乳酸脱氢酶 医学生用的生化学习
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶科技名词定义中文名称：乳酸脱氢酶英文名称：lactate dehydrogenase;LDH定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。
L-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于L-乳酸；D-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于D-乳酸，两者均以NAD＋为氢受体。
在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布求助编辑百科名片催化机理乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。
乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。
乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。
同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用电泳方法将其分离。
LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。
正常人血清中LDH2，〉LDH1。
如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。
目录基本信息临床意义乳酸脱氢酶及其同工酶的简介血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶测定及意义乳酸脱氢酶高的原因乳酸脱氢酶偏低的原因乳酸脱氢酶（LDH）实验基本信息临床意义乳酸脱氢酶及其同工酶的简介编辑本段基本信息英文名称：LDH（lactate dehydrogenase）序列信息：1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围：血清～L；尿560～2050U/L；脑脊液含量为血清的1/10。
编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。
它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。
生化试验四垂直板聚丙烯酰胺凝胶连续电泳分离乳酸脱氢酶同工酶
聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型
连续系统 是指电泳系统采用相同孔径的凝胶、 缓冲系统等条件下进行区带电泳，是利用蛋白质分子 的电荷效应进行分离，凝胶的分子筛效应不明显，一 般只用于分离一些比较简单的样品，缺点是分辨率不 高。优点是制胶简单快捷，缓冲系统的pH恒定，可以 防止样品进胶后因pH变化发生凝聚和沉淀，缓冲系统 组成简单。
检查合格后方可离开！
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乳酸脱氢酶同工酶活性染色
用活性染色对LDH进行鉴定，将凝胶浸泡在活性染色 液中，LDH与底物的反应，用甲硫吩嗪(PMS)作为电子的 中间载体，氯化硝基四氮唑蓝(NBT)作为最终电子受体， 底物脱下的氢最后传递给NBT，NBT被还原后，产生蓝紫 色的不溶于水的物质以对LDH定位。反应式如下：
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双蒸水
2.5ml 1次
3号试剂（凝胶浓度7.5%，Ph8.9） 10ml 2次
➢ 置小烧杯中,混匀,迅速注入到二块玻璃板之间(短玻璃 朝负极),凝胶加至横板的0.5cm处；
➢ 在室温中聚合20-30分钟。
➢ 注意：acr/bis有神经毒/制胶时避免产生气泡
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3. 加样40ul / 样品槽（注意样品编号，加样顺 序）；接冷却管（流速要小）
3.对pH和温度变化较稳定,几乎无吸附和电渗 作用；
4.样品用量少，灵敏度可达10-6g;
5.凝胶孔径可调节；
6.分辨率高。
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凝胶的总质量浓度T和交联度C决定凝胶的有效 孔径。凝胶的三维网状结构具有分子筛效应，不同 大小和形状的大分子通过孔径时所受的阻滞力不同， 加上大分子的电荷效应，使各种大分子迁移率不同 得以分离。 大多数蛋白质在7.5%凝胶中能得到满意的结果，所 以这个浓度的凝胶称为标准胶。 当分析一个未知样品时，常用标准胶或梯度凝胶来 测试，而后确定适宜的凝胶浓度。
乳酸脱氢酶乳酸底物法_概述及解释说明
乳酸脱氢酶乳酸底物法概述及解释说明1. 引言1.1 概述乳酸脱氢酶乳酸底物法是一种常用的生化实验方法，通过利用乳酸脱氢酶催化反应，将乳酸转化为丙酮酸，并同时生成NADH。
该实验方法可以用来测定样品中乳酸的含量，广泛应用于医学、生物学和食品工业等领域。
1.2 文章结构本文主要分为五个部分进行介绍。
首先，在引言部分将对乳酸脱氢酶乳酸底物法进行概述。
接下来，第二部分将详细介绍乳酸脱氢酶的基本原理以及乳酸底物法的工作原理。
第三部分将介绍该实验方法的具体步骤和执行要点。
在第四部分，我们将展示和解读实验结果，并对数据进行分析与讨论。
最后，在第五部分中给出本次实验的主要结论，并对未来进一步研究和应用进行展望。
1.3 目的本文旨在向读者提供关于乳酸脱氢酶乳酸底物法的全面了解。
通过介绍该实验方法的原理、步骤和结果分析，读者将能够掌握该方法的基本操作技巧，并了解其在不同领域中的应用场景和价值。
对于有意开展相关研究或者需要使用该方法的科研人员和实验室来说，本文将提供一份有用的参考资料。
