血清蛋白电泳ppt课件
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血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳ppt课件
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五、实验操作
浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。在无光 泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之置于盛有缓冲液 的平皿中，浸泡30 min方可用于点样
点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液， 然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片上滴一滴血清， 点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可来回移动一次），再将点 样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄膜内，形成均匀的直线
点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或印出凹陷影响 电泳区带分离效果
电泳时应选择合适的电流强度，一般电流强度为0.4～0.6mA/cm膜宽度。 电流强度高，则热效应高；电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散
操作过程为防止指纹污染，应戴手套
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七、实验思考
用醋酸纤维薄膜电泳做电泳支持物有什么优点？ 电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
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一、实验目的
了解电泳技术的一般原理 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作
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二、实验原理
电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在 一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电 荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的 电泳迁移率不同，因此可使它们分离
影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强 度和电渗现象
影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状
按支持介质不同可将电泳分为纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶 电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验一血清蛋白质测定(共51张PPT)
【注意事项】
1.测定的血清以新鲜为宜，但在冰箱保存而不混 浊的标本也可应用，高脂血症混浊血清会干扰比 色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离 心管，各加待测血清，再加蒸馏水和丙酮10ml， 塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试 管倒立于滤纸上吸去残余液体。向沉淀中分别加 入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述 相同的其他操作和计算。
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标准
A 血红蛋白和BCG产生与白蛋白相等的颜色强度，血红蛋白在1g/L以下无明显干扰，2g/L使吸光度增高3.
2．10mmol/L BCG贮存液
标准
3．叠氮钠贮存液
4．聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)贮存液
5．BCG试剂
实验一 血清蛋白质测定
但本法的检出限为～，这相当于70g/L的血清3～24μl，已能满足临床生化检验的需要，成为临床实验室血清TP首选的最方便，实用的常规方法。 酚酞、溴磺酞钠在碱性溶液中呈色，影响测定结果，右旋糖酐可使测定管混浊亦影响结果，理论上这些干扰均可用相应的标本空白管来消除。 ３．在波长630nm处用空白管调零，用定量加液器加BCG试剂，与测定管血清混合后，立即在30±3s内，读取吸光度。 4%，4g/L使吸光度增高7. 2 桌面，边台，水池，窗台，仪器要一尘不染，请值日生用抹布擦干净。 4(显蓝绿色)，受酸、碱影响较大，故所用的器材必须无酸、碱污染，BCG工作液的pH必须精确度监测，务必使其保持在限度内。 手工操作参数：波长540nm，光径1cm； 用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度，用溴甲酚绿法测定血清白蛋白浓度, 蛋白质测定方法很多，常用的有： 丽春红蛋白结合法测得的结果与凯氏定氮法相符，并且显色后在室温可稳定24小时； 1．黄疸血清，溶血，高糖，酚酞等干扰用样本空白来消除。 由于血红蛋白本身能与双缩脲试剂反应，产生与血清白蛋白和球蛋白相近的显色效价，故应注意高血红蛋白的影响。 取试管4支，标明测定管（U）、标准管（S）、标本空白管（B）、试剂空白管（RB）。 双缩脲法测定血清总蛋白
血清蛋白电泳典型图谱分析.pptx
肾病综合征
肾病综合征时，主要是α2 区的α2巨球蛋白增加，β1 区的ApoB增加所致。
遗传基因突变；或服用β内酰胺类抗生素等导致药物与 白蛋白结合。
低丙球蛋白血症
常见于先天性缺陷或继发性因素（如免疫抑制剂治疗）
高免疫球蛋白血症
高免疫球蛋白(多克隆)，常见于自身免疫性疾病、慢性 感染等
