梅毒螺旋体特异抗体测定-凝集、印迹法
三种梅毒螺旋体抗体检测方法的比较分析
三种梅毒螺旋体抗体检测方法的比较分析魏从芳;汤巧【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2014(035)004【摘要】目的比较化学发光法(TP-CLIA)、酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝聚试验(TPPA)对梅毒螺旋体特异性抗体(TP-Ab)检测的意义.方法分别用CLIA、ELISA和TPPA检测患者的1 797份血清样本,收集CLIA/ELISA/TPPA/法检测均阳性但临床未明确诊断的标本及结果不一致标本以重组免疫印迹法(RIBA)最终确认.结果三种方法共筛选69例阳性及可疑血清标本.CLIA/ELISA/TPPA法均阳性标本63例,其中52例有临床明确诊断.另11例3种方法检测均阳性但未明确诊断标本和6例检测结果不一致标本用RIBA确证.CLIA法确认阳性66例,阳性率3.67;ELISA法确认阳性65例,阳性率3.62;TPPA 法法确认阳性61例,阳性率3.39;CLIA、ELISA及TPPA法敏感性分别为98.51％、97.02％和91.05％;特异性均为99.88;诊断效率分别99.83％、99.78和99.66％.结论 CLIA法和ELISA法敏感性均高于TPPA法,不管用何种方法检测对于临床诊断不符的标本均应慎重,必要时用RIBA法补充确认,以排除假阳性.【总页数】3页(P458-459,462)【作者】魏从芳;汤巧【作者单位】南京医科大学附属南京医院检验科,江苏南京210006;南京市建邺区江心洲社区卫生服务中心检验科,江苏南京210019;南京医科大学附属南京医院检验科,江苏南京210006【正文语种】中文【相关文献】1.三种方法检测梅毒螺旋体抗体低值标本的比较分析 [J], 覃涛;杨昌伟;宋芳2.梅毒螺旋体抗体检测方法的比较分析 [J], 刘莹;王苏;张桂华3.三种梅毒螺旋体抗体检测方法的应用分析 [J], 刘长秀; 李静; 赵辰娜4.ELISA、TPPA和CLIA三种检测方法在血清梅毒螺旋体特异性抗体检测中的应用观察 [J], 朱纯刚5.三种梅毒螺旋体特异性抗体检测方法性能评价 [J], 王娟梅;方孝美;宋冰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价
5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价摘要目的评价分析5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果。
方法基于本次研究需求，分别采取梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、化学发光法（CLIA）、甲苯胺红不加热血清试验（Trust）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及免疫印迹法（WB）对120例标本实施梅毒螺旋体抗体检测，对比分析5种检测法阳性率，将WB作为参照分析其他4种检测法的总符合率、特异度以及敏感度。
结果经分析，TPPA法、CLIA法、ELISA法以及Trust法和WB法阳性率对比差异无统计学意义（P>0.05）；将WB检测法当作确认试验，TPPA 法、CLIA法、ELISA法特异度、敏感度和总符合率均比较高。
结论经研究结果分析可知，TPPA法、CLIA法、ELISA法不管是敏感度，还是特异度均比较高，实际应用中可根据梅毒螺旋体抗体实际情况合理选用检测法。
关键词血清学；梅毒螺旋体抗体；检测在临床中梅毒作为常见性传播疾病之一，传染性非常高，目前在献血员以及临床患者输血之前、各种创伤性检验中梅毒血清学检验已成为常规检测中一项基本项目，基于该形势下，选用快捷、灵敏度和特异度均比较高以及操作便捷的检测法对于正确筛查与诊断梅毒也变得尤为重要[1，2]。
本次研究就5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果进行评价。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料本次研究所用标本来自2012年7月～2015年5月到本院诊治患者120例，全部标本均实施梅毒螺旋体抗体检测，其中男50例，女70例，年龄32～56岁，平均年龄（45.26±4.9）岁。
1. 2 方法于空腹状态下采集3 ml静脉血，以3000 r/min进行离心，离心时间一般为10 min，经血清分离实施检测。
5种血清检测法所用仪器如下：洗板机、水浴箱、Clem Clin化学发光免疫分析仪、振荡器、Roto-2600c酶标仪以及离心器等；所用试剂有CLIA试剂、ELISA试剂、TPPA试剂、WB试剂以及Trust试剂。
