微生物学实验原理及思考题答案

微生物学实验原理及思考题答案.txt铁饭碗的真实含义不是在一个地方吃一辈子饭，而是一辈子到哪儿都有饭吃。就算是一坨屎，也有遇见屎壳郎的那天。所以你大可不必为今天的自己有太多担忧。油镜便于观察的原理是什么?

用油镜观察时在油镜与载玻片之间加入了和玻璃折射率相近的香柏油，使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，使物象明亮清晰。

1.细调节器每旋转一周使镜筒上升或下降.

一。培养基的配制

原理：微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养物，为其生长发育提供所需营养的基质。培养基配制好以后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物实验。一次培养基的配制和灭菌是微生物实验室中最基本的操作，通过本次实验学习微生物实验室中常用培养基的配制方法和灭菌方法。

1.称药品的钥匙不要混用

称完药品应及时盖紧瓶盖，因为某些成分如蛋白胨极易吸水潮解

调PH时要小心操作，避免回调。

配制培养基应注意哪些问题？

要选定合适的培养基;培养基成分要称量准确；PH要适宜；灭菌要严格。

培养基配制完成后为什么要立即灭菌？已灭菌的培养基如何进行无菌检查？

防止细菌污染培养基

一旦细菌污染了培养基，由于培养基有丰富的营养物质，细菌会段时间内大量产生

这样子就会跟培养物争夺营养物质，另一方面，细菌生长过程中会产生有毒物质致使培养物死亡。放在37℃的恒温箱中一两天后，培养基上没有生长任何微生物的就可以使用（若有微生物则是以菌落出现的肉眼可以看见）

二。细菌的单染色技术

原理：单染色法师利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

在中性，碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易于带负电荷的细菌结合而使细菌着色。

制备染色标本时的注意事项？

选择合适菌龄的细菌；固定时避免火焰直接烘烤破坏细菌形态；染色时间要适宜；水洗时水不能直接冲在涂片处。

制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？

油和水之间会分层，油就不能与标本接触还有光会发生折射等等原因，这样不利于油镜观察三。细菌的革兰氏染色法

原理：细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，为G+，有的可被脱去，为G-.

1.革兰氏染色成败的关键是乙醇脱色。脱色过度，阳性细菌被染成阴性细菌，脱色不足，阴性细菌被染成阳性细菌

涂片务必均匀，切忌过厚，以免脱色不彻底造成假阳性

要用活跃生长期的适龄菌，老龄菌因体内核算减少或菌体死亡，会使阳性菌被染成阴性菌，故不建议使用。

为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不超过24h？

若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应,关键在于细胞壁的通透性的改变，使结晶紫染液可以脱色透出。

当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能保证你的操作正确，结果可靠？

找事先已知的且和未知菌形态明显不同的G+和G-分别做混合涂片，当和G+做时G+正确显紫色和当和G-做时G-正确显红色，看这个未知菌分别显什么色，若一致，则可确定此菌为G+或G-。再回过头单做此未知菌的革兰氏染色，显现正确那就证明此染色技术操作正确。

四。细菌的鞭毛染色法

原理：染色前先用媒染剂处理，让他沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。

1.镀银法染色染色液必须现配先用，不能存放。

Leifson染色法受菌种，菌龄和室温等因素的影响，且染色液须经15~20次过滤，要掌握好染色条件

细菌鞭毛极细，很易脱落，在整个操作过程中药小心，防止鞭毛脱落。

染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。

哪些因素能影响鞭毛染色结果？如何控制？

选取的细菌菌种及菌龄要适宜；镀银法染色液必须现配先用；

操作要小心，防止鞭毛脱落；染色用玻片干净无油污

鞭毛染色的菌种为什么要连续传种几代，并且要采用幼龄菌种？

因为菌龄较老的细菌容易失落鞭毛。

五。细菌数量的测定

原理：镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂质或杂菌常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板。血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。

1.有压线的菌体，每格只统计上方及右方线上的细胞

因菌液在血球计数板上处于不同的空间，要在不同的焦距下才能看全，所以观察时必须不断调节细螺旋方可找全。

每个样品重复2~3次，若两次差别太大应重测。

哪些因素会造成血细胞计数板的计数误差，应如何避免？

仪器的准确度和操作的规范性

所用器材均应清洁干燥，计数板的规格应符合要求或经过校正；必须一次性充满计数室，防止产生气泡。

六。放线菌的形态和结构观察

原理：放线菌细胞一般呈分枝无隔的丝状，纤细的菌丝体分为基内菌丝和气生菌丝.采用插片法观察放线菌。将盖玻片倾斜约45°角插入琼脂表面，然后将放线菌接种于盖玻片与培养基接缝处，经培养使放线菌生长在盖玻片上。观察时将盖玻片取下，贴放在载玻片上，直接镜检。

1.用玻璃纸法接种时，注意玻璃纸与培养基之间不能有气泡，以免影响其表面放线菌的生长。操作过程，切勿动玻璃纸菌面上的培养物。

玻璃纸培养和观察法是否可以应用于其他微生物类群的培养和观察？为什么？

可以应用于霉菌。

镜检时，如何区别放线菌的基内菌丝和气生菌丝？

基内菌丝分枝繁茂，无色或产生水溶性或脂溶性色素而呈现黄、绿、橙、红、紫、蓝、褐、黑等各种颜色。气生菌丝颜色较深且较基内菌丝粗，直径为1～μm，直形或弯曲状，有分枝，有的产生色素

七。酵母菌形态观察及死活细胞的鉴别

原理：酵母菌是多行的，不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显分化，菌体比细菌大。美蓝是一种无毒性染料，他的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能是美蓝由蓝色的氧．

化型变成无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的