石蜡切片技术

植物进化生态研究组技术体系之——

石蜡切片技术

固定

1.切实验材料（在满足实验要求的条件下，尽可能小），置于FAA溶液中（如

果材料过大，最好抽气固定至材料沉底）；材料小固定24 h即可，材料大可适当延长时间。FAA固定的材料可放置数月。

脱水

2.用配置FAA时同等浓度的酒精来清洗材料（材料小的话，每次20 min，材料

大的话可延长至1—2 h，如刺玫瑰花苞的上位腺体与花药每次均清洗1.5h。

以下脱水，透明与透蜡每一步的时间都与此相似）；

3.70%，80%，90%%酒精各清洗1次，每次20min；

4.100%酒精清洗两次，每次30min；

透明

5.25%二甲苯+75%酒精，50%二甲苯+50%酒精，75%二甲苯+25%酒精各30min，

100%二甲苯30 min，两次；

透蜡

6.在纯二甲苯加入约1/4体积的蜡块，2h后放入37度恒温箱中，过夜（此时，

把载玻片清洗干净，用蒸馏水泡过后，放在烘箱中至烤干）

7.再加入1/4体积的蜡块，把恒温箱调到42度；

8. 2 h后去掉一半的混合液，再加入1/2蜡块，把恒温箱调到48度；

9. 2 h后更换纯石蜡，恒温箱58度；

10.2 h后更换纯石蜡（可先把包埋模预热）；

11.2 h后再更换纯石蜡，过夜（可把蜡液连同实验材料倒在预热的包埋模内）（此

时，把烤干的载玻片用粘片剂处理，可用多聚赖氨酸，用配好的多聚赖氨酸溶液，用移液器滴50 μL左右在一个载玻片一端，然后取另一个载玻片与之轻轻合在一起，使液滴在两个载玻片之间均匀分布，所有玻片都处理后，把一对一对的载玻片放在白瓷盘里，放在烘箱里烤干）；

包埋

12.用包埋模包埋（若是倒好的包埋模，用白瓷盘放入约1—2 cm深的凉水或冰

水，从烘箱中拿出一个包埋模，左手拿模子，右手拿镊子，镊子在酒精灯上晃过，轻轻用镊子夹着材料不让其沉底，然后把模子放入水中，用镊子将其摆放至你准备切的切面，让模子中的蜡自然冷却）；

13.第二天把蜡块从模子中磕出来，修块；

切片

14.去中心实验室切片时，先把摊片机的水槽清洗干净，装适量的纯水（不要用

自来水），打开摊片机电源，设置温度为37度；再打开烤片机的电源，温度设置为37度；

15.中心实验室石蜡切片机的粘石蜡块的装置，是一个空心的塑料盒子，石蜡块

要黏在盒子上无突起的一侧；粘块时，先给废的一次性石蜡切片机的切片加热，用烫的刀片抹在蜡块地步，然后迅速地黏在盒子上，后用刀片在酒精灯上溶废蜡若干，滴在蜡块周围，这样固定的蜡块会非常结实，切片时不会脱落；

16.固定好蜡块后，等1分钟左右蜡凝固，可把盒子固定在石蜡切片机上；

17.给切片机换一个刀片，转动手轮调节蜡块与刀片之间的距离，以刀片能触到

蜡块为宜，若蜡块在刀片上方时突出刀片距离过大（蜡块在刀片左侧，人在转轮一侧），容易导致蜡块从固定的盒子上脱落，若蜡块在刀片上方时离刀片距离较大（蜡块在刀片右侧），空转时间会较长；

18.切好的蜡带，用毛笔或者毛刷轻轻转移至摊片机的水里展片，展片时间不易

过短或过长，以石蜡带平滑为宜，约30 s左右；

19.用涂过粘片剂的载玻片，插入到水槽中蜡带的下方，轻轻将蜡带捞起，平展

地铺在载玻片上，然后把捞有蜡带的载玻片放在烤片机上；

20.所有片子切好后，等载玻片表明的水分看不到后，把左右片子收在白瓷盘内，

带回实验室，在37度烘箱内烤片过夜；

脱蜡至水

21.把载玻片放入染色缸内，内放纯二甲苯，15min，2次；

22.纯酒精两次，各20min；

23.90%、70%、50%酒精各一次，每次10min；

24.蒸馏水中2次，每次10 min；

25.在显微镜下选片，切片完整的用于染色；

染色

26.在1%番红溶液中染色1-2 h；

27.蒸馏水洗10 min；2次；

28.30%酒精溶液中1-2 min；

29.50%酒精溶液中1-2 min；

30.70%酒精溶液中1-2 min；

31.95%酒精溶液中1-2 min；

32.固绿溶液（0.2 g固绿溶于100 mL95%的酒精溶液中）染30 s-2 min；

33.95%酒精溶液中1 min；

34.无水酒精中2-5 min，2次；

封片

35.50%二甲苯+50%无水酒精溶液中，5min；

36.纯二甲苯溶液中5min；2次；

37.中性树胶封片（不宜滴过多树胶）。