2. 乳酸脱氢酶乳酸底物法概述：2.1 乳酸脱氢酶简介：乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，简称LDH）是一种重要的代谢酶，存在于多种生物体内。
它主要参与细胞内的糖酵解过程，在无氧条件下将产生的乳酸转化为丙酮酸，从而供能给细胞。
LDH在各种组织中广泛分布，包括肝脏、肌肉、心脏等，因此具有广泛的应用价值。
2.2 乳酸底物法原理：乳酸底物法利用了LDH对乳酸的催化作用。
该方法通过将待测样品中的乳酸与辅助底物（如双硫苏糖）反应，同时加入LDH作为催化剂，在一定条件下观察和测定产生的反应物（如NADH）含量变化。
由于LDH能够特异性地催化乳酸生成丙酮酸的反应，所以可以通过测量NADH生成速率来间接确定待测样品中乳酸浓度的高低。
2.3 应用场景和价值：乳酸脱氢酶乳酸底物法具有一定的应用价值。
首先，该方法操作简便、快速，不需要复杂的设备和步骤，适用于实验室中对乳酸浓度进行初步检测与筛选。
普通而熟悉的生化指标-乳酸脱氢酶
普通而熟悉的生化指标-乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶（LDH）为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。
LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。
红细胞内LDH约为正常血清的100倍。
乳酸脱氢酶（LDH）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。
它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。
由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。
在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。
由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对入院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测。
LDH在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3、LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。
血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5。
乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的指标之一。
临床意义1.乳酸脱氢酶同工酶结果要与临床症状结合才能做出准确判断。
2.LDH1和LDH2升高，且LDH1/LDH2>1见于：急性心肌梗死、溶血性贫血、急性镰刀型红细胞贫血、巨幼红细胞贫血等恶性贫血。
急性肾皮质坏死及各种血管内外溶血症(若无LDH1升高，可排除溶血性贫血)。
3.LDH5升高：骨骼肌炎症、损伤及退化、肝损伤(肝硬变、肝炎、肝过度充血)、癌。
4.单纯LDH1升高：细菌性细胞瘤(如，畸胎瘤、睾丸细胞瘤及卵巢坏死性细胞瘤)。
5.总LDH升高而同工酶谱正常见于：心脏病、肝病、骨骼肌病、瘤及其他功能性失调症。
医学检验·检查项目：乳酸脱氢酶(LDH,LD)_课件模板
骨的原发性淋巴瘤、老年人心肌梗死、心 肌梗死、急性心肌梗死、肝硬化、心肌梗 死后心包炎、严重急性呼吸综合征、心房 心肌梗死、右室心肌梗死、非ST段抬高心 肌梗死、无痛性心肌梗死、妊娠性心肌梗 死、青年心肌梗死。
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医学检验·各论 乳酸脱氢酶(LDH,LD)
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别名： 乳酸脱氢酶。
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简介： 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱
氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内， 其中以肾脏含量较高。
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相关检查： 血清乳酸脱氢酶（LDH）、血清乳酸脱氢 酶同工酶（LDHI）、乳酸脱氢酶同工酶、 心肌酶谱。
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相关症状： 肌梗死、心肌坏死广泛、心肌缺氧、虹 膜表面形成灰白色肿瘤结节、腰背痛、关 节疼痛。
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临床意义：
增高：见于肝炎、肝硬化、肝癌、心 肌梗死、横纹肌损伤、心肌炎、恶性肿瘤、 肾病、肺梗死、巨幼细胞贫血、白血病、 恶性淋巴瘤及妊娠等。
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正常值： 血清：100～300U／L； 尿：560～
2050U／L； 脑脊液含量为血清的1／10。
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乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶科技名词定义中文名称：乳酸脱氢酶英文名称：lactate dehydrogenase;LDH定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。
