石蜡包埋步骤

石蜡包埋步骤（推荐五篇）

石蜡包埋步骤（推荐五篇）第一篇：石蜡包埋步骤石蜡包埋步骤1组织脱水、渗透与包埋脱水：○50% 乙醇（90min）→70% 乙醇（90min）→85%乙醇(90min)→95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。

注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）○2脱水的体积至少为组织提及的4倍○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬○4 最好能搅拌，使脱水充分透明：○1/2乙醇＋1/2二甲苯→ 二甲苯→ 二甲苯，每步60min。

注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。

时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。

渗透：○ 1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I(120min)→石蜡II(120min),62℃。

注：若出现从脱水到渗透时间太长，可在1/2二甲苯＋1/2石蜡或石蜡I的步骤停下,即将进入1/2二甲苯＋1/2石或石蜡I后，立即冷却，将组织封进里面，到第二天复融；第二天融解时温度不能超过65℃，并且需到完全溶解时开始进入步骤算时间。

包埋：○将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。

注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。

切片和贴片将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。

第二篇：石蜡包埋人体组织STR检验的探讨【摘要l目的探讨普通甲醛对人体组织dna的影响及提高str检出率的手段。

方法取少量石蜡包埋组织，65℃水浴脱蜡，chelex一100法提取dna，pcr扩增，循环次数分别为28次和28+6次，扩增产物经310型测序检测。

结果普通甲醛固定5 d以内的组织基本上可检出amel及15个str基因座。

固定时间延长，检出率下降；pcr循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。

石蜡包埋

石蜡切片及HE染色过程一石蜡切片1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.注意: (1). 固定液量应为组织块体积的40倍.(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.(4)固定容器应大些.3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(6 0-120’).5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.二HE染色1. 染色前切片处理(1) 脱福尔马林色素.(2) 脱汞盐结晶.(3) 脱黑色素.2. 染色步骤二甲苯脱蜡(10’)→ 无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗(1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s—5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精(2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片.3. 染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色.三盐酸酒精的配制浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短.脑组织的石蜡包埋过程中有很多干预因素，一个环节处理的不好就会影响整个实验，我把我们的制作方法说一下，供参考。

医院石蜡包埋机操作程序

石蜡包埋机操作程序
1.打开或自动定时起动包埋中心和冷冻台；打开工作灯，调节石蜡流量开关，预热包埋框及镊子。

2.选择合适的包埋框，先加入少量的蜡，用热镊子夹取组织块，使病灶或指定面向下埋入蜡中，并用镊子轻轻按压，加上该组织的塑料框格，再加合适的蜡，待蜡稍凝后将其移入冷冻台上使其加速凝固。

3.待全部包埋结束后，将蜡块从包埋框中取出，修整蜡块边缘多余的石蜡，按序号排列，并与取材单上逐一核对，数据准确后放入冰盒内于冰箱冷冻层内。

4.关闭流量开关及包埋工作灯，清理包埋机上剩余残蜡，将脱水篮及铁片于烤箱内烘烤备用。

5.将包埋框按大小规格清理排列放好备用。

6.检查包埋机溶蜡槽中的石蜡量，并及时添加。

7.在包埋过程中，如遇组织块的数目与所标记的数目不相符合；脱水盒开盖，组织块滑出脱水盒，不易辨认或丢失等。

应及时与取材医师联系核对，并在取材单上签字注明。

石蜡包埋的制作过程

石蜡包埋1．取材：根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求新鲜，避免挤压，挫伤，干枯。

（1）肉眼观察大体，记录大体标本的病变性状（形状，大小，重量，色泽，质地，表面，切面形态，和周围组织的关系等），同时注明采集时间，地点，名称，组织部位，并编号。

（2）取同时具有病变组织和正常组织的部位，所取组织块要大小适当，即要能说明问题，又要考虑固定剂的渗透能力。

一般取厚2mm－5m m，大小15mm×15mm左右。

如果所需要的组织块过大，可以分几个块固定。

对于大体标本，取材时以应保存完整性，可对大体标本做楔形切片。

（3）注意事项：a.标本避免挤压，防止其形态改变。

小标本可用镊子夹取，大标本取时应使用锋利的刀。

b.取材要平整，小标本最少要有一个面是平整的，并做出标记。

c .去除多余的组织。

d.标本应及时，新鲜，防止细胞自溶。

2．固定：(1) 及时将所取组织块放入合适的固定液中,常用的有甲醛。

固定的作用在于通过固定液，在尽量短的时间内使原生物体停止生命活动，保持如同生前一样精细的细胞结构，防止死后自溶；尽可能避免使组织膨胀或收缩，并且软硬合适易于切片；增加细胞内含物的折光性，易于镜下观察，同时增加媒染作用和染色能力。

