免疫组化结果判断及常见问题的分析

合集下载

免疫组化结果判断及常见问题的分析

精选
25
精选
26
四、免疫组化异常着色及对策
1.非特异性着色及其对策
非特异性着色原因操作过程冲洗不充分内源性过氧化物酶
内源性生物素电荷吸附抗体不纯
切片制片不当加试剂后切片干燥
对策每步冲洗3×5min
3％H2O2封闭使用生物素阻断试剂盒阻断
非免疫动物血清封闭
采用单克隆抗体
改善取材和制片
2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少
3.排除人为造成的非特异性染色切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。
4.颗粒性显色 DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。
精选
5
免疫组化标准化照片
CK10 ER CD44v6
精选
6
精选
切片制片不当加试剂后切片干燥
对策每步冲洗3×5min
3％H2O2封闭使用生物素阻断试剂盒阻断
非免疫动物血清封闭采用单克隆抗体改善取材和制片防止切片干燥
精选
43
无信号片
精C选D30
44
2. 染色的假阴性及其对策
染色假阴性原因
组织处理不当（固定、浸蜡）一抗与二抗种属连接错误抗体失效显色系统不相适配操作不当，遗漏重要步骤
精选
CD34
21
K-ras
精选
VEGF
22
附：定量分析——图象处理系统
1、图象处理：
利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。 1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。 2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。
精选

免疫组化结果分析4则

免疫组化结果分析4则以下是网友分享的关于免疫组化结果分析的资料4篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。

《免疫组化实验结果的判定和分析范文一》免疫组化实验结果的判定和分析免疫组化实验结果的判定和分析就实验结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容。

只有严格的实验设计、标准的实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最优质的服务。

免疫组化结果的判定原则：⒈必须同时设对照染色。

没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。

⒉抗原表达必须在特定部位。

如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上等等。

不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。

⒊阴性结果不能视为抗原不表达。

由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。

⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。

因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。

⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。

对照染色设计：(一）对照染色的目的设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。

假阴性的原因主要有三种：①组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；②抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；③染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液pH和离子强度不当等。

假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：①自发荧光或内源酶等干扰；②抗体试剂不纯(特别是一抗）；③操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；④Fc受体的干扰，等等。

（二）对照的种类及其选用目的对照染色大致可分为四类：即阳性组织对照、阴性组织和阴性试剂对照及自身对照。

⒈阳性组织对照指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。

免疫组化结果判断及常见问题的分析

非特异性染色
总结词
非特异性染色是由于抗体与非目标组织成分的交叉反应导致的。
详细描述
非特异性染色是免疫组化实验中常见的问题，通常是由于抗体与组织中非目标成分的交叉反应。为了减少非特异性染色，可以尝试降低抗体浓度、增加洗涤步骤或使用阻断剂等方法。
背景染色
总结词
背景染色是由于组织中其他成分的非特异性染色或由于抗体与组织中其他成分的交叉反应导致的。
免疫组化结果判断及常见问题的分析
目
CONTENCT
录
• 免疫组化基本概念 • 免疫组化结果解读 • 常见问题及解决方法 • 免疫组化在临床上的应用 • 免疫组化技术新进展
01
免疫组化基本概念
定义与原理
定义
免疫组化是一种利用抗原-抗体反应原理，通过标记的抗体在组织或细胞中检测特定抗原的方法。
免疫组化可以与其他技术如原位杂交、原位PCR等联合应用，以同时检测抗原和相关基因的表达，提供更全面的分子信息，有助于深入了解疾病的发生发展机制。
联合应用多种技术可以相互补充，提高检测的敏感性和特异性，为临床诊断和治疗提供更可靠的依据。
THANK YOU
感谢聆听
数字免疫组化技术
数字免疫组化技术是一种基于数字图像分析的免疫组化技术，通过高分辨率数字成像系统获取组织切片图像，利用计算机软件进行图像分析和处理。
数字免疫组化技术能够实现自动化、高通量的组织切片分析，提高检测效率，减少人为误差，特别适合大规模临床筛查和流行病学研究。
免疫组化与其他技术的联合应用
04
免疫组化在临床上的应用
肿瘤诊断与鉴别诊断
肿瘤诊断
免疫组化技术可以检测肿瘤组织中特定抗原的表达，从而确定肿瘤的性质和来源。通过对不同肿瘤标志物的检测，有助于医生对肿瘤进行准确的诊断。