梅毒螺旋体特异性抗体检验
免疫学新技术的应用
化学发光免疫分析
利用化学发光技术标记特异性抗体，通过检测发光信号的强度，实现对梅毒螺旋 体抗体的定量检测。
荧光免疫分析
利用荧光物质标记特异性抗体，通过荧光信号的激发和检测，实现对梅毒螺旋体 抗体的定量和定性检测。
自动化检测系统的应用
全自动免疫分析仪
通过将样品和试剂加入到免疫分析仪中，自动完成样品的加 样、孵育、洗涤、检测等步骤，实现梅毒螺旋体抗体的自动 化检测。
《梅毒螺旋体特异性抗体检验》
xx年xx月xx日
目录
• 梅毒螺旋体及感染概述 • 梅毒螺旋体特异性抗体的检测方法 • 梅毒螺旋体特异性抗体检验的临床应用 • 梅毒螺旋体特异性抗体检验的局限性 • 新技术在梅毒螺旋体特异性抗体检验中的应用 • 相关伦理、隐私及法律问题
01
梅毒螺旋体及感染概述
形态和结构
加强监管的必要性
为确保梅毒螺旋体特异性抗体检验的规范和安全，有必要加 强相关部门的监管力度，制定严格的准入标准和操作规范， 并加大对违法行为的惩处力度。
THANKS
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检测抗体的特异性
Western blot
将纯化的梅毒螺旋体抗原印迹到膜上，然后与血清中的抗体反应，最后加入酶标 记的抗人IgG抗体，形成复合物，再加入底物显色，根据条带的特异性判断抗体 的特异性。
竞争抑制试验
将不同种类的抗原包被在固相载体上，加入酶标记的抗人IgG抗体和待测血清， 观察不同抗原的抑制作用，从而判断抗体的特异性。
02
抗体浓度过低
若患者特异性抗体浓度过低，也可能导致检测不出，造成假阴性。
03
检测方法局限性
不同的检测方法具有不同的敏感性和特异性，也可能导致假阴性。
梅毒螺旋体抗体凝集实验(TPPA)操作程序
梅毒螺旋体抗体凝集实验（TPPA）操作程序1．标本种类及收集要求标本种类：血清2．设备和材料2.1设备：旋转振荡仪、精确移液器2.2材料：梅毒螺旋体确认试剂盒。
来源：富士瑞比欧梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒或者类似产品。
有效期内。
2.3 试剂盒：按说明书要求调制致敏粒子和未致敏粒子悬液。
3．原理将梅毒螺旋体Nichols 株的精制菌体成分包被于明胶颗粒上，此种致敏颗粒与检样中的抗TP 抗体结合时可产生凝集反应。
4．试验步骤4.1 将诊断试剂盒平衡至室温4.2 按下述手工操作方法，迅速连贯地进行操作。
定性试验只做4孔，半定量（测抗体滴度）试验做12孔。
4.3 在反应板第1孔中微量移液管取（100μl）血清稀释液，第2～4孔每孔滴1滴（25μl）。
4.4 用微量移液管取待测血清25μl加至第1孔中，然后再用微量加样器混匀后取25μl至第2孔，依次稀释至第4孔（或12孔）。
此时，第1孔待测血清为1:5倍稀释，第2～4孔分别为1:10～1:40（第12孔则为10240）。
4.5 用试剂盒中的专用滴管在第3孔中滴加1滴（25μl）未致敏粒子，在第4孔中滴加1滴（25μl）致敏粒子。
待测血清的最终稀释倍数第3孔为1:40，至第12孔为1:20480。
4.6 平板在平板混合器上混合30s，加盖后置室温（15℃～30℃）下水平静置2h（即使24h不影响结果判定），用观察镜观察并记录结果。
4.7 对照试验：每个试剂盒中的阳性对照血清都要与样品用相同的测定方法进行试验，阳性对照血清调制成抗体效价为1:320（最终稀释倍数）。
5．结果判断及报告5.1 判定标准：见下表5.2结果判定：阳性：第3孔（加未致敏粒子，待测血清最高稀释倍数为1:40）为（—），第4孔（加致敏粒子，待测血清最高稀释倍数为1:80）为（﹢），判为阳性。
如做12孔测定，则以出现（﹢）的最终稀释倍数为抗体滴度。
阴性：只要第4孔为（—），即判为阴性。
可疑：第3孔为（—），第4孔为（±）时判为可疑。
梅毒螺旋抗体TPPA(凝集法)
梅毒螺旋抗体TPPA（凝集法）传播途径：1、性接触这是主要的传染途径。
未经治疗的病人在感染后的1年内最具有传染性；随着病期的延长，传染性越来越小；到感染后4年，通过性接触一般无传染性。
2、血传播梅毒患者、潜伏梅毒及隐性梅毒血清具传染性，通过输血及共用针头可传染他人。
3、胎传患梅毒的孕妇可以通过胎盘使胎儿受染，一般认为感染发生在妊娠4个月以后。
名称：赛乐迪亚原理：将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。
这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体（TP）抗体,并且可用来测定抗体效价。
操作方法：试验前试剂应恢复到15～30℃。
用前30分钟按规定量加溶解液（0.6ML)溶解致敏颗粒、未致敏颗粒并混匀；按规定量加溶解液于质控血清。
(1)标本稀释液加至微量反应板孔内，第l孔100微升，第2-5孔各25微升。