固定的方法有浸泡法，熏蒸法，灌注法等。

(2) 注意事项：a.针对标本，选择合适的固定液。

b.固定液的量一般为所固定组织的20倍；如固定的组织较多，可用纱布使瓶底不平整，固定液易于渗入。

c . 注意固定时的温度，固定时间要充分。

3．脱水：是用一种即能与水又能与透明液混合的液体来逐渐置换样品中游离的水。

最常用的是酒精，它能使组织块收缩，变硬，应注意时间不易过长。

（1）脱水过程一般是酒精浓度70％（时间不限）－80％（时间不限）－95％（1小时左右）－95％（1小时左右）－100％（1小时左右）－1 00％（1小时左右）。

（2）注意事项：a.脱水剂既能与水相溶，又能与媒浸剂相溶。

b.脱水剂的浓度应足够高。

组织块石蜡包埋

组织块石蜡包埋的步骤：1.取材：尽量活杀，在处死30min内取材完毕，组织块的大小一般为（1.0-1.5cm）*1.0cm*(0.2-0.3cm)2.固定：常用甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1:9比例配制而成。

固定时间以12-24h为宜。

（4℃冰箱可放置1-3个月）3.冲洗：将组织块放在固定的容器中用流水冲洗24h.4.脱水：一次70%酒精2h, 80%酒精2h, 90%酒精1h, 95%酒精40min,无水乙醇Ⅰ40min,无水乙醇Ⅱ30min。

可将组织放于70%酒精中过夜。

5.透明：将脱水后组织直接浸入二甲苯透明剂中（二甲苯Ⅰ, 二甲苯Ⅱ），每次透明为10min。

6.浸蜡：常规制片常用熔点高于56℃以上的石蜡，普通采用56℃-58℃石蜡。

先将组织浸入软蜡Ⅰ1h左右, 再浸入软蜡Ⅱ40min；硬蜡Ⅰ40min, 硬蜡Ⅱ1h。

（一般浸蜡时间为3-4h）软蜡熔点为45℃-50℃，硬蜡熔点为55℃-60℃。

7.包埋：将蜡液注入包埋硬具中，迅速将组织块平放入蜡液中，摆正并铺平，然后移至冷却台，使组织块同蜡液凝固在一起的过程。

（硬蜡凝固定型）石蜡切片法：在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为“修块”），但也不能留得太少，否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。

一般切片厚度为4-6μm。

贴片时先在干净的载玻片上涂一层蛋白甘油，然后于60℃恒温箱中烘烤1h，若未烤干可适当延长时间；若组织剥脱可涂一层蛋清加以固定。

做免疫组化时，玻片应涂多聚赖氨酸，亦可买防脱玻片。

HE染色的步骤：二甲苯Ⅰ5-10min→二甲苯Ⅱ5-10min→无水乙醇Ⅰ1-3min→无水乙醇Ⅱ1-3min→90%酒精1min→80%酒精1min→70%酒精1min→水洗→苏木精3-5min→水洗→盐酸酒精1-3s→水洗→饱和碳酸锂（氨水）10-30s→水洗→伊红3-5min→水洗（短）→70%酒精1-2s→80%酒精3-5min→90%酒精3-5min→95%酒精3-5min→无水乙醇5-10min→二甲苯Ⅰ3-5min→二甲苯Ⅱ3-5min→中性树胶封片染色液的配制：1.Harris苏木精的配制苏木精 1g硫酸铝钾 15g无水乙醇 10ml蒸馏水 200ml先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。

石蜡包埋和冰冻包埋实验步骤

1.取材固定:离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散。

固定就是加入一些可以让蛋白质变性的物质(比如说甲醛)，使得蛋白质的结构被固定住，不再发生变化，同时也不会再发生一些活性反应，这样才好做后续的染色步骤。

常见固定液是4%的多聚甲醛和饱和苦味酸。

根据不同目的、组织特征代表性取材。

取的材料应该小而薄。

便于固定剂迅速渗入内部，一般厚度不超过2mm，大小不超过5X 5mm"。

每个组织最好多切几块。

新鲜组织固定(组织块不宜太大太厚，这样固定液很难进入里面，可能会导致在较短的时间内脱水不完全，引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。