L-乳酸脱氢酶(编号：EC 1.1.1.27)作用于L-乳酸；D-乳酸脱氢酶(编号：EC 1.1.1.28)作用于D-乳酸，两者均以NAD ＋为氢受体。
在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布催化机理编辑本段基本信息英文名称： LDH（lactate dehydrogenase）序列信息：1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围：血清 135.0～215.0U/L；尿 560～2050U/L；脑脊液含量为血清的1/10。
编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。
它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。
LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化（为逆反应）。
LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。
由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。
在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。
由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。
LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3．LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。
乳酸脱氢酶活力测定(精)
匀浆缓冲液：
10m mol/L pH6.5磷酸氢二钾磷酸二氢钾缓冲液。
操作方法
（一）制备肌肉匀浆 （二）LDH活力测定 （三）蛋白质含量测定 （四）数据处理
（一）制备肌肉匀浆
取瘦猪肉（或兔肉）一块除去脂肪及筋膜等，称取20g， 按W/V=1/4比例加入4℃预冷的10m mol/L pH6.5磷酸氢 二钾-磷酸二氢钾缓冲液，用组织捣碎机捣碎，每次10s， 连续3次。将匀浆液倒至烧杯中，置4℃冰箱提取过夜， 过滤后的红色液体为组织提取液，量总体积。
乳酸脱氢酶活力测定
目的要求
（1）学习LDH活力测定原理； （2）测定动物肌肉组织提取液LDH活力 及比活力。
原理
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）广泛存在于动物、 植物及微生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化 如下反应： LDH 乳酸 +NAD+ 丙酮酸+NADH+H+ pH7.4-7.8
（二）LDH活力测定
实验时预先将丙酮酸溶液及NADH溶液放在25 ℃ 水浴 中预热。取2只光径为1cm的石英比色皿，在一只比色 皿中加入0.1mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液3ml，置紫外分 光光度计中，于340nm处调A值为0；另一只比色皿用 于测定LDH活力，依次加入2.9ml丙酮酸溶液、0.1ml NADH溶液，加盖摇匀后测定A340nm，然后加入经稀释 （20倍）的酶液10μl，立即计时，每隔0.5min测A340nm， 连续测定3min。以A对时间作图，取最初线性部分， 计算Δ A340nm/min减少值。
思考题
脑脊液生化乳酸脱氢酶 生化法
脑脊液生化乳酸脱氢酶生化法1. 脑脊液生化乳酸脱氢酶（LDH）是一种重要的生化指标，它在临床诊断和疾病监测中具有很高的价值。
脑脊液是由脑室系统分泌的，主要是通过脑脊液循环而进入脊髓和大脑皮质脑脊液围绕着大脑和脊髓，起着保护和支撑作用。
脑脊液的生化指标对于了解脑脊液循环和神经系统健康状况具有重要意义。
2. 对脑脊液生化乳酸脱氢酶的检测可以帮助我们了解神经系统的代谢情况，并且可以在很多疾病的诊断和治疗中提供重要的参考依据。
其中，乳酸脱氢酶是一种重要的生化酶，它参与乳酸的代谢过程，特别是在神经系统的能量代谢中具有关键的作用。
通过检测这一酶的水平，我们可以了解神经系统的能量代谢情况，从而帮助诊断和治疗相关的疾病。
3. 在临床实践中，脑脊液生化乳酸脱氢酶的测定通常是通过生化分析来完成的。
这种方法可以明确地测定乳酸脱氢酶酶的活性和水平，为临床医生提供重要的信息。
通过生化方法测定脑脊液生化乳酸脱氢酶，可以帮助我们更好地了解神经系统的代谢情况，以及可能存在的疾病状态。
生化法是一种非常有效的方法来评估乳酸脱氢酶水平，从而帮助我们更好地了解神经系统的健康状况。
4. 作为一个重要的生化指标，脑脊液生化乳酸脱氢酶的变化可以反映出神经系统的代谢情况，对于疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
在临床实践中，我们应该重视脑脊液生化乳酸脱氢酶的检测，并结合临床病史和其他检查结果，全面评估患者的神经系统健康状况。
也应该不断完善和提高相关的检测方法，以更好地服务于临床医学的实践。
总结：脑脊液生化乳酸脱氢酶是神经系统代谢情况的重要指标，在临床诊断和疾病监测中具有很高的价值。
通过生化方法测定脑脊液生化乳酸脱氢酶，可以帮助我们更好地了解神经系统的健康状况，对于疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
脑脊液生化乳酸脱氢酶的检测和评估尤为重要，对于提高神经系统健康水平和服务于临床医学的实践具有重要的意义。
脑脊液生化乳酸脱氢酶（LDH）作为神经系统代谢情况的重要指标，在临床诊断和疾病监测中具有关键的价值。
乳酸脱氢酶 医学生用的生化学习
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶
LD几乎存在于各种组织中，心、肺、肝、 LD几乎存在于各种组织中，心、肺、肝、 肾、红细胞、骨骼肌和皮肤的急性损伤， 以及恶性肿瘤等疾患均致此酶增高，故其 特异性差。LD活性增高主要见于心肌梗死、 特异性差。LD活性增高主要见于心肌梗死、 肺梗死、病毒性肝炎、肝硬化、肾脏疾病、 某些恶性肿瘤、白血病以及非恶性疾病如 传染性单核细胞增多症、贫血、肌营养不 良，胰腺炎等。一些肿瘤转移所致的胸膜 水中LD活性往往有升高。目前临床主要用 水中LD活性往往有升高。目前临床主要用 于心肌梗死，肝病和恶性肿瘤的辅助诊断。
乳酸脱氢酶
正反两向反应的最适PH不同，其中正向为 正反两向反应的最适PH不同，其中正向为 8.8-9.8。其优点是乳酸和NAD 8.8-9.8。其优点是乳酸和NAD+稳定性好， 且NAD+纯品易得，价格较低，过量乳酸对 LD活性抵制较小，反应线性较好，缺点是 LD活性抵制较小，反应线性较好，缺点是 需要较高的底物浓度，反应速度较慢。
乳酸脱氢酶
由于红细胞和血小板中含有大量的LD，故 由于红细胞和血小板中含有大量的LD，故 严禁使用溶血标本，在采用血浆标本时必 须3000转/分离心15分钟除去血小板。 3000转 分离心15分钟除去血小板。 LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二 LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二 酸、草酸以及EDTA都是竟争性抑制剂。 酸、草酸以及EDTA都是竟争性抑制剂。
乳酸脱氢酶
是糖酵解和糖异生的一个重要酶。含有锌 离子，能可逆催化乳酸（L）和丙酮酸（P 离子，能可逆催化乳酸（L）和丙酮酸（P） 之间的氧化还原反应。 乳酸+NAD 丙酮酸+NADH+H 乳酸+NAD+→丙酮酸+NADH+H+ 其中L P为正向反应， 其中L → P为正向反应， P → L为逆向反应。 L为逆向反应。
实验6 乳酸脱氢酶的活性测定
实验步骤
3）数据处理 计算每毫升组织提取液中LDH活力单位： LDH活力（U）/mL =
提取液中LDH总活力单位＝LDH活力（U）/ml 总体 积
LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很多，其中紫外 分光光度法更为简单、快速。鉴于NADH, NAD+ 在340nm及260nm 处有各自的最大吸收峰，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通 过340nm光吸收值得改变，定量测定酶的含量。本实验测定LDH活 力，基质液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下，加入一定量酶液， 观察NADH在反应过程中340 nm 处光吸收减少值，减少越多，则 LDH活力越高。其活力单位定义是：在25℃，pH7.5条件下 A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组 织中LDH单位。定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。
实验6乳酸脱氢酶的活性测定
1、任务背景 乳酸脱氢酶（LDH）是催化乳酸和丙酮相互转化的同工酶，属 于氢转移酶。该酶存在于所有动物的组织中，在肝脏中活性最 高，其次为心脏、骨骼肌、肾脏，在肿瘤组织及白血病细胞中 也能检测到。在大多数动物组织中，它是由两种肽链按一定比 例组成的5种四聚体。它的每条肽链各由一个基因编码，经转 录、翻译、修饰加工等过程，最后成为有生物学活性的物质。 不同的动物，不同的组织或器官在不同的发育阶段或不同的生 活周期均有其特异性的同工酶酶谱。 2、任务目标 ①掌握LDH活性测定原理； ②学习用比色法测定酶活性的方法。 3、工作理 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase简称LDH， EC.1.1.1.27, L－乳酸：NAD+氧化还原酶）广泛存在于生物细 胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。
血清乳酸脱氢酶(LDH)—生化检测项目
血清乳酸脱氢酶（LDH）
一、检测原理
LDH催化L-乳酸氧化成丙酮酸，同时NAD还原成NADH+，引起340nm吸光度的升高，与样品中LDH的活性成正比。
二、参考区间
血清：109—245U/L
三、临床意义
1、乳酸脱氢酶，属于糖酵解酶的一种，可以在人体的血液、骨骼以及心脏大量存在。
2、乳酸脱氢酶的临床意义较大，可以作为诊断心肌疾病、慢性肝炎以及肝癌等病症的诊断依据。
3、乳酸脱氢酶有5种同工酶的形式，即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5，在人体的心肌、肾脏以及红细胞中LDH1、LDH2含量比较高，这两项升高常见于心肌炎、心肌梗死、恶性贫血、急性肾皮质坏死。
肝脏和横纹肌以LDH
4、LDH5为主，当升高的时候常见于肝硬化、肝炎以及骨骼肌的损伤等，
LDH3在胰腺、脾脏、甲状腺、肾上腺当中较多，当异常升高时常见于胰腺癌等疾病。
4、血清LDH活性检测可判断白血病的疗效和转归。
实验八 乳酸脱氢酶
实验八乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的琼脂糖凝胶电泳一、实验目的了解琼脂糖凝胶电泳的方法和原理，学会分离LDH同工酶的方法。
二、原理同工酶是指能够催化相同的化学反应，但酶分子的结构理化特性乃至免疫学性质不同的一组酶，同工酶这种差异是由于酶蛋白的编码基因不同或基因相同但转录、翻译或后加工有别所造成的。
同工酶存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织，甚至同一组织或细胞的不同亚细胞结构中。
人们已发现几百种同工酶。
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase LDH）是人们认识的第一个同工酶。
LDH是糖酉孝解中的一个酶，它催化的反应如下。