(2)取血清或血浆25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后取25微升至第5孔，混匀后弃去25微升。
(3)第4孔未致敏颗粒25微升，第5孔加致敏颗粒25微升。
(4)将反应板置振荡器振荡30秒。
(5)加盖后于室温（15-30℃）下水平静置，2小时后观察结果。
结果判断：判定基准阳性：未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－），致敏粒子（最终稀释倍数１：８０以上）的反应图象判定为（＋）时,最终判定为阳性，进行方法2的测定时，将显示出反应图象为(+)时的最终稀释倍数作为抗体效价。
阴性：无论未致敏粒子呈现何种反应图象，只要致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象显示为（－）时，最终判定即为阴性。
未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－）且致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象判定为（±）时，最终判定为保留。
注意事项：使用过的器具（移液管、试管等）、废液、废物等除用次氯酸钠（有效氯浓度1,000ppm，浸泡1小时以上），戊二醛（2%，浸泡1小时以上）进行消毒以外，还要进行高压蒸汽灭菌（121℃1小时以上）及焚烧等处理。
梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)SOP
梅毒螺旋体抗体检测（TPPA）（凝集法）1.目的：规范实验室TPPA检测操作。
2.范围： xxx 院 xxx 科3.测定原理：将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。
这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test,PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。
4.标本：4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。
4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。
5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。
5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。
5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。
5.3试剂组成5.3.1溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。
5.3.2血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。
5.3.3致敏粒子（冷冻干燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。
5.3.4未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。
5.3.5阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1：320(最终稀释倍数)。
6.临床标本测定6.1试剂的调制6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。
6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。
梅毒螺旋体抗体使用说明
梅毒螺旋体抗体诊断试剂（凝集法）使用说明书一、检验方法：如果利用自动分析测定装置来使用本试剂时，请按照仪器的使用说明书进行操作。
以下所述是手工操作方法，请连贯地进行操作。
试剂的调制。
A：溶解液（液状）按照测定操作规则使用。
B：血清稀释液（液状）按照测定操作规则使用。
C：致敏粒子（冷冻干燥）加入一定量的溶解液进行调制。
请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。
D：未致敏颗粒（冷冻干燥）加入一定量的溶解液进行调制。
请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。
E：阳性对照血清（液状）按照测定操作规则使用。
1.方法1（1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第一孔中，共计4滴（100μl），从第二孔至第四孔各滴1滴（25μl）。