导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败。

组织块也不能太小，否则不能保证切片数量，且透明时间和浸蜡时间不能很好的把握。

)固定时间因固定剂种类而异，大多6-12 小时，一般不超过12小时。

视组织固定的难易程度而定。

后续如果做免疫组化，不应超过12小时;后续如果做HE染色，不应超过24小时。

固定完之后用水洗(目的:洗去渗入组织的固定液，终止固定以免影响对组织的内结构的观察，分析。

换液两次，一次半小时。

) 之后可直接脱水包埋或放入75%的乙醇4度可长期保存。

2.脱水从75%的乙醇中取出，分别放到80%，90%，100%( I )的乙醇中30min，再放入100%乙醇中。

固定完直接水洗包埋的，应从70%乙醇开始，易碎组织从50%乙醇开始。

组织脱水时间不应过长，尤其是高浓度乙醇，要特别注意控制时间。

3.透明透明的目的是置换组织内的脱水剂，为下一步浸蜡起到桥梁作用，二甲苯可以去除脂肪。

乙醇+-二甲苯(1:1) 2h；二甲苯(I )，二甲苯(II)各10min(根据组织的大小和透明的难易程度不同，透明的时间可以根据具体情况调整。

颜色浅的组织表面油亮，可以透过光时效果较好，颜色较深的组织至少边缘可以透光。

)4.浸蜡浸蜡目的是置换组织中的透明剂，为包埋作准备。

二甲苯+石蜡(1:1)2h；石蜡(I)1h;石蜡(II)2h.(浸蜡的时间也可以长一些)5.包埋在冰盒上进行，将融好的纯蜡(最好提前4小时以上开始融蜡，新蜡更难融)，倒入蜡盒(可以浸没组织就行，大约蜡盒的三分之一)由于蜡盒底部与冰盒接触，底部的蜡会先凝固，这样就可以把组织用镊子夹住立在底部。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤

常规的石蜡‎包埋过程包‎括五个基本‎步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋‎制作石蜡切‎片，切片前须将‎石蜡渗透组‎织包埋于石‎蜡中，而水与石蜡‎又是不相混‎合的，所以在浸蜡‎，包埋前必须‎将组织内所‎含的水分脱‎去。

而大多数的‎组织固定剂‎是水溶液，随后的水冲‎洗也使其含‎有大量水分‎，因此必须先‎行脱水，一般是浸入‎逐级增加浓‎度的酒精来‎完成。

由于酒精和‎石蜡不能混‎合，须再用一种‎石蜡的溶剂‎来置换酒精‎，因大多数石‎蜡溶剂有使‎组织的折光‎率增高并表‎现为透明或‎半透明状，所以此步骤‎又称透明。

最后用石蜡‎浸渍组织并‎铸制成坚实‎的蜡块。

常规的石蜡‎包埋过程包‎括五个基本‎步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋‎，前一章中已‎述过固定。

第一节脱水脱水就是用‎脱水剂完全‎除去组织内‎的水分，为下一步透‎明及浸蜡创‎造条件。

此外，脱水还可以‎使组织再次‎发生一定的‎硬化，脱水剂必须‎是与水在任‎何比例下均‎能混合的液‎体。

一．常用的脱水‎剂1．酒精：是制片最常‎用的试剂，可与水在任‎何比例下相‎混合，酒精的脱水‎能力比较强‎，又能硬化组‎织。

但是酒精的‎船头速度很‎快，对于组织会‎有明显的收‎缩作用。

因此在以酒‎精作为脱水‎剂时，应该先从浓‎度较低的酒‎精开始，然后递增其‎浓度，这样可以避‎免组织过度‎收缩。

第一瓶酒精‎浓度随固定‎剂，脱水组织的‎大小和种类‎而异，经水溶性固‎定剂固定的‎细柔组织需‎要慢慢脱水‎，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等‎大多数组织‎标本则是从‎70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒‎精。

但是有时为‎了某种特殊‎要求，例如要做糖‎元的切片标‎本或是要做‎尿酸结晶染‎色切片标本‎，为了防止糖‎元和尿酸结‎晶在水中消‎失却要直接‎投入无水酒‎精中固定，而不需要经‎过水洗和低‎浓度酒精的‎脱水过程。