M蛋白
γ区单克隆免疫球蛋白升高，可见于多发性骨髓瘤、淋 巴瘤等疾病
β区M蛋白
因IgA位于β区后部或β和γ区之间，所以单克隆IgA 升高常出现这样图形，主要见于IgA型骨髓瘤 。
M蛋白
M蛋白
即单克隆蛋白monoclonal protein ，是浆细胞或B淋巴细胞 单克隆恶性增殖所产生的一种大量异常免疫球蛋白，其本 质是一种（无功能的）免疫球蛋白或免疫球蛋白片段（重 链，轻链等）。
--毛细管电泳
血清电泳原理
➢ 蛋白质等电点
由于蛋白质含有羧基 “-COOH”和氨基 “-NH2”可 解离成带电荷基团，所以在溶液中有两性电离现象。
当蛋白质溶液处于某一pH时，该蛋白质极性基团解 离正负离子数相等，净电荷为0，此时该溶液的pH值就 是该蛋白质的等电点pI值。
每种蛋白质pI大小是特定的，只与该蛋白质结构有关。
➢ 从正极起依次为白蛋白、a1、a2、b（ b1， b2）、g。 ➢ 区带经丽春红等染料染色后，由光密度扫描仪检测
并自动画出吸光度积分曲线。
血清蛋白电泳正常图谱
Albumin α1 α2 β
γ
正常血清蛋白电泳图谱
白蛋白
a1: a1酸性糖蛋白, a1抗胰蛋白酶，甲胎蛋白等 a2: 结合珠蛋白, a2 巨球蛋白, a脂蛋白, 铜蓝蛋白等 b : 转铁蛋白, b脂蛋白,纤维蛋白原,补体,b2微球蛋白等 g : 免疫球蛋白
医学检验·检查项目：血清蛋白电泳(SPE)_课件模板
医学检验·各论：血清蛋白电泳（SPE） >>>
简介：
7～9β7～1110～13γ9～1817～22白蛋白： 54％--65％；α1球蛋白：1．4％--3．3 ％α2白蛋白：7．3％～12．0％β球蛋白： 8．2％～13．8％γ球蛋白：10．5％-23.5％。
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医学检验·各论 血清蛋白电泳（SPE）
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简介：
血清蛋白电泳即用电泳方法测定血清 中各类蛋白占总蛋白的百分比。对于肝、 肾疾病和多发性骨髓瘤的诊断有意义。
血清含有各种蛋白质，其等电点均在 pH7.5以下，若置于pH8以上的缓冲液电泳 时均游离成负离子，再向正极移动。由于 其等电点，分子量和分子形状各不相同， 其电泳速度就不同。故
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简介：
可将血清中蛋白质区分开来。分子量小， 带电荷多者，泳动速度最快。按其游动速 度顺序把血清蛋白粗略分为清蛋白，α1、 α2、β及γ球蛋白。正常值见表，临床 上血清白蛋白减少与γ球蛋白增高为肝病 患者血清蛋白电泳所共有的现象，其减少 与增加的程度和肝炎的损伤的范围相并行。 急性肝炎早期无变化，发病
正常值： 。
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相关检查： 溶解酶、血小板凝集试验（PAgT）、尿微 量清蛋白（mA1B）、土拉伦斯杆菌凝集试 验。
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相关症状： 膨胀性肝脏搏动、肝星状细胞增生、肝区 摩擦音、血清丙肝病毒RNA(HCV-RNA)阳性、 血吸虫导致的肝硬化、肝被膜血肿破裂。
实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳.ppt
指南：
电泳仪由电泳槽和稳压电源两部分组成，，两者之间有专门的连 线连接。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电 源连接好后，将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上，盖上盖子， 通电，调整好电压，进行电泳。注意电泳槽的电极方向，负极应 与醋酸纤维薄膜上的点样原点在同一侧。目前，该电泳仪已改进 为数显式的DYY-6C型。 浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。 在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之 置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样。 点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓 冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片 上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可 来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄 膜内，形成均匀的直线。
4. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带， 从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ 球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。
三、实验器材
1. DYY-6C型 双稳定时电泳仪和 DYY-Ⅲ型电泳槽，均为北京市六 一仪器厂生产 2. 醋酸纤维薄膜（2 cm×8cm） 3. 培养皿：一排桌子公用5套，包括 平衡、染色各用一套，漂洗用3套。 4. 点样器 5. 滤纸 6. 载玻片 7. 镊子 8. 玻棒
5.染色：
电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养 皿中浸泡5 min
6.漂洗：
将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直至背 景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带清晰的电泳图 谱 。
7.记录和分析实验结果
漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上的5条色带根据其颜 色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录在预习本上，并判断 分析其结果。