（2）用微量移液管取样品25μl至第一孔中。
然后用微量加样器或微量移液管以2m的方式从第一空稀释至第四孔。
（3）用试剂盒中提供的滴管在第三孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，在第四孔中滴入1滴（25μl）致敏粒子。
（4）用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15~30℃）下水平静置。
2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。
另外，即使静置至次日也不影响判定结果。
在方法1中判定为阳性的样品，请再用具有确定意义的方法2进行检测。
2.方法2（1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第一孔中，共计4滴(100μl)，从第二孔至最后一孔各滴入1滴（25μl）。
（2）用微量移液管取样品25μl至第一孔中。
然后用微量加样器或微量移液管以2m的方式从第一孔稀释至最后一孔。
（3））用试剂盒中提供的滴管在第三孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，从第四孔至最后一孔各滴入1滴（25μl）致敏粒子。
（4）用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15~30℃）下水平静置。
2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。
梅毒螺旋体抗体测定方法比较
梅毒螺旋体抗体测定方法比较目的：对胶体金法、酶联免疫法(ELISA)、免疫发光法、凝集法（TPPA）四种梅毒螺旋体抗体测定方式进行比较。
方法：选取我院60份确诊为梅毒患者的血清，同时抽取60例健康人群的血清，对四种检测方式进行比较。
结果：四种检测方法中凝集法检测率为100%，准确率最高，酶联免疫法与免疫法光法的阳性平均检出率为98%，而胶体金法的梅毒阳性检出率为95%，且假阳性出现比例为3%，与其他三种检测率比较,p＜0.05,差异具有统计学意义。
结论：胶体金法在操作中简便快速，但假阳性假阴性均有发生，质量控制没有另外三种方法好，凝集法检出率最高，为最准确的梅毒抗体检测方式。
标签：梅毒螺旋体抗体；胶体金；测定梅毒是一种由苍白密螺旋体苍白亚种病毒所引起的疾病，本病起病较慢，是一种全身性的疾病，主要通过性来传播。
由于本病对患者的伤害较大且发病缓慢，因此本病的早期诊断是非常重要的。
血清诊断为主要的诊断方式，目前在临床中通常有胶体金法、酶联免疫法、免疫发光法、凝集法四种，本院将对四种抗体测定方式进行研究比较，寻找准确率最高的测定方式。
1资料与方法1.1一般资料选取我院2012年3月——2014年3月间60份确诊为梅毒患者的血清，同时抽取60例健康人群的血清，60例梅毒患者中有37例为一期梅毒患者，16例为二期梅毒患者，7例为三期梅毒患者。
所有患者血清均来自于我院体检以及住院部患者群中，所有标本收集完成后均行血清分离处理，放置冰箱保存。
1.2仪器试剂方法一：胶体金法（SYP）试剂来源：北京万泰生物药业股份有限公司。
方法二：酶联免疫法(ELISA)仪器:科华ST-360酶标仪试剂来源：英科新创（厦门）科技有限公司。
方法三：免疫发光法(CMIA)仪器：ABBORT C16200 全自动生化免疫分析仪，试剂配套。
方法四：凝集法（TPPA）试剂来源：富士瑞必欧珠式会社。
1.3结果观察对四种测定方式测定的梅毒阳性率进行比较，并做好详细记录。
梅毒螺旋体抗体测定
梅毒螺旋体抗体测定一、化学发光微粒子免疫检测法原理采用两步法免疫检测法，用化学发光微粒子免疫检测法在雅培I2000系统检测模式上定性测定人血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体。
1、将样本重组梅毒螺旋体抗原（TPN15、TPN17和TPN47）包被的微粒子和项目稀释液混合，形成样本中的梅毒抗体与试剂中的抗原结合。
2、冲洗后加入吖啶酯标记的抗人IgG和IgM抗体结合物，形成反应混合物。
3、再冲洗后，将预激发液和激发液加入混合物中。
4、测量产生的化学反光反应，S/CO值>1.0为有反应性二、凝集法检测原理（TPPA）将梅毒螺旋体的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上.这种致敏粒子和样品中的梅毒抗体进行反应发生凝集，来检测血浆和血清中的梅毒抗体，此方法为倍比稀释法，所以也可以用来测定抗体效价。
结果1:80为阳性。
三、特异性1、化学法光法所包被抗原为TPN15、TPN17和TPN47具有高特异性和高灵敏度。
所测抗体中包括IgG和IgM,窗口期可缩短到2周后。
