石蜡包埋步骤

石蜡包埋步骤

1组织脱水、渗透与包埋

1脱水：

○50%乙醇（90min）→70%乙醇（90min）→85%乙醇(90min)→95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。

注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）○2脱水的体积至少为组织提及的4倍○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬○4最好能搅拌，使脱水充分

2透明：

○1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步60min。

注：

在二甲苯的时间不宜过短或过长。时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。

3渗透：

○1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I (120min)→石蜡II(120min),62℃。

注：

若出现从脱水到渗透时间太长，可在1/2二甲苯＋1/2石蜡或石蜡I的步骤停下,即将进入1/2二甲苯＋1/2石或石蜡I后，立即冷却，将组织封进里面，到第二天复融；第二天融解时温度不能超过65℃，并且需到完全溶解时开始进入步骤算时间。

4包埋：

○将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。

注：

包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。

2切片和贴片

将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。