经无水酒精‎固定后的组‎织只需要再‎经过换一次‎无水酒精脱‎水即可。

石蜡包埋脱水程序

石蜡包埋脱水程序石蜡包埋脱水程序是一种常用的组织学技术，用于固定和处理生物样本，使其适合显微镜观察。

本文将介绍石蜡包埋脱水程序的具体步骤和注意事项。

石蜡包埋脱水程序的第一步是脱水。

脱水是将生物样本中的水分逐渐替换为有机溶剂，以防止石蜡在包埋过程中产生气泡。

常用的脱水溶剂包括乙醇和二甲苯。

脱水的步骤一般是从低浓度的乙醇开始，逐渐提高乙醇浓度，最后使用纯二甲苯进行脱水。

在每个浓度的乙醇中，样本需要浸泡一定的时间，以确保完全脱水。

接下来，是清洁和固定步骤。

清洁是为了去除样本中的杂质和污染物，以保证最终制作出的切片质量。

清洁一般使用乙醇或二甲苯进行多次洗涤。

固定则是使用适当的固定剂对样本进行处理，以保持其形态和结构不变。

常用的固定剂有福尔马林和乙酸纤维素盐酸溶液。

固定的时间和温度需要根据样本的性质和要求进行调整。

然后，是浸渍和包埋步骤。

浸渍是将样本浸入石蜡中，以取代脱水溶剂。

石蜡是一种透明的固体物质，可以提供样本的支撑和保护。

浸渍的时间和温度也需要根据样本的性质和要求进行调整。

包埋是将浸渍后的样本放入石蜡模具中，并倒入石蜡，使样本被完全包裹。

包埋后，石蜡需要在适当的温度下进行固化，以确保样本在切片过程中不会产生移位或变形。

是切片和染色步骤。

切片是将包埋好的样本切成薄片，以便于显微镜观察。

切片可以使用手动切片机或自动切片机进行。

在切片之前，石蜡需要冷冻或冷却，以提高切片的质量。

切片后，可以选择染色，以增强样本的对比度和可见性。

常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫染色等。

在进行石蜡包埋脱水程序时，需要注意以下几点。

首先，脱水过程中需要逐渐提高溶剂的浓度，以避免快速脱水对样本造成损伤。

其次，固定时间和温度需要控制好，过长或过短都会影响样本的质量。

第三，浸渍和包埋的时间和温度也需要根据样本的性质和要求进行调整。

最后，在切片和染色过程中，需要小心操作，避免样本的损坏或污染。

石蜡包埋脱水程序是一种重要的组织学技术，可以使生物样本适合显微镜观察。

石蜡包埋和HE染色的制作过程

步骤一：取材与固定：取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

步骤一：脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。

再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

步骤三：浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。

待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。

冷却凝固成块即成。

包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。

步骤四：切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。

切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

步骤四：脱蜡常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。

苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。

伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。

染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

酒精用了2次先有低到高，再有高到低，这是为什么？步骤五：染色HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

②酸水及氨水中分色，各数秒钟。

③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

————又要脱水！⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

步骤六：脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

又要用一次无水酒精，这是为什么？步骤七：封固：将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。

石蜡包埋法

我们已经完成了取材和固定接下来就依次是脱水透明浸蜡包埋。

脱水：因为水与石蜡是不相混合的所以在浸蜡包埋前必须将组织内所含的水分脱去而大多数的组织固定剂是水溶液因此必须先行脱水以酒精作为脱水剂时应该先从浓度较低的酒精开始然后递增其浓度这样可以避免组织过度收缩
步骤：50% 乙醇（90min）→70% 乙醇（90min）→85%(90min)→95% 乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)
透明：组织脱水后还要经过一个浸蜡的媒剂透明过程目的是使石蜡渗透到组织中去达到包埋的支持作用二甲苯是最为常用的一种透明剂它能与酒精丙酮相混合又是石蜡的溶剂在二甲苯的时间不宜过短或过长。

时间过短引起透明不充分，影响后面渗
透包埋；时间过长则引起组织变脆
步骤：1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步60min
浸蜡：组织经媒剂的透明作用之后移入熔化的石蜡内浸渍石蜡逐渐浸入组织间隙取代透明剂这一程序就叫浸蜡根据所用石蜡的熔点浸蜡需要能够保持于54－60.C温箱内进行
步骤：1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I (120min)→石蜡II(120min)
包埋：就是将已经经过固定脱水透明浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内包埋成块使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却
步骤：将组织放入盛有石蜡的模具中摆好位置于石蜡包埋机的冷台上冷却。