（ IgM 2周后可检测出）2、凝集法抗原为梅毒螺旋体菌株，具有特异性好、灵敏度高的优点。
四、假阳性结核、红斑狼疮、类风湿关节炎、猩红热等疾病可以导致假阳性。
老年人、早孕者、恶性肿瘤患者、透析患者和自身免疫性疾病患者可以导致假阳性。
其原因可能是这些患者体内存在抗脂类抗体或梅毒螺旋体交叉抗原，老年人免疫功能减弱出现一些异种蛋白的干扰，还有补体高浓度的非特异性免疫球蛋白。
五、关于结果解释化学发光法S/CO>3时TPPA法复检阳性率增高。
考虑到梅毒假阳性因素多，可将化学发光法S/CO值为1-5时通过TPPA复查，并且TPPA阳性值降到1:40如果TPPA 1:40 阳性，发光报告原值。
如果TPPA 1:40 阴性，发光报告阴性。
发光法梅毒特异性抗体检测试剂具有高度的灵敏度和特异性，非常适合大批量标本的筛查，然而化学发光法作为筛查实验过程中产生的假阳性有必要同时开展TPPA实验作为一种有效补充。
(完整word)梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：TPPA；组合项目申请：RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2。
1标本采集2。
1。
1常规静脉采血约2 ml,不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2。
1。
2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.8下列标本为不合格标本2。
1。
8。
1标本量不足。
2。
1。
8。
2严重溶血、严重浑浊的标本。
2。
1.8。
3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.8。
4其他如标识涂改、标本试管破裂等.2。
2标本保存2。
2.1标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内。
2.2。
2已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
3、方法原理凝集法。
将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上。
这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且可用来测定抗体效价。
4、试剂及其他用品准备溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子（冷冻干燥） 0。
6ml/瓶×5，未致敏粒子 (冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，阳性对照血清 (液状） 0.6ml/瓶×5。
5 质控品与室内质控规则5。
1 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
5。
2 质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。
5。
3质控规则：阴性和阳性对照符合即可。
5.4如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。
6操作步骤6。
1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul)，从第2孔至最后一孔各滴入1滴(25ul）.6.2吸取样品25ul至第1孔中。
梅毒螺旋体抗体两种检测方法的对比分析
梅毒螺旋体抗体两种检测方法的对比分析摘要目的探讨梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）与梅毒螺旋体抗体凝集法（TPPA）在梅毒螺旋体检测中的应用。
方法450例阴性标本和40例梅毒阳性标本，采用TP-ELISA与TPPA检测血清梅毒螺旋体结果进行分析，比较两种方法检测梅毒螺旋体的差异。
结果TP-ELISA与TPPA各检出梅毒螺旋体陽性41例和40例，阳性检出率分别为8.4%和8.2%，TP-ELISA与TPPA 阳性检出率比较差异无统计学意义（P>0.05）。
两种方法的阳性符合率为97.6%，阴性符合率为99.8%，总符合率为99.8%。
TP-ELISA的假阳性率为0.2%，TPPA 无假阳性。
结论为实现大批量自动化处理和提高检测的准确性，对于梅毒检验工作使用TP-ELISA筛查联合TPPA确认更为快速，准确。
关键词梅毒螺旋体抗体；梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验；梅毒螺旋体抗体凝集法梅毒在《中华人民共和国传染病防治法》中列为乙类防治管理病种，其是一种慢性、系统性性传播疾病[1]，由苍白螺旋体苍白亚种（TP）感染所引起。
