7 黑曲霉发酵柠檬酸

柠檬酸合成的代谢调节
1、由于锰离子的缺乏，抑制了蛋白 质的合成，而导致细胞内的NH4+ 浓 度升高，促进了EMP途径的畅通。 2、由组成型的丙酮酸羧化酶源源不 断提供草酰乙酸。 3、在控制Fe2+含量的情况下，顺乌 头酸酶活性低，从而使柠檬酸积累。 4、丙酮酸氧化脱羧生成乙酰辅酶Ａ 和丙酮酸固定CO２反应相平衡，以及 柠檬酸合成酶不被抑制，增强了合成 柠檬酸的能力。 5、柠檬酸积累增加，pH降低，在低 pH条件下，顺乌头酸水合酶和异柠 檬酸脱氢酶失活，从而进一步促进了 柠檬酸自身的积累。
实验步骤
菌种获得（纯种） 种子液制备 无菌操作，取5mL无菌水至黑曲霉平板上， 用接种环轻轻刮下孢子，用枪吹吸数下制 成孢子悬液。 液体深层发酵 无菌操作，取3mL孢子悬液接种于玉米粉摇 瓶发酵培养基中。在转速为200rpm旋转摇 床上，30℃培养5～6天。
后续实验准备 黑根霉的分离培养 制作马铃薯培养基平板2块 单号组用接种环无菌操作，从酒酿样品中挑取 1环，在1块马铃薯培养基平板上进行划线分离。 双号组取安琪菌剂0.1g加入10mL带玻珠的无 菌水三角瓶进行稀释溶解，取稀释液0.1mL， 在1块马铃薯培养基平板上进行均匀涂布。 另外一块平板置于冷藏柜备用。 将划好的培养基平板置于517房间30℃培养箱 内正置培养3天，至周一进行结果观察和转接。
灭菌自来水 （20mL，于50mL三角瓶） 每组2瓶，其中一瓶放置数颗玻璃珠 其他灭菌物品 （每组1套） 小包装1.5mL离心管、蓝色黄色枪头若干， 培 养皿每组1包（每包不少于6个）
问题与思考 影响黑曲霉发酵生产柠檬酸的因 素有哪些？ 素有哪些？ 试设计分离筛选酵母菌发酵生产 酒精实验并阐述酒精产生机理
柠檬酸发酵的条件： 柠檬酸发酵的条件：
1、合适的碳源（淀粉、麦芽糖、甘露糖 等），高浓度的糖； 2、限制有机氮源、选择适量的无机氮源 （铵盐）； 3、合适的pH值； 4、发酵液中溶氧量要高（摇床的转速 250r/m）； 5、限制重金属离子如Mn2＋、Fe2＋、Zn2＋含 量。
工业化发酵生产示意图
源自文库
实验七 黑曲霉发酵 生产柠檬酸
实验目的
了解产物发酵生产的机理； 了解产物发酵生产的机理； 柠檬酸发酵的发酵条件 掌握发酵过程步骤
实验原理
柠檬酸的发酵
80%的糖代谢走EMP途径
生产菌中存在TCA的酶系
草酰乙酸的来源不是由TCA 供应，而是由2个CO2固定 提供，故CO2固定对柠檬酸 合成必不可少。