COOH COOHHO—C—H+NAD＋C＝O＋NADH＋H+CH3 CH3LDH有五种同工酶，分子量在13万～15万之间，由四个亚基组成。
LDH的亚基有两种类型，一种是心肌型亚基（H型）（B基因），另一种是骨骼肌型亚基（M型）（A基因）。
两类亚基以不同比例可组成五种四聚体。
即LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(H1M3)、LDH5(M4)。
H型亚基与M型亚基的氨基酸组成有差异，前者含酸性氨基酸残基多，故LDH可用电泳的方法进行分离。
本实验用pH8.6的缓冲液，在此条件下电泳，LDH的五种同工酶均净带负电荷，向正极泳动，但LDH1最快，依次减慢，LDH5最慢。
在哺乳动物体内，一般厌氧性组织中，如骨骼肌、肝脏中，LDH5含量高；在非厌氧性组织中，如心、脑中，LDH1含量高。
本实验用琼脂糖凝胶，LDH的五种同工酶在琼脂糖凝胶板上分离后，进行酶促反应，使乳酸脱氢生成NADH，NADH将人工递氢体PMS还原，还原型PMS 最终将NBT还原。
NADH++H++PMS=====NAD++PMSH2PMSH2＋NBT======PMS＋NBTH2NBTH2为蓝色化合物。
三、实验器材（一）、仪器1、电泳仪1、水平电泳槽2、离心机3、玻璃匀浆器5、恒温箱6、微量移液器7、吸量管四、材料与试剂1、小白鼠（成年）2、白瓷盘3、剪子4、镊子5、载玻片6、滤纸7、生理盐水8、0.01mol/l pH7.4磷酸钠缓冲液：取0.01mol/L NaH2PO419ml和0.01mol/L Na2HPO481ml混合即可。
生化实验报告血乳酸(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过生化方法测定血乳酸浓度，了解机体代谢状态，为临床诊断提供参考。
二、实验原理乳酸脱氢酶（LDH）是一种糖酵解酶，广泛存在于机体所有组织细胞的胞质内。
在缺氧或无氧条件下，乳酸脱氢酶催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，生成乳酸和NADH。
通过测定血中乳酸的浓度，可以反映机体代谢状况和缺氧程度。
三、实验材料1. 标本：静脉血5ml2. 试剂：乳酸测定试剂盒（包括乳酸脱氢酶、NADH、NAD+、缓冲液等）3. 仪器：全自动生化分析仪、恒温水浴箱、移液器、试管等四、实验方法1. 取静脉血5ml，加入含有抗凝剂的试管中，混匀。
2. 按照试剂盒说明书进行操作，将血样加入反应管中，加入乳酸测定试剂盒中的其他试剂，充分混匀。
3. 将反应管放入恒温水浴箱中，在37℃下孵育一定时间。
4. 取出反应管，用全自动生化分析仪测定血乳酸浓度。
五、实验结果本次实验测定血乳酸浓度为2.5mmol/L。
六、结果分析1. 正常人血乳酸浓度为1.0-2.5mmol/L，本次实验结果在正常范围内。
2. 血乳酸浓度升高可能见于以下情况：- 缺氧：如慢性阻塞性肺疾病、心力衰竭等；- 营养不良：如糖尿病、蛋白质营养不良等；- 药物作用：如某些抗生素、抗癫痫药物等；- 先天性代谢缺陷：如乳酸酸中毒等。
七、讨论1. 本实验通过测定血乳酸浓度，可以初步了解机体代谢状态和缺氧程度。
但在实际临床应用中，需要结合患者的病史、症状、体征和其他检查结果进行综合判断。
2. 影响血乳酸浓度的因素较多，如药物、饮食、运动等，因此在实验过程中应严格控制实验条件，确保实验结果的准确性。
3. 血乳酸检测作为一种无创、简便、快速的方法，在临床诊断中具有广泛的应用前景。
八、结论本次实验成功测定了血乳酸浓度，为临床诊断提供了参考。
在今后的工作中，我们将进一步研究血乳酸检测在临床诊断中的应用价值。
九、注意事项1. 实验操作过程中，应严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
LDH法细胞毒性检测：原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率LDH（乳酸脱氢酶）是一种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外； LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红色甲臢化合物，可通过酶标仪进行检测。
颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。
应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。
这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下目标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。
乳酸脱氢酶（LDH）在胞质内含量非常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中 LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比，通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的 LDH 活性进行比较，可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。
该实验方法操作简便、快速，可应用于 CTL 和 NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，目前已有 LDH 法测定 CTL 活性的试剂盒。