其主要通过性传播途径、血液、母婴垂直传播途径等传播。
随着医学和科技的不断发展，各种有效的抗菌药物可积极控制梅毒的发展，但梅毒发病率仍居高不下，且梅毒感染还可增加患艾滋病的风险[2]。
梅毒根据临床表现可分为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏梅毒和胎传梅毒等。
各期梅毒的临床特征分别为一期梅毒的硬下疳，通常感染TP后7～60 d 出现；二期梅毒以二期梅毒疹可伴有全身症状；三期梅毒（晚期梅毒）中，1/6为良性，1/6～1/5为严重的晚期梅毒可有皮肤黏膜溃疡性损害或内脏器官的肉芽肿样病变，近关节结节、心血管毒素、神经梅毒等表现[3]，对自身组织器官的破坏性很强；潜伏梅毒（隐形梅毒）无明显临床症状，脑脊液检查正常但梅毒血清试验阳性，显性梅毒活动期后症状暂时消退后也可引起；孕期发生的显性或隐性梅毒叫妊娠梅毒，此时，TP可通过胎盘或脐静脉传给胎儿让所生婴儿患先天梅毒，梅毒孕妇极易造成流产、早产、死胎，只有少数可生健康儿。
梅毒特异性抗体的两种血清学检测方法比较
产生。
编辑／ 贺丽
梅毒特异性抗体 的两种血清学检测方法 比较
莫凤 明
（ 西 河 池 市人 民 医 院 ． 西 河池 广 广 ５７０） ４０ ０
摘 要 ： 本 文 比较 梅 毒 螺 旋 体 明 胶 颗 粒 凝 集 试验 法（ Ｐ 与 酶联 免 疫 吸 附 试 验 法 （ Ｐ — Ｅ Ｓ 两 种 方 法 的 敏 感 性 和 特 异 性 ， 价 两种 方 法在 ＴＰ Ａ） Ｔ Ｌ ＩＡ） 评
医学信 息 ２ １ 年 ８月第 ２ ０１ ４卷第 ８ Ｍｅｉａ Ｉｆｒ ｔ ｎ Ａ ｇ ２ １． ｏ．４ Ｎ ． 期 ｄｃｌｎｏ ｉ ． ｕ ． ０ １ Ｖ １２ ． ｏ ８ ｍａ ｏ
途径和合理 的间隔 时间， 同时必 须采用 各种 综合措施 。① 给药途径： 应根据感染 严重程度及药 物动力 学特 点决定给药途径， 轻症感染尽 量选用生物利用度高 的口服制剂 ； 多种 药物可供选用 时， ②有 应以窄 谱 ， 良反应少， 不 价廉者优先 。注意剂量和 间隔时间； 抗菌药物的更 ③
１ 资料 与 方 法
９ ．％， ４０ 酶联免疫 吸附试验法 （ Ｐ—Ｅ Ａ） Ｔ Ｌ ｔ 检测敏感性 ９ ％，Ｐ Ａ Ｓ ６ ＴＰ 及 Ｅ ＩＡ这两种检测方法 经统计 学分析 ，显示 比较无显著差异 ， ＬＳ 螺 旋体 明胶颗粒凝集试验法检测 的特异性 ９ ％， ５ 而酶联免疫 吸附试验 法检测高达特异度 １０ ０ ％，经统计学分析 Ｅ ＩＡ检测法的特异性高 ＬＳ
毒性 ， 可引起永久 陛耳聋 。
５ ． ２四环素类抗生素， 能与新生长牙齿中的钙结合形成黄色结合物沉 着， 俗称” 四环素牙” 此类药物还能与骨中的钙结合抑制婴儿的骨骼 。
梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)SOP
梅毒螺旋体抗体检测（TPPA）（凝集法）1.目的：规范实验室TPPA检测操作。
2.范围： xxx 院 xxx 科3.测定原理：将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。
这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test,PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。
4.标本：4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。
4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。
5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。
5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。
5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。
5.3试剂组成5.3.1溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。
5.3.2血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。
5.3.3致敏粒子（冷冻干燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。
5.3.4未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。
5.3.5阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1：320(最终稀释倍数)。