免疫组化结果分析和判断

免疫组化结果分析和判断
免疫组化结果分析和判断
第一节免疫组化结果的判断原则免疫组化结果的判断原则概括起来有以下几点：
免疫组化结果分析和判断
⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。
⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内； PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。
免疫组化结果分析和判断
⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。
免疫组化结果分析和判断
第二节对照染色设计
免疫组化结果分析和判断
(一）对照染色的目的
设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三：①组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；②抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；③染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液的pH 和离子强度不当等。
免疫组化结果分析和判断
假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：①自发荧光或内源酶等干扰；②抗体试剂不纯(特别是一抗）；③操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；④Fc受体的干扰，等等。
免疫组化结果分析和判断
（二）对照的种类及其选用目的对照染色大致可分为阳性组织对
照、阴性组织及阴性试剂对照和自身对照四大类：
免疫组化结果分析和判断
这类阴性试剂对照的选用原则是： ①空白对照不能省，其他对照在预实验中应尽量多做，尤其是应用新抗体试剂；②对照必需与实验片同步进行染色； ③对照的结果应附合要求。
免疫组化结果分析和判断
⒋自身对照是指在同一标记切片上的自身组织成分的阴性背景对照。即与靶抗原阳性反应细胞或成分相邻的阴性背景结构的显色，结果应为阴性或着色较浅，需与阳性着色成分呈鲜明对比。目的在于排除内源性干扰产生的假阳性和因抗原弥散移位造成的错误结果。

免疫组化5-结果的分析和判断

（三）阳性标记组织学特征（以 HRPDAB/H2O2为例）免疫组化染色阳性细胞在组织中的分布排列形式可以有如下7种：① 局灶型；②弥漫型；③片块型；④网状型； ⑤腺管型；⑥腔缘型和⑦菊团型，等。这主要取决于抗原抗体复合物在细胞内的分布和阳性细胞在组织内的群体分布特点。
⑷抑制试验是指用标记抗体和未标记抗体（可以是一抗，也可以是二抗或桥抗体）两者的混合物作试剂，其他步骤不变的免疫组化染色试剂对照，结果其阳性着色应成比例的减弱（等量或1：9）。此试剂对照多用于直接法。
这类阴性试剂对照的选用原则是： ①空白对照不能省，其他对照在预实验中应尽量多做，尤其是应用新抗体试剂 ②对照必需与实验片同步进行染色
四、阳性标记的形态特征和判断
免疫组化标记具有一定形态特点，若能熟练掌握则有助于对免疫组化标记结果的正确判断。内容包括定性、定位和定量三方面。
定性定量指标---免疫显色强度和阳性细胞密度（抗原含量）定位指标---阳性细胞的着色形态及组织分布特点（功能）
（一）阳性标记免疫特征：分"弱(+) 、中(++)、强(+++)"三级。免疫荧光法（ FITC为例）则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和亮绿色耀眼荧光；
原因：组织处理不当，组织细胞抗原丢
失或试剂错误(如漏加、错加、失效、变质等),操作失误等
对照结果判断：
阳性对照阴性对照替代对照检测结果
结果判断
1 （－） 2 （＋） 3 （＋） 4 （－） 5 （＋） 6 （＋） 7 （＋）
（－）（＋）（＋）（－）（－）（－）（－）
（－）
（－）抗体失活，操作有误

