石蜡包埋步骤
医院石蜡包埋机操作程序
关于环保建议书的格式（通用15篇）关于环保的格式篇1临湘市政府：地球是我们的家，同时也是我们的母亲，地球无偿的供给我们各种资源，而我们却在为一些蝇头小利不顾后果的肆意去破坏她。
正如《只有一个地球》这篇课文说的，我们不能指望破坏了地球移居到别的星球上去，地球如果灭亡了，那么降临到地球上的命运终究也会降临到人类身上。
所以，我们亡羊补牢，为时不晚，保护我们的地球，爱护环境，望做到以下几点：1、珍惜现在的每一口空气，把工厂带来的污染尽量减少，要制止乱砍乱伐森林的行为，要少破坏大自然;2、不要滥用各种资源，如煤，矿，木，水……如果这些资源被无止境的开采，当没有资源时，就不能生存了。
3、水是生命之源，但它又太少了，用洗菜的水可以洗碗人网你也可以投稿，用洗衣服的水冲马桶。
虽然我们一两个人改变不了地球的命运，但是要全国人民都从身边的小事做起，保护地球，地球就能炫出青春的笑脸。
关于环保建议书的格式篇2尊敬的局长叔叔：您好!我是一名小学生，就读于长屿小学，在阳光明媚的今天，我们一家人兴致勃勃在温岭市市区闲逛。
沿途的绿化带令我陶醉，可在美中不足的是，在市区的车站，书店门口，购物区等都摆满了流动小摊，人们买了东西后，就把一些塑料袋，包装纸随手一扔，若无其事的样子，一阵风吹来，塑料袋被刮得满天飞。
现在，被人们丢弃的塑料得及其他废旧塑料制品随处可见。
焚烧这些“白色垃圾”会污染大气，深埋三百年不腐烂，还会严重影响土地质量。
因此，我向全市人民发出建议：(1)禁止流动小摊继续营业。
(2)保证自己不随便丢弃塑料袋及其他废旧塑料品。
(3)积极宣传白色垃圾的危害，劝说别人不乱丢。
(4)利用休息日，全市人民捡拾废旧塑料，消灭白色垃圾。
保护、美化生活环境是我们每个人应尽的责任和义务。
我们应该共同行动起来。
那么，这场“白色垃圾战”一定能取得胜利。
关于环保建议书的格式篇3同学们：请问你们是否看到过，在一条干净的街道旁，睡着一团白纸：你们是否看到过，垃圾桶就在一旁，这里却有一堆垃圾.现在，我们的城市既然如此美丽，我们为什么要破坏环境?在此，我向同学们提出以下几点建议：1、不乱扔垃圾，不随地吐痰。
石蜡包埋和HE染色的制作过程
步骤一：取材与固定：取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。
步骤一：脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。
再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
步骤三：浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。
待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。
冷却凝固成块即成。
包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
步骤四：切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。
切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
步骤四：脱蜡常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。
苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。
伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。
染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
酒精用了2次先有低到高，再有高到低，这是为什么？步骤五：染色HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
②酸水及氨水中分色，各数秒钟。
③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。
④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。
————又要脱水！⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。
步骤六：脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。
又要用一次无水酒精，这是为什么？步骤七：封固：将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。
石蜡包埋技术
石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。
由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。
最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。
第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。
此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。
用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。
一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。
但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
组织块石蜡包埋
组织块石蜡包埋的步骤：1.取材：尽量活杀，在处死30min内取材完毕，组织块的大小一般为（1.0-1.5cm）*1.0cm*(0.2-0.3cm)2.固定：常用甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1:9比例配制而成。
固定时间以12-24h为宜。
（4℃冰箱可放置1-3个月）3.冲洗：将组织块放在固定的容器中用流水冲洗24h.4.脱水：一次70%酒精2h, 80%酒精2h, 90%酒精1h, 95%酒精40min,无水乙醇Ⅰ40min,无水乙醇Ⅱ30min。
可将组织放于70%酒精中过夜。
5.透明：将脱水后组织直接浸入二甲苯透明剂中（二甲苯Ⅰ, 二甲苯Ⅱ），每次透明为10min。
6.浸蜡：常规制片常用熔点高于56℃以上的石蜡，普通采用56℃-58℃石蜡。
先将组织浸入软蜡Ⅰ1h左右, 再浸入软蜡Ⅱ40min；硬蜡Ⅰ40min, 硬蜡Ⅱ1h。