同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组按5∶1、10∶1、20∶1（效应细胞∶靶细胞）细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶操作流程：设立效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组）：50μl效应细胞+50μl培养基实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50μl效应细胞+50μl靶细胞设立靶细胞自发释放组：50μl靶细胞+50μl培养基设立靶细胞最大释放组：50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液（10×）设立体积校正对照组：100μl培养基+10μl裂解液（10×）设立背景对照组：100μl培养基250g离心4分钟37℃孵育4小时离心前45分钟添加裂解液（10×）至靶细胞最大释放组250g离心4分钟取上清50μl转移至另一孔板（可选）于独立的孔中加50μl LDH阳性对照（1：5000）于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物室温避光孵育30分钟添加50μl终止溶液490nm测吸收值1.靶细胞接种数目的优化1.1.设立检测板1.1.1.准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl，使用与细胞毒分析相同的培养基及孔板终体积。
乳酸脱氢酶实验原理
乳酸脱氢酶实验原理
乳酸脱氢酶（LDH）实验原理是基于LDH催化乳酸与辅酶NAD+之间的反应。
LDH催化乳酸脱氢成为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH。
该反应可以用下式表示：
乳酸 + NAD+ ⇌丙酮酸 + NADH + H+
在实验中，乳酸存在时，LDH会将乳酸氧化为丙酮酸，同时产生NADH。
NADH的生成量可通过光密度变化来测定。
NADH的光密度在340 nm波长下较高，因此可以使用分光光度计对其吸光度进行测量。
根据比色法原理，可以通过测量样品中NADH的吸光度变化来间接测定乳酸的含量。
根据比色法原理，NADH的吸光度与NADH的浓度成正比。
因此，通过测量反应体系中NADH 产生的速率和NADH的吸光度，可以推算出乳酸的浓度。
一般情况下，通过比较样品在LDH反应之前和之后的NADH 浓度变化来测定乳酸的含量。
这可以通过测量吸光度来实现。
吸光度值可以转换为相应的乳酸浓度，从而确定乳酸脱氢酶的活性或乳酸的浓度。
检验科生化乳酸脱氢酶测定的程序
乳酸脱氢酶测定的程序【目的】体外检测血清中乳酸脱氢酶（LDH ）含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。
2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理复星长征乳酸脱氢酶试剂（L →P ）以Gay 等方法为基础，以乳酸为底物，测定原理如下：NADH LDH L +−−−→−+-+丙酮酸乳酸NAD乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸，在此过程中，NAD +被还原为NADH ，通过在340nm 处监测吸光度上升的速率，即可测得样本中乳酸脱氢酶的活力。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司LDH-L 试剂盒，为液体双试剂，其各组分如下：试剂1（R1）：乳酸锂62.5mmol/L 氯化钾 190.0mmol/LTris 缓冲液100.0mmol/L 试剂2（R2）：Tris 缓冲液100.0mmol/L NAD +30mmol/L2.校准要求 2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。
2.2校准间隔2.2.1试剂批号变更时，使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
厦门医学检验学知识：乳酸脱氢酶及其同工酶
同工酶是指来源于同一个体或组织，能催化相同的化学反应，但其蛋白质分子结构、理化性质和免疫性能等存在明显差异的一组酶。
最典型的同工酶就是乳酸脱氢酶(LDH)同工酶，乳酸脱氢酶是医学基础知识和检验的相关考试中的常见考点，知识点较多下面我们来深入讲解下乳酸脱氢酶及其同工酶。
LDH存在于所有体细胞的细胞质中，是由M(Muscle(肌肉))、H(Heart(心脏))两种亚基组成的四聚体，使用电泳的方法可分离出5条区带由阳极到阴极分别命名为LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(H1M3)、LDH5(M4)。
各种同工酶在组织和器官中的分布比例不同，这个由其亚基组成我们可以简易理解记忆，心肌中以LDH1及LDH2较为丰富，LDH1也存在于红细胞中且其活性远高于心肌，横纹肌及肝脏中以LDH5为主LDH4含量也较高，脾脏、肺中以LDH3最高。
利用这种组织分布特异性临床上LDH同工酶检测可以作为某些疾病诊断的依据。
正常人血清中LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5;心肌梗塞、心肌炎时LDH1和LDH2升高，且LDH1/LDH2>1，LDH在心肌梗塞中出现时间最晚，持续时间最长;肝损伤及肌肉损伤时主要见LDH5升高;而LDH3升高见于恶性肿瘤、肺梗死等。
LDH检测中还有几个要注意的知识点，溶血的标本不适用于LDH及其同工酶的检测，溶血可使LDH1/LDH2失去意义;LDH对冷冻存在敏感性，尤其是LDH4、LDH5对冷冻很敏感，无法及时检测的标本应常温保存，防止酶活性降低;另外还有一种特殊的乳酸脱氢酶LDHX(或LD-C2)由成熟睾丸合成，为精子独有。
以上就是对乳酸脱氢酶及其同工酶的主要内容的阐述讲解，下面我们做一道例题。
【例题1】以下测定哪种酶的标本不适于冰箱保存，而宜放置于室温25℃左右：A.LDHB.ASTC.ALTD.ALPE.GGT【答案】A。
关于乳酸脱氢酶的学习和总结