电泳仪由电泳槽和稳压电源两部分组成，，两者之间有专门的连 线连接。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电 源连接好后，将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上，盖上盖子， 通电，调整好电压，进行电泳。注意电泳槽的电极方向，负极应 与醋酸纤维薄膜上的点样原点在同一侧。目前，该电泳仪已改进 为数显式的DYY-6C型。 浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。 在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之 置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样。 点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓 冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片 上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可 来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄 膜内，形成均匀的直线。
4. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带， 从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ 球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。
三、实验器材
1. DYY-6C型 双稳定时电泳仪和 DYY-Ⅲ型电泳槽，均为北京市六 一仪器厂生产 2. 醋酸纤维薄膜（2 cm×8cm） 3. 培养皿：一排桌子公用5套，包括 平衡、染色各用一套，漂洗用3套。 4. 点样器 5. 滤纸 6. 载玻片 7. 镊子 8. 玻棒
5.染色：
电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养 皿中浸泡5 min
6.漂洗：
将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直至背 景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带清晰的电泳图 谱 。
7.记录和分析实验结果
漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上的5条色带根据其颜 色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录在预习本上，并判断 分析其结果。
蛋白质电泳分析PPT课件
蛋白质组学研究
蛋白质电泳分析在蛋白质组学研 究中具有重要作用，可用于分离 和鉴定蛋白质，揭示蛋白质的表
达模式和功能。
生物标志物发现
通过蛋白质电泳分析，可以发现 与疾病相关的生物标志物，有助
于疾病的早期诊用于药物靶点 的筛选和验证，以及药物作用机
制的研究，有助于新药研发。
绝对定量
通过灰度扫描电泳图谱中蛋白质条带， 可以计算出各蛋白质条带的相对含量。
通过标准品或已知浓度的蛋白质样品， 可以建立标准曲线，从而对未知浓度 的蛋白质样品进行绝对定量分析。
相对定量
通过比较不同样品中蛋白质条带的灰 度值或亮度，可以计算出各蛋白质的 相对表达量。
04
蛋白质电泳分析的优缺点
优点
03
蛋白质电泳分析结果解读
电泳图谱的解读
01
02
03
蛋白质分子量标准
电泳图谱中通常会有一条 蛋白质分子量标准，用于 参考和标定蛋白质的分子 量。
蛋白质条带位置
通过观察电泳图谱中蛋白 质条带的位置，可以判断 蛋白质的迁移率和分子量 大小。
蛋白质表达量
通过比较不同样品中蛋白 质条带的亮度或密度，可 以判断蛋白质的表达量。
在食品安全和检测领域的应用前景
食品成分分析
蛋白质电泳分析可用于食品中蛋白质的鉴定和含 量测定，确保食品质量和安全。
污染物检测
蛋白质电泳分析可以检测食品中的有害物质和污 染物，如农药残留、重金属等。
转基因食品检测
通过蛋白质电泳分析，可以检测转基因食品中的 外源蛋白质，保障消费者权益。
THANKS
感谢观看
蛋白质电泳分析PPT 课件
目录
• 蛋白质电泳分析概述 • 蛋白质电泳分析实验操作 • 蛋白质电泳分析结果解读 • 蛋白质电泳分析的优缺点 • 蛋白质电泳分析展望
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质ppt幻灯片
2.点样
1）用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸 干多余的缓冲液，然后平铺在桌子上（毛面朝 上）。
2）在一次性手套上滴一滴血清（3-5μl），用点样 器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在CAM膜的 点样线上，待血清完全渗透到薄膜内后移开。
3.电泳
1）将加样后的薄膜，毛面向下，垂直架于电泳槽的游杆两 端，点样端置于负极，纱布将膜的两端与缓冲液连通 2）将电泳槽的正极和负极分别与电泳仪的正极、负极连接， 打开电源，低压，平衡5min。调节电压至90-150V (110V),稳压电泳45min。 3）待电泳区带展开约25-35mm后，关闭电源。
2.M蛋白血症 单克隆γ球蛋白（M蛋白）血症，主要见于多发性骨
髓瘤、巨球蛋白血症、重链病以及一些良性M蛋白增多症。在β和 γ球蛋白后区段的各部分出现一条致密浓集的M蛋白带。
3.蛋白缺乏症 主要包括a1抗胰蛋白酶缺乏症、γ球蛋白缺乏症等。
临床上较少见，电泳图表现为a1或γ球蛋白缺乏或显著降低。