（一般浸蜡时间为3-4h）软蜡熔点为45℃-50℃，硬蜡熔点为55℃-60℃。
7.包埋：将蜡液注入包埋硬具中，迅速将组织块平放入蜡液中，摆正并铺平，然后移至冷却台，使组织块同蜡液凝固在一起的过程。
（硬蜡凝固定型）石蜡切片法：在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为“修块”），但也不能留得太少，否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。
一般切片厚度为4-6μm。
贴片时先在干净的载玻片上涂一层蛋白甘油，然后于60℃恒温箱中烘烤1h，若未烤干可适当延长时间；若组织剥脱可涂一层蛋清加以固定。
做免疫组化时，玻片应涂多聚赖氨酸，亦可买防脱玻片。
HE染色的步骤：二甲苯Ⅰ5-10min→二甲苯Ⅱ5-10min→无水乙醇Ⅰ1-3min→无水乙醇Ⅱ1-3min→90%酒精1min→80%酒精1min→70%酒精1min→水洗→苏木精3-5min→水洗→盐酸酒精1-3s→水洗→饱和碳酸锂（氨水）10-30s→水洗→伊红3-5min→水洗（短）→70%酒精1-2s→80%酒精3-5min→90%酒精3-5min→95%酒精3-5min→无水乙醇5-10min→二甲苯Ⅰ3-5min→二甲苯Ⅱ3-5min→中性树胶封片染色液的配制：1.Harris苏木精的配制苏木精 1g硫酸铝钾 15g无水乙醇 10ml蒸馏水 200ml先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。
石蜡包埋和冰冻包埋实验步骤
1.取材固定:离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散。
固定就是加入一些可以让蛋白质变性的物质(比如说甲醛)，使得蛋白质的结构被固定住，不再发生变化，同时也不会再发生一些活性反应，这样才好做后续的染色步骤。
常见固定液是4%的多聚甲醛和饱和苦味酸。
根据不同目的、组织特征代表性取材。
取的材料应该小而薄。
便于固定剂迅速渗入内部，一般厚度不超过2mm，大小不超过5X 5mm"。
每个组织最好多切几块。
新鲜组织固定(组织块不宜太大太厚，这样固定液很难进入里面，可能会导致在较短的时间内脱水不完全，引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。
导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败。
组织块也不能太小，否则不能保证切片数量，且透明时间和浸蜡时间不能很好的把握。
)固定时间因固定剂种类而异，大多6-12 小时，一般不超过12小时。
视组织固定的难易程度而定。
后续如果做免疫组化，不应超过12小时;后续如果做HE染色，不应超过24小时。
固定完之后用水洗(目的:洗去渗入组织的固定液，终止固定以免影响对组织的内结构的观察，分析。
换液两次，一次半小时。
) 之后可直接脱水包埋或放入75%的乙醇4度可长期保存。
2.脱水从75%的乙醇中取出，分别放到80%，90%，100%( I )的乙醇中30min，再放入100%乙醇中。
固定完直接水洗包埋的，应从70%乙醇开始，易碎组织从50%乙醇开始。
组织脱水时间不应过长，尤其是高浓度乙醇，要特别注意控制时间。
3.透明透明的目的是置换组织内的脱水剂，为下一步浸蜡起到桥梁作用，二甲苯可以去除脂肪。
乙醇+-二甲苯(1:1) 2h；二甲苯(I )，二甲苯(II)各10min(根据组织的大小和透明的难易程度不同，透明的时间可以根据具体情况调整。
颜色浅的组织表面油亮，可以透过光时效果较好，颜色较深的组织至少边缘可以透光。
)4.浸蜡浸蜡目的是置换组织中的透明剂，为包埋作准备。
二甲苯+石蜡(1:1)2h；石蜡(I)1h;石蜡(II)2h.(浸蜡的时间也可以长一些)5.包埋在冰盒上进行，将融好的纯蜡(最好提前4小时以上开始融蜡，新蜡更难融)，倒入蜡盒(可以浸没组织就行，大约蜡盒的三分之一)由于蜡盒底部与冰盒接触，底部的蜡会先凝固，这样就可以把组织用镊子夹住立在底部。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。
由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。
最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。
第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。
此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
石蜡包埋的基本步骤及注意事项
石蜡包埋的基本步骤和注意事项第一部分石蜡包埋的基本步骤一、脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。
此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。
用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。
一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。
但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。
如脱钙的骨组织，实质性脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱水过程则宜适当延长。
水分必须脱干净，脂肪必须溶去。
含有铬酸的固定剂固定的组织，脱水时间不宜过长，而镀银组织更应注意，脱水时间应比为镀银的同类组织要短。
脱水的基本原则：从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。
石蜡包埋和HE染色的制作过程
步骤一：取材与固定：取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。
步骤一：脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。
再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
步骤三：浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。
待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。
冷却凝固成块即成。