6.临床标本测定6.1试剂的调制6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。
6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。
螺旋体抗体的测定方法和临床意义的解释
螺旋体抗体的测定方法和临床意义的解释梅毒螺旋体(trepomema pallidum, TP)为梅毒的病原体，亦称梅毒密螺旋体，梅毒螺旋体感染人体后，患者血清中可出现两类抗体，一类为非特异性类脂质反应素抗体，即抗心磷脂抗体，又称反应素，多为IgA和IgM混合型抗体，另一类为抗密螺旋体特异抗体，包括IgM和IgG由于梅毒患者血清中出现的两类不同抗体，因而免疫测定方法根据所使用的抗原分为类脂质抗原血清学试验（非梅毒螺旋体抗原血清学试验）和特异性密螺旋体抗原血清学试验（梅毒螺旋体抗原血清学试验）两大类。
一、非梅毒螺旋体抗原血清学试验1、方法①性病研究实验室试验（VDRL）②不加热血清反应素试验（USR）③快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）④甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）--目前最常用的梅毒筛检方法2、临床意义①早期梅毒硬下疳1周-2周后血清可呈阳性。
②经治疗后，血清中反应素滴度下降并阴性，可作为疗效观察、判断愈后，复发或再感染的指征。
二、梅毒螺旋体抗原血清学试验1、方法①荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）②梅毒螺旋体血细胞凝集试验（TPHA）③梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）④梅毒螺旋体酶联免疫试验（ELISA）--首选方法⑤梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）--确认实验2、临床意义①作为非梅毒螺旋体抗原血清学试验，如RPR，TRUST等阳性标本的验证实验②梅毒患者经抗梅毒治疗后，TPPA，ELISA法仍呈阳性，故不能作为疗效观察指标，不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清学试验进行诊断。
我们实验室梅毒螺旋体抗体测定采用的方法是：①非梅毒螺旋体抗原血清学试验--TRUST②梅毒螺旋体抗原血清学试验—ELISATRUST和 ELISA法检测结果临床意义模式分析。
梅毒螺旋体特异性抗体检测
梅毒螺旋体特异性抗体检测梅毒螺旋体特异性抗体检测1.实验原理梅毒的病原是苍⽩螺旋体（TP），感染后患者⾎清学反应较复杂，可产⽣2种抗体，⼀种是⾮梅毒螺旋体抗体；另⼀种是TP 特异性抗体。
前者在疾病活动期可检出，但治疗后很快下降，⼀般⽤RPR等检测。
后者在治疗后相当长时间内都可检测到。
Syphagen-TPHA是⼀种检测TP抗体的特异、灵敏的间接⾎球凝集试验。
适⽤于梅毒确诊检查。
2. 标本采集2.1 标本采集前病⼈准备：空腹采⾎2.2 标本种类：⾎清或EDTA抗凝⾎浆2.3 标本要求：检测标本可以是⾎清，对于⼤范围筛选实验，也可⽤含EDTA的⾎浆。
如果出现可疑结果，⽤⾎清标本来确证。
⽤含抗凝剂（EDTA）的试管收集⾎液，离⼼收集⾎浆，在24⼩时内检测。
3. 标本储存：⾎清于2-8℃可存放48⼩时，在-20℃可存放4周；⾎浆则⽤含抗凝剂（EDTA）的试管收集⾎液，离⼼收集⾎浆，在24⼩时内检测。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：溶⾎、脂⾎或污染标本。
6. 试剂6.1 试剂名称：梅毒螺旋体抗体诊断试剂6.2 试剂⽣产⼚家：（⽇本）富⼠瑞必欧珠式会社6.3 包装规格：100⼈份6.4 试剂盒组成：溶解液，⾎清稀释液，致敏粒⼦，未致敏粒⼦，阴性对照⾎清，阳性对照⾎清，滴管2⽀，使⽤说明书。
6.5 试剂储存条件及有效期6.6存放于2-10℃，有效期为12个⽉，不同批号的试剂不得混⽤。
7. 操作步骤7.1.1 每⼈份需4个孔，其中2个⽤于样品稀释。
在第1个孔中加100ul（4滴）稀释液，在第2孔⾄第4孔中各加25ul（1滴）稀释液。
7.1.2 在第1孔加⼊25ul标本后，混匀后取25ul加⼊第2孔，混匀后取25ul加⼊第3孔，混匀后取25ul丢弃。
7.1.3 在第3孔加25ul（1滴）未致敏粒⼦；在第4孔加25ul致敏粒⼦。
7.1.4 轻轻摇晃混匀后，加盖静置于室温，120分钟后观察结果。
7.2 定量检测7.2.1在第1个孔中加100ul（4滴）稀释液，在第2孔⾄最后⼀孔中各加25ul（1滴）稀释液。
梅毒螺旋体血球凝集试验
梅毒螺旋体血球凝集试验
梅毒螺旋体血球凝集试验介绍：