关于乳酸脱氢酶的学习和总结陈思翀;陈芳【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2008(026)002【摘要】作为一名生物专业的学生，笔者深感生物化学是一门重要的专业基础课，该课程承前启后，学习意义重大，特别是各种酶的学习和记忆关系到学习效果和意义。
讲究学习方法、注重学习技巧、善于归纳和总结是学好生物化学的关键。
本文以乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，LDH）为例将所学内容从理论到实验、从基础到临床进行全方位的归纳和比较，使所学的知识系统、生动、灵活，以达到举一反三，真正掌握所学的知识，并为后续课程的学习打下良好基础的目的。
【总页数】2页(P71-72)【作者】陈思翀;陈芳【作者单位】武汉大学,湖北,武汉,430072;武汉大学,湖北,武汉,430072【正文语种】中文【中图分类】G420【相关文献】1.改变教学观念突出学生的主体作用以新课标为理念探索与实施语文教学高中历史新课改之我见历史教学中如何培养学生的创新能力在英语教学中提高学生的阅读能力新课讲授中如何渗透物理方法教育关于提高初中生英语口语交际能力的探索改变教学模式使学生成为活动的主体如何在英语教学中渗透素质教育学案教学的实践总结新形势下如何搞好初中语文课堂教学浅谈如何培养学生学习化学的兴趣激励教学法在初中体育教学中的应用在英语教学中如何培养学生学习的兴趣思想品德课教学中如何激发学生的学习兴趣浅析如何在数学课堂上培养学生的创新意识改变教学观念突出学生的主体作用2.总结经验抓实抓好第二批学习实践活动——全省深入学习实践科学发展观活动第一批总结暨第二批动员大会召开3.整合学习、学会发现、异步设计、同步激励、优化发展全国教育科学"十五"规划教育部重点课题子课题《网络教育学习观与传统教育学习观优势互补研究》回顾与总结(一)4.整合学习、学会发现、异步设计、同步激励、优化发展——全国教育科学"十五"规划教育部重点课题子课题《网络教育学习观与传统教育学习观优势互补研究》回顾与总结(二)5.理论学习开启发展引擎——包头市县级党委(党组)理论学习中心组学习经验总结因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase ,LDH）是存在于细胞浆内的一种酶，乳酸脱氢酶在生命体中糖代谢中扮演重要角色。
在我们培养的细胞中乳酸脱氢酶分别存在于以下三个地方：1、存在于活细胞内。
若你培养的是贴壁细胞(viable adherent cells)，那么贴在壁上的就是活细胞，此时的乳酸脱氢酶就存在于细胞内，所以测得贴壁细胞中的乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中活细胞的量，我们称之为LDHV。
2、存在于漂浮于培养液中的凋亡小体(Apoptotic bodies)。
由于凋亡小体有细胞膜，因此凋亡小体中的乳酸脱氢酶也没有释放到胞外。
此时测得凋亡小体中的乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中凋亡细胞(apoptotic cell)的量，我们称之为LDHa。
3、存在于培养液中。
坏死的细胞(Necrosis)胞膜破裂乳酸脱氢酶释放，分布于培养液中, 此时测得培养液乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中坏死细胞(necrotic cell)的量，我们称之为LDHn。
那么我们就可以计算细胞中凋亡或坏死的比率来衡量细胞损伤的程度。
凋亡% = LDHa/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100坏死% = LDHn/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100死亡% = (LDHa +LDHn)/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100其中(LDHa+LDHn+LDHv)代表细胞总LHD。
因为即使我们每次埋板的细胞数相同，但是由于细胞生长受多方面影响，所得的细胞数量也不一样，所以每次测得胞内和胞外乳酸脱氢酶的量都会不一样，所以不能单纯通过测上清中LDH的量或测细胞总LHD来评估细胞受损的程度，而通过上清LDH/总LDH的比率来评估细胞受损程度是比较符合实际。
另附简要操作：吸取细胞培养瓶中液体置离心管中离心，离心后沉淀于管底的是凋亡小体，上清液中的就是坏死细胞的LDH,将凋亡小体和贴附于培养瓶壁上的细胞破膜即可测定凋亡小体和活细胞的LDH.1。
乳酸脱氢酶和亚硫酸钠
乳酸脱氢酶和亚硫酸钠乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，简称LDH）和亚硫酸钠是生物化学领域中的两个重要概念。
本文将分别介绍乳酸脱氢酶和亚硫酸钠的相关知识，探讨它们在生物学和化学领域的应用。
乳酸脱氢酶是一种存在于多种生物体内的酶类，其主要功能是催化乳酸的氧化反应。
乳酸脱氢酶存在于细胞质中，广泛分布于动植物及微生物体内。
它的主要功能是将产生乳酸的反应物丙酮酸与NADH （尼克酰腺二核苷酸）还原成乳酸和NAD+（尼克酰腺二核苷酸）。
这个反应是细胞内乳酸代谢的重要环节，通过调节乳酸脱氢酶的活性，可以维持细胞内乳酸水平的平衡，从而保证正常的能量代谢。
乳酸脱氢酶在医学诊断中也有重要应用。
乳酸脱氢酶测定是一种常用的临床检验方法，可以用于判断心肌梗死、肝病、肺病等疾病的发生和病情的严重程度。
通过检测乳酸脱氢酶的活性或浓度变化，可以及早发现和诊断疾病，指导临床治疗。
亚硫酸钠是一种无机化合物，化学式为Na2SO3，常用作抗氧化剂、漂白剂和防腐剂。
亚硫酸钠具有较强的还原性，可以与氧气发生反应，起到抗氧化的作用。
在食品工业中，亚硫酸钠常用于蔬菜、水果等食品的防腐和漂白处理。
此外，亚硫酸钠还可用于制备其他化合物，如硫酸钠、亚硫酸氢钠等。
亚硫酸钠在环境保护领域也有重要应用。
由于亚硫酸钠对氧气具有还原作用，可以用于减少大气中的氧化物浓度和降低大气污染物的浓度。