石蜡包埋

石蜡包埋固定透明脱水浸蜡：4%甲醛固定（过夜）→自来水冲（8h）→70%乙醇（4℃，不超过1周）→80%乙醇（1h）→90%乙醇（1h）→100%乙醇A（1h）→100%乙醇B（1h）→丙酮（30min）→二甲苯A（30min）→二甲苯B（30min）→石蜡A（1h）→石蜡B（1h）→石蜡C（1h）→包埋包埋：1.将蜡块浸于包埋仪蜡槽约30min；2.将包埋框置于蜡槽预热备用；3.取出铁框，装清洁蜡，将组织置于其中，注意平整面朝下；4.将铁框放置于平台，保持组织块在蜡块范围内，平整面朝下；5.将包埋框压于表面，冷却凝固即可；6.蜡块凝固后可掰下放于4℃过夜；7.次日置于-20℃约25min；8.掰下铁框，修正蜡块周边不平整蜡，室温放置备用。

备注：※1：开水浴锅，确认水浴锅启动（摇晃），62.5℃。

※2：此处请务必保证时间的准确性,丙酮用于快速脱水,处理时间过久易使组织收缩硬化;二甲苯透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，不易切出完整切片。

※3：提前1.5小时打开包埋仪,待包埋缸石蜡完全熔化后,再将标本框放入浸蜡30min左右,即可进行包埋。

※4：标本框可先在纱布上把试剂扣干之后,再移入下一个试剂,可确保试剂的使用效果及效率。

需注意的细节：1、固定。

新鲜标本放入甲醛（10%福尔马林）24 h～1W（不超过1W），甲醛固定液可重复使用一次。

（附）组织长时间的固定，福尔马林会产生一种酸，影响核的染色。

对于固定很长时间的陈列性标本制片后切片染色不鲜艳，显得非常陈旧。

另外，长时间的固定往往会出现福尔马林色素，尤其是造血器官的标本，更应注意。

固定时间过长，可降低抗原的活性。

2、冲水。

从甲醛中取出包埋块，放入包埋块盒，盖好盖子。

先用自来水冲洗2～3遍，然后用流动自来水冲洗包埋块盒6～8 h，间中移动数次。

3、脱水。

冲洗完后，把包埋块装在一个网兜里，放入70%乙醇，4℃过夜。

HE、Masson、VG、pas、免疫组化、TUNEL染色步骤

包埋，就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。

包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。

一．石蜡包埋法石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法，它有许多优点，操作简易便于掌握，可进行连续切片，包埋后的组织可以长期保存。

包埋的方法有自动包埋机包埋和手工包埋两种。

手工包埋的步骤如下：1.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。

从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。

2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。

3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。

4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有一层透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。

5.蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。

二．石蜡包埋的注意事项1.作为包埋组织使用的石蜡不仅由于气候的不同需要加以选择，而且与组织的硬度也有密切关系，过硬的组织最好用硬度较高的石蜡包埋，反之，软组织则应以硬度较低的石蜡包埋。

其熔点一般要求再60。

C左右。

2.包埋用石蜡加温不可过高，以保持其不凝固为度，温度过高容易将组织烫坏，使得组织变硬，变脆，并发生卷曲，收缩变形而不利于切片，甚至影响诊断。

另外注意埋蜡的温度和组织本身的温度，两者是否合适，温度不一致常可造成组织与周围石蜡脱裂的现象，而达不到包埋的作用。

3.包埋用石蜡应掌握用量，以组织全部包埋完毕，石蜡也恰好用完为宜。

4.包埋应注意组织病变面放在下面，并尽可能使组织放平，在不损伤组织的情况下可用镊子轻压。

5.囊壁和消化道等组织包埋时更应注意组织方位，应将组织块直立拉平，不要卷曲。

石蜡包埋步骤
一、组织固定
按1：20将组织放入固定液【小块组织如卵巢可放入2ml EP管中加入2ml的bouins 固定液（4℃冰箱摇床中2~3h）或PFA固定液】；如果不进行下一步，可放于70%酒精中4℃冰箱中长期保存。

1组织脱水、渗透与包埋
○1脱水：
70% 乙醇（30min）→85%乙醇(30min) →95%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)。

注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）
○2脱水的体积至少为组织体积的4倍
○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬
○4最好能搅拌，使脱水充分
○2透明：
二甲苯I (30min)→二甲苯II(30min)。

