石蜡包埋步骤

心肌组织石蜡包埋与切片

多聚甲醛配制：

1×PBS + 4%多聚甲醛（PH值7.2-7.4）

1×PBS：Na

2HPO

4

.12H

2

O 2.88g

NaH

2PO

4

.2H

2

O 0.296g

NaCl 8.5g

定容至1L。

熔蜡过程：

新蜡块最好提前放入烤箱，反复凝熔3次以上，再做浸蜡包埋。

1)大鼠心室经4%多聚甲醛固定24h以上，将组织放入包埋框内，用铅笔做

好标记；

2)将包埋框与组织一起放入0.01M PBS，震荡冲洗30min×2次；

3) 弃去PBS，心脏组织经乙醇梯度脱水：75%乙醇4h，80%乙醇4h，95%乙醇Ⅰ2h，95%乙醇Ⅱ2h，100%乙醇Ⅰ1h 20min，100%乙醇Ⅱ1h 40min；

4) 二甲苯透明：二甲苯：乙醇（1:1）10min，二甲苯Ⅰ20min，二甲苯Ⅱ20min；

5) 浸蜡：石蜡Ⅰ40min，石蜡Ⅱ2h；石蜡I、石蜡II与包埋蜡反复凝固融化3次，浸蜡时温度控制在56-60 ℃。

6) 石蜡包埋：将熔化的石蜡（注意保持石蜡密度的均一性）倒入包埋框，用加热的镊子将浸蜡后的组织块放入包埋框内，温度控制在56-60℃（整个操作过程尽可能快），待石蜡凝固后取下石蜡块准备切片；

7) 切片：每个标本取10张切片，切片厚度为5μm左右。将切片铺于预先用多聚赖氨酸包被的载玻片上，60℃置于烤片机中烘烤60min。染色前将切片置于37℃烤箱中过夜或60℃ 2h。