谢谢观看！ 电各2内清2内在12内1将将电各1薄A这点1醋白这1在 β薄1将各β将将正A清蛋1A正电3电在AA在2内各也这电 在正在aa电电各将将M2内1将这也也脐在调电2内因场蛋醋白蛋a蛋5将5这电各醋白电M1β因场电1也 AM蛋正调cc） ） ） ） ）） ） ） ） ） ） ） ） ）） ） ）111---XXXXXX蛋蛋蛋球球球泳组后蛋后β后染已泳组膜些样酸。些β膜漂组染染常蛋白常泳泳ββ后组可些泳β常β泳泳组染已后已些可染可带β节泳后血中白酸。白白已些泳组酸。泳血中泳可白常节mm---::::::球球球在在醋在将 将醋醋醋将待在在将 在醋将和和和和和和和各各各各各各白白白处处蛋 蛋 蛋： 分 移 白 移 移 色 经 ： 分 的 蛋 时 纤 蛋 的 洗 分 色 色 血 白 缺 血 ： ： 移 分 将 蛋 技血 技 时 分 色 经 移 经 蛋 将 色 将 血 电 槽 移 清 ， 缺 纤 缺 缺 经 蛋 装 分 纤 装 清 ， 槽 将缺 血 电蛋蛋蛋一一酸一加 加酸酸酸加电一一加 一酸加γγγγγγγ组 组组组组组血血 血，，白白白带蛋开开开过编带蛋浸白，维白浸好蛋过过清乏清带带开蛋各白术 清术应蛋过编开编白各过各清压置开中各乏维乏乏编白置蛋维置中各置各 乏清压球球 球球球球球白白白次次纤次样 样纤纤纤样泳次次样 次纤样分 分分分分分症症 症用用电白。。。的号电白润经应薄经润的白的的蛋症蛋电电。白蛋经:蛋:选白的号。号经蛋蛋、至于。各蛋症薄症症号经由白薄由各蛋于蛋 症蛋至蛋蛋蛋蛋蛋蛋蛋性性维性后 后维维维后区性利 利性后 性维后蛋 蛋蛋蛋蛋蛋直直粒%薄、粒%是过将膜过是C%薄薄白白粒粒%白过白择%薄、、过白薄白胎9水种白膜、过电%膜电种白水白 白9白白 白白白白白单单 单手手薄手的 的薄薄薄的带手手的 0手薄的0用 用主主主主主白 白白白白白A======尺尺子膜标子电染薄电染电膜膜电电子子区染电合膜标标染区膜区儿平蛋质电标染泳电泳蛋质平区771117后后 后后后后后--M克克 克11AAAAAA套套膜套薄 薄膜膜膜薄展套套薄 套膜薄--要--要要-要-要带 带光 光光光光光115551和和在依记在泳色膜泳色泳依依泳泳在在带色泳适依记记色带依带血台白的泳记色槽泳槽白的台带55区区 区区区区区XXXXXX薄隆隆 隆33...3上上的上膜 膜的的的膜开上上膜 上的膜包包包包包电 电00密 密密密密密//////铅铅电次的电成处表可处成次次一一电电剪处一的次的的处剪次剪清，质电可的处和可和质电，剪 一%%%A段A段 A段段A段段A段AVV膜γγγ滴滴准滴， ，准准准，约滴滴， 滴准，括括括括括粒 粒度 度度度度度TTTTTT笔笔球球 球场放场败理面将理败放放般般场场下理般电放理下放下、两的泳将理稳将稳的泳两下 般CCCC((的的 的的的的放11××××××一 一 备 一 毛毛 备 备 备 毛 一 一 毛一 备 毛a2aaaa子子值值值值值值AAAA11轻轻蛋蛋蛋中在中的，多血，的在在可可中中，，可压在，，在，部侧迁血，压血压迁侧，可pp各各 各各各各各151111置MMMM00111111滴滴滴面 面面滴滴面 滴面II在 在抗-抗抗抗抗值值划划白白 白VV向漂向关可余清可关漂漂分分向向分可分，漂可分漂分分注移清可电清电移注分 分3部部 部部部部部000000膜膜膜膜在血血血向 向向血血向 血向5电 电))000000胰胰胰胰胰不不一一（（ （,,本洗本键展的蛋展键洗洗为为本本别展为一洗展别洗别原入率蛋展源蛋源率入别 为55分分 分分分分分m以以以以滤%%%%%%稳稳清清清下 下下清清下 清下77场 场蛋蛋蛋蛋蛋同同横横MMMm身缸身之示缓白示之缸缸身身用示般缸示用缸用发等也白示两白两也等用5555出出 出出出出出--毛毛毛毛纸压压66（（（， ，，（（， （，条条条条中 中白白白白白蛋蛋 蛋后，，线线所所一出冲分出一所所一出稳出一一性量不分出部分部不量一1111188现现 现现现现现面面面面上电电垂 垂垂垂 垂,,,,,333区区3区33区%%移 移酶酶酶酶酶白白 白，22222在在，，带带。清液成清。带带定清压清定定肝的同成清分成分同的定一一 一一一一一------朝朝朝朝，泳泳,,,,,555555直 直直直 直带带带带动 动33333缺缺缺缺缺）） ）关同同做做电电晰用五晰电电量晰在晰量量癌巴。五晰组五组。巴量μμμμμμ条条 条条条条条下下下下吸中中中中中44架 架架架 架，，，，速 速llllll乏乏乏乏乏血血 血闭））））））55一一点点荷荷的滤条的荷荷的的为的的的血比条的成条成比的致致 致致致致致的的的的干漂漂漂漂漂mm于 于于于 于即即即即度 度症症症症症症症 症电，，，，，，pp样样相相蛋纸主蛋相相蛋蛋清妥主蛋，主，妥N1NNN密密 密密密密密ii方方方方水洗洗洗洗洗HHnn1电 电电电 电AAAA不 不、、、、、aaaa，， ，源用用用用用用标标。。反反白吸要白反反白白在缓要白两要两缓0浓浓 浓浓浓浓浓缓缓式式式式分llll，，，，，OOOObbbb泳 泳泳泳 泳同 同γγγγγ主主 主。点点点点点点V记记的的电去区电的的电电冲区电者区者冲A，，，，HHHH集集集集集集集冲冲球球球球球浸浸浸浸，每 每 每 每 每。槽 槽槽槽 槽而而l要要 要稀稀稀稀样样样样样样b，，电电泳，带泳电电泳泳液带泳之带之液αααα的的 的的的的的液液蛋蛋蛋蛋蛋入入入入放次次次次次和的 的的的 的达 达1111见见 见溶溶溶溶器器器器器器并并极极图但，图极极图图，，图间，间，MMMMMMM中中，，，，白白白白白巴巴巴巴入55555α游 游游游 游到 到于于 于液液液液在在在在在在用用蛋蛋 蛋蛋蛋蛋蛋移移谱不从谱移移谱谱使从谱有从有使1mmmmm带带αααα缺缺缺缺缺比比比比扫杆 杆杆杆 杆球分 分多多 多2222洗洗洗洗血血血血血血iiiii铅铅白白 白白白白白动动。宜正。动动。。其正。专正专其nnnnn电电乏乏乏乏乏妥妥妥妥描，，，，两 两两两 两蛋离 离发发 发脱脱脱脱清清清清清清笔笔带带 带带带带带的的太极的的在极门极门在荷荷症症症症症缓缓缓缓仪ββββ端 端端端 端白的 的性性 性，，，，上上上上上上,,,,标标。。 。。。。。现现干端现现同端的端的同量量γγγγ等等等等等冲冲冲冲中， ，，， ，之技 技球球球球骨骨 骨进进进进蘸蘸蘸蘸蘸蘸号号象象。起象象一起连起连一会会。。。。。液液液液进点 点点点 点间术 术蛋蛋蛋蛋髓髓 髓行行行行一一一一一一。。。。依。。水依线依线水有有中中中中行样 样样样 样可。 。白白白白瘤瘤 瘤比比比比下下下下下下次平次连次连平不不，，，，扫端 端端端 端增。。。。、、 、色色色色，，，，，，为面为接为接面同同浸浸浸浸描置 置置置 置加巨巨 巨，，，，再再再再再再清。清。清。。，，泡泡泡泡，于 于于于 于一球球 球测测测测将将将将将将蛋蛋蛋此此并3333负 负负负 负条蛋蛋 蛋出出出出0000点点点点点点白白白外外用极 极极极 极甲mmmm白白 白各各各各样样样样样样///，，软白白白iiii， ，，， ，胎nnnn血血 血蛋蛋蛋蛋器器器器器器各各件。。。。