注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。

时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。

○3渗透：
石蜡I (60min)→石蜡II(60min),62℃烘箱中。

○4包埋：
将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。

注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。

2 切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。

石蜡包埋技术

石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。

而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。

由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。

最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。

第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。

此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。

一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。

用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。

用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。

一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。

但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。

石蜡切片包埋的原理是什么

石蜡切片包埋的原理是什么
石蜡切片包埋是一种常用的组织学技术，用于在光学显微镜下观察组织的形态和结构。

其原理如下：
1. 组织处理：首先，将组织标本进行固定和脱水处理。

固定可以使用甲醛等化学物质，以保持组织的形态和结构。

然后，通过一系列浓度梯度的醇溶液，如丙酮或乙醇，逐渐将水分从组织中取出，使得组织进一步脱水。

2. 渗透剂浸泡：在脱水处理后，将组织标本浸泡在溶解于有机溶剂中的石蜡中。

通常使用的有机溶剂是乙烯基石蜡（ethylene vinyl acetate copolymer），其可以很好地与水相宜，能进一步移除标本中的水分并渗透到组织中。

3. 包埋：将浸泡在石蜡中的组织标本放入包埋模具中，并加入熔融的纯石蜡。

在加热的条件下，纯石蜡会渗透到组织中，并在标本固定在模具底部的同时填充模具的其余空间。

这样，组织标本就被完全包裹在石蜡中，保持了其形态和结构。

4. 固化：放置包埋模具在冷却台上，使得石蜡迅速冷却固化。

这样，石蜡将固定住组织，并使其成为一块坚固的切片。

5. 切片：采用专门的组织切片机将固化的石蜡切成薄片，通常为5-8微米的厚度。

这些切片可以通过去石蜡和染色等步骤，进行光学显微镜观察下的染色和分
析。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。

而大多数的组织固定剂是水溶液,随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水,一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。

由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。

最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤,即固定,脱水,透明，浸蜡和包埋,前一章中已述过固定。

第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件.此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体.一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时,应该先从浓度较低的酒精开始,然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异,经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可.用AAF固定液固定的组织可直接置于95%酒精开始脱水.用醇性固定剂(如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸.一般情况下，组织经过70％，80％，90％,95％,以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求.但是为了能使大量的组织块同时进行脱水,则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。

试总结石蜡包埋的流程和实验要点

试总结石蜡包埋的流程和实验要点下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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石蜡包埋的步骤

包埋时间50%酒精：1个小时70%酒精：1个小时80%酒精：1个小时90%酒精：1个小时95%酒精：1个小时无水酒精1：1个小时无水酒精2：1个小时无水酒精:二甲苯1:1 1个小时二甲苯透明：时间不定二甲苯:石蜡1:1 20- 1个小时不等石蜡1：1个半小时石蜡2：1个半小时包埋的时间不确定，由组织块的大小来决定，像一般的比较小的而且比较容易脱水的如消化道的胃、小肠等脱水半个小时至四十分就行，蝌蚪整体的话因为有皮肤包着所以时间要长一些至少一个小时这样算下来包完一套需要至少12个小时，包埋的关键不是脱水，而是在那两步1：1上，只要这两个过度做好了其余的就很顺畅了，只要1:1时间够了透明时间就可以适当的短一些，一般不要超过1分钟，30秒左右就可以。

想做好石蜡切片从取材到染色每一步都很重要，可以说是环环相扣，哪一步没做好都会影响最终的结果。

现在从取材说起，取材时要迅速，以免组织自溶，固定要充分，固定液我们一般用的有两种，一是10%中性福尔马林溶液，第二是Bouin氏液，这个根据组织来决定用哪个，要是整体固定蝌蚪的话可以用浓度稍高一些的福尔马林，一般可以用12—15%的福尔马林。

取下的材料需固定一段时间，至少要过夜，若是固定时间比较长的话需要用流水冲洗一个晚上第二天再脱水包埋，时间短的话，第二天可以直接用水泡一个半小时即可进行包埋，当然这其中要换几次水。

包埋完切片，捞出的片子至少烘干一个晚上的时间。

二甲苯2：30分钟二甲苯1：30分钟酒精:二甲苯1:1：10分钟无水酒精2：5分钟无水酒精1：5分钟95%；5分钟90%：5分钟80%：5分钟70%：5分钟50%：5分钟流水冲洗苏木精时间不定，视当时染液的情况而定。

一般5-10分钟，甚至更长。

流水冲洗50%：5分钟70%：5分钟80%：5分钟90%：5分钟伊红30秒，吸水纸上吸一下染液95%：蘸三下无水酒精1：5分钟无水酒精2：5分钟酒精:二甲苯1:1 10分钟二甲苯1：30分钟二甲苯2：30分钟染色整个过程大约需要四个小时，每一步都要用吸水纸蘸几下；整个实验下来至少需要两天半时间。