包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
步骤四：切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。
切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
步骤四：脱蜡常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。
苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。
伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。
染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
酒精用了2次先有低到高，再有高到低，这是为什么？步骤五：染色HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
②酸水及氨水中分色，各数秒钟。
③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。
④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。
————又要脱水！⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。
步骤六：脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。
又要用一次无水酒精，这是为什么？步骤七：封固：将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。
(完整word版)石蜡包埋的基本步骤及注意事项
石蜡包埋的基本步骤和注意事项第一部分石蜡包埋的基本步骤一、脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。
此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。
用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。
一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。
但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。
如脱钙的骨组织，实质性脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱水过程则宜适当延长。
水分必须脱干净，脂肪必须溶去。
含有铬酸的固定剂固定的组织，脱水时间不宜过长，而镀银组织更应注意，脱水时间应比为镀银的同类组织要短。
脱水的基本原则：从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。
石蜡包埋原理
石蜡包埋原理
石蜡包埋是一种常用的组织学技术，它可以帮助保护组织结构，使细胞和组织得以保存，为后续的切片和染色提供了可靠的基础。
石蜡包埋的原理主要包括脱水、透明化、浸渍和包埋四个步骤。
首先，脱水是石蜡包埋的第一步，它的目的是去除样本中的水分，使细胞和组织的结构得以保持。
脱水通常采用乙醇逐渐浓度升
高的方法进行，乙醇能够逐渐取代细胞和组织中的水分，使其逐渐
脱水。
脱水的过程需要严格控制时间和温度，以免对细胞和组织结
构造成损伤。
接下来是透明化步骤，透明化是在脱水之后进行的，其目的是
使细胞和组织透明化，为后续的浸渍和包埋做准备。
透明化通常采
用二甲苯或氯仿等有机溶剂进行，这些溶剂能够逐渐取代细胞和组
织中的乙醇，使其逐渐透明化。
透明化的过程同样需要严格控制时
间和温度，以免对细胞和组织结构造成影响。
浸渍是石蜡包埋的第三步，它是将样本逐渐浸入熔化的石蜡中，使细胞和组织与石蜡充分接触，最终被包裹在石蜡中。
浸渍的过程
需要控制石蜡的温度和浸渍时间，以免石蜡温度过高或浸渍时间过
长导致样本变性或破坏。
最后是包埋步骤，包埋是将经过脱水、透明化和浸渍处理的样本，置于包埋模具中，加入熔化的石蜡，使其充分包裹样本，形成石蜡块。
包埋的石蜡块可以为后续的切片提供支撑，并保护细胞和组织结构不受切割时的损伤。
总的来说，石蜡包埋的原理是通过脱水、透明化、浸渍和包埋四个步骤，使细胞和组织得以保存，并为后续的切片和染色提供可靠的基础。
这一技术在组织学研究和临床诊断中具有重要意义，对于保护细胞和组织结构，保证样本质量具有不可替代的作用。
病理制片技术――包埋
病理制片技术――包埋一、意义组织块经过固定、脱水、透明、浸蜡等处理后，用包埋剂(如石蜡、树脂、塑料等)将其包制成含组织块的蜡块或塑料块等的过程称为包埋。
不同的包埋方法有不同的要求，经包埋后，组织可达到一定的硬度和韧度，有利于切成理想的薄片。
二、包埋步骤先将熔化的石蜡注入包埋托内(模具)，而后用镊子将经过浸蜡的组织块从脱水盒中取出，放入包埋托中央，放在小冷台上，用镊子轻按组织块，以达到组织块平整，盖上脱水盒底，再加好石蜡，移至冷冻台上，待冷冻好后，卸下组织蜡块待切。
包埋时应根据组织的不同，选择大小型号适合的包埋托；有要求直立包埋的组织要用镊子将组织固定在蜡块中央稍停片刻，以使组织在蜡凝时立住，达到立埋的要求。
三、注意事项1．每次夹取组织块时，镊子用乙醇灯加热至温度适中。
2．包埋托内不要有水、碎蜡等异物，以免影响包埋质量。
3．包埋蜡的温度要控制好，包埋蜡的熔点应为58~60℃。
4．包埋蜡加入少量蜂蜡(蜜蜡)，可以增加韧度，利于切片。
5．夹取组织块放人包埋托内时，一定要注意包埋面。
6．包埋好的蜡块，用刀修整时，一定要适当保留蜡块中组织周边的白蜡边，以利于连续切片。
7．每包埋完一块组织，镊子必须擦干净或用乙醇灯烧。
四、自动包埋机简介自动包埋机是对组织经脱水、浸蜡后进行包埋处理的设备。
有多种类型，其设计具有人性化，一般整机由包埋部分和冷冻部分组合而成(一体化简洁紧凑)，全自动程序控制，具有延时自动开机功能，加热快速，温控准确，安全可靠，包埋效果好等特点，冷台最低温度可达一5℃，可进行快速冷冻处理包埋块，具有大冷台，冷冻面积大，可放置超大包埋盒或多个包埋盒。
包埋部分温度可以从55～70℃，可储存3～5 L石蜡，自动熔解石蜡，可容纳70～100个样品包埋盒。
金属板表面容易清洗，有2个加热的抽屉，可收集多余的石蜡，进行重新利用，避免石蜡浪费。
具有冷却镊子架，方便使用。
可配放大镜利于小活检标本的包埋；可配脚踏：石蜡注入由脚踏开关控制或上手工控制。
石蜡包埋