免疫组化实验结果分析

免疫组化实验结果分析免疫组化实验作为一种常用的分子生物学实验技术，广泛应用于医学研究和临床诊断中。

免疫组化实验通过使用特异性抗体与目标分子结合，并通过染色反应来检测分子的存在和定位位置，从而提供关于生物体内蛋白质表达的重要信息。

本文将对免疫组化实验结果进行深入分析，探讨其应用和解读。

免疫组化实验结果分析的第一步是对免疫组织化学染色图像的观察和评估。

通常，免疫组化实验后的标本会显现出不同程度的染色反应，而反应的强度则取决于目标分子在样本中的表达水平。

通过观察染色的颜色强度和分布范围，我们可以初步判断目标分子的表达情况。

一般来说，染色越强，表示目标分子的表达水平越高。

然而，仅凭免疫组化实验的染色结果进行定性判断是远远不够的，我们还需要进一步进行定量分析和解读。

为了准确评估目标分子的表达水平，在免疫组化实验中常会使用数字图像分析技术。

这种技术可以通过对数字图像进行计算和统计分析，获得更加客观的结果。

数字图像分析的方法有很多种，其中最常用的是计算染色物的光密度。

通过光密度值的计算和比较，我们可以比较不同样本之间目标分子表达的差异。

通常情况下，光密度越高表示目标分子的表达水平越高，反之则较低。

除了光密度，我们还可以利用数字图像分析来计算目标分子在特定区域的表达强度。

通过在数字图像上划定感兴趣的区域，计算其中目标分子的表达强度，可以帮助我们更加准确地评估目标分子的表达水平。

同时，这种方法也可以用来检测目标分子在不同区域之间的表达变化。

另外，在免疫组化实验的结果分析中，我们还需要考虑到一些可能的干扰因素。

例如，免疫组化实验中的染色剂和抗体可能会出现非特异性反应，导致某些背景噪声。

此外，不同的样本处理和实验条件可能会对结果产生一定的影响。

因此，在结果的解读过程中，我们需要仔细分析和对比不同样本之间的差异，并确保所得的结论是可靠和可重复的。

免疫组化实验结果的分析不仅可以用于科学研究，还可以在临床诊断中发挥重要作用。

免疫组化结果分析的判定

(1)首先要确定免疫组化技术是否合格，合格的染色结果应该是背景颜色浅淡或无着色，而阳性标志物清晰和定位明确。

切片中的正常组织可以作为最简便的对照来判断染色结果的可靠与否，例如用Vimentin抗体，间质成纤维细胞利血管壁平滑肌细胞胞浆应呈阳性。

肯定为阳性的对照组织却呈阴性，待测组织的染色结果也就不可靠；这现象常是由于抗体失效或过度稀释、组织中抗原严重丢失等。

另一种现象是全片呈非特异性染色，实质细胞、间质细胞和细胞外基质无区别地都呈黄色(以HRP酶标法DAB为底物显色而言)，抗原无明确定位。

造成这种现象的原因很多，如抗体质量问题、组织固定不佳、洗涤不充分、组织中有能作用于底物的内源性酶(如过氧化物酶)、底物变质或显色时间过长等。

上述两种情况都表明染色失败，不能作为判断的依据。

(2)不仅要判断所检组织中有或无阳性标记物，还要注意阳性信号的分布部位和形态特征。

一般说来，阳性信号应与被测抗原所在的部位一致。

此处所说的部位包括组织和细胞的不同区域。

如免疫复合物的Ig和补体可在肾小球毛细血管壁、系膜区或间质血管壁上；细胞表达的抗原可在胞浆内、核内、胞膜上或细胞外基质。

