350TStorage试剂(A):IAA标准(200μg/ml)25ml4℃避光试剂(B):IAA Lysis buffer250ml RT试剂(C):IAA Assay buffer60ml4℃避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：将大豆或绿豆等种子置于30℃中避光萌发3-4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶和根，留下胚轴作为材料。
取胚轴，称重，按每100mg加入适量预冷的IAA Lysis buffer的比例，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
离心,留取上清液即为吲哚乙酸氧化酶粗提液。
短期4℃保存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，保存，用于吲哚乙酸氧化酶的检测。
高效毛细管电泳法测定吲哚乙酸氧化酶的活力
时， 吲哚 乙酸 氧化酶 的活 力最 高。 关键 词 高效毛 细管 电泳 ； 吲哚 乙酸氧化 酶 ； 山石 斛 霍 中图分类 号 Ｑ ５ 文 献标识 码 Ａ ５４ 文 章编 号 ０ １—６ １２０ ）８ ００５ ０ ５７ ６ １（０ ８０— ３７ —２
Ｓｔ ｙ ｏ ｈｅＤｅ ｅ ｍ ｉ ｔｏ ｆＩ Ａ ｕｄ ｎｔ ｔ ｒ ｎａ ｉｎ ｏ Ａ Ｏｘｉ ｓ ｔｖ ｔ ｙ Ｈｉ ｒ ｏ ｍ ａｎ ｅＣａ ｌ ｒ ｅ ｔｏ ｄａ ｅＡｃｉｉｙｂ ｇｈＰｅ ｆ ｒ ｃ ｐｉｌ ｙＥｌｃｒ ｐｈｏ ｅ ｉ ａ ｒ ｓｓ
ｔｅｏｔ ｍ ｏ ｄｔ ｎ ｒ ｅｅｍｉｉｇｔｅａｔ ｉ ｆｎ ｏｅｃ ｔ ｃｄ（ ） ｘｄ ｓ ｅｅｓｕ ｉｄｂ ｉｈｐ ｒ ｒ ｎ ｅｃｐｌ ｒ ｌｃｒｐ ｏｅｉ ｈ ｐｉ ｍｕ ｃｎ ｉｏ ｓ ｔｒ ｎｎ ｃｉ ｔ ｏ ｄｌａｅｉ ａ ｉ Ｉ ｉ ｆ ｄ ｏ ｈ ｖｙ ｉ ｃ ＡＡ ｏ ｉａｅｗ ｒ ｄｅ ｙｈｇ ｅｆ ｍａｃ ａ ｉａｙｅｅｔ ｈ ｒｓ ｔ ｏ ｌ ｏ ｓ
ｅ ｚ ｍｅｗａ ｎ ｒ ａ ｅ ｔ ｈ ｒ ａ ｉｇｏ ｈ ｕ ｓｒｔ ｏ ｃ ． ｈ ｎ ｔｅｓ ｂ ｔａｅｃ ｎ ｎ． ｓｍｏ ｅｔａ ０ ｍｇＬ．ｈ ｎ ｙ ｃｉｉ ｓｎｏ ｎ ｙ ｓｉ ｃｅ ｓｄｗｉｈｔｅｉ ｅ ｓ ｆ ｅｓ ｂ ｔａｅｃ ｎ ｎ Ｗ ｅ ｈ ｕ ｓｒ ｔ ｏ ｃ ｗａ ｒ ｈ ｎ２ ／ ｔｅｅ ｚ ｍｅａ ｔｖｔ ｗａ ｔ ｎｃ ｔ ｙ