蛋蛋蛋纱 纱纱纱 纱蛋症症 症白白白白轻轻轻轻轻轻蛋蛋分白白白布 布布布 布白、、 、质质质质印印印印印印白白析AAA将 将将将 将带重重 重区区区区在在在在在在lll质质bbb各膜 膜膜膜 膜。链链 链，，，带带带带CCCCCC的的种AAAAAA的 的的的 的病病 病的的的的分分MMMMMM蛋ααα两 两两两 两以以 以相相相相111膜膜膜膜膜膜子 子白---端端 端 端端及及 及球球球对对对对的的的的的的大大质与 与与与 与一一 一蛋蛋蛋含含含含点点点点点点小小的缓 缓缓缓 缓些些 些白白白量量量量样样样样样样和和相冲 冲冲冲 冲良良 良，，，。。。。线线线线线线形形对液 液液液 液性性 性ααα上上上上上上状状含222连 连连连 连MMM---，，，，，，也也量球球球通 通通通 通蛋蛋 蛋待待待待待待不不。蛋蛋蛋白白 白血血血血血血一一白白白增增 增清清清清清清致致，，，多多 多完完完完完完，，βββ症症 症---全全全全全全所所球球球。。 。渗渗渗渗渗渗以以蛋蛋蛋透透透透透透在在白白白到到到到到到同同,,, γγγ薄薄薄薄薄薄一一---球球球膜膜膜膜膜膜电电蛋蛋蛋
实验血清蛋白电泳
实验三 血清蛋白电泳
电泳基本原理：
电泳：带电粒子在电场的作用下，向着与其电性 相反的电极移动。
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析 的技术。
蛋白质N端游离氨基，C端游离羧基以及侧链 上一些基团在一定pH条件带电荷， 因此可以 用电泳技术分离和鉴定。
COO╱ + H+ Pr ←————→ ╲ + OH-
电极缓冲液通常为pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液，样品及浓缩胶中为pH6.7 Tris-HCL缓冲液。 甘氨酸的电离小，有效迁移率小，称为慢离子。 浓缩胶中的氯离子完全电离，有效迁移率大，称为快离子。 蛋白质在浓缩胶中介于二者之间。电泳开始后，蛋白质被压缩。 1cm厚样品层可以压缩0.25μm的厚度。
注意： （1）加入胶时避免气泡； （2）注水时用滴管或移液器，尽量轻，避免胶表面发生震动与扩散； （3）长针头易堵塞，不要用于注水； （4）滤纸不能接触胶表面。
2. 上样和电泳： 将凝胶管插入电泳槽槽底橡胶塞孔中，加入电极缓冲液
与下电泳槽，随后放入凝胶管及上槽，除气泡, 加样品液 50μl至浓缩胶面。加电解液直至装满上电泳槽。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为 支持介质的一种电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶的优点
聚丙烯酰胺是人工合成的凝胶。机械强度好、弹 性大、透明，化学稳定性高，分辨率高。仅需小 量样品即可进行。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分类
按凝胶装置分为盘状电泳及板状电泳。
盘状电泳通常是不连续系统，利用缓冲液离子成分、 pH、凝胶孔径进行电泳，带电颗粒电泳时具有电荷 效应、分子筛效应、 浓缩效应。
电泳约1.5hr。 上层浓缩胶 电流1mA/管。 下层分离胶 电流5mA/管。 电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳。
电泳基本原理：
电泳：带电粒子在电场的作用下，向着与其电性 相反的电极移动。
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析 的技术。
蛋白质N端游离氨基，C端游离羧基以及侧链 上一些基团在一定pH条件带电荷， 因此可以 用电泳技术分离和鉴定。
COO╱ + H+ Pr ←————→ ╲ + OH-
电极缓冲液通常为pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液，样品及浓缩胶中为pH6.7 Tris-HCL缓冲液。 甘氨酸的电离小，有效迁移率小，称为慢离子。 浓缩胶中的氯离子完全电离，有效迁移率大，称为快离子。 蛋白质在浓缩胶中介于二者之间。电泳开始后，蛋白质被压缩。 1cm厚样品层可以压缩0.25μm的厚度。
注意： （1）加入胶时避免气泡； （2）注水时用滴管或移液器，尽量轻，避免胶表面发生震动与扩散； （3）长针头易堵塞，不要用于注水； （4）滤纸不能接触胶表面。
2. 上样和电泳： 将凝胶管插入电泳槽槽底橡胶塞孔中，加入电极缓冲液
与下电泳槽，随后放入凝胶管及上槽，除气泡, 加样品液 50μl至浓缩胶面。加电解液直至装满上电泳槽。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为 支持介质的一种电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶的优点
聚丙烯酰胺是人工合成的凝胶。机械强度好、弹 性大、透明，化学稳定性高，分辨率高。仅需小 量样品即可进行。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分类
按凝胶装置分为盘状电泳及板状电泳。
盘状电泳通常是不连续系统，利用缓冲液离子成分、 pH、凝胶孔径进行电泳，带电颗粒电泳时具有电荷 效应、分子筛效应、 浓缩效应。
电泳约1.5hr。 上层浓缩胶 电流1mA/管。 下层分离胶 电流5mA/管。 电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳课件
2. 点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约1.5 cm 处，点加3-5 μL待分离血清。注意取样适量、均匀； 血清线位置适当，粗细均匀，不能有明显扩散现象。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 1.5cm
9
3. 搭桥：首先将双层纱布铺好，分别放置于电泳槽两端， 其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好样的薄膜光面 向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意桥的方向，点 样的一端位于负极，点样线不能搭在滤纸上。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