梅毒螺旋体血球凝集试验(Trepomema Pallidum Hemagglutinatio
n Assay简称TPHA)是一种特异性梅毒血清学试验方法,具有敏感性高、
特异性强,操作简便等特点。
梅毒螺旋体血球凝集试验正常值：
该试验检测的是患者血清中的梅毒螺旋体特异性抗体，如出现阴性，可属于正常。
梅毒螺旋体血球凝集试验临床意义：
异常结果：T该试验检测的是患者血清中的梅毒螺旋体特异性抗体，如出现阳性反应，结合临床可确诊梅毒。
由于本试验检测的是血清中
的抗体，而抗体一旦产生可持续数年甚至终生，故该试验不宜用于治
疗效果的监测。
需要检查的人群：患者本人或其性伴有非婚性接触史;检查RPR滴
度均在1∶8以上，其中2例1∶8，2例1∶16，1例1∶32，TPHA阳性。
梅毒螺旋体血球凝集试验注意事项：
不合宜人群：孕妇分娩期，老人身体不适。
检查前禁忌：试剂盒不可置0℃以下，防止冻结，不同批号试剂间
不可混合使用
检查时要求：TPHA反应板要清洁干净，孔内无异物;
梅毒螺旋体血球凝集试验检查过程：
试验前所有试剂应恢复到室温(15℃~25℃)，并充分混匀。
用U型反应板，每个试验4孔，第1、第2孔用于标本的稀释。
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梅毒是一种由梅毒螺旋体引起的性传播疾病，通过性行为传播，也可以通过母婴传播。
梅毒螺旋体特异抗体测定是一种常见的临床检测方法，用于诊断患者是否感染了梅毒螺旋体。
主要有凝集法和印迹法两种。
1.凝集法
凝集法是一种常规的梅毒螺旋体特异抗体测定方法。
它利用患者血清中的梅毒螺旋体特异抗体与抗原结合形成可见凝集的原理，进行梅毒的诊断。
这种方法简单、快速，但需要有经验的医务人员进行操作和解读结果，凝集法在一些医疗机构仍然被广泛应用。
2.印迹法
印迹法是一种新兴的梅毒螺旋体特异抗体测定方法。
它利用患者血清中的抗原与梅毒螺旋体特异抗体之间的特异性反应，通过免疫印迹技术进行定量化测定。
印迹法具有灵敏度高、准确度好的特点，能够有效地检测梅毒感染，有望成为未来梅毒诊断的主流方法之一。
3.比较
凝集法和印迹法在梅毒螺旋体特异抗体测定中各有优劣。
凝集法操作简单，成本低，适用于部分基层医疗机构。
但凝集法的灵敏度和特异性相对较低，容易受到操作人员的经验水平和环境条件的影响。
相比之下，印迹法的准确度更高，可以减少假阳性和假阴性结果的发生，同时还可以进行定量分析，有助于监测患者的治疗效果。
但印迹法的
成本较高，需要更为专业的设备和技术支持。
结论
随着医学技术的不断进步，梅毒螺旋体特异抗体测定方法也在不断优
化和更新。
凝集法和印迹法各有优劣，可以根据不同的临床需求和实
际情况进行选择。
未来，随着印迹法技术的进步和成本的降低，相信
印迹法将会成为梅毒螺旋体特异抗体测定的主流方法，为临床诊断和
治疗提供更为准确、快速的支持。
梅毒是一种性传播疾病，由梅毒螺
旋体引起，主要通过性行为传播，也可以通过母婴传播。
梅毒在临床
上通常分为早期梅毒、中期梅毒和晚期梅毒三个阶段。
早期梅毒症状
不明显或类似于其他疾病，因此诊断较为困难。
但在患者感染梅毒后，身体会产生梅毒螺旋体特异抗体，因此梅毒螺旋体特异抗体测定成为
了一种常见的临床检测方法，用于诊断患者是否感染了梅毒螺旋体。
凝集法和印迹法是目前常用的梅毒螺旋体特异抗体测定方法。
凝集法
利用患者血清中的梅毒螺旋体特异抗体与抗原结合形成可见凝集的原
理进行梅毒的诊断，操作简单快速，但需要有经验的医务人员进行操
作和解读结果。
而印迹法利用患者血清中的抗原与梅毒螺旋体特异抗
体之间的特异性反应，通过免疫印迹技术进行定量化测定，具有灵敏
度高、准确度好的特点。
两种方法各有优劣，可以根据不同实际情况进行选择。
凝集法操作简单，成本低，适用于部分基层医疗机构。
但其灵敏度和特异性相对较
低，容易受到操作人员的经验水平和环境条件的影响。
相比之下，印迹法的准确度更高，可以减少假阳性和假阴性结果的发生，同时还可以进行定量分析，有助于监测患者的治疗效果。
然而，印迹法成本较高，需要更为专业的设备和技术支持。
随着医学技术的不断进步，梅毒螺旋体特异抗体测定方法也在不断优化和更新。
未来，随着印迹法技术的进步和成本的降低，相信印迹法将会成为梅毒螺旋体特异抗体测定的主流方法，为临床诊断和治疗提供更为准确、快速的支持。
除了检测方法的发展和优化，预防和治疗梅毒同样至关重要。
加强健康教育和宣传，提高人们对梅毒的认识和防范意识，尤其是性教育的普及是预防梅毒传播的重要手段之一。
使用安全套是预防梅毒传播的有效途径，尤其是在性行为中要保持规范的性伴侣选择和避免不安全的性行为。
对于患者的治疗也至关重要，早期发现和及时治疗能够有效阻止梅毒的进展和减少患者的痛苦。
梅毒螺旋体特异抗体测定方法的不断发展和优化为梅毒的诊断和治疗提供了强大的支持。
在未来，人们可以期待更加准确、快速的检测方法的出现，同时也需要在预防和治疗上加强工作，共同努力减少梅毒对人类健康的危害。