病理医生应对于拟测抗原分布于何处有所了解。

例如Ki—67、PCNA、雌激素受体、孕激素受体、P53蛋白等定位于胞核；EMA、Ki—1、LCA等为胞膜型抗原，但有时也在胞质中。

大部分细胞抗原位于胞质内，其中亦有区别，有的阳性颗粒弥散于整个细胞的胞质，有的则呈斑块状局限于胞浆某处。

还有些抗原同时分布于胞质和胞膜(如胃肠腺癌细胞的EMA)，或核与胞质(如S—100、HMB—45)。

同一种抗原在不同类型的细胞可定位不同，因而分布的特点也有一定的鉴别意义，在此不一一列举。

免疫组化染色结果与预期的不一致时应作具体分析，不要轻易地否定或采用。

病理医生应了解以下几个与判断结果有关的因素。

①细胞内的阳性标志物不一定是该细胞自身表达的抗原，而可能是吞噬或吞饮的抗原物质；如间质中的巨噬细胞可摄入其他细胞释放的抗原物质，因而常呈非特异性的阳性表现；恶性肿瘤细胞侵袭破坏相邻的组织后也可摄入正常细胞的抗原，如恶性纤维组织细胞瘤、恶性黑色素瘤可与邻近的正常上皮呈现相同的上皮细胞抗原；甲状腺内的转移癌细胞可以呈甲状腺球蛋白阳性反应，固而可能被误认为甲状腺原发癌；但肿瘤细胞的吞噬只是近距离的，阳性细胞位于残存的正常组织附近；②肿瘤细胞和其相应的正常细胞在抗原表达的质和量方面都可有所不同；抗原的定位也可偏离一般规律，如正常细胞的膜型抗原在癌细胞却可定位于胞质内。

免疫组化技术常见问题及处理方法

详细描述
染色弱或无信号问题可能是由于抗体浓度过低、孵育时间不足、组织抗原量少等原因所致。为解决这一问题，可以增加抗体浓度、延长孵育时间、增强组织抗原的暴露等措施，以提高染色强度。
染色背景问题
总结词
染色背景是指染色结果中除了目标蛋白外的其他染色，通常表现为整个视野的弥漫性着色。
详细描述
染色背景问题可能是由于抗体与组织中其他蛋白的交叉反应、组织内源性酶活性、组织处理过程中产生的物质等所致。为解决这一问题，可以采取使用阻断剂、降低抗体浓度、
定期对仪器设备进行校准，确保其性能稳定、准确可靠。同时，对设备进行日常维护，及时排除故障，保证实验的正常进行。
试剂储存和有效期问题
总结词
试剂的储存和有效期直接关系到实验结果的可靠性。
详细描述
严格按照试剂说明书进行储存，避免试剂受潮、光照、高温等不利因素的影响。关注试剂的有效期，避免使用过期试剂。
详细描述
固定和保存组织的目的是为了保持组织结构和抗原性。不同的组织需要不同的固定液和固定时间，以确保抗原的完整性和稳定性。同时，组织的保存条件也需严格控制，以防
抗原丢失或降解。
04
仪器设备和试剂问题
仪器设备校准和维护问题
总结词
仪器设备校准和维护是确保免疫组化实验准确性的关键环节。
详细描述
详细描述
为了促进免疫组化技术的数据共享和交流，需要建立统一的数据库和平台，以便研究人员能够共享数据、交流经验和技巧。此外，应鼓励研究人员在学术会议和期刊上发表研究成果，促进技术的传播和应用。通过加强数据共享和交流，可以推动免疫组化技术的进步和创新，提高其在医学研究中的应用价值。
THANK YOU
感谢聆听

免疫组化实验结果分析

免疫组化实验结果分析免疫组化实验是一种用特异性抗体与目标蛋白质相互作用的技术，通过对细胞内或组织切片中目标分子的免疫染色来观察、分析目标分子在细胞或组织中的表达与定位情况。