3
影响带电粒子电泳速率的因素： 1. 带电量 F=qE 2. 分子量 3. 形状
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
4
2.电泳分离蛋白质的原理
蛋白质的两性解离：
pH小于pI
pI
+OH-
+H-
pH大于pI
+OH+H-
等电点 —— 即 pI ( isoelectric point）
当pH距离pI越远时，所带电量越多。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
5
血清蛋白质的等电点为4.8~7.5，均低于8.6，因此 电泳时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带 负电荷，在电场中向正极移动。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
6
3.醋酸纤膜薄膜电泳分离血清蛋支持物的一种电泳 技术。
1.定性观察：染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
12
六、临床意义
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分析 血、尿等样品中的蛋白质，供临床上诊断肝、肾等疾病 参考。
1．肝硬化时清蛋白明显降底，α2和β-球蛋白无显 著变化，而γ球蛋白可显著增加。正常生理情况，清蛋 白与球蛋白之比约为1.5~2.5∶1，而肝硬化时有可能出 现清∶球＜1的情况，常称为清、球比例倒置，说明肝 功能严重受损。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 1.5cm
9
3. 搭桥：首先将双层纱布铺好，分别放置于电泳槽两端， 其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好样的薄膜光面 向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意桥的方向，点 样的一端位于负极，点样线不能搭在滤纸上。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
3
影响带电粒子电泳速率的因素： 1. 带电量 F=qE 2. 分子量 3. 形状
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
4
2.电泳分离蛋白质的原理
蛋白质的两性解离：
pH小于pI
pI
+OH-
+H-
pH大于pI
+OH+H-
等电点 —— 即 pI ( isoelectric point）
当pH距离pI越远时，所带电量越多。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
5
血清蛋白质的等电点为4.8~7.5，均低于8.6，因此 电泳时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带 负电荷，在电场中向正极移动。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
6
3.醋酸纤膜薄膜电泳分离血清蛋支持物的一种电泳 技术。
1.定性观察：染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
12
六、临床意义
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分析 血、尿等样品中的蛋白质，供临床上诊断肝、肾等疾病 参考。
1．肝硬化时清蛋白明显降底，α2和β-球蛋白无显 著变化，而γ球蛋白可显著增加。正常生理情况，清蛋 白与球蛋白之比约为1.5~2.5∶1，而肝硬化时有可能出 现清∶球＜1的情况，常称为清、球比例倒置，说明肝 功能严重受损。
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缓冲液：巴比妥缓冲液（pH8.6 ） 染色液：丽春红S染色液 漂洗液：3%（V/V）醋酸溶液 洗脱液：0.1mol/LNaOH溶液
.
操作
准备 ➢ 电泳槽准备 ➢ CAM的准备 点样 吸3-5μl血清均匀点于CAM无光泽面 电泳 无光泽面朝下，点样侧置于负极端，通电 染色 将薄膜条浸入丽春红S染色液，染5-10min 漂洗
.
电泳结果示意图
γ
β α2 α1 清蛋白
.
染色时染料与蛋白质特异结合而不与醋纤膜结 合，染色深浅与蛋白质的量成正比
染色一段时间后脱色，将各蛋白区带剪下，经 脱色、比色即可计算出各蛋白质组分的相对百 分数。
如同时测定出总蛋白浓度，还可计算出各蛋白 组分的绝对浓度
.
正常血清电泳扫描图谱
.
试剂
.
醋纤膜规格及点样示意图
.
定量
取试管6支，在白蛋白管内加入0.1mol/L NaOH 液6ml，其余各管加入3ml，将各蛋白区带剪下 分别置于各试管中，另从空白背景剪一块平均 大小的膜条置于空白管中，37℃10-20min
向白蛋白管中加入40%醋酸0.6ml,其余各管加 0.3ml,以中和部分NaOH
血清蛋白电泳
(Serum Protein Electrophoresis)
.
血清和血浆
• 血清:是指离体的血液经过自然凝固而析出 的液体部分. 血浆:是指离体并经过抗凝的血液经过离心 沉淀后的上清部分. 血清中无纤维蛋白原
.
简介
人类血液中有125种以上蛋白质成分。 白蛋白、脂蛋白、抗体、补体、凝血酶原
❖ 按支持介质形状不同：薄层电泳、板电泳和 柱电泳
❖ 按用途不同：分析电泳、制备电泳、定量免 疫电泳和连续制备电泳。
.
影响电泳的因素
在电泳中,电场,带电粒子和促使带电粒子移 动的介质是产生电泳的三大要素.因而,影 响电泳的主要因素有：
➢ 电场强度的影响 ➢ 溶液的pH值 ➢ 溶液的离子强度 ➢ 电渗 ➢ 温度、分子大小、吸附作用等
蒸发薄膜与滤纸桥接触不良 薄膜位置歪斜、弯曲，与电流方向不平行 缓冲液变质；样品不新鲜 CAM质量不高等 电渗现象
.
评价
❖ 优点：CAM电泳具有灵敏度高，标本用量少，
分辨率高，区带清晰，电泳时间短，操作简便 快捷；CAM对染料不吸附，蛋白区带均匀，背 景清晰，既易比色定量，又易透明后进行光密 度扫描。
占总蛋白的百分数(%) 57～68 1.0～5.7 4.9～11.2 7.0～13.0 9.8～18.2
.