亚硫酸钠可与二氧化硫反应生成亚硫酸氢钠，进而参与气候调节和大气污染物的降解过程。
因此，在工业废气处理和大气环境保护中，亚硫酸钠被广泛应用。
总结起来，乳酸脱氢酶和亚硫酸钠是生物化学领域中的两个重要概念。
乳酸脱氢酶在细胞内参与乳酸代谢，通过调节其活性可以维持细胞内乳酸水平的平衡。
在医学诊断中，乳酸脱氢酶测定可用于判断疾病的发生和病情的严重程度。
亚硫酸钠则是一种常用的抗氧化剂和漂白剂，广泛应用于食品工业和环境保护中。
这两个概念的研究和应用对于生物学和化学领域的发展具有重要意义。
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乳酸脱氢酶
由于红细胞和血小板中含有大量的LD，故 由于红细胞和血小板中含有大量的LD，故 严禁使用溶血标本，在采用血浆标本时必 须3000转/分离心15分钟除去血小板。 3000转 分离心15分钟除去血小板。 LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二 LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二 酸、草酸以及EDTA都是竟争性抑制剂。 酸、草酸以及EDTA都是竟争性抑制剂。
乳酸脱氢酶
逆向反应的最适PH为7.4-7.8，其显著的优点在于 逆向反应的最适PH为7.4-7.8，其显著的优点在于 NADH用量少，仅为正向反应的3%左右，而反应 NADH用量少，仅为正向反应的3%左右，而反应 速度比前者快3 速度比前者快3倍，灵敏度高 但丙酮酸与NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸 但丙酮酸与NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸 对LD活性的抑制作用较大。 LD活性的抑制作用较大。 LD活性测定正反都可应用，但检验学会酶学组专 LD活性测定正反都可应用，但检验学会酶学组专 家推荐选择正向反应。
乳酸脱氢酶
按照LD同工酶的分布将组织分为3 按照LD同工酶的分布将组织分为3类： 以LD1为主，这类组织以心肌为代表 以LD5为主，这类组织以肝脏肌代表 以LD3为主，以肺、脾为代表 当组织损伤时，其中所含同工酶释放到血 液中，引起同工酶活性变化。
乳酸脱氢酶
常用于急性心肌梗死的鉴别诊断。 在急性心肌梗死LD 在急性心肌梗死LD1和LD2活性均升高，但 LD1升高更早更明显，导致LD1/ LD2比例增 升高更早更明显，导致LD 大。
乳酸脱氢酶
LDH在AMI诊断中的评价 LDH在AMI诊断中的评价 1）总LDH不能单独诊断AMI，LDH单独诊断AMI的特异性只 LDH不能单独诊断AMI，LDH单独诊断AMI的特异性只 不能单独诊断AMI 单独诊断AMI 有53%，可用于AMI的排除诊断。 53%，可用于AMI的排除诊断。 AMI的排除诊断 2）LDH在胸痛后8-12h出现，7-12天恢复正常，时间长， LDH在胸痛后 12h出现， 12天恢复正常，时间长， 在胸痛后8 出现 天恢复正常 可以用于就诊较迟的患者 可以用于就诊较迟的患者。 用于就诊较迟的患者。 3）如果CK-MB和cTn等已经有阳性结果，没有必要检测LDH。 如果CK MB和cTn等已经有阳性结果，没有必要检测LDH CKLDH。 等已经有阳性结果 4）LDH不能用于溶栓治疗的监测。 LDH不能用于溶栓治疗的监测。 不能用于溶栓治疗的监测
乳酸脱氢酶
LD由 型和H型亚单位构成5种同工酶，H LD由M型和H型亚单位构成5种同工酶，H4 （LD1）、MH3（LD2）、M2H2（LD3）、 ）、MH ）、M M3H1（LD4）、和M5（LD5）。 ）、和M 不同组织有其特征性同工酶。心肝肾脏和 红细胞所含LD同工酶比例相近，以LD 红细胞所含LD同工酶比例相近，以LD1和 LD2为主。
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶
LD几乎存在于各种组织中，心、肺、肝、 LD几乎存在于各种组织中，心、肺、肝、 肾、红细胞、骨骼肌和皮肤的急性损伤， 以及恶性肿瘤等疾患均致此酶增高，故其 特异性差。LD活性增高主要见于心肌梗死、 特异性差。LD活性增高主要见于心肌梗死、 肺梗死、病毒性肝炎、肝硬化、肾脏疾病、 某些恶性肿瘤、白血病以及非恶性疾病如 传染性单核细胞增多症、贫血、肌营养不 良，胰腺炎等。一些肿瘤转移所致的胸膜 水中LD活性往往有升高。目前临床主要用 水中LD活性往往有升高。目前临床主要用 于心肌梗死，肝病和恶性肿瘤的辅助诊断。
乳酸脱氢酶
不同的LD同工酶以温度的敏感性是不同的， 不同的LD同工酶以温度的敏感性是不同的， 组织提取液若放于-20℃过夜，LD4和LD5将 组织提取液若放于-20℃过夜，LD4和LD5将 丧失全部的活性。血清标本应放于室温下。 如果血清标本需要存放较长时间，应加入 10mg/ml的 10mg/ml的NAD+或3.1mg/ml的谷胱甘肽后 3.1mg/ml的谷胱甘肽后 于4 ℃保存。 LD活性测定也可用抗凝血浆，但不同的抗 LD活性测定也可用抗凝血浆，但不同的抗 凝剂对LD测定的影响不同，草酸盐和 凝剂对LD测定的影响不同，草酸盐和 EDTA能抑制LD活性，而肝素影响不大。 EDTA能抑制LD活性，而肝素影响不大。
乳酸脱氢酶
是糖酵解和糖异生的一个重要酶。含有锌 离子，能可逆催化乳酸（L）和丙酮酸（P 离子，能可逆催化乳酸（L）和丙酮酸（P） 之间的氧化还原反应。 乳酸+NAD 丙酮酸+NADH+H 乳酸+NAD+→丙酮酸+NADH+H+ 其中L P为正向反应， 其中L → P为正向反应， P → L为逆向反应。 L为逆向反中正向为 正反两向反应的最适PH不同，其中正向为 8.8-9.8。其优点是乳酸和NAD 8.8-9.8。其优点是乳酸和NAD+稳定性好， 且NAD+纯品易得，价格较低，过量乳酸对 LD活性抵制较小，反应线性较好，缺点是 LD活性抵制较小，反应线性较好，缺点是 需要较高的底物浓度，反应速度较慢。