本文将对免疫组化实验结果进行分析，以揭示其在研究领域中的应用与意义。

1. 实验设计与控制免疫组化实验前，首先需要进行实验设计。

在实验设计过程中，应明确需要检测的目标分子以及合适的抗体选择。

同时，合理设定实验组与对照组，用以对比分析不同处理条件下目标分子的表达变化。

控制变量的同时，还需确保实验操作的准确性和可重复性。

2. 结果解读与定量分析在免疫组化实验中，常见的结果表达形式是显微镜下对目标分子免疫染色的图像。

通过观察图像，可以初步判断目标分子在不同组织、细胞种是否存在表达，并探讨其表达差异。

同时，需着重对结果进行定量分析，使用专业软件对图像进行数字化处理，计算光密度或荧光强度等指标，以实现对不同样品之间的比较与分析。

3. 结果分析与比较在进行免疫组化实验结果分析时，需要将不同样品之间的实验结果进行对比与分析，以探究目标分子的表达变化与信号定位。

常见的分析方法包括：(1) 目标分子的表达量分析：通过计算光密度或荧光强度等指标，对不同样品中目标分子的表达量进行定量比较。

可以使用统计学方法对数据进行处理，比如均值、标准差等分析，以评估目标分子的表达水平是否存在显著差异。

(2) 信号定位与定量：通过观察光学显微镜下的染色结果图像，可以初步判断目标分子在细胞或组织中的定位情况。

同时，也可以使用数字化图像分析软件，对染色信号进行定位与定量，以精确描述目标分子在特定位置的表达情况。

(3) 目标分子与疾病发生的关联性：通过对不同疾病样本中目标分子的表达和定位进行研究，可以分析目标分子与疾病的关联性。

比如，某一分子在肿瘤组织中的高表达与某种癌症的发生相关性等。

4. 结果讨论与展望在对免疫组化实验结果进行分析后，可以从结果出发进行讨论与展望，以揭示目标分子的功能与潜在作用。

免疫组化结果判断及常见问题的分析

三、结果分析
1-day CM
阳性强度 20×10视野下，随机选
取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此 4-day CM 片的阳性强度。
PCNA
S-P×400 S-P×400
阳性细胞百分比
计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：
＜5%
（－）
5%~30% （＋）
30%~50% （＋＋）
利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。 1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。 2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。
2、图象处理系统组成
图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出
3、图象处理系统功能
几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量 DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA 含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图 AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例
全片着色
Cyclin D1 套细胞淋巴瘤
全片着色
边缘着色
“阴阳脸”着色
气泡
非特异性着色及其对策
非特异性着色原因操作过程冲洗不充分内源性过氧化物酶
内源性生物素电荷吸附抗体不纯
切片制片不当加试剂后切片干燥
对策每步冲洗3×5min
3％H2O2封闭使用生物素阻断试剂盒阻断
非免疫动物血清封闭采用单克隆抗体改善取材和制片防止切片干燥
四、免疫组化异常着色及对策
1.非特异性着色及其对策
非特异性着色原因操作过程冲洗不充分内源性过氧化物酶

免疫组化结果分析和判断

中等阳性 ++, 指阳性细胞总数在 25%— 49%；强阳性+++ ,指阳性细胞总数在 50% 以上 . 目前多采用积分综合计量 . 计算公式为：+%x1 +++%x2++++%x3；总数值 <1.0 者为 + , 1.0-1.5 者为 ++,>1.5 者为+++.至少随机观察5-10个HPF.
一、阳性标记免疫特征：分"弱+、中++、强+++"三级.免疫荧光法FITC为例则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和亮绿色耀眼荧光；
免疫酶标记HRP- DAB/H2O2则表现
为淡黄色细颗粒、棕黄色颗粒和褐黄色粗颗粒,后者耀眼易见.一般图片照像,原
则上多取强阳性区域.
二、阳性标记细胞学特征以 HRPDAB/H2O2为例可分为①胞膜型；②胞核型；③胞质浆型；④微绒毛型和⑤复合型胞膜-胞质兼有,胞核-胞质兼有,或微绒毛-胞质兼有等五种阳性细胞类型.这与抗原所在部位相关联,但应注意排除因组织固定不好引起的抗原弥散假象,尤其是复合型图像.
⑴空白对照指以缓冲液PBS、TBS等取代第一抗体主要的,必要时还可做第二抗体及桥联抗体的空白取代,其他各步不变的试剂对照染色,结果应为阴性.
⑵取代对照指以所用方法第一抗体同源动物的正常血清,或与本实验无关的抗体靶生物缺如的取代第一抗体,其他步骤不变的试剂对照染色,结果应为阴性.
⑶吸收试验是指用事先经过量抗原吸收的第一抗体上清液取代第一抗体,其他步骤不变的免疫染色试剂对照.结果应是阴性或阳性着色明显减弱吸收不全时.