各组分构成
Alb：白蛋白 α1：α1酸性糖蛋白；α1抗胰蛋白
酶；甲胎蛋白；高密度脂蛋白 α2：触珠蛋白；铜兰蛋白；α2巨球蛋白；
α脂蛋白 β：转铁蛋白；补体系统；β脂蛋白 γ：IgG；IgM；IgA；IgD；IgE； CRP
用520nm比色，以空白管调零，读各管吸光度
.
计算
设各部吸光度分别为AA、Aa1、Aa2、 Aβ、Aγ。吸光度总和（AT）为：
AT= AA+Aa1+Aa2+Aβ+Aγ ❖ 白蛋白（%）＝（AA *2 AT）*100% ❖ a1-球蛋白（%） = （Aa1 AT）*100% ❖ ……
.
注意事项
通电时，不得接触槽内缓冲液或CAM， 以防触电
❖ 1959年，Raymond和Weintraub创建聚 丙烯酰胺凝胶电泳
.
电泳和电泳技术
电泳是指带电粒子在电场的作用下，向 着与其电性相反的电极移动的现象。
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行 分离分析的技术。
.
应用
• 电泳技术除了用于小分子物质的分离分析 外,最主要用于蛋白质,核酸等生物分子的研 究.由于电泳法设备简单,操作方便,具有高分 辨率及选择性特点,已成为医学检验中常用 的技术.
.
电泳用于分离物质的原理
COO╱ + H+ Pr ←————→ ╲ + OH-
NH2
COO-
COOH
╱ + H+ ╱
Pr ←————→ Pr
╲ + OH- ╲
NH3+
NH3+
PH>PI
PH=PI
PH<PI
.
电泳分类
❖ 按分离的原理不同：区带电泳、自由界面电 泳、等速电泳、等电聚焦电泳
❖ 按支持介质的不同：纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电 泳
.
电渗
液体对固体支持物的相对移动，由 缓冲液的水分子和支持介质的表面之间 产生的一种相关电荷所引起。如果电渗 与电泳方向相同，V变大；反之变小。
.
血清蛋白醋酸 纤维素薄膜电泳
.
原理
在 pH8.6碱性环境，血清蛋白均带负电荷， 在电场中向正极移动
各种蛋白质pI不同，带电荷量有差异 蛋白质的分子大小与分子形状不相同 带电荷多、分子量小者，泳动较快；反之
缓冲液液面要保证一定高度 标本：血清应新鲜，不得溶血 染料：对蛋白质的各组分亲和力相同，
水溶性好，稳定，吸光度敏感，形成的 染料蛋白质复合物稳定且易洗脱比色
.
注意事项
电泳后区带拖尾、各区带分开不明显原因： 点样过多 点样不均匀、不整齐 样品触及薄膜边缘；薄膜过湿，样品扩散； 薄膜未完全浸透或温度过高导致干燥或水分
❖ 缺点：有轻微电渗现象，薄膜吸水性差，电阻
容易增大，当电流较大时，薄膜中水分极易蒸 发，造成蛋白质分子变性破坏。
.
临床意义
.
蛋白质组分 白蛋白
α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白
丽春红S染色参考范围
g/L 35～52 1.0～4.0 4.0～8.0 5.0～10.0 6.0～13.0
和凝血因子、抗凝血因子、α1-抗胰蛋白、 α1-糖蛋白、α2-巨球蛋白、转铁蛋白和 其他微量蛋白等成分。
历史
❖ 1809年，Pehce(俄国物理学家)首先发现 电泳现象
❖ 1937年，Tiselius(瑞典)制成界面电泳仪， 应用于蛋白质研究
❖ 1948年，Wieland和Fischer建立了滤纸 电泳法，奠定了区带电泳技术的基础
则较慢
.
蛋白质的等电点、分子量及迁移率
蛋白质名称
白蛋白
等电点
4.84
相对分子量
6.9万
电泳迁移率
5.9*10-5
α1-球蛋白 5.06
20万
5.1*10-5
α2-球蛋白 5.06
30万
4.1*10-5
β-球蛋白 5.12
9万～15万 2.8*10-5
γ-球蛋白 6.86～7.30 15.6万～30万 1.0*10-5
.
操作
准备 ➢ 电泳槽准备 ➢ CAM的准备 点样 吸3-5μl血清均匀点于CAM无光泽面 电泳 无光泽面朝下，点样侧置于负极端，通电 染色 将薄膜条浸入丽春红S染色液，染5-10min 漂洗
.
电泳结果示意图
γ
β α2 α1 清蛋白
.
染色时染料与蛋白质特异结合而不与醋纤膜结 合，染色深浅与蛋白质的量成正比
染色一段时间后脱色，将各蛋白区带剪下，经 脱色、比色即可计算出各蛋白质组分的相对百 分数。
如同时测定出总蛋白浓度，还可计算出各蛋白 组分的绝对浓度
.
正常血清电泳扫描图谱
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试剂
.
醋纤膜规格及点样示意图
.
定量
取试管6支，在白蛋白管内加入0.1mol/L NaOH 液6ml，其余各管加入3ml，将各蛋白区带剪下 分别置于各试管中，另从空白背景剪一块平均 大小的膜条置于空白管中，37℃10-20min
向白蛋白管中加入40%醋酸0.6ml,其余各管加 0.3ml,以中和部分NaOH
血清蛋白电泳
(Serum Protein Electrophoresis)
.
血清和血浆
• 血清:是指离体的血液经过自然凝固而析出 的液体部分. 血浆:是指离体并经过抗凝的血液经过离心 沉淀后的上清部分. 血清中无纤维蛋白原
.