石蜡包埋固定透明脱水浸蜡：4%甲醛固定（过夜）→自来水冲（8h）→70%乙醇（4℃，不超过1周）→80%乙醇（1h）→90%乙醇（1h）→100%乙醇A（1h）→100%乙醇B（1h）→丙酮（30min）→二甲苯A（30min）→二甲苯B（30min）→石蜡A（1h）→石蜡B（1h）→石蜡C（1h）→包埋包埋：1.将蜡块浸于包埋仪蜡槽约30min；2.将包埋框置于蜡槽预热备用；3.取出铁框，装清洁蜡，将组织置于其中，注意平整面朝下；4.将铁框放置于平台，保持组织块在蜡块范围内，平整面朝下；5.将包埋框压于表面，冷却凝固即可；6.蜡块凝固后可掰下放于4℃过夜；7.次日置于-20℃约25min；8.掰下铁框，修正蜡块周边不平整蜡，室温放置备用。
备注：※1：开水浴锅，确认水浴锅启动（摇晃），62.5℃。
※2：此处请务必保证时间的准确性,丙酮用于快速脱水,处理时间过久易使组织收缩硬化;二甲苯透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，不易切出完整切片。
※3：提前1.5小时打开包埋仪,待包埋缸石蜡完全熔化后,再将标本框放入浸蜡30min左右,即可进行包埋。
※4：标本框可先在纱布上把试剂扣干之后,再移入下一个试剂,可确保试剂的使用效果及效率。
需注意的细节：1、固定。
新鲜标本放入甲醛（10%福尔马林）24 h～1W（不超过1W），甲醛固定液可重复使用一次。
（附）组织长时间的固定，福尔马林会产生一种酸，影响核的染色。
对于固定很长时间的陈列性标本制片后切片染色不鲜艳，显得非常陈旧。
另外，长时间的固定往往会出现福尔马林色素，尤其是造血器官的标本，更应注意。
固定时间过长，可降低抗原的活性。
2、冲水。
从甲醛中取出包埋块，放入包埋块盒，盖好盖子。
先用自来水冲洗2～3遍，然后用流动自来水冲洗包埋块盒6～8 h，间中移动数次。
3、脱水。
冲洗完后，把包埋块装在一个网兜里，放入70%乙醇，4℃过夜。
石蜡包埋步骤
石蜡包埋步骤
石蜡包埋步骤
一、组织固定
按1：20将组织放入固定液【小块组织如卵巢可放入2ml EP管中加入2ml的bouins 固定液（4℃冰箱摇床中2~3h）或PFA固定液】；如果不进行下一步，可放于70%酒精中4℃冰箱中长期保存。
1组织脱水、渗透与包埋
○1脱水：
70% 乙醇（30min）→85%乙醇(30min) →95%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)。
注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）
○2脱水的体积至少为组织体积的4倍
○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬
○4最好能搅拌，使脱水充分
○2透明：
二甲苯I (30min)→二甲苯II(30min)。
注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。
时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。
○3渗透：
石蜡I (60min)→石蜡II(60min),62℃烘箱中。
○4包埋：
将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。
注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。
2 切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5μm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。
石蜡包埋步骤
石蜡包埋步骤
一、组织固定
按1：20将组织放入固定液【小块组织如卵巢可放入2ml EP管中加入2ml的bouins 固定液（4℃冰箱摇床中2~3h）或PFA固定液】；如果不进行下一步，可放于70%酒精中4℃冰箱中长期保存。
1组织脱水、渗透与包埋
○1脱水：
70% 乙醇（30min）→85%乙醇(30min) →95%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)。
注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）
○2脱水的体积至少为组织体积的4倍
○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬
○4最好能搅拌，使脱水充分
○2透明：
二甲苯I (30min)→二甲苯II(30min)。
注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。
时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。
○3渗透：
石蜡I (60min)→石蜡II(60min),62℃烘箱中。
○4包埋：
将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。
注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。
2 切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。
石蜡包埋技术
石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。
由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。
最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。
第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。
此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。
一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。
用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。
用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。
一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。
但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。