免疫组化实验结果的判定和分析

免疫组化实验结果的判定和分析免疫组化实验结果的判定和分析就实验结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容。

只有严格的实验设计、标准的实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最优质的服务。

免疫组化结果的判定原则：1•必须同时设对照染色。

没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。

2•抗原表达必须在特定部位。

如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53 蛋白应定位在细胞核内；EMA 应定位在细胞膜上等等。

不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。

3•阴性结果不能视为抗原不表达。

由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。

4•尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。

因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。

5•对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。

对照染色设计：（一）对照染色的目的设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。

假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：①自发荧光或内源酶等干扰；②抗体试剂不纯（特别是一抗）；③操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等；④Fc 受体的干扰，等等。

（二）对照的种类及其选用目的对照染色大致可分为四类：即阳性组织对照、阴性组织和阴性试剂对照及自身对照。

•阳性组织对照指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。

正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。

免疫组化实验结果的判定和分析

只有严格的实验设计、标准的实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最优质的服务。

免疫组化结果的判定原则：⒈必须同时设对照染色。

没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。

⒉抗原表达必须在特定部位。

如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA 及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上等等。

不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。

⒊阴性结果不能视为抗原不表达。

由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反应，判断时应注意。

⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。

因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。

⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。

对照染色设计：(一）对照染色的目的设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。

（二）对照的种类及其选用目的对照染色大致可分为四类：即阳性组织对照、阴性组织和阴性试剂对照及自身对照。

⒈阳性组织对照指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。

正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。

免疫组化技术常见问题及处理方法

免疫组化技术常见问题及处理方法
contents
目录
• 实验操作问题 • 染色问题 • 仪器设备问题 • 图像分析问题 • 质量控制与标准化问题
01 实验操作问题
抗原修复问题
总结词
抗原修复是免疫组化实验中的关键步骤，处理不当可能导致抗原失活，影响染色结果。
详细描述
抗原修复过程中需注意使用适当的修复液和修复条件，如pH值、温度和时间，以保持抗原的完整性和活性。修复液的选择和使用方法需根据抗原类型和抗体特异性进行选择
感谢您的观看
背景染色过高
可能是由于抗体非特异性结合或清洗不彻底造成，可通过增加清洗次数或使用低浓度的抗体解决。
组织切片染色不均
可能是由于切片厚度、组织处理不当或抗体分布不均导致，需确保切片质量并优化组织处理流程。
室间质评问题
不同实验室间染色结果差异大
可能是由于抗体来源、实验操作、仪器设备等不同造成，需建立统一的操作规程和质控标准。
04 图像分析问题
图像分析软件选择问题
总结词
选择合适的图像分析软件是进行免疫组化图像分析的关键，不同的软件具有不同的特点和适用范围。
详细描述
在选择软件时，需要考虑软件的算法、功能、操作简便性、准确性以及是否符合实验室需求等因素。常用的免疫组化图像分析软件包括Image Pro Plus、 ImageJ、CellProfiler等。
总结词
背景染色问题通常是由于非特异性结合或内源性酶的干扰导致的。
详细描述
为减少背景染色，可以尝试增加洗涤次数，以减少非特异性结合；同时，使用内源性酶抑制剂可以有效抑制内源性酶的干扰。此外，优化抗体稀释比例和使用低速离心技术也可以帮助减少背景染色问题。