简介
人类血液中有125种以上蛋白质成分。 白蛋白、脂蛋白、抗体、补体、凝血酶原
❖ 按支持介质形状不同：薄层电泳、板电泳和 柱电泳
❖ 按用途不同：分析电泳、制备电泳、定量免 疫电泳和连续制备电泳。
.
影响电泳的因素
在电泳中,电场,带电粒子和促使带电粒子移 动的介质是产生电泳的三大要素.因而,影 响电泳的主要因素有：
➢ 电场强度的影响 ➢ 溶液的pH值 ➢ 溶液的离子强度 ➢ 电渗 ➢ 温度、分子大小、吸附作用等
蒸发薄膜与滤纸桥接触不良 薄膜位置歪斜、弯曲，与电流方向不平行 缓冲液变质；样品不新鲜 CAM质量不高等 电渗现象
.
评价
❖ 优点：CAM电泳具有灵敏度高，标本用量少，
分辨率高，区带清晰，电泳时间短，操作简便 快捷；CAM对染料不吸附，蛋白区带均匀，背 景清晰，既易比色定量，又易透明后进行光密 度扫描。
占总蛋白的百分数(%) 57～68 1.0～5.7 4.9～11.2 7.0～13.0 9.8～18.2
.
各组分构成
Alb：白蛋白 α1：α1酸性糖蛋白；α1抗胰蛋白
酶；甲胎蛋白；高密度脂蛋白 α2：触珠蛋白；铜兰蛋白；α2巨球蛋白；
α脂蛋白 β：转铁蛋白；补体系统；β脂蛋白 γ：IgG；IgM；IgA；IgD；IgE； CRP
用520nm比色，以空白管调零，读各管吸光度
.
计算
设各部吸光度分别为AA、Aa1、Aa2、 Aβ、Aγ。吸光度总和（AT）为：
AT= AA+Aa1+Aa2+Aβ+Aγ ❖ 白蛋白（%）＝（AA *2 AT）*100% ❖ a1-球蛋白（%） = （Aa1 AT）*100% ❖ ……
.
注意事项
通电时，不得接触槽内缓冲液或CAM， 以防触电
❖ 1959年，Raymond和Weintraub创建聚 丙烯酰胺凝胶电泳
.
电泳和电泳技术
电泳是指带电粒子在电场的作用下，向 着与其电性相反的电极移动的现象。
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行 分离分析的技术。
.
应用
• 电泳技术除了用于小分子物质的分离分析 外,最主要用于蛋白质,核酸等生物分子的研 究.由于电泳法设备简单,操作方便,具有高分 辨率及选择性特点,已成为医学检验中常用 的技术.
.
电泳用于分离物质的原理
COO╱ + H+ Pr ←————→ ╲ + OH-
NH2
COO-
COOH
╱ + H+ ╱
Pr ←————→ Pr
╲ + OH- ╲
NH3+
NH3+
PH>PI
PH=PI
PH<PI
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电泳分类
❖ 按分离的原理不同：区带电泳、自由界面电 泳、等速电泳、等电聚焦电泳
❖ 按支持介质的不同：纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电 泳
.
电渗
液体对固体支持物的相对移动，由 缓冲液的水分子和支持介质的表面之间 产生的一种相关电荷所引起。如果电渗 与电泳方向相同，V变大；反之变小。
.
血清蛋白醋酸 纤维素薄膜电泳
.
原理
在 pH8.6碱性环境，血清蛋白均带负电荷， 在电场中向正极移动
各种蛋白质pI不同，带电荷量有差异 蛋白质的分子大小与分子形状不相同 带电荷多、分子量小者，泳动较快；反之
缓冲液液面要保证一定高度 标本：血清应新鲜，不得溶血 染料：对蛋白质的各组分亲和力相同，
水溶性好，稳定，吸光度敏感，形成的 染料蛋白质复合物稳定且易洗脱比色
.
注意事项
电泳后区带拖尾、各区带分开不明显原因： 点样过多 点样不均匀、不整齐 样品触及薄膜边缘；薄膜过湿，样品扩散； 薄膜未完全浸透或温度过高导致干燥或水分
❖ 缺点：有轻微电渗现象，薄膜吸水性差，电阻
容易增大，当电流较大时，薄膜中水分极易蒸 发，造成蛋白质分子变性破坏。
.
临床意义
.
蛋白质组分 白蛋白
α1-球蛋白 α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白
丽春红S染色参考范围
g/L 35～52 1.0～4.0 4.0～8.0 5.0～10.0 6.0～13.0
和凝血因子、抗凝血因子、α1-抗胰蛋白、 α1-糖蛋白、α2-巨球蛋白、转铁蛋白和 其他微量蛋白等成分。
历史
❖ 1809年，Pehce(俄国物理学家)首先发现 电泳现象
❖ 1937年，Tiselius(瑞典)制成界面电泳仪， 应用于蛋白质研究
❖ 1948年，Wieland和Fischer建立了滤纸 电泳法，奠定了区带电泳技术的基础
则较慢
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蛋白质的等电点、分子量及迁移率
蛋白质名称
白蛋白
等电点
4.84
相对分子量
6.9万
电泳迁移率
5.9*10-5
α1-球蛋白 5.06
20万
5.1*10-5
α2-球蛋白 5.06
30万
4.1*10-5
β-球蛋白 5.12
9万～15万 2.8*10-5
γ-球蛋白 6.86～7.30 15.6万～30万 1.0*10-5