而大多数的组织固定剂是水溶液,随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水,一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。
由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。
最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。
常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤,即固定,脱水,透明，浸蜡和包埋,前一章中已述过固定。
第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件.此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体.一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。
但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。
因此在以酒精作为脱水剂时,应该先从浓度较低的酒精开始,然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。
第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异,经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。
如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。
但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。
经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可.用AAF固定液固定的组织可直接置于95%酒精开始脱水.用醇性固定剂(如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸.一般情况下，组织经过70％，80％，90％,95％,以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求.但是为了能使大量的组织块同时进行脱水,则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。
石蜡包埋步骤-使用
石蜡包埋步骤1.取材固定：离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散。
固定就是加入一些可以让蛋白质变性的物质（比如说甲醛），使得蛋白质的结构被固定住，不再发生变化，同时也不会再发生一些活性反应，这样才好做后续的染色步骤。
常见固定液是4%的多聚甲醛和饱和苦味酸。
根据不同目的、组织特征代表性取材。
取的材料应该小而薄。
便于固定剂迅速渗入内部，一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。
每个组织最好多切几块。
新鲜组织固定（组织块不宜太大太厚，这样固定液很难进入里面，可能会导致在较短的时间内脱水不完全，引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。
导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败。
组织块也不能太小，否则不能保证切片数量，且透明时间和浸蜡时间不能很好的把握。
）固定时间因固定剂种类而异，大多6-12小时，一般不超过12小时。
视组织固定的难易程度而定。
后续如果做免疫组化，不应超过12小时；后续如果做HE染色，不应超过24小时。
固定完之后用水洗（目的：洗去渗入组织的固定液，终止固定以免影响对组织的内结构的观察，分析。
换液两次，一次半小时。
）之后可直接脱水包埋或放入75%的乙醇4度可长期保存。
2.脱水：从75%的乙醇中取出，分别放到80%，90%，100%(Ⅰ)的乙醇中半小时，再放入100%乙醇中15min。
固定完直接水洗包埋的，应从70%乙醇开始，易碎组织从50%乙醇开始。
组织脱水时间不应过长，尤其是高浓度乙醇，要特别注意控制时间。
3.透明：透明的目的是置换组织内的脱水剂，为下一步浸蜡起到桥梁作用，二甲苯可以去除脂肪。
乙醇+二甲苯（1:1）2h；二甲苯（Ⅰ），二甲苯（Ⅱ）各10min（根据组织的大小和透明的难易程度不同，透明的时间可以根据具体情况调整。
颜色浅的组织表面油亮，可以透过光时效果较好，颜色较深的组织至少边缘可以透光。
类似于风干的杏肉。
）4.浸蜡：浸蜡目的是置换组织中的透明剂，为包埋作准备。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
石蜡包埋步骤
1组织脱水、渗透与包埋
1脱水：
○50%乙醇（90min）→70%乙醇（90min）→85%乙醇(90min)→95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。
注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）○2脱水的体积至少为组织提及的4倍○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬○4最好能搅拌，使脱水充分
2透明：
○1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步60min。
注：
在二甲苯的时间不宜过短或过长。
时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。
3渗透：
○1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I (120min)→石蜡II(120min),62℃。
注：
若出现从脱水到渗透时间太长，可在1/2二甲苯＋1/2石蜡或石蜡I的步骤停下,即将进入1/2二甲苯＋1/2石或石蜡I后，立即冷却，将组织封进里面，到第二天复融；第二天融解时温度不能超过65℃，并且需到完全溶解时开始进入步骤算时间。
4包埋：
○将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。
